Name: expanding cytotoxic t lymphocytes from umbilical cord blood that target cytomegalovirus, epstein-barr virus, and adenovirus
Uploaded: 2012-05-07T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי דן דאנקן שיתופי מענק מחקר (CMB וEJS), לב, ריאה הלאומית, ודם מכון (US4HL081007), לוקמיה ולימפומה פרס אגודת מחקר הקליני Scholar (CMB), והמכון הלאומי לסרטן (RO1 CA06150816; EJS).

1. בידוד התא mononuclear (יום 0) <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס ספייק של מתאם luer נקבה לתוך פתח יציאה מחלק 20% מיחידת דם הטבורים, לצרף מזרק ולהסיר דם. העברת דם מופשר עד 20 מ&quot;ל של RPMI חמם בצינור צנטריפוגה מ&quot;ל 50. יש לשטוף את שקית דם טבורים עם 5 מ&quot;ל של RPMI ול?...

<ol>
	<li>Kennedy-Nasser, A. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparable+outcome+of+alternative+donor+and+matched+sibling+donor+hematopoietic+stem+cell+transplant+for+children+with+acute+lymphoblastic+leukemia+in+first+or+second+remission+using+alemtuzumab+in+a+myeloablative+conditioning+regimen.">Comparable outcome of alternative donor and matched sibling donor hematopoietic stem cell transplant for children with acute lymphoblastic leukemia in first or second remission using alemtuzumab in a myeloablative conditioning regimen.</a> Biol. Blood Marrow Transplant. 14, 1245-1245 (2008).</li><li>Hanley, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improving+clinical+outcomes+using+adoptively+transferred+immune+cells+from+umbilical+cord+blood.">Improving clinical outcomes using adoptively transferred immune cells from umbilical cord blood.</a> Cytotherapy. 12, 713 (2010).</li><li>Szabolcs, P., Cairo, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unrelated+umbilical+cord+blood+transplantation+and+immune+reconstitution.">Unrelated umbilical cord blood transplantation and immune reconstitution.</a> Semin. Hematol. 47, 22 (2010).</li><li>Canto, E., Rodriguez-Sanchez, J. L., Vidal, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinctive+response+of+naive+lymphocytes+from+cord+blood+to+primary+activation+via+TCR.">Distinctive response of naive lymphocytes from cord blood to primary activation via TCR.</a> J. Leukoc. Biol. 74, 998-998 (2003).</li><li>Leen, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monoculture-derived+T+lymphocytes+specific+for+multiple+viruses+expand+and+produce+clinically+relevant+effects+in+immunocompromised+individuals.">Monoculture-derived T lymphocytes specific for multiple viruses expand and produce clinically relevant effects in immunocompromised individuals.</a> Nat. Med. 12, 1160-1160 (2006).</li><li>Riddell, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Restoration+of+viral+immunity+in+immunodeficient+humans+by+the+adoptive+transfer+of+T+cell+clones.">Restoration of viral immunity in immunodeficient humans by the adoptive transfer of T cell clones.</a> Science. 257, 238 (1992).</li><li>O'Reilly, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+transfer+of+antigen-specific+T-cells+of+donor+type+for+immunotherapy+of+viral+infections+following+allogeneic+hematopoietic+cell+transplants.">Adoptive transfer of antigen-specific T-cells of donor type for immunotherapy of viral infections following allogeneic hematopoietic cell transplants.</a> Immunol. Res. 38, 237-237 (2007).</li><li>Peggs, K. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adoptive+cellular+therapy+for+early+cytomegalovirus+infection+after+allogeneic+stem-cell+transplantation+with+virus-specific+T-cell+lines.">Adoptive cellular therapy for early cytomegalovirus infection after allogeneic stem-cell transplantation with virus-specific T-cell lines.</a> Lancet. 362, 1375-1375 (2003).</li><li>Sili, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+expansion+of+dendritic+cell-primed+polyclonal+human+cytotoxic+T-lymphocyte+lines+using+lymphoblastoid+cell+lines+for+adoptive+immunotherapy.">Large-scale expansion of dendritic cell-primed polyclonal human cytotoxic T-lymphocyte lines using lymphoblastoid cell lines for adoptive immunotherapy.</a> J. Immunother. 26, 241 (2003).</li><li>Bollard, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Good+manufacturing+practice-grade+cytotoxic+T+lymphocytes+specific+for+latent+membrane+proteins+(LMP)-1+and+LMP2+for+patients+with+Epstein-Barr+virus-associated+lymphoma.">Good manufacturing practice-grade cytotoxic T lymphocytes specific for latent membrane proteins (LMP)-1 and LMP2 for patients with Epstein-Barr virus-associated lymphoma.</a> Cytotherapy. 13, 518 (2011).</li><li>Hanley, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functionally+active+virus-specific+T+cells+that+target+CMV,+adenovirus,+and+EBV+can+be+expanded+from+naive+T-cell+populations+in+cord+blood+and+will+target+a+range+of+viral+epitopes.">Functionally active virus-specific T cells that target CMV, adenovirus, and EBV can be expanded from naive T-cell populations in cord blood and will target a range of viral epitopes.</a> Blood. 114, 1958 (1958).</li><li>Hanley, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+T+cells+targeting+multiple+antigens+of+cytomegalovirus,+Epstein-Barr+virus+and+adenovirus+to+provide+broad+antiviral+specificity+after+stem+cell+transplantation.">Expansion of T cells targeting multiple antigens of cytomegalovirus, Epstein-Barr virus and adenovirus to provide broad antiviral specificity after stem cell transplantation.</a> Cytotherapy. , (2011).</li><li>Gerdemann, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Generation+of+Multivirus-specific+T+Cells+to+Prevent/treat+Viral+Infections+after+Allogeneic+Hematopoietic+Stem+Cell+Transplant.">Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant.</a> J. Vis. Exp. (51), e2736 (2011).</li><li>Mori, T., Kato, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytomegalovirus+infection/disease+after+hematopoietic+stem+cell+transplantation.">Cytomegalovirus infection/disease after hematopoietic stem cell transplantation.</a> Int. J. Hematol. 91, 588 (2010).</li><li>Einsele, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Infusion+of+cytomegalovirus+(CMV)-specific+T+cells+for+the+treatment+of+CMV+infection+not+responding+to+antiviral+chemotherapy.">Infusion of cytomegalovirus (CMV)-specific T cells for the treatment of CMV infection not responding to antiviral chemotherapy.</a> Blood. 99, 3916 (2002).</li><li>Bao, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+cytomegalovirus+pp65+and+IE-1+specific+cytotoxic+T+lymphocytes+for+cytomegalovirus-specific+immunotherapy+following+allogeneic+stem+cell+transplantation.">Expansion of cytomegalovirus pp65 and IE-1 specific cytotoxic T lymphocytes for cytomegalovirus-specific immunotherapy following allogeneic stem cell transplantation.</a> Biol. Blood Marrow Transplant. 14, 1156 (2008).</li><li>Shpall, E. J., Bollard, C. M., Brunstein, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Novel+cord+blood+transplant+therapies.">Novel cord blood transplant therapies.</a> Biol. Blood Marrow Transplant. 17, S39-S45 (2011).</li><li>Vera, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Accelerated+production+of+antigen-specific+T+cells+for+preclinical+and+clinical+applications+using+gas-permeable+rapid+expansion+cultureware+(G-Rex.">Accelerated production of antigen-specific T cells for preclinical and clinical applications using gas-permeable rapid expansion cultureware (G-Rex.</a> J. Immunother. 33, 305 (2010).</li></ol>

<html> אסטרטגיות נוכחיות נועדו לשלוט זיהומים נגיפיים לאחר CBT יכולות להיות יעילות, אבל הם קשורים עם רעילויות משמעותיות, הם יקרים, ואינם מעניקות הגנה לטווח ארוכה מפני זיהום מאוחר יותר. למעשה, השימוש בכמה תרופות אנטי עלול להגביל את ההתפשטות של תאים ספציפיים לוירוס T שאחרת ה?...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> שם מגיב </td><td> חברה </td><td> מספר קטלוגים </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Invitrogen </td><td> 21870-076 </td></tr><tr><td> DC תקשורת </td><td> CellGenix </td><td> 20801-0500 </td></tr><tr><td> EHAA (הבינוני של לחץ) </td><td> אירווין מדעי </td><td> 9195 </td></tr><tr><td> סרום אדם </td><td> ג&#39;מיני מוצרים ביו </td><td> 100-110 </td></tr><tr><td> חדירות Cultureware 18 </td><td> וילסון-וולף </td><td> 80040S </td></tr><tr><td> IL-2 </td><td> כירון (TCH רוקחות) </td><td></td></tr><tr><td> IL-12 </td><td> NCI / CTEP </td><td></td></tr><tr><td> IL-15 </td><td> CellGenix </td><td> 1013-050 </td></tr><tr><td> IL-7 </td><td> מו&quot;פ </td><td> AFL207 </td></tr><tr><td> IL-1beta </td><td> מו&quot;פ </td><td> AFL201 </td></tr><tr><td> IL-6 </td><td> תאGenix </td><td> 1004-050 </td></tr><tr><td> GM-CSF </td><td> TCH מרקחת </td><td></td></tr><tr><td> IL-4 </td><td> מו&quot;פ </td><td> <a href="http://www.rndsystems.com/pdf/AFL204.pdf" target="_blank">AFL204</a> </td></tr><tr><td> TNF-אלפא </td><td> מו&quot;פ </td><td> AFL210 </td></tr><tr><td> Ad5f35pp65 </td><td> מתקן ייצור וקטור CAGT BCM </td><td></td></tr><tr><td> העברת פלזמה מוגדרת עם מתאם luer נשי </td><td> אמנה רפואית </td><td> 89-550-66j </td></tr><tr><td> Lymphoprep </td><td> Nycomed </td><td> 1114550 </td></tr></tbody></table>

expanding cytotoxic t lymphocytes from umbilical cord blood that target cytomegalovirus, epstein-barr virus, and adenovirus

הידבקות בוירוסים לאחר השתלת תאי גזע הן בין הגורמים השכיחים ביותר למוות, במיוחד לאחר דם טבורים (CB) השתלה (CBT) בי CB אינו מכיל מספרים ניכרים של תאי וירוס מנוסים T שיכול להגן על הנמען מהזיהום 1. - 4 אנחנו ואחרים הראינו שנוצרו וירוס הספציפי CTL מתורמים נושאים את ה HIV והחדירו לנמען הם בטוחים ומגוננים. 5-8 עם זאת, עד לאחרונה, תאי T ספציפיים לוירוס לא יכולים להיות שנוצרו מדם הטבורי, כנראה עקב היעדר תאי T זיכרון ספציפיים לוירוס. במאמץ טוב יותר כדי לחקות את התנאים בייזום vivo של תאי T נאיביים, הקים שיטה שהשתמשה בתאים דנדריטיים CB-derived (DC) transduced עם וקטור adenoviral (Ad5f35pp65) המכיל את האנטיגן pp65 immunodominant CMV, ולכן נוהג סגולי תא T לקראת CMV ואדנווירוס. 9 בייזום, אנו משתמשים ma אלהDCS tured כמו גם תאי T CB-derived בנוכחותם של ציטוקינים IL-7, IL-12, ו IL-15. 10 בגירוי השני שהשתמשנו EBV הפך-תאי B, או EBV-LCL, שמביעים שניהם אנטיגנים EBV ממוסס סמוי ו. Ad5f35pp65-transduced EBV-LCL משמש כדי לגרות את תאי T בנוכחות של IL-15 בגירוי השני. גירויים שלאחר מכן להשתמש Ad5f35pp65-transduced EBV-LCL וIL-2. מ50x10 6 תאי mononuclear CB אנו מסוגלים לייצר למעלה מ 150 10 6 תאי T x וירוס ספציפיים שlyse מטרות אנטיגן פעמו וציטוקינים שחרור בתגובה לגירוי antigenic. 11 תאים אלו יוצרו באופן GMP תואם רק באמצעות חלק 20% מיחידת דם טבורים מופרדת ותורגם לשימוש קליני.

Watch this Scientific Journal Video about Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus at JoVE.com

Expanding Cytotoxic T Lymphocytes from Umbilical Cord Blood that Target Cytomegalovirus, Epstein-Barr Virus, and Adenovirus

כאן אנו מתארים אימון הראשון הטוב הייצור (GMP)-תואמת שיטה של ​​ייצור תאי T ציטוטוקסיים וירוס ספציפיים (CTL) מדם טבורים, מקור לתאי T בעיקר נאיביים.

הרחבת לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיים מדם טבורים שציטומגלווירוס יעד, וירוס אפשטיין באר, וadenovirus

Virus infections after stem cell transplantation are among the most common causes of death, especially after cord blood (CB) transplantation (CBT) where ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Preparation and Use of HIV-1 Infected Primary CD4+ T-Cells as Target Cells in Natural Killer Cell Cytotoxic Assays

הכנה ושימוש של HIV-1 CD4 ראשי מאשרום + T-תאים כמו תאים היעד של טבע Cell מבחני Killer ציטוטוקסיות

 Natural killer (NK) cells are a vital component of the innate immune response to virus-infected cells. It is important to understand the ability of NK ...

Methods to Assess Beta Cell Death Mediated by Cytotoxic T Lymphocytes

שיטות להעריך מתווכת בטא מוות של תאים על ידי לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיות

Type 1 diabetes (T1D) is a T cell mediated autoimmune disease.  During the pathogenesis, patients become progressively more insulinopenic as 
insulin ...

Introducing Shear Stress in the Study of Bacterial Adhesion

היכרות עם מתח שאר בחקר הדבקה חיידקית

During bacterial infections a sequence of interactions occur between the pathogen and its host. Bacterial adhesion to the host cell surface is often the ...

Establishment of Epstein-Barr Virus Growth-transformed Lymphoblastoid Cell Lines

הקמת Epstein-Barr Virus צמיחה הפך שורות תאים Lymphoblastoid

Infection of B cells with Epstein-Barr virus (EBV) leads to proliferation and subsequent immortalization, resulting in establishment of lymphoblastoid ...

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

Clinical Application of Sleeping Beauty and Artificial Antigen Presenting Cells to Genetically Modify T Cells from Peripheral and Umbilical Cord Blood

יישום קליני של<em&gt; יפהפה נרדם</em&gt; ומלאכותי תאי מציגי אנטיגן גנטי לשינוי תאי T מדם טבורים היקפי וטבורים

The potency of clinical-grade T cells can be improved by combining gene therapy with immunotherapy to engineer  a biologic product with the potential for ...

Isolation of Precursor B-cell Subsets from Umbilical Cord Blood

בידוד של קבוצות משנה מבשר B-cell מדם טבורים

Umbilical cord blood is highly enriched for hematopoietic progenitor cells at different lineage commitment stages. We have developed a protocol for ...

Isolation and Th17 Differentiation of Na&iuml;ve CD4 T Lymphocytes

Isolation and Th17 Differentiation of NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve CD4 T Lymphocytes

בידוד ובידול של Th17 הנאיביים T מסוג CD4 לימפוציטים

Th17 cells are a distinct subset of T cells that have been found to produce interleukin 17 (IL-17), and differ in function from the other T cell subsets ...

Development of an IFN-&#947; ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

Development of an IFN-ÃƒÅ½Ã‚Â³ ELISpot Assay to Assess Varicella-Zoster Virus-specific Cell-mediated Immunity Following Umbilical Cord Blood Transplantation

פיתוח של חסינות ELISPOT Assay להעריך γ-IFN אבעבועות רוח, זוסטר וירוס ספציפי לתא בתיווך לאחר השתלת דם טבורים

Varicella zoster virus (VZV) is a significant cause of morbidity and mortality following umbilical cord blood transplantation (UCBT). For this reason, ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

דור של תאי T האנושי Alloantigen ספציפיים מהדם היקפי

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

Radial Mobility and Cytotoxic Function of Retroviral Replicating Vector Transduced, Non-adherent Alloresponsive T Lymphocytes

מחוגי ניידות ותפקוד ציטוטוקסיות של retroviral מעתיקה וקטור transduced, שאינם חסיד Alloresponsive T לימפוציטים

We report a novel adaptation of the Radial Monolayer Cell Migration assay, first reported to measure the radial migration of adherent tumor cells on ...