Name: the cyp2d6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice
Uploaded: 2012-02-03T12:00:00
Duration: 9 min 3 s
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Este trabalho é apoiado pela Universidade Goethe de Frankfurt Hospital e uma bolsa da Fundação Alemã de Pesquisa para a UC

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	<li>Manns, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diagnosis+and+management+of+autoimmune+hepatitis.">Diagnosis and management of autoimmune hepatitis.</a> Hepatology. 51, 2193-2213 (2010).</li><li>Czaja, A. J., Manns, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+the+Diagnosis,+Pathogenesis+and+Management+of+Autoimmune+Hepatitis.">Advances in the Diagnosis, Pathogenesis and Management of Autoimmune Hepatitis.</a> Gastroenterology. 4, 429-443 (2010).</li><li>Christen, U., Hintermann, E., Jaeckel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+animal+models+for+autoimmune+hepatitis.">New animal models for autoimmune hepatitis.</a> Semin. 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Autoimmun. , (2011).</li><li>Ando, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Class+I-restricted+cytotoxic+T+lymphocytes+are+directly+cytopathic+for+their+target+cells+in+vivo.">Class I-restricted cytotoxic T lymphocytes are directly cytopathic for their target cells in vivo.</a> J. Immunol. 152, 3245-3253 (1994).</li><li>Zierden, M., Kuhnen, E., Odenthal, M., Dienes, H. 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Immunol. 165, 2415-2422 (2000).</li><li>Derkow, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Differential+priming+of+CD8+and+CD4+T-cells+in+animal+models+of+autoimmune+hepatitis+and+cholangitis.">Differential priming of CD8 and CD4 T-cells in animal models of autoimmune hepatitis and cholangitis.</a> Hepatology. 46, 1155-1165 (2007).</li><li>Lapierre, P., Djilali-Saiah, I., Vitozzi, S., Alvarez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+murine+model+of+type+2+autoimmune+hepatitis:+Xenoimmunization+with+human+antigens.">A murine model of type 2 autoimmune hepatitis: Xenoimmunization with human antigens.</a> Hepatology. 39, 1066-1074 (2004).</li><li>Djilali-Saiah, I., Lapierre, P., Vittozi, S., Alvarez, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=DNA+vaccination+breaks+tolerance+for+a+neo-self+antigen+in+liver:+a+transgenic+murine+model+of+autoimmune+hepatitis.">DNA vaccination breaks tolerance for a neo-self antigen in liver: a transgenic murine model of autoimmune hepatitis.</a> J. Immunol. 169, 4889-4896 (2002).</li><li>Christen, U., Hintermann, E., Holdener, M., von Herrath, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Viral+triggers+for+autoimmunity:+is+the+'glass+of+molecular+mimicry'+half+full+or+half+empty.">Viral triggers for autoimmunity: is the 'glass of molecular mimicry' half full or half empty.</a> J. Autoimmun. 34, 38-44 (2010).</li><li>Krebs, P., Scandella, E., Odermatt, B., Ludewig, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapid+functional+exhaustion+and+deletion+of+CTL+following+immunization+with+recombinant+adenovirus.">Rapid functional exhaustion and deletion of CTL following immunization with recombinant adenovirus.</a> J. Immunol. 174, 4559-4566 (2005).</li><li>Hintermann, E., Bayer, M., Pfeilschifter, J., Christen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Adenoviral+delivery+of+the+liver+autoantigen+cytochrome+P450+2D6+chronically+activates+hepatic+stellate+cells+and+induces+fibrosis.">Adenoviral delivery of the liver autoantigen cytochrome P450 2D6 chronically activates hepatic stellate cells and induces fibrosis.</a> Manuscript Submitted. , (2011).</li></ol>

Os autores não têm nada a revelar.

Em estudos anteriores, hepatite experimental foi freqüentemente relatado para ser apenas transitórios e muitos modelos atuais para doença hepática auto-imune dependem de uma doença bastante complexos protocolos de indução (para revisões ver 3,5). Por exemplo, vários modelos usar camundongos transgênicos expressando antígenos-alvo específicos e adotivamente transferido alvo antígeno-específicas, na sua maioria TcR-transgênicas células, T 14,15. Muitas vezes, uma infecção adicional com vírus, bactérias ou livertropic parasitas é necessário para induzir a doença 16-18. Alternativamente, o DNA-vacinação com plasmídeos que codificam para antígenos-alvo, incluindo CYP2D6 19, é usado para induzir a hepatite. No entanto, uma vacinação adicional com plasmídeos que codificam para citocinas pró-inflamatórias, tais como a IL-12, é exigido 20. Infelizmente, com raras exceções 15,20 hepatite é apenas transitória. O modelo CYP2D6 6,21 usa um método simples tPara induzir a hepatite auto-imune, simplesmente infectando camundongos com um adenovírus expressando hCYP2D6, o auto-antígeno importante na AIH-2 7,8. Entrega de CYP2D6 por uma construção adenovírus garante a segmentação direta do fígado, bem como uma inflamação local que promove a quebra de tolerância. É importante notar, contudo, que tanto o título de o vírus, bem como a via de administração é crucial para esse modelo. Por um lado, o Ad-2D6 é um vírus de replicação deficiente, assim, um titer suficiente elevado de vírus é necessária para gerar uma quantidade crítica de antígeno dentro do fígado. Por outro lado, demasiado elevado título de um pode resultar em uma falha de fígado aguda fatal. Além disso, ele tem sido demonstrada anteriormente de que a infecção de camundongos por altos títulos de adenovírus leva a uma exaustão funcional da resposta imune 22. Em nosso modelo, nós usou uma combinação de infecção por via venosa e por via intraperitoneal em fim de se obter tanto a infiltração crônica celular, bem como extfibrose ensive. Temos observado que a infecção por via venosa sozinho ainda faz com que infiltração celular maciço, mas nenhuma fibrose da região subcapsular, indicando que a inflamação peritoneal devido à injecção intraperitoneal pode estar envolvido na o acúmulo contínuo subcapsular de colágeno (Hintermann &amp; Christen, manuscrito em preparação). No entanto, ele é importante para, observe que o fibrose hepática observada é antígeno-específica, desde que nós não detectou a ativação de células estreladas hepáticas e deposição de colágeno após a infecção com igualdade de vírus-títulos de Ad GFP-ou Ad de Controle-23. O modelo CYP2D6 reflete muitos aspectos de 1,2 AIH humana, tais como hepatite crônica caracterizada por infiltração celular persistente e fibrose hepática 6. Além disso, a presença de alta-título de anti-CYP2D6 anticorpos com especificidade epítopo semelhante e se espalhando 13 a LKM-1 anticorpos encontrados em AIH-2 pacientes indica o présença de uma reatividade crônica auto-imune comum. CYP2D6 é o antígeno importante na AIH-2, mas ele não é reconhecido por pacientes diagnosticados com a mais freqüente AIH tipo 1. Além disso, pacientes que sofrem de outras doenças hepáticas de etiologia auto-imune, tais como cirrose biliar primária (PBC) ou colangite esclerosante primária (PSC), gerar auto-anticorpos característicos com a especificidade de auto-antígenos distintos do fígado e seus fígados mostram diferentes características patológicas centradas no pequeno (PBC ) ou grandes dutos (PSC) biliares. Não obstante, as CYP2D6 modelos oferece a oportunidade de analisar mecanismos imunopatogênicos envolvidos em processos de hepáticas crônicas inflamatórias como ocorrendo durante as doenças hepáticas auto-imunes, para identificar jogadores-chave que impulsionam a destruição auto-imune de hepatócitos e para avaliar possíveis intervenções terapêuticas para curar a doença.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome do equipamento de </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Agulha 23G </td><td> BD Biosciences </td><td> 300800 </td><td></td></tr><tr><td> 27 ½ G agulha </td><td> VWR </td><td> 612-0151 </td><td></td></tr><tr><td> 30 ½ agulha G </td><td> BD Biosciences </td><td> 304000 </td><td></td></tr><tr><td> Alanina aminotransferase (tiras de teste GPT / ALT) </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10 745 138 202 </td><td></td></tr><tr><td> Aspartato aminotransferase tiras de teste (TGO / AST) </td><td> Roche Diagnostics </td><td> 10 745 120 202 </td><td></td></tr><tr><td> Anestesia Unidade Univentor 400 </td><td> <a href="http://www.agnthos.se" target="_blank" >AgnTho de</a> </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Moldes base, 37x24x10 mm descartável </td><td> VWR </td><td> 720-0208 </td><td></td></tr><tr><td> Celular filtro 70 milímetros </td><td> VWR </td><td> 734-0003 </td><td></td></tr><tr><td> Criostato </td><td> Leica </td><td> CM1850 UV </td><td></td></tr><tr><td> Tubos capilares heparinizados </td><td> Pescador </td><td> 3123987 </td><td></td></tr><tr><td> Microscópio Lâminas SuperFrost Plus </td><td> Menzel Glaser </td><td> J1800AMNZ </td><td></td></tr><tr><td> Microtainer SST tubos </td><td> BD Biosciences </td><td> 365951 </td><td></td></tr><tr><td> Placas de poliestireno, V-bottom </td><td> VWR </td><td> 391-1924 </td><td></td></tr><tr><td> Além disso Reflotron </td><td> Roche Diagnostics </td><td></td><td> Determiniation de soro AST / ALT </td></tr><tr><td colspan="4"></td></tr><tr><td> Nomeie of reagente de o </td><td> Companhia </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentários </td></tr><tr><td> Coelho anti-rato tipo anti-colágeno I IgG, </td><td> Chemicon </td><td> AB765P </td><td></td></tr><tr><td> Biotinilado de cabra anti-IgG de coelho </td><td> Vetorial (AXXORA) </td><td> VC-BA-1000-MC15 </td><td></td></tr><tr><td> FITC-conjugado anti-rato anticorpo CD8a </td><td> Southern Biotech </td><td> 1550-1502 </td><td></td></tr><tr><td> PE-anticorpo conjugado com IFNy anti-rato </td><td> BD Biosciences </td><td> 554412 </td><td></td></tr><tr><td> PE-conjugado anti-rato CD16/CD32 anticorpo (FcR bloco) </td><td> BD Biosciences </td><td> 553141 </td><td></td></tr><tr><td> Aquatex </td><td> VWR </td><td> 1.08562.0050 </td><td></td></tr><tr><td> Avidina / biotina Bloqueio de kit </td><td&gt; Vetorial (AXXORA) </td><td> VC-SP-2001-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> A Brefeldin </td><td> Sigma </td><td> B6542 </td><td></td></tr><tr><td> Colagenase IV </td><td> Sigma </td><td> C5138-100mg </td><td></td></tr><tr><td> Substrato DAB kit 3&#39;3&#39;diaminobenzidine </td><td> Vetorial (AXXORA) </td><td> VC-SK-4100-KI01 </td><td></td></tr><tr><td> DNase </td><td> Sigma </td><td> DN-25 </td><td></td></tr><tr><td> Elite Reagente ABC </td><td> Vetorial (AXXORA) </td><td> VC-PK-7100-L050 </td><td></td></tr><tr><td> Eosina solução G / Y </td><td> Roth </td><td> X883.1 </td><td></td></tr><tr><td> Soro fetal de vitelo (FCS) </td><td> Biochrom AG </td><td> S 0115 </td><td></td></tr><tr><td> Isofluran </td><td> Forene </td><td> B506 </td><td></td></tr><tr><td> Solução de hematoxilina de Meyer </td><td> AppliChem </td><td> A4840, 1000 </td><td></td></tr><tr><td> Composto outubro </td><td> Sakura Finetek Europa </td><td> 4583 </td><td></td></tr><tr><td> PBS-formol tamponado a 10% </td><td> Roth </td><td> A146.3 </td><td></td></tr><tr><td> Percoll </td><td> Amersham </td><td> 17-0891-01 </td><td></td></tr><tr><td> Roti-Histokit </td><td> Roth </td><td> 6638,1 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI </td><td> Invitrogen </td><td> 61870 </td><td></td></tr><tr><td> Saponina da casca Quillaja </td><td> Sigma </td><td> S7900 </td><td></td></tr></tbody></table>

the cyp2d6 animal model: how to induce autoimmune hepatitis in mice

Hepatite auto-imune é uma doença rara mas potencialmente fatal auto-imune do fígado de 1,2 etiologia desconhecida. Em as tentativas passado, muitos tenham sido efectuadas ao gerar um modelo animal, que reflete as características de a doença humana 3-5. No entanto, em vários modelos a indução de doença foi de bastante complexo e, muitas vezes a hepatite foi de apenas transiente 3-5. Portanto, temos desenvolvido um modelo do rato simples de que, usa o autoantígeno major humano em tipo 2 hepatite auto-imune (AIH-2), a saber, hCYP2D6, como um gatilho 6. Tipo 1 fígado e rim-anticorpos microssomais (LKM-1) anticorpos que reconhecem hCYP2D6 são a marca registrada de AIH-2 7,8. Entrega de hCYP2D6 em tipo selvagem FVB ou camundongos C57BL / 6 foi por um construto Adenovírus (Ad-2D6), que garanta uma entrega directa de o antígeno desencadeante para o fígado. Assim, a inflamação que se seguiu local gera um campo fértil 9 para o desenvolvimento subseqüente de auto-imunidade. Um combination de injecção intravenosa e intraperitoneal de Ad-2D6 é a rota mais eficaz para induzir a um dano a longo-duradoura auto-imune para o fígado (secção 1). Aqui nós fornecemos um protocolo detalhado sobre como doença auto-imune hepática é induzida no modelo de CYP2D6 e como os diferentes aspectos da lesão hepática pode ser avaliada. Em primeiro lugar, os níveis séricos de marcadores que indicam destruição hepatócito, tais como aminotransferases, bem como os títulos de aglutininas hCYP2D6 anticorpos são determinadas pela recolha de sangue retroorbitaly (seção 2). Segundo lugar, o hCYP2D6-específico resposta das células T é caracterizada através da recolha de linfócitos a partir do baço e do fígado. A fim de obter linfócitos de fígado puros, os fígados são perfundidos pela PBS através da veia portal (secção 3), digerido em colágeno e purificou-se ao longo de um gradiente de Percoll (seção 4). A frequência de células hCYP2D6-T específicas é analisada por estimulação com hCYP2D6 peptídeos e à identificação de IFNy-células produtoras de por citometria de fluxo (seção 5). Em terceiro lugar,infiltração celular e fibrose é determinada por imuno-histoquímica de secções de fígado (seção 6). Regimen Tal análise tem de ser conduzida a várias vezes após a iniciação da doença, a fim de provar a natureza crônica do modelo. A magnitude da resposta imune caracterizada por a freqüência e actividade das hCYP2D6-específicos T e / ou células B e o grau de a danos no fígado e fibrose têm de ser avaliados para uma subsequente avaliação de possíveis tratamentos para prevenir, atrasar ou revogue a autodestructive processo de o fígado.

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The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Infecção de camundongos com um Adenovírus expressando o autoantígeno major humano do citocromo P450 2D6 (hCYP2D6) reconhecidas pelos soros de pacientes que sofrem a partir de tipo 2 resultados da hepatite auto-imunes em uma forma persistente da auto-imune-mediada doença do fígado caracterizada por extenso hepatite fibrose, e de geração de um CYP2D6 -específica resposta imune.

O modelo animal CYP2D6: Como induzir hepatite auto-imune em ratos

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