Name: preparation of 3d fibrin scaffolds for stem cell culture applications
Uploaded: 2012-03-02T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications at JoVE.com

Os autores gostariam de agradecer NSERC Discovery Grant 402462 &quot;andaimes da engenharia de tecidos para controlar pluripotentes induzidas comportamento de células-tronco&quot;.

Notas antes de iniciar o protocolo: O fibrinogênio é uma proteína derivada de sangue e treinamento de segurança, pois, adequado deve ser concluída antes do manuseio. Este protocolo requer 2 dias para ser concluído assim que o tempo das culturas-tronco desejadas de forma adequada para garantir que eles estão prontos para a semeadura. Em termos de cálculo quanto fibrinogénio a pesar, três pratos 35 mm de petri de solução salina tamponada com tris (TBS, pH 7,4) contendo 110-130 mg de fibrinogé...

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	<li>Keung, A. J., Healy, K. E., Kumar, S., Schaffer, D. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biophysics+and+dynamics+of+natural+and+engineered+stem+cell+microenvironments.">Biophysics and dynamics of natural and engineered stem cell microenvironments.</a> Wiley Interdiscip. Rev. Syst. Biol. Med. 2, 49-64 (2010).</li><li>Willerth, S. M., Sakiyama-Elbert, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Combining+stem+cells+and+biomaterial+scaffolds+for+constructing+tissues+and+cell+delivery.">Combining stem cells and biomaterial scaffolds for constructing tissues and cell delivery.</a> StemBook. , (2008).</li><li>Lee, J., Cuddihy, M. J., Kotov, N. 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J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+improvement+of+focal+cerebral+ischemia+injury+by+subdural+transplantation+of+induced+pluripotent+stem+cells+with+fibrin+glue.">Functional improvement of focal cerebral ischemia injury by subdural transplantation of induced pluripotent stem cells with fibrin glue.</a> Stem Cells Dev. 19, 1757-1767 (2010).</li></ol>

Este protocolo detalhado acima fornece um método para a geração de andaimes 3D de fibrina para a cultura de células estaminais pluripotentes, especificamente para o rato embrionário e células estaminais pluripotentes induzidas. Este sistema de cultura de 3D ​​biomaterial baseado com mais precisão imita o nicho de células-tronco encontrada in vivo e, como resultado, pode ser utilizado para rastrear sinais biológicos para determinar os seus efeitos sobre a diferenciação de células-tronco ...

Equipamento necessário: Balança analítica medidor de pH De cultura de tecidos incubadora (37 ° C, 5% de CO 2) Mexa placa Espectrofotômetro Capa cultura estéril tecido Solução salina tamponada com Tris (pH 7,4) (4 Necessita L mais suficiente para dissolver o fibrinogénio) 50 mM de solução de cloreto de cálcio Estéreis tubos cónicos (15 ou 50 mL) 35 mm placas de Petri Tubo de diálise (7.000 corte MW) Clipes de diálise 5.0 uM filtros de seringa Embalados individualmente estéril de 0,22 mM de seringas filtros Seringa 24 placas de cultura de tecidos <table border="1"><tbody><tr><td> Nome do reagente </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Fibrinogénio (humano) </td><td> Calbiocbainha </td><td> 341578 </td><td></td></tr><tr><td> A trombina (humano) </td><td> Sigma </td><td> T7009 </td><td></td></tr></tbody></table>

preparation of 3d fibrin scaffolds for stem cell culture applications

As células estaminais são encontrados em que ocorre naturalmente microambientes 3D in vivo, os quais são muitas vezes referida como a célula nicho haste 1. A cultura de células-tronco dentro de 3D ​​biomaterial andaimes fornece uma maneira para exatidão imitar estes microambientes, proporcionando uma vantagem sobre os métodos tradicionais de cultura 2D usando poliestireno, bem como um método para tecidos de engenharia de substituição 2. Enquanto polystrene cultura 2D tecido tem sido utilizada para a maioria das experiências de cultura de células, andaimes 3D biomaterial pode mais estreitamente replicar os microambientes encontrados in vivo, permitindo estabelecimento mais precisa da polaridade de células no meio ambiente e possuindo propriedades bioquímicas e mecânicas semelhantes a tecido mole. 3 A variedade de origem natural e andaimes biomaterial sintético têm sido investigados como ambientes 3D para apoiar o crescimento de células-tronco. Enquanto andaimes sintéticos podem ser sintetizados a ter uma maior range de propriedades mecânicas e químicas e muitas vezes têm uma maior reprodutibilidade, biomateriais naturais são frequentemente compostas de proteínas e polissacáridos encontrados na matriz extracelular e, como resultado contêm sítios de ligação para a adesão celular e prontamente suporte de cultura de células. Fibrina andaimes, produzido por polimerização do fibrinogénio proteína obtida a partir de plasma, têm sido amplamente investigados para uma variedade de aplicações de engenharia de tecidos tanto in vitro como in vivo 4. Tais suportes pode ser modificada usando uma variedade de métodos para incorporar os sistemas de libertação controlada para a entrega de factores terapêuticos 5. O trabalho anterior mostrou que andaimes tais pode ser utilizado com sucesso para a cultura de células estaminais embrionárias e este sistema de cultura de andaime baseado pode ser usado para examinar os efeitos de vários factores de crescimento sobre a diferenciação das células-tronco semeadas dentro 6,7. Este detalhes protocolo do processo de polymerizing de fibrina scaffolds a partir de soluções de fibrinogénio, usando a actividade enzimática da trombina. O processo leva 2 dias para se completar, incluindo um passo de diálise durante a noite para a solução de fibrinogénio para remover citratos que inibem a polimerização. Estes métodos detalhados contar com as concentrações de fibrinogênio determinados a ser o ideal para embrionário e induzida por cultura de células pluripotentes estaminais. Outros grupos têm investigado andaimes de fibrina para uma vasta gama de tipos de células e aplicações - demonstrando a versatilidade desta abordagem 8-12.

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Preparation of 3D Fibrin Scaffolds for Stem Cell Culture Applications

Isso detalhes o trabalho de preparação de fibrina scaffolds 3D para cultura e diferenciação das células-tronco plutipotent. Tais suportes podem ser usados ​​para examinar os efeitos de vários compostos biológicos sobre o comportamento das células estaminais, bem como modificada para conter sistemas de entrega de drogas.

Preparação de fibrina Andaimes 3D para aplicações de cultura de células-tronco

Stem cells are found in naturally occurring 3D microenvironments in vivo, which are often referred to as the stem cell niche 1. Culturing stem cells ...

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells (hESC) to Different Lineages

Alginate Microcapsule as a 3D Platform for Propagation and Differentiation of Human Embryonic Stem Cells hESC to Different Lineages

Microcápsulas de alginato como uma plataforma 3D para Propagação e Diferenciação de Células-Tronco Embrionárias (hESC) para diferentes linhagens

Human embryonic stem cells (hESC) are emerging as an attractive alternative source for cell replacement therapy since they can be expanded in culture ...

Bioengenharia

Self-reporting Scaffolds for 3-Dimensional Cell Culture

Andaimes auto-relato para cultura de células 3-Dimensional

Culturing cells in 3D on appropriate scaffolds is thought to better mimic the in vivo microenvironment and increase cell-cell interactions. The resulting ...

Sample Preparation Strategies for Mass Spectrometry Imaging of 3D Cell Culture Models

Amostra Estratégias Preparação para Mass Spectrometry imagem da cultura celular 3D Models

Three dimensional cell cultures are attractive models for biological research. They combine the flexibility and cost-effectiveness of cell culture with ...

3D Hydrogel Scaffolds for Articular Chondrocyte Culture and Cartilage Generation

3D Hidrogel Andaimes para articular de condrócitos Cultura e Geração de cartilagem

Human articular cartilage is highly susceptible to damage and has limited self-repair and regeneration potential. Cell-based strategies to engineer ...

Epithelial Cell Repopulation and Preparation of Rodent Extracellular Matrix Scaffolds for Renal Tissue Development

Repovoamento celular epitelial e Preparação de Rodent Matriz Extracelular Andaimes para o desenvolvimento do tecido renal

This protocol details the generation of acellular, yet biofunctional, renal extracellular matrix (ECM) scaffolds that are useful as small-scale model ...

Micropatterning and Assembly of 3D Microvessels

Micropatterning e Montagem de microvasos 3D

In vitro platforms to study endothelial cells and vascular biology are largely limited to 2D endothelial cell culture, flow chambers with polymer or glass ...

Light-mediated Formation and Patterning of Hydrogels for Cell Culture Applications

Formação Light-mediada e padronização de hidrogéis para aplicações de cultura celular

Click chemistries have been investigated for use in numerous biomaterials applications, including drug delivery, tissue engineering, and cell culture. In ...

Synthesis of Biocompatible Liquid Crystal Elastomer Foams as Cell Scaffolds for 3D Spatial Cell Cultures

Síntese de biocompatíveis cristal líquido de elastómero Espumas como andaimes celulares para cultura de células 3D espaciais

Here, we present a step-by-step preparation of a 3D, biodegradable, foam-like cell scaffold. These scaffolds were prepared by cross-linking star block ...

Construction of a Multilayered Mesenchymal Stem Cell Sheet with a 3D Dynamic Culture System

Construção de uma folha de células-tronco mesenquimais em várias camadas com um sistema de cultura dinâmica 3D

Stem cell therapy shows a promising future in regenerating injured organ and tissues, and the cell sheet technique has been developed to improve the low ...

A Culture Method to Maintain Quiescent Human Hematopoietic Stem Cells

Um método cultural para manter células-tronco hematopoiéticas humanas quiescentes

Human hematopoietic stem cells (HSCs), like other mammalian HSCs, maintain lifelong hematopoiesis in the bone marrow. HSCs remain quiescent in vivo, ...