Name: the cyp2d6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice
Uploaded: 2012-02-03T12:00:00
Duration: 9 min 3 s
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この作品は、ゲーテ大学病院、フランクフルトとUCにドイツ研究財団の助成金によってサポートされています

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	<li>Manns, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+autoimmune+hepatitis.">Diagnosis and management of autoimmune hepatitis.</a> Hepatology. 51, 2193-2213 (2010).</li><li>Czaja, A. J., Manns, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Diagnosis,+Pathogenesis+and+Management+of+Autoimmune+Hepatitis.">Advances in the Diagnosis, Pathogenesis and Management of Autoimmune Hepatitis.</a> Gastroenterology. 4, 429-443 (2010).</li><li>Christen, U., Hintermann, E., Jaeckel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+animal+models+for+autoimmune+hepatitis.">New animal models for autoimmune hepatitis.</a> Semin. 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著者らは、開示することは何もありません。

以前の研究では、実験的肝炎はしばしば自己免疫性肝疾患のための唯一の過渡的な現在の多くのモデルがかなり複雑な疾患の誘導プロトコル（レビューのための3,5を参照）に依存すると報告されている。たとえば、いくつかのモデルは、特定の標的抗原を発現するトランスジェニックマウスを使用して、養子標的抗原特異的な、主にTCR-トランスジェニックT細胞14,15を移した。しばしばlivertropicウイルス、細菌や寄生虫を持つ追加の感染は病気16-18誘導する必要があります。また、CYP2D6 19を含む標的抗原、をコードするプラスミドを用いたDNAワクチン接種は、肝炎を誘導するために使用されています。しかし、このようなIL-12などの炎症性サイトカイン、をコードするプラスミドを持つ追加のワクチン接種は20が必要です。残念なことに、少数の例外を除いて15,20 A型肝炎は一過性である。 CYP2D6モデル6,21は、簡単な方法tを使用する単にhCYP2D6、AIH-2 7,8の主要な自己抗原を発現するアデノウイルスをマウスに感染させることによって自己免疫性肝炎を誘発O。アデノウイルスの構築により、CYP2D6の配信は、肝臓の直接の標的としてだけでなく、寛容の破壊を促進する局所の炎症の両方を保証します。ウイルス力価と同様に、投与経路の両方がこのモデルに不可欠であることにも注意することが重要です。一方では、Ad-2D6は、複製欠損ウイルスであり、したがって、ウイルスの十分な高力価は、肝臓内の抗原の重要な量を生成する必要があります。一方、高すぎると力価は、致命的な急性肝不全になる可能性があります。加えて、アデノウイルスの高力価によるマウスの感染は、免疫応答22の機能的な枯渇につながることを以前に実証されている。我々のモデルでは、両方の慢性的な細胞浸潤と同様に内線を得るために静脈内および腹腔内感染症の組み合わせを使用ensive線維症。我々は、単独で静脈内感染症は依然として大​​規模な細胞浸潤を引き起こすが、腹腔内注射によるその腹膜の炎症を示す被膜下領域のない線維は、コラーゲンの連続被膜蓄積（Hintermann＆クリステン、投稿準備中）に関与していない可能性があることを観察した。しかし、我々は、AD-GFPまたはAd-コントロール23の等しいウイルス力価と感染後の肝星細胞とコラーゲン沈着の活性化を検出しませんでしたので、観測された肝線維症は、抗原特異的であることに注意することが重要です。 CYP2D6モデルは、永続的な細胞浸潤と肝線維症6によって特徴付けられる慢性肝炎などの人間AIH 1,2の多くの側面を反映しています。さらに、AIH-2患者に見られる類似のエピトープ特異性を有する高力価の抗CYP2D6抗体の存在と拡散13〜LKM-1抗体は、事前に示します。一般的な慢性の自己免疫反応性上述の意味。 CYP2D6はAIH-2の主要抗原であるが、それはより頻繁に、1型AIHと診断された患者では認識されません。さらに、そのような原発性胆汁性肝硬変（PBC）や原発性硬化性胆管炎（PSC）などの自己免疫病因を持つ他の肝疾患、患っている患者では、特徴的な抗体を生成異なる肝抗原とその肝臓に特異的に小を中心とした別の病理学的特徴（PBCを表示場合）または大（PSC）胆管。それにもかかわらず、CYP2D6のモデルは、肝細胞の自己免疫破壊を促進し、病気を治すために可能な治療介入を評価するためのキープレーヤーを識別するために、自己免疫性肝疾患時に発生するとして慢性肝炎症プロセスに関与immunopathogenicメカニズムを分析する機会を提供しています。

<table border="1"><tbody><tr><td> 機器の名前 </td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td> 23G針</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 300800 </td><td></td></tr><tr><td> 27½G針</td><td> VWR </td><td> 612-0151 </td><td></td></tr><tr><td> 30½G針</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 304000 </td><td></td></tr><tr><td>アラニンアミノトランスフェラーゼテストストリップ（GPT / ALT） </td><td>ロシュ·ダイアグノスティックス</td><td> 10 745 138 202 </td><td></td></tr><tr><td>アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼテストストリップ（GOT / AST） </td><td>ロシュ·ダイアグノスティックス</td><td> 10 745 120 202 </td><td></td></tr><tr><td>麻酔ユニットUniventor 400 </td><td> <a href="http://www.agnthos.se" target="_blank" >AgnThoの</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td>ベース型、使い捨て37x24x10さmm </td><td> VWR </td><td> 720-0208 </td><td></td></tr><tr><td>セルストレーナー70ミリメートル</td><td> VWR </td><td> 734-0003 </td><td></td></tr><tr><td>クライオスタット</td><td>ライカ</td><td> CM1850 UV </td><td></td></tr><tr><td>ヘパリン毛細管</td><td>フィッシャー</td><td> 3123987 </td><td></td></tr><tr><td>顕微鏡はSuperfrost Plusをスライド</td><td>メンツェルグレイザー</td><td> J1800AMN​​Z </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer SSTチューブ</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 365951 </td><td></td></tr><tr><td>マイクロタイタープレート、V底</td><td> VWR </td><td> 391-1924 </td><td></td></tr><tr><td> Reflotronプラス</td><td>ロシュ·ダイアグノスティックス</td><td></td><td>血清AST / ALTのDeterminiation </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> 名前OF試薬</td><td> 会社 </td><td> カタログ番号 </td><td> コメント </td></tr><tr><td>ウサギ抗マウス抗コラーゲンI型IgG抗体、 </td><td>ケミコン</td><td> AB765P </td><td></td></tr><tr><td>ビオチン化ヤギ抗ウサギIgG </td><td>ベクトル（AXXORA） </td><td> VC-BA-1000-MC15 </td><td></td></tr><tr><td> FITC結合抗マウスCD8a抗体</td><td>サザンバイオテクノロジー</td><td> 1550年から1502年</td><td></td></tr><tr><td> PE標識抗マウスIFNγ抗体</td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 554412 </td><td></td></tr><tr><td> PE標識抗マウスCD16/CD32抗体（FCRブロック） </td><td> BDバイオサイエンス</td><td> 553141 </td><td></td></tr><tr><td> Aquatex </td><td> VWR </td><td> 1.08562.0050 </td><td></td></tr><tr><td>アビジン/ビオチンブロッキングキット</td><td&gt;ベクトル（AXXORA） </td><td> VC-SP-2001-KI01 </td><td></td></tr><tr><td>ブレフェルジン</td><td>シグマ</td><td> B6542 </td><td></td></tr><tr><td>コラゲナーゼIV </td><td>シグマ</td><td> C5138-100MG </td><td></td></tr><tr><td> DAB基質キット3&#39;3&#39;diaminobenzidine </td><td>ベクトル（AXXORA） </td><td> VC-SK-4100-KI01 </td><td></td></tr><tr><td>デオキシリボヌクレアーゼ</td><td>シグマ</td><td> DN-25 </td><td></td></tr><tr><td>エリートABC試薬</td><td>ベクトル（AXXORA） </td><td> VC-PK-7100-L050 </td><td></td></tr><tr><td>エオシンG / Yソリューション</td><td>ロート</td><td> X883.1 </td><td></td></tr><tr><td>ウシ胎児血清（FCS） </td><td> Biochrom AG </td><td> S 0115 </td><td></td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Forene </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td>マイヤーのヘマトキシリン​​液</td><td> AppliChem </td><td> A4840、1000 </td><td></td></tr><tr><td> OCTコンパウンド</td><td>サクラファインテックヨーロッパ</td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> PBS - 緩衝ホルムアルデヒド10パーセント</td><td>ロート</td><td> A146.3 </td><td></td></tr><tr><td>パーコール</td><td>アマシャム</td><td> 17-0891-01 </td><td></td></tr><tr><td>ロティ·Histokit </td><td>ロート</td><td> 6638.1 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td>インビトロジェン</td><td> 61870 </td><td></td></tr><tr><td>キラヤの樹皮からサポニン</td><td>シグマ</td><td> S7900 </td><td></td></tr></tbody></table>

the cyp2d6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice

自己免疫性肝炎はまれですが、生活は未知の病因1,2の肝臓の自己免疫疾患を脅かしている。過去の多くの試みで、ヒトの疾患3-5の特性を反映した動物モデルを生成するためになされてきた。しかし、様々なモデルでは、疾患の誘導はかなり複雑であり、多くの場合肝炎は3-5のみ一過性であった。したがって、我々は、トリガー6として、すなわち、2型自己免疫性肝炎（AIH-2）、hCYP2D6の主要な人間の自己抗原を使用して簡単なマウスモデルを開発しました。 hCYP2D6を認識し1型肝腎ミクロソーム抗体（LKM-1）抗体はAIH-2の7,8の特徴である。野生型FVBまたはC57BL / 6マウスにhCYP2D6の配信は、肝臓へのトリガ抗原の直接配信を保証するアデノウイルスコンストラクト（AD-2D6）であった。したがって、その後の地元の炎症は自己免疫のその後の開発のための肥沃なフィールド9を生成します 。 ℃広告-2D6の静脈内および腹腔内注射のombinationは、肝臓（セクション1）長期的な自己免疫損傷を誘発するための最も効果的なルートです。ここでは、CYP2D6モデルに誘導される方法と、肝臓の損傷の様々な側面を評価することができているか自己免疫性肝疾患に関する詳細なプロトコルを提供しています。最初に、このようなアミノトランスフェラーゼと同様に、hCYP2D6抗体価として肝細胞の破壊を示すマーカーの血清レベルは、サンプリング血液retroorbitaly（セクション2）で決定されます。第二に、hCYP2D6特異的T細胞応答は、脾臓と肝臓からリンパ球を集めることを特徴としている。純粋な肝リンパ球を得るために、肝臓をコラーゲンで消化し、Percoll勾配（セクション4）で精製し、門脈（セクション3）を介して、PBSで灌流されています。 hCYP2D6特異的T細胞の頻度はhCYP2D6ペプチドおよびフローサイトメトリーによるIFNγ産生細胞（セクション5）の識別による刺激によって分析されます。第三に、細胞浸潤と線維症は、肝臓切片の免疫組織化学（セクション6）によって決定されます。このような分析療法は、モデルの慢性的な性質を証明するために、疾患の開始後数回で実施する必要があります。周波数とアクティビティhCYP2D6特異的Tおよび/またはB細胞の肝障害と線維化の程度によって特徴付け免疫応答の大きさは、防止または遅延a​​utodestructiveを廃止するために可能な治療のその後の評価のために評価する必要があります肝臓のプロセス。

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The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

主要な人間の自己抗原を発現するアデノウイルスによるマウスの感染は、CYP2D6の広範な肝炎、線維化と世代を特徴とする自己免疫介在性肝疾患の永続的な形式で、2型自己免疫性肝炎の結果を患っている患者の血清によって認識されるP450 2D6（hCYP2D6）のシトクロム特異的免疫応答。

CYP2D6の動物モデル：マウスにおける自己免疫性肝炎を誘導する方法

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

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