Name: the cyp2d6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice
Uploaded: 2012-02-03T12:00:00
Duration: 9 min 3 s
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이 작품은 괴테 대학 병원 프랑 크푸르트와 UC에 대한 독일 연구 재단의 교부금에 의해 지원됩니다

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저자가 공개하는 게 없다.

이전 연구에서 실험 형 간염은 주로자가 면역 질환 간 질환에 대해서만 일시적 많은 현재의 모델은 다소 복잡한 질병 유도 프로토콜 (서평 3,5 참조)에 따라 달라집니다 것으로 보도되었다. 예를 들어, 몇몇 모델은 특정 대상 항원을 표현 형질 전환 생쥐를 사용하고 adoptively 표적 항원에 특정한, 대부분 TcR - 유전자 변형, T 세포 14,15을 양도. 종종 livertropic 바이러스, 박테리아 또는 기생충과 추가 감염 질병 16-18를 유도해야합니다. 또는 CYP2D6 19를 포함하여 대상 항원, 인코딩을 plasmids과 DNA-접종이 간염을 유발하는 데 사용됩니다. 그러나 이러한 IL-12과 같은 프로 염증성 크린 시토킨, 인코딩을 plasmids있는 추가 접종은 20 필요합니다. 불행하게도, 몇 가지 예외 15-20 형 간염은 일시적입니다. CYP2D6 모델 6,21는 직접적인 방법 t를 사용단순히 hCYP2D6, AIH-2 7,8의 주요 autoantigen을 표현 아데노 바이러스와 쥐를 감염에 의해 면역 간염을 유발 O. 아데노 바이러스 구조에 의한 CYP2D6의 배달 간의 직접 타겟팅을뿐만 아니라 관용의 분해를 촉진 지역 염증을 모두 보장합니다. 그것은 바이러스 titer뿐만 아니라 행정의 노선이 모두이 모델의 중요한는 것을주의하는 것이 중요합니다. 한편, 광고-2D6은, 따라서, 복제 결함 바이러스 바이러스의 충분한 높은 titer는 간장 내에서 항원의 중요한 금액을 생성하기 위해 필요합니다. 한편, 너무 높은 titer는 치명적인 급성 간경화가 발생할 수 있습니다. 또한, 그것은 아데노 바이러스의 높은 titers에 의한 생쥐의 감염이 면역 반응 22 기능적인 피로로 연결되는 이전에 입증되었습니다. 우리의 모델에서, 우리는 둘 다 만성 세포 침투뿐만 아니라 내선 번호를 얻기 위해서는 정맥 주사와 intraperitoneal 감염의 조합을 사용ensive 섬유증. 우리는 혼자 정맥 주사 감염이 여전히 심한 세포 침윤을 초래하지만, intraperitoneal 주사로 인해 해당 복막 염증을 나타내는 subcapsular 지역에 대한 섬유증은, 콜라겐의 지속적인 subcapsular 축적 (Hintermann &amp; 카누, 준비 원고)에 관여하지 있기 관찰했습니다. 그러나 우리가 광고-GFP 또는 광고 제어 23 평등 바이러스 titers으로 감염 후 간장 별 모양의 세포와 콜라겐 증착의 활성화를 검색하지 않았으므로 관찰된 간장 섬유증은 항원에 특정한된다는 점에 유의하는 것이 중요합니다. CYP2D6 모델과 같은 영구적인 세포 침윤과 간 섬유증 6 특징으로 만성 간염과 같은 인간의 AIH의 1,2의 여러 ​​측면을 반영합니다. 또한, 유사한 에피토프의 특이성과 AIH-2 환자에서 발견 LKM-1 항체에 13 확산과 높은 titer 안티 CYP2D6 항체의 존재는 사전을 나타냅니다일반적인 만성자가 면역 반응의 sence. CYP2D6는 AIH-2의 주요 항원 있지만 더 자주 1 형 AIH 진단을 환자가 인식되지 않습니다. 또한, 그러한 기본 담즙 간경변 (PBC) 또는 기본 sclerosing cholangitis (PSC)와 같은 면역 병인 다른 간 질환에서 고통받는 환자가 특징의 autoantibodies을 생성하는 고유한 간 autoantigens과 그들의 간을 대한 특이성과 소형을 중심으로 서로 다른 병리 학적 특징 (PBC을 보여 ) 또는 대형 (PSC) 담즙 관. 그럼에도 불구하고, CYP2D6 모델 hepatocytes의 면역 파괴를 운전하고 질병을 치료할 수 치료 개입을 평가하는 핵심 선수를 식별할 수 있도록,자가 면역 질환 간 질환 중에 발생으로 만성 간장 염증 과정에 관여 immunopathogenic 메커니즘을 분석할 수있는 기회를 제공합니다.

<table border="1"><tbody><tr><td> 장비의 명칭 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 23G 바늘 </td><td> BD Biosciences </td><td> 300,800 </td><td></td></tr><tr><td> 27 ½ G 바늘 </td><td> VWR </td><td> 612-0151 </td><td></td></tr><tr><td> 30 ½ G 바늘 </td><td> BD Biosciences </td><td> 304,000 </td><td></td></tr><tr><td> 알라닌 아미노 전이 효소 테스트 스트립 (GPT / ALT) </td><td> 로슈 진단 </td><td> 10 745 138 202 </td><td></td></tr><tr><td> Aspartate 아미노 전이 효소 테스트 스트립 (알겠습니다 / 대서양 표준시) </td><td> 로슈 진단 </td><td> 10 745 120 202 </td><td></td></tr><tr><td> Anaesthesia 단위 Univentor 400 </td><td> <a href="http://www.agnthos.se" target="_blank" >AgnTho의</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 자료 금형, 일회용 37x24x10 mm의 </td><td> VWR </td><td> 720-0208 </td><td></td></tr><tr><td> 셀 스트레이너 70mm </td><td> VWR </td><td> 734-0003 </td><td></td></tr><tr><td> 그라 이오 스탯 </td><td> Leica </td><td> CM1850 자외선 </td><td></td></tr><tr><td> Heparinized 모세관 튜브 </td><td> 어부 </td><td> 3,123,987 </td><td></td></tr><tr><td> 현미경 Superfrost 플러스 슬라이드 </td><td> Menzel Gläser </td><td> J1800AMN​​Z </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer SST 튜브 </td><td> BD Biosciences </td><td> 365,951 </td><td></td></tr><tr><td> Microtiter 번호판, V-바닥 </td><td> VWR </td><td> 391-1924 </td><td></td></tr><tr><td> Reflotron 플러스 </td><td> 로슈 진단 </td><td></td><td> 혈청 대서양 표준시 / ALT의 Determiniation </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> O의 이름을 지정F 시약 </td><td> 회사 </td><td> 카탈로그 번호 </td><td> 댓글 </td></tr><tr><td> 토끼 항 마우스 방지 콜라겐 유형 I IgG, </td><td> Chemicon </td><td> AB765P </td><td></td></tr><tr><td> Biotinylated 염소 항 토끼 IgG </td><td> 벡터 (AXXORA) </td><td> VC-BA-1000-MC15 </td><td></td></tr><tr><td> FITC-복합 백신 마우스 CD8a 항체 </td><td> 남부 생명 공학 </td><td> 1550-02 </td><td></td></tr><tr><td> PE-복합 백신 마우스 IFNγ 항체 </td><td> BD Biosciences </td><td> 554,412 </td><td></td></tr><tr><td> PE-복합 백신 마우스 CD16/CD32 항체 (FcR 블록) </td><td> BD Biosciences </td><td> 553,141 </td><td></td></tr><tr><td> Aquatex </td><td> VWR </td><td> 1.08562.0050 </td><td></td></tr><tr><td> 아비딘 / 비오틴 차단 키트 </td><td&gt; 벡터 (AXXORA) </td><td> VC-SP-2001-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> 를 Brefeldin </td><td> 시그마 </td><td> B6542 </td><td></td></tr><tr><td> Collagenase IV </td><td> 시그마 </td><td> C5138-100MG </td><td></td></tr><tr><td> DAB 기판 키트 3&#39;3&#39;diaminobenzidine </td><td> 벡터 (AXXORA) </td><td> VC-SK-4100-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> DNase </td><td> 시그마 </td><td> DN-25 </td><td></td></tr><tr><td> 엘리트 ABC 시약 </td><td> 벡터 (AXXORA) </td><td> VC-PK-7100-L050 </td><td></td></tr><tr><td> Eosin G / Y 솔루션 </td><td> 로스 </td><td> X883.1 </td><td></td></tr><tr><td> 태아 송아지 혈청 (FCS) </td><td> Biochrom AG </td><td> S 0115 </td><td></td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Forene </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td> 메이어의 Hematoxylin 용액 </td><td> AppliChem </td><td> A4840, 1000 </td><td></td></tr><tr><td> 10월 운드 </td><td> 사쿠라 Finetek 유럽 </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> PBS 버퍼 포름 알데히드 10% </td><td> 로스 </td><td> A146.3 </td><td></td></tr><tr><td> Percoll </td><td> Amersham </td><td> 17-0891-01 </td><td></td></tr><tr><td> Roti-Histokit </td><td> 로스 </td><td> 6638.1 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 61,870 </td><td></td></tr><tr><td> quillaja 껍질에서 사포닌 </td><td> 시그마 </td><td> S7900 </td><td></td></tr></tbody></table>

the cyp2d6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice

자가 면역 간염은 알 수없는 병인 1,2의 간을 드물지만 생명에 지장 면역 질환이다. 과거 수많은 시도에서 인간의 질병 3-5의 특성을 반영 동물 모델을 생성되었습니다. 그러나 다양한 모델로 질병의 유도 오히려 복잡했고 종종 간염 3-5에만 일시적했습니다. 따라서 트리거 6으로 제 2 형자가 면역 간염 (AIH-2), 즉 hCYP2D6에서 주요 인간 autoantigen를 사용하여 간단한 마우스 모델을 개발했습니다. hCYP2D6을 인식 1 형 간 - 신장 microsomal 항체 (LKM-1) 항체는 AIH-2 7,8의 특징입니다. wildtype FVB 또는 C57BL / 6 마​​우스에 hCYP2D6 게재가 간으로 트리거링 항원의 직접적인 전달을 보장합니다 아데노 바이러스 구조 (AD-2D6)에 의해했습니다. 따라서, 다음의 지역 염증이 autoimmunity의 후속 개발을위한 비옥한 분야 9를 생성합니다. C광고-2D6의 정맥 주사와 intraperitoneal 주사의 ombination은 간장에 대한 지속적인 면역 손상 (섹션 1) 유도하기위한 가장 효과적인 경로이다. 여기 간 질환은 CYP2D6 모델에서 유도되는 방법과 간 손상의 다양한 측면을 평가하는 방법을자가 면역 질환에 대한 상세한 프로토콜을 제공합니다. 첫째, hepatocyte 같은 aminotransferases 등의 파괴,뿐만 아니라 hCYP2D6 항체의 titers을 나타내는 마커의 혈청 수준은 혈액 retroorbitaly (섹션 2) 샘플링에 의해 결정됩니다. 둘째, hCYP2D6 특정 T 세포 반응은 비장과 간장에서 lymphocytes를 수집하는이 특징입니다. 순수 간 lymphocytes를 얻기 위해, 간은는 콜라겐으로 소화와 Percoll 기울기 (섹션 4) 위에 정화 포털 정맥 (섹션 3)를 통해 PBS에 의해 perfused됩니다. hCYP2D6 특정 T 세포의 빈도는 hCYP2D6 펩티드 및 유동세포계측법 의한 IFNγ 생산 세포 (섹션 5)의 식별과 자극에 의​​해 분석됩니다. 셋째,세포 침투와 섬유증은 간암 섹션 (섹션 6) immunohistochemistry에 의해 결정됩니다. 이러한 분석 섭생이 모델의 만성적인 성격을 증명하기 위해서는 질병의 개시 이후에 여러 번 실시되어야한다. 주파수와 활동 hCYP2D6 특정 T 및 / 또는 B 세포 및 간 손상과 섬유증의 정도 특징으로 면역 반응의 정도는 예방 지연이나 autodestructive을 폐기하기위한 가능한 치료의 후속 평가를 위해 평가되어야 간장의 과정입니다.

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The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

주요 인간 autoantigen을 표현 아데노 바이러스와 생쥐의 감염은 CYP2D6의 광범 간염, 섬유증 및 생성을 특징으로 면역 - 매개 간 질환의 영구적인 형태로 제 2 형자가 면역 간염 결과에서 고통받는 환자 세라 인정 P450 2D6 (hCYP2D6)를 시토크롬 특정 면역 반응.

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