Name: preparation of 3d fibrin scaffolds for stem cell culture applications
Uploaded: 2012-03-02T12:00:00
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著者らは、 &quot;誘導多能性幹細胞の挙動を制御するための組織工学的足場&quot; NSERCディスカバリーグラント402462を確認したいと思います。

プロトコルを開始する前に注意：フィブリノーゲンは、血液由来のタンパク質であり、したがって、適切な安全訓練が処理する前に完了する必要があります。このプロトコルは2日、所望の幹文化が適切に彼らは播種の準備ができていることを確認するための時間を完了する必要があります。どのくらいのフィブリノゲンは、トリスの3 35ミリメートルペトリ皿を量るための計算?...

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	<li>Keung, A. J., Healy, K. E., Kumar, S., Schaffer, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysics+and+dynamics+of+natural+and+engineered+stem+cell+microenvironments.">Biophysics and dynamics of natural and engineered stem cell microenvironments.</a> Wiley Interdiscip. Rev. Syst. Biol. Med. 2, 49-64 (2010).</li><li>Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+stem+cells+and+biomaterial+scaffolds+for+constructing+tissues+and+cell+delivery.">Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues and cell delivery.</a> StemBook. , (2008).</li><li>Lee, J., Cuddihy, M. J., Kotov, N. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+improvement+of+focal+cerebral+ischemia+injury+by+subdural+transplantation+of+induced+pluripotent+stem+cells+with+fibrin+glue.">Functional improvement of focal cerebral ischemia injury by subdural transplantation of induced pluripotent stem cells with fibrin glue.</a> Stem Cells Dev. 19, 1757-1767 (2010).</li></ol>

上記の詳細は、このプロトコルは、マウス胚および誘導多能性幹細胞に特化し、多能性幹細胞培養用の3Dフィブリンの足場を生成するためのメソッドを提供します。この3Dバイオマテリアルベースの培養系は、より正確に生体内で見つかった幹細胞のニッチを模倣し、結果として、それは幹細胞の分化6日にその効果を決定するために生物学的な手がかりをスクリーニングするた...

必要な部品： 化学てんびん pHメータ 組織培養インキュベーター（37℃、5％CO 2） プレートをかき混ぜる 分光光度計 無菌組織培養フードトリス（フィブリノゲンを溶解するための必要性4 Lを加えた十分な）（pH7.4）で緩衝生理食塩水 50mMの塩化カルシウム溶液 滅菌コニカルチューブ（15または50 mL）で 35ミリメートルのペトリ皿 透析チューブ（7,000 MWカットオフ） 透析クリップ 5.0μmのシリンジフィルター 個別包装された無菌の0.22μmのシリンジフィルター 注射器 24ウェル組織培養プレート<table border="1"><tbody><tr><td> 試薬の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>フィブリノゲン（ヒト） </td><td> Calbioc裾</td><td> 341578 </td><td></td></tr><tr><td>トロンビン（ヒト） </td><td>シグマ</td><td> T7009 </td><td></td></tr></tbody></table>

preparation of 3d fibrin scaffolds for stem cell culture applications

幹細胞は自然に多くの場合、幹細胞のニッチ1と呼ばれる生体内 3次元微小に発生するに記載されています。 3D生体材料足場の内側に培養幹細胞はポリスチレンなどのエンジニアリング交換組織2の方法を使用して、従来の2D培養法上の利点を提供し、正確にこれらの微小環境を模倣する方法を提供します。 2Dの組織培養polystreneは、細胞培養実験の大半に使用されている一方で、3D生体の足場は、より密接な環境で細胞極性のより正確な設置を可能にし、軟組織に似て生化学的および機械的性質を有することにより、生体内で見つかった微小環境を複製することができます。 3の様々な天然由来の合成生体材料足場が幹細胞の成長をサポートするための3D環境として検討されている。合成足場は大きなrを持つように合成することができる一方機械的および化学的性質のアンジュ、しばしば大きく再現性を持っているが、天然の生体材料は、多くの場合、細胞外マトリックスや細胞接着の結合部位が含まれており、容易に細胞培養をサポートして結果として検出されたタンパク質や多糖類で構成されています。血漿から得られた蛋白質フィブリノゲンを重合することによって生成されたフィブリンの足場は、広く、in vitroおよび in vivo 4 の両方の組織工学の様々なアプリケーションのために検討されている。このような足場は、治療因子5を提供するための制御放出システムを組み込むための様々な方法を使用して変更できます。前の仕事は、このような足場が正常に培養胚性幹細胞を使用することができ、この足場ベースの培養系が6,7の内側に播種した幹細胞の分化の様々な成長因子の効果をスクリーニングするために使用することができることが示されています。 このプロトコルの詳細polymerizinのプロセスグラムフィブリンは、トロンビンの酵素活性を用いてフィブリノゲン溶液から足場。プロセスは、重合を阻害するクエン酸塩を除去するフィブリノゲン溶液で一晩透析する工程を含む、完成には2日かかります。これらの詳細な方法は、胚および誘導多能性幹細胞培養のための最適であると判断さフィブリノゲン濃度に依存しています。他のグループはさらに、細胞の種類とアプリケーションの広い範囲のフィブリンの足場を検討した-このアプローチは8から12の汎用性を実証した。

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Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

この作品の詳細3Dフィブリンの調製は、培養およびplutipotent幹細胞を区別するための足場。このような足場は、同様の薬物送達システムを含むように修正された幹細胞の挙動に及ぼす種々の生物学的化合物の作用をスクリーニングするために使用することができます。

幹細胞培養アプリケーションのための3Dフィブリン足場の調製

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

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