Name: the cyp2d6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice
Uploaded: 2012-02-03T12:00:00
Duration: 9 min 3 s
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Questo lavoro è supportato dall&#39;Università Goethe Hospital Francoforte e una sovvenzione della Fondazione tedesca per la ricerca di UC

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	<li>Manns, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+autoimmune+hepatitis.">Diagnosis and management of autoimmune hepatitis.</a> Hepatology. 51, 2193-2213 (2010).</li><li>Czaja, A. J., Manns, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Diagnosis,+Pathogenesis+and+Management+of+Autoimmune+Hepatitis.">Advances in the Diagnosis, Pathogenesis and Management of Autoimmune Hepatitis.</a> Gastroenterology. 4, 429-443 (2010).</li><li>Christen, U., Hintermann, E., Jaeckel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+animal+models+for+autoimmune+hepatitis.">New animal models for autoimmune hepatitis.</a> Semin. 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Immunol. 174, 4559-4566 (2005).</li><li>Hintermann, E., Bayer, M., Pfeilschifter, J., Christen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+delivery+of+the+liver+autoantigen+cytochrome+P450+2D6+chronically+activates+hepatic+stellate+cells+and+induces+fibrosis.">Adenoviral delivery of the liver autoantigen cytochrome P450 2D6 chronically activates hepatic stellate cells and induces fibrosis.</a> Manuscript Submitted. , (2011).</li></ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

In studi precedenti, l&#39;epatite sperimentale è stato spesso segnalato per essere solo transitori e molti modelli attuali di una patologia epatica autoimmune dipende da una malattia piuttosto complessi protocolli di induzione (per una rassegna si veda 3,5). Ad esempio, parecchi modelli utilizzare topi transgenici esprimendo antigeni bersaglio specifici e adoptively trasferiti bersaglio antigene-specifici, per lo più TcR-transgenici, cellule T 14,15. Spesso un&#39;infezione supplementare con virus livertropic, batteri o parassiti è necessario di indurre la malattia 16-18. In alternativa, DNA-vaccinazione con plasmidi codificanti per antigeni bersaglio, compresi CYP2D6 19, viene usato per indurre epatite. Tuttavia, una vaccinazione supplementare con plasmidi codificano per pro-infiammatorie citochine, come IL-12, le è richiesto 20. Purtroppo, con poche eccezioni 15,20 epatite è solo transitoria. Il modello di CYP2D6 6,21 utilizza un metodo semplice tO indurre epatite autoimmune semplicemente infettando i topi con un adenovirus esprimere hCYP2D6, l&#39;autoantigene importante EAI-2 7,8. Consegna di CYP2D6 da uno costrutto adenovirus garantisce sia un targeting diretto del fegato nonché una infiammazione locale che promuove la ripartizione di tolleranza. È importante notare tuttavia che sia il titolo virus così come la via di somministrazione è fondamentale per questo modello. Da un lato, Ad-2D6 è un virus replicazione deficiente, così, un titolo sufficiente elevato di virus è richiesto per generare una quantità critica di antigene all&#39;interno del fegato. D&#39;altra parte, troppo alto un titolo potrebbe comportare una fatale insufficienza epatica acuta. Inoltre, è stato dimostrato precedentemente che infezione di topi da parte di alti titoli di adenovirus porta ad un esaurimento funzionale della risposta immunitaria 22. Nel nostro modello, abbiamo usato una combinazione di infezione endovenosa e intraperitoneale al fine di ottenere sia infiltrazione cronica cellulare nonché extfibrosi ensive. Abbiamo osservato che l&#39;infezione endovenosa sola provoca ancora massiccia infiltrazione cellulare, ma nessuna fibrosi della regione sottocapsulare, indicando che infiammazione peritoneale a causa dell&#39;iniezione intraperitoneale potessero essere coinvolti in il continuo accumulo sottocapsulare di collagene (Hintermann &amp; Christen, manoscritto in preparazione). Tuttavia, è importante notare che la fibrosi epatica osservata è antigene-specifica, poiché non abbiamo fatto rilevare attivazione delle cellule stellate epatiche e della deposizione collagene dopo infezione con pari virus dei titoli-di Ad-GFP o Ad-Control 23. Il CYP2D6 modello riflette molti aspetti della umana 1,2 AIH, come ad esempio l&#39;epatite cronica, caratterizzata da persistente infiltrazione cellulare e fibrosi epatica 6. Inoltre, la presenza di high-titoli anticorpali anti-CYP2D6 anticorpi con specificità di epitopo simili e diffondendo 13 a LKM-1 anticorpi trovati in AIH-2 pazienti indica la preza di una comune reattività cronica autoimmune. CYP2D6 è il principale antigene in AIH-2, ma esso non viene riconosciuto da pazienti diagnosticati con il più frequente tipo 1 AIH. Inoltre, i pazienti affetti da altre malattie del fegato ad eziologia autoimmune, come la cirrosi biliare primaria (PBC) o colangite sclerosante primaria (PSC), di generare caratteristici autoanticorpi con specificità per autoantigeni fegato distinte e il loro fegato mostrano differenti caratteristiche patologiche di centraggio sulle piccole (PBC ) o grande (PSC) dotti biliari. Tuttavia, i modelli CYP2D6 offre l&#39;opportunità di analizzare i meccanismi coinvolti nei processi di immunopathogenic epatiche infiammatorie croniche che si manifestano nel corso delle malattie autoimmuni del fegato, per identificare i giocatori chiave che guidano la distruzione autoimmune di epatociti e valutare possibili interventi terapeutici per curare la malattia.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome dell&#39;apparecchiatura </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> Ago 23G </td><td> BD Biosciences </td><td> 300800 </td><td></td></tr><tr><td> 27 ½ G ago </td><td> VWR </td><td> 612-0151 </td><td></td></tr><tr><td> 30 ago ½ G </td><td> BD Biosciences </td><td> 304000 </td><td></td></tr><tr><td> Strisce reattive alanina aminotransferasi (GPT / ALT) </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10 745 138 202 </td><td></td></tr><tr><td> Strisce reattive aspartato aminotransferasi (GOT / AST) </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10 745 120 202 </td><td></td></tr><tr><td> Anestesia Unità Univentor 400 </td><td> <a href="http://www.agnthos.se" target="_blank" >AgnTho di</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Stampi di base, 37x24x10 mm e getta </td><td> VWR </td><td> 720-0208 </td><td></td></tr><tr><td> Cella filtro 70 millimetri </td><td> VWR </td><td> 734-0003 </td><td></td></tr><tr><td> Criostato </td><td> Leica </td><td> CM1850 UV </td><td></td></tr><tr><td> Eparinizzati tubi capillari </td><td> Pescatore </td><td> 3123987 </td><td></td></tr><tr><td> Vetrini SuperFrost Plus </td><td> Menzel Gläser </td><td> J1800AMNZ </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer SST tubi </td><td> BD Biosciences </td><td> 365951 </td><td></td></tr><tr><td> Micropiastre, V-fondo </td><td> VWR </td><td> 391-1924 </td><td></td></tr><tr><td> Reflotron Plus. </td><td> Roche Diagnostics </td><td></td><td> Determiniation di siero AST / ALT </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> Nome of il reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> Coniglio anti-topo anti-Collagene di tipo I IgG, </td><td> Chemicon </td><td> AB765P </td><td></td></tr><tr><td> Biotinilato di capra anti-IgG di coniglio </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-BA-1000-MC15 </td><td></td></tr><tr><td> FITC-coniugato anticorpo anti topo CD8a </td><td> Southern Biotech </td><td> 1550-1502 </td><td></td></tr><tr><td> PE-coniugato anti topo IFNy </td><td> BD Biosciences </td><td> 554412 </td><td></td></tr><tr><td> PE-coniugato anti-topo CD16/CD32 anticorpo (FcR blocco) </td><td> BD Biosciences </td><td> 553141 </td><td></td></tr><tr><td> Aquatex </td><td> VWR </td><td> 1.08562.0050 </td><td></td></tr><tr><td> Avidina / biotina Blocco kit </td><td&gt; Vettore (AXXORA) </td><td> VC-SP-2001-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> A brefeldina </td><td> Sigma </td><td> B6542 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenasi IV </td><td> Sigma </td><td> C5138-100mg </td><td></td></tr><tr><td> DAB substrato kit 3&#39;3&#39;diaminobenzidine </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-SK-4100-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> DNasi </td><td> Sigma </td><td> DN-25 </td><td></td></tr><tr><td> Elite ABC reagente </td><td> Vector (AXXORA) </td><td> VC-PK-7100-L050 </td><td></td></tr><tr><td> Eosina G / G soluzione </td><td> Roth </td><td> X883.1 </td><td></td></tr><tr><td> Siero fetale bovino (FCS) </td><td> Biochrom AG </td><td> S 0115 </td><td></td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Forene </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td> Meyer Ematossilina soluzione </td><td> Industry </td><td> A4840, 1000 </td><td></td></tr><tr><td> Ottobre Compound </td><td> Sakura Finetek Europa </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> PBS-tamponata formaldeide 10% </td><td> Roth </td><td> A146.3 </td><td></td></tr><tr><td> Percoll </td><td> Amersham </td><td> 17-0891-01 </td><td></td></tr><tr><td> Roti-Histokit </td><td> Roth </td><td> 6.638,1 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 61870 </td><td></td></tr><tr><td> Saponina dalla corteccia Quillaja </td><td> Sigma </td><td> S7900 </td><td></td></tr></tbody></table>

the cyp2d6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice

L&#39;epatite autoimmune è una malattia rara ma pericolosa per la vita autoimmune del fegato di 1,2 eziologia sconosciuta. In passato, i tentativi numerosi sono stati fatti per generare un modello animale che riflette le caratteristiche della malattia umana 3-5. Tuttavia, in vari modelli la induzione di malattia era piuttosto complessa e spesso epatite era solo transitoria 3-5. Pertanto, abbiamo sviluppato un modello semplice topo che utilizza l&#39;autoantigene maggiore umano in tipo 2 epatite autoimmune (AIH-2), cioè hCYP2D6, come un trigger 6. Di tipo 1 di fegato e rene anticorpi microsomiali (LKM-1) anticorpi che riconoscono hCYP2D6 sono il segno distintivo di EAI-2 7,8. Consegna di tipo selvatico hCYP2D6 in FVB o C57BL / 6 topi era da un costrutto Adenovirus (Ad-2D6) che assicura una consegna diretta dell&#39;antigene di attivazione al fegato. Così, l&#39;infiammazione conseguente locale genera un campo fertile 9 per il successivo sviluppo di autoimmunità. A combination di iniezione endovenosa e intraperitoneale di Ad-2D6 è la via più efficace per indurre un danno a lungo termine autoimmune al fegato (sezione 1). Qui forniamo un protocollo dettagliato su come autoimmune malattia epatica viene indotta nel modello CYP2D6 e come i differenti aspetti di danno epatico può essere valutata. In primo luogo, i livelli sierici di markers che indicano distruzione epatociti, come aminotransferasi, nonché i titoli di hCYP2D6 anticorpi sono determinate campionando sangue retroorbitaly (sezione 2). In secondo luogo, il hCYP2D6-specifica risposta di cellule T è caratterizzata da raccogliendo linfociti dalla milza e il fegato. Al fine di ottenere linfociti fegato puri, i fegatini sono perfusi dalla PBS attraverso la vena portale (sezione 3), digerito in collagene e purificato su un gradiente di Percoll (sezione 4). La frequenza di hCYP2D6 specifiche cellule T viene analizzato dalla stimolazione con hCYP2D6 peptidi e l&#39;identificazione delle cellule che producono IFN-mediante citometria di flusso (sezione 5). Terzo,infiltrazione cellulare e fibrosi è determinata dalla immunoistochimica su sezioni di fegato (sezione 6). Regime Tale analisi dovrà essere condotta in diversi momenti dopo l&#39;inizio della malattia al fine di dimostrare la natura cronica del modello. La grandezza della risposta immunitaria caratterizzata dalla frequenza e l&#39;attività di hCYP2D6-specifici T e / o cellule B e il grado del danno epatico e fibrosi devono essere valutati per una successiva valutazione di possibili trattamenti per prevenire, ritardare o abrogare la autodestructive processo del fegato.

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The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Infezione di topi con uno Adenovirus che esprime il autoantigene maggiore umano citocromo P450 2D6 (hCYP2D6) riconosciuti da sieri di pazienti affetti da di tipo 2 risultati epatite autoimmune in una forma persistente di autoimmune-mediata malattia epatica caratterizzata da estensiva epatite, fibrosi e la generazione di uno CYP2D6 -specifica risposta immunitaria.

Il CYP2D6 modello animale: come indurre epatite autoimmune in topi

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

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