Name: generation of induced regulatory t cells from primary human na&iuml;ve and memory t cells
Uploaded: 2012-04-16T12:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÂ¯ve and Memory T Cells at JoVE.com

<p class="jove_content"&gt; Авторы выражают благодарность Дженнифер Странно и Грег Баумана за помощь в анализе потока цитометрии и сортировки. Эта работа была поддержана Количество NIH Грант 2P20 RR020171 от NCRR и Университета Кентукки средства для запуска FM; ГНС признает поддержку президентской стипендии Высшее и стипендий Кентукки возможностей.</p

1. Выделение человека мононуклеарных клеток периферической крови (МНПК) из шерсти Баффи <ol><li> Приобретает одну единицу слой кровяного сгустка из больницы или поблизости от расположения центра крови. Наш центр крови дает нам около 40-60 мл лейкомассы на единицу получил от нормальных доно?...

<ol>
	<li>Powrie, F., Correa-Oliveira, R., Mauze, S., Coffman, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+interactions+between+CD45RBhigh+and+CD45RBlow+CD4++T+cells+are+important+for+the+balance+between+protective+and+pathogenic+cell-mediated+immunity.">Regulatory interactions between CD45RBhigh and CD45RBlow CD4+ T cells are important for the balance between protective and pathogenic cell-mediated immunity.</a> The Journal of Experimental Medicine. 179, 589-600 (1994).</li><li>Tarbell, K. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dendritic+cell-expanded,+islet-specific+CD4++CD25++CD62L++regulatory+T+cells+restore+normoglycemia+in+diabetic+NOD+mice.">Dendritic cell-expanded, islet-specific CD4+ CD25+ CD62L+ regulatory T cells restore normoglycemia in diabetic NOD mice.</a> The Journal of Experimental Medicine. 204, 191-201 (2007).</li><li>Morgan, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effective+treatment+of+collagen-induced+arthritis+by+adoptive+transfer+of+CD25++regulatory+T+cells.">Effective treatment of collagen-induced arthritis by adoptive transfer of CD25+ regulatory T cells.</a> Arthritis and Rheumatism. 52, 2212-2221 (2005).</li><li>Taylor, P. A., Lees, C. J., Blazar, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+infusion+of+ex+vivo+activated+and+expanded+CD4(+)CD25(+)+immune+regulatory+cells+inhibits+graft-versus-host+disease+lethality.">The infusion of ex vivo activated and expanded CD4(+)CD25(+) immune regulatory cells inhibits graft-versus-host disease lethality.</a> Blood. 99, 3493-3493 (2002).</li><li>Ziegler, S. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=FOXP3:+of+mice+and+men.">FOXP3: of mice and men.</a> Annual Review of Immunology. 24, 209-226 (2006).</li><li>Riley, J. L., June, C. H., Blazar, B. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+T+regulatory+cell+therapy:+take+a+billion+or+so+and+call+me+in+the+morning.">Human T regulatory cell therapy: take a billion or so and call me in the morning.</a> Immunity. 30, 656-6565 (2009).</li><li>Morgan, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+FOXP3+mRNA+is+not+confined+to+CD4+CD25++T+regulatory+cells+in+humans.">Expression of FOXP3 mRNA is not confined to CD4+CD25+ T regulatory cells in humans.</a> Human Immunology. 66, 13-20 (2005).</li><li>Wang, J., Huizinga, T. W. J., Toew, R. E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=De+Novo+Generation+and+Enhanced+Suppression+of+Human+CD4+CD25++Regulatory+T+Cells+by+Retinoic+Acid.">De Novo Generation and Enhanced Suppression of Human CD4+CD25+ Regulatory T Cells by Retinoic Acid.</a> Journal of Immunology. 183, 4119-4126 (2009).</li><li>Hori, S., Nomura, T., Sakaguchi, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+regulatory+T+cell+development+by+the+transcription+factor+Foxp3.">Control of regulatory T cell development by the transcription factor Foxp3.</a> Science (New York, N.Y.). 299, 1057-1061 (2003).</li><li>McHugh, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD4(+)CD25(+)+immunoregulatory+T+cells:+gene+expression+analysis+reveals+a+functional+role+for+the+glucocorticoid-induced+TNF+receptor.">CD4(+)CD25(+) immunoregulatory T cells: gene expression analysis reveals a functional role for the glucocorticoid-induced TNF receptor.</a> Immunity. 16, 311-323 (2002).</li><li>Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunologic+Self-Tolerance+Maintained+by+Cd25+Cd4+Regulatory+T+Cells+Constitutively+Expressing+Cytotoxic+T+Lymphocyte-Associated+Antigen+4.">Immunologic Self-Tolerance Maintained by Cd25+Cd4+Regulatory T Cells Constitutively Expressing Cytotoxic T Lymphocyte-Associated Antigen 4.</a> The Journal of Experimental Medicine. 192, 303-310 (2000).</li><li>Liu, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD127+expression+inversely+correlates+with+FoxP3+and+suppressive+function+of+human+CD4++T+reg+cells.">CD127 expression inversely correlates with FoxP3 and suppressive function of human CD4+ T reg cells.</a> The Journal of Experimental Medicine. 203, 1701-1711 (2006).</li><li>Schraven, B., Kalinke, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CD28+superagonists:+what+makes+the+difference+in+humans.">CD28 superagonists: what makes the difference in humans.</a> Immunity. 28, 591-595 (2008).</li><li>Reneer, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peripherally+induced+human+Regulatory+T+cells+uncouple+Kv1.3+activation+from+TCR-associated+signaling.">Peripherally induced human Regulatory T cells uncouple Kv1.3 activation from TCR-associated signaling.</a> European Journal of Immunology. , (2011).</li></ol>

Хотя Treg передачи держит огромный терапевтический обещание в борьбе с аутоиммунными отторжения трансплантата и других иммунных или воспалительных опосредованного нарушения, методы их эффективного формирования и стабильного обслуживания до сих пор не разработаны. Как только 1-5% цирку...

<table border="1"><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер по каталогу </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Lymphoprep </td><td> Ось-Shield </td><td> 1114547 </td><td> Хранить при комнатной температуре </td></tr><tr><td> Холодильные настольные центрифуги </td><td> Эппендорф </td><td> 5810R </td><td></td></tr><tr><td> Яркий-Line гемоцитометра </td><td> Хауссер Научные </td><td> 3110 </td><td></td></tr><tr><td> EasySep человека CD4 + Т-клеток Обогащение Kit </td><td> Технологии стволовых клеток </td><td> 19052 </td><td></td></tr><tr><td> EasySep человека CD4 + Т-памяти сотового обогащению Kit </td><td> Технологии стволовых клеток </td><td> 19157 </td><td></td></tr><tr><td> EasySep человека наивного CD4 + Т-клеток Обогащение Kit </td><td> Технологии стволовых клеток </td><td> 19155 </td><td></td></tr><tr><td> Big Easy EasySep Magчистый </td><td> Технологии стволовых клеток </td><td> 18001 </td><td> Серебро </td></tr><tr><td> 5 мл Круглые трубы полистирола Нижний </td><td> BD Сокол </td><td> 352008 </td><td></td></tr><tr><td> 15 мл полипропиленовые трубы центрифуги </td><td> VWR </td><td> 89004-368 </td><td></td></tr><tr><td> 14 мл полипропиленовые с круглым дном трубы </td><td> BD Сокол </td><td> 352059 </td><td></td></tr><tr><td> 50 мл полипропиленовые трубы центрифуги </td><td> VWR </td><td> 89004-364 </td><td></td></tr><tr><td> Человека анти-CD3 антитела </td><td> Bio X сотовых </td><td> BE0001-2 </td><td> Клон: OKT3 </td></tr><tr><td> 24 Ну Сотовые плиты из полистирола культуры </td><td> BD Сокол </td><td> 353047 </td><td></td></tr><tr><td> 96 лунок круглым дном тканевой культуры плиты </td><td> Гренье Bio-One </td><td> 650180 </td><td></td></tr><tr><td> RPMI 1640 с Glutamax-я и HEPES буфера </td><td> Гибко </td><td> 72400 </td><td></td></tr> &lt;TR&gt; <td> Эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) </td><td> Гибко </td><td> 16000 </td><td></td></tr><tr><td> β-меркаптоэтанол </td><td> Сигма </td><td> M7522 </td><td></td></tr><tr><td> Рекомбинантного человеческого TGF-β1 </td><td> eBioscience </td><td> 14-8348-62 </td><td></td></tr><tr><td> Рекомбинантного человеческого IL-2 </td><td> eBioscience </td><td> 14-8029-63 </td><td></td></tr><tr><td> Бычьего сывороточного альбумина (БСА) </td><td> MP Biomedicals Инк </td><td> 810531 </td><td></td></tr><tr><td> 0,5 М ЭДТА </td><td> Amresco </td><td> E177 </td><td></td></tr><tr><td> Мышь против человека CD25-PE </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-091-024 </td><td> Клон: 4E3 </td></tr><tr><td> Мышь против человека CD45RA-PE-Cy5 </td><td> eBioscience </td><td> 15-0458-42 </td><td> Клон: HI100 </td></tr><tr><td> Мышь против человека CD127 АПК </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-094-890 </td><td> Клон: MB15-18C9 </td></tr><tr><td> ДНКазы II </td><td> MP Biomedicals Инк </td><td> 190370 </td><td></td></tr><tr><td> MoFlo Проточный цитометр </td><td> Beckman Coulter </td><td></td><td></td></tr><tr><td> FlowJo Software </td><td> Дерево Звезды, Inc </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Сотовые Quest Pro Software </td><td> BD Biosciences </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Новорожденный теленок сыворотки </td><td> Гибко </td><td> 16010 </td><td></td></tr><tr><td> L-глютамин </td><td> Гибко </td><td> 25030 </td><td></td></tr><tr><td> AIM-V </td><td> Гибко </td><td> 0870112 </td><td></td></tr><tr><td> CellTrace CFSE пролиферации клеток Kit </td><td> Invitrogen </td><td> C34554 </td><td></td></tr><tr><td> TREG бисер борьбе с инспектором </td><td> Miltenyi Biotec </td><td> 130-092-909 </td><td></td></tr><tr><td> Пенициллин, стрептомицин </td><td> Гибко </td><td> 15140 </td><td></td></tr><tr><td> 40 мкМ клеточной линии нейлонэ </td><td> BD Сокол </td><td> 352340 </td><td></td></tr></table>

generation of induced regulatory t cells from primary human na&iuml;ve and memory t cells

Разработка и сопровождение иммуносупрессивных CD4 + регуляторных Т-клеток (Tregs) способствуют периферической толерантности необходимо оставаться в иммунологический гомеостаз с огромным количеством себе и комменсальных антигенов и на организм человека. Возмущения в балансе между Tregs и воспалительных обычные Т-клеток может привести к иммунопатологии или рак. Хотя терапевтические инъекции Tregs было показано, что эффективность в мышиных моделях колита 1, тип диабета 2, ревматоидный артрит и трансплантат против хозяина, 4 несколько принципиальных отличий в сравнении с человеческой мыши Treg биологии 5, до сих пор препятствует клинического использования. Отсутствие достаточного количества, чистоты, стабильности и наведения специфику терапевтической Tregs необходимость динамическая платформа развития человека Treg, на котором для оптимизации условий для расширения своих бывших естественных 6. Здесь уровня Дописывать круг метод дифференциации индуцированных Tregs (iTregs) из одной человеческой периферической крови доноров, которые могут быть разбиты на четыре этапа: изоляция мононуклеарных клеток периферической крови, магнитные выбор CD4 + Т-клетки, в пробирке культуру клеток и флуоресцентных активированный сортировки клеток (FACS) Т подмножеств клеток. С Treg подпись транскрипционный фактор forkhead окно P3 (FOXP3) является активация вызванных фактором транскрипции у людей 7 и никакой другой уникальный маркер существует, комбинаторной панели маркеров должны быть использованы для определения Т-лимфоцитов с супрессорной активности. После шести дней в культуре клетки в нашей системе может быть разграничены на наивных Т-клеток, Т-клетки памяти или iTregs на основе их относительной выражение CD25 и CD45RA. В ячейках памяти и наивных Т имеют различные сообщил поляризации требования и пластичности 8 предварительной сортировки исходной популяции Т-клеток в CD45RA + + и CD45RO подмножества может бE используется для изучения этих расхождений. В соответствии с другим, наши CD25 Привет CD45RA - iTregs экспресс высокого уровня FOXP3 9 GITR и CTLA-4 11 и низкого уровня CD127 12. После FACS каждой популяции, полученные в результате клетки могут быть использованы в анализе супрессоров, которая оценивает относительную способность замедлить распространение карбоксифлуоресцеина сукцинимидил эфира (CFSE)-меченных аутологичных Т-клеток.

Watch this Scientific Journal Video about Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÂ¯ve and Memory T Cells at JoVE.com

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human NaÃƒÆ’Ã‚Â¯ve and Memory T Cells

Мы опишем метод для создания нормативной, оперативной памяти и наивных Т-клеток из одной человеческой донорской крови. Поляризованный Tregs можно затем по сравнению с другими подмножества в различных генетических и функциональных приложений с генетической однородности, в том числе подавление анализ также подробно здесь.

Генерация индуцированного регуляторных Т клеток из первичной человека наивного и Т-клеток памяти

The development and maintenance of immunosuppressive CD4+ regulatory T cells (Tregs) contribute to the peripheral tolerance needed to remain in ...

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Generation of Induced Regulatory T Cells from Primary Human Na&iuml;ve and Memory T Cells

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

Ретровирусные трансдукция Т-клеточных рецепторов в мышь Т-клеток

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Directed Differentiation of Induced Pluripotent Stem Cells towards T Lymphocytes

Направленной дифференцировки индуцированных плюрипотентных стволовых клеток по отношению к Т-лимфоцитов

Adoptive cell transfer (ACT) of antigen-specific CD8+  cytotoxic T lymphocytes (CTLs) is a promising treatment for a variety of  malignancies 1. CTLs can  ...

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

piggyBac Transposon System Modification of Primary Human T Cells

PiggyBac транспозонов модификации системы первичной Т-клетках человека

The piggyBac transposon system is naturally active, originally derived from the cabbage looper moth1,2. This non-viral system is plasmid based, most ...

New Tools to Expand Regulatory T Cells from HIV-1-infected Individuals

Новые методы для расширения регуляторных Т-клеток от ВИЧ-1-инфицированных

CD4+ Regulatory T cells (Tregs) are potent immune modulators and serve an important function in human immune homeostasis. Depletion of Tregs has led to ...

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Derivation of T Cells In Vitro from Mouse Embryonic Stem Cells

Вывод Т-клеток<em&gt; In Vitro</em&gt; От эмбриональных стволовых клеток мыши

The OP9/OP9-DL1 co-culture system has become a well-established method for deriving differentiated blood cell types from embryonic and hematopoietic ...

Generation of Human Alloantigen-specific T Cells from Peripheral Blood

Генерация человека Аллоантиген-специфических Т-клеток из периферической крови

The study of human T lymphocyte biology often involves examination of responses to activating ligands. T cells recognize and respond to processed peptide ...

T Cells Capture Bacteria by Transinfection from Dendritic Cells

Т-клеток Захват бактерий Transinfection от дендритных клеток

Recently, we have shown, contrary to what is described, that CD4+ T cells, the paradigm of adaptive immune cells, capture bacteria from infected dendritic ...

Phenotypic and Functional Analysis of Activated Regulatory T Cells Isolated from Chronic Lymphocytic Choriomeningitis Virus-infected Mice

Фенотипическая и функционального анализа активированных регуляторных Т-клеток, выделенных из хронического лимфоцитарного хореоменингита инфицированных вирусом мышей

Regulatory T (Treg) cells, which express Foxp3 as a transcription factor, are subsets of CD4+ T cells. Treg cells play crucial roles in immune tolerance ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

Развитие стволовых клеток, полученных из антиген-специфических регуляторных Т-клеток против аутоиммунитета

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells (iTregs) from Na&#239;ve CD4+ T Cells Using a TGF-&#946;-containing Protocol

In Vitro Differentiation of Human CD4+FOXP3+ Induced Regulatory T Cells iTregs from NaÃƒÆ’Ã†'Ãƒâ€šÃ‚Â¯ve CD4+ T Cells Using a TGF-ÃƒÆ’Ã…Â½Ãƒâ€šÃ‚Â²-containing Protocol

In Vitro Дифференциация человеческого CD4 + FOXP3 + Индуцированные регуляторных Т - клеток (iTregs) от наивных CD4 + Т - клеток с использованием TGF-β-содержащего протокол

Regulatory T cells (Tregs) are an integral part of peripheral tolerance, suppressing immune reactions against self-structures and thus preventing ...