Name: high-resolution live imaging of cell behavior in the developing neuroepithelium
Uploaded: 2012-04-12T13:00:00
Duration: 10 min 59 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium at JoVE.com

1. Bulaşık Hazırlık <ol><li> Kesit kültürü için kullanılan Yemekleri (WillCo yemekleri) (temel olarak bir coverslip ile) altı cam vardır. Bu cam taban temiz tutmak için 6 cm doku kültürü çanak lens dokusu yerleştirilir. </li><li> Deney bir gün önce, poli-L-lizin katı cam alt izin verecek şekilde, oda sıcaklığında 5dk süreyle cam dipli çanak ve inkübe 2 ml% 0.1 poli-L-lizin solüsyonu ilave edin. </li><li> Poli-L-lizin çözeltisi kaldırmak ve deiyonize su içinde üç kez durulama ve sonra bir defa% 70 etanol içinde. </li><li> Gece kurumaya bırakın. Yemekleri de yavaşça 30-45 saniye süreyle düşük güçte mikrodalga fırında ısıtılarak kurutulabilir. </li></ol> 2. Embriyo Elektroporasyon <ol><li> 37 yumurta inkübe ° C Hamburger-Hamilton (HH) evre 10 (~ 36 saat) (veya diğer istenen sahne) için. </li><li> Başlayan cam iğneler (biz bir Flaming / Kahverengi modeli P87 microcapillary çektirmesi kullanın) hazırlamak ve needl den ucu koptu öncee bir mikroskop altında ince bir pens kullanarak. Bu DNA solüsyonu enjeksiyonu engelleyecek kadar dar olmamasına rağmen iğnenin ucunu embriyo delmek için yeterli keskinlikte olmalıdır. </li><li> Embriyonun iki tarafında Pencere yumurta ve yer elektrotlar (5mm) </li><li> Nöral tüp içine - DNA (hızlı yeşil küçük bir miktar ile boyanmaktadır deiyonize suda 0.5 mg / ml ~ 0.025) enjekte edilir. </li><li> Mevcut uygulama - darbeler arasında 950 ms 12-17 V üç kez, 50ms darbe uzunluğu. </li><li> Biz tek tek hücrelerin takip edebilirsiniz böylece mozaik ifade elde etmek için DNA düşük konsantrasyonlarda ve düşük elektroporasyon gerilim kullanın. </li><li> Cellotape ile yumurta kabuğu pencere Kapak ve mühürlü olduğundan emin olun. </li><li> Embriyoların 37 3-4 saat veya gece boyunca kurtarmak için izin ° C </li></ol> 3. Kollajen ve Dilim Kültür Orta Hazırlık <ol><li> Dilimleme önce yaklaşık bir saat kollajen karışımı ve dilim kültür ortamı hazırlayın. </li><li> 300 ul tYPE 1 kollajen 100 ul% 0.1 asetik asit solüsyonu ve 100 ul 5 x L15, orta ekleyin. Her eklemeden sonra iyice vorteksleyin. Çözüm sarı açmalısınız. </li><li> Şimdi 15-20 ul% 7.5 sodyum bikarbonat ve iyice vorteks ekleyin. Çözeltisi hafif pembe olmalıdır, ve bunun için gerekli sodyum bikarbonat hacmi farklı olabilir. Buz üzerinde tutun ve her zaman taze oluşturuyor. </li><li> 10 ml neurobasal ortam, bir 1 x nihai konsantrasyona ve 10 ul gentamisin çözeltisine, B-27 takviyesi ve Glutamax eklemek. </li><li> 37 ° C inkübatör koyun orta% 5 CO 2 ile tampon. Bu CO2 ile dengelenmesi için izin vermek için kabın üst serbest bırakır. </li></ol> 4. Dilim Kültür <ol><li> Yumurtadan embriyo çıkarın ve L15 ortamda yıkayın. </li><li> Bir altta sylgard tabakası ve gerildi böylece çevreleyen ekstra embriyonik zarlar yoluyla onları iğnelemek bir doku kültür kaplarına koyun. </li><li> Bir mikrofon kullanarakroknife, ilgi bölgesinden geçen dilim embriyonu olarak düz mümkün. Spinal kord için, kalın dilimler 1-2 Somitlerin arasında olmalıdır. Bunları kaybetmemeniz için diğer embriyolar dilim ise embriyo bağlı dilimleri bırakın. </li><li> Ucu ~ 1 mm kesmek ve bir p2 veya p10 bu takarak bir 200 ul mikropipet ucu hazırlayın. Bu ucu cam alt çanak omurilik dilimleri aktarmak için kullanılacaktır. A 10 ul ucu dilim almak için yeterince geniş değil. </li><li> Coat daha önceden hazırlanmış 1 ul kollajen karışımı pipetleme kollajen ile ucunun içinde. L15 orta ile yıkayın daha sonra 1-2 dakika bekletin ve. Bu ucu içine yapışmasını doku önleyecektir. </li><li> Bir microknife kullanarak embriyodan dilim ayırın ve 200 ul ucu ile donatılmış ve 1 ul ayarlanmış bir p2 veya p10 kullanarak çanak kaldırmak. Mümkün olduğu kadar az aracı olarak almaya çalışın. </li><li> Poli-L-Lizin kaplamalı çanak üzerindeki bu vorteks kollajen karışımı ve damla 5-8 ul. </li><li> Immedialarına ince forseps bir çift ile yerine kollajen ve pozisyona embriyo dilim koydu. Dilimler yansıması ile yan coverslip ile aynı hizada olacak şekilde yerleştirilmelidir. Doku coverslip üzerindeki poli-l-lizin kaplama uymalıdır. </li><li> Eğer coverslip birkaç dilim bulana kadar tekrarlayın. Biz genellikle bir çanak üzerine 6-9 dilim yerleştirebilirsiniz. </li><li> Tüm dilimler yerinde sonra, çanak kapağı ve kollajen 20 dakika ayarlamanızı sağlar. Erken yerleştirilen kollajen bazıları şimdiden kurumaya başlamış olabilir. Bu bu kapsayan önce L15 için küçük bir miktar eklemek önlemek için. </li><li> Bir kez, dikkatle ayarlanmış en az bir saat için 37 ° C&#39;de% 5 CO 2 dengelenmiş oldu 2ml dilim kültür ortamı ekleyin. Bakım coverslip gelen kollajen çıkarmak değil alınmalıdır. </li><li> 37 ° /% 5 CO2 inkübatör Yeri ve dilimleri görüntüleme önce en az 3 saat kurtarmak için izin verir. Bir kutu zekâ hiç nem, yer çanak varsabir köşede nemli kağıt mendil ha biraz. </li></ol> 5.. Görüntüleme Embriyo Dilimleri <ol><li> Biz görüntü dilimleri bir Weatherstation kazanı ile donatılmış bir DeltaVision Çekirdek geniş alan mikroskobu kullanın. Odacık sürekli% 5 CO2 /% 95 hava azından mikroskop aşamasında sürdürmek için bir CO2 perfüzyon aparatı ile 37 ° C&#39;de muhafaza edilir. </li><li> Görüntüleme normalde 40 x / 1.30 NA immersiyon yağı lens kullanarak ve görüntüleri CCD kamera soğutmalı bir CoolSnap HQ2 ile yakalanan yapılmaktadır. </li><li> Z-bölümleri 45 mikron doku aracılığıyla her 1.5 mikron yakalanır. Pozlama süresi mümkün olduğu kadar düşük tutulmalıdır. Biz normalde her Z-bölüm için 5-50 ms için maruz. Görüntüler her 7 dakikada yakalanır ve en fazla 9 dilim fonksiyonu Ziyaret DeltaVision sistemin hassas noktası kullanarak ziyaret edilebilir. </li></ol> 6. Temsilcisi Sonuçlar Bir omurilik progenitör hücre örneği time-lapse sırasıŞek. 2a ve tekabül eden film 1. Görüntüleme iki gün yaşlı (HH aşamada 12) embriyo bir omurilik dilim başlandı. Bu hücre GFP-αTubulin ifade eden bir yapı ile transfekte edildi. Bu erken aşamada, nöral progenitör hücrelerin ağırlıklı hücreleri iki tane daha bisiklet progenitör hücreler üretmek için bölmek sırasında progenitör-progenitör modu bölünmeler uğrarlar. Şekil. 2b ve tekabül eden film 2 hücre membran işaretleme, GFP-GPI (GPI GFP demirli) ile transfekte edilmiş bir hücre gösterir. Bu hücre bazal süreci ikiye böler ve eşit kızı hücreleri tarafından devralınan sırasında bir bölümü uğrar. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/3920/3920fig1.jpg" /> Şekil 1.. Time-lapse görüntüleme için Dilim kültür protokolü. <img alt="Şekil 2" src="/files/ftp_upload/3920/3920fig2.jpg" /> Şekil 2. Hücre bNormal omurilik gelişimi sırasında ehavior. Movie 1 (a) Seçilmiş kareleri. GFP-tubulin ifade Hücre bir kez daha (24 saat 23 dk ve 25 saat 54 dakika) bölen iki kızı üreten hücreleri, apikal yüzeye (2 saat 20 dakika) dik bir bölünme uçağı ile böler. (B) Film 2 Seçili karelerin. GFP-GPI ile transfekte Hücre bazal süreci bölünmüş (beyaz ok) ve eşit kızı hücreleri tarafından devralınan sırasında hücre bölünmesi uğrar. Movie 1. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3920/3920movie1.mov" target="_blank">filmi görmek için buraya tıklayın</a> . Film 2. <a href="http://www.jove.com/files/ftp_upload/3920/3920movie1.mov" target="_blank">filmi görmek için buraya tıklayın</a> .

<ol>
	<li>Ulloa, F., Briscoe, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphogens+and+the+Control+of+Cell+Proliferation+and+Patterning+in+the+Spinal+Cord.">Morphogens and the Control of Cell Proliferation and Patterning in the Spinal Cord.</a> Cell Cycle. 6, 2640-2649 (2007).</li><li>Briscoe, J., Novitch, B. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulatory+pathways+linking+progenitor+patterning,+cell+fates+and+neurogenesis+in+the+ventral+neural+tube.">Regulatory pathways linking progenitor patterning, cell fates and neurogenesis in the ventral neural tube.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 363, 57-70 (2008).</li><li>Shiau, C., Das, R., Storey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+effective+assay+for+high+cellular+resolution+time-lapse+imaging+of+sensory+placode+formation+and+morphogenesis.">An effective assay for high cellular resolution time-lapse imaging of sensory placode formation and morphogenesis.</a> BMC Neuroscience. 12, 37 (2011).</li><li>Wilcock, A. C., Swedlow, J. R., Storey, K. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitotic+spindle+orientation+distinguishes+stem+cell+and+terminal+modes+of+neuron+production+in+the+early+spinal+cord.">Mitotic spindle orientation distinguishes stem cell and terminal modes of neuron production in the early spinal cord.</a> Development. 134, 1943-1954 (2007).</li><li>Vilas-Boas, F., Fior, R., Swedlow, J. R., Storey, K. G., Henrique, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+reporter+of+notch+signalling+indicates+regulated+and+random+notch+activation+during+Vertebrate+neurogenesis.">A novel reporter of notch signalling indicates regulated and random notch activation during Vertebrate neurogenesis.</a> BMC Biology. 9, 58 (2011).</li><li>Herman, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+microscopy.">Fluorescence microscopy.</a> Bios Scientific Publishers. , (1998).</li><li>Conchello, J. -. A., Lichtman, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optical+sectioning+microscopy.">Optical sectioning microscopy.</a> Nat. Meth. 2, 920-931 (2005).</li><li>Pawley, J. B., Pawley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Fundamental Limits in Confocal Microscopy Handbook Of Biological Confocal. , (2006).</li><li>Swedlow, J. R., Hu, K., Andrews, P. D., Roos, D. S., Murray, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Measuring+tubulin+content+in+Toxoplasma+gondii:+A+comparison+of+laser-scanning+confocal+and+wide-field+fluorescence+microscopy.">Measuring tubulin content in Toxoplasma gondii: A comparison of laser-scanning confocal and wide-field fluorescence microscopy.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 99, 2014-2019 (2002).</li><li>Murray, J. M., Appleton, P. L., Swedlow, J. R., Waters, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+performance+in+three-dimensional+fluorescence+microscopy.">Evaluating performance in three-dimensional fluorescence microscopy.</a> Journal of Microscopy. 228, 390-405 (2007).</li><li>Biggs, D. S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+Deconvolution+Microscopy.">3D Deconvolution Microscopy.</a> Current Protocols in Cytometry. , (2001).</li><li>Chalfie, M., Tu, Y., Euskirchen, G., Ward, W., Prasher, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Green+fluorescent+protein+as+a+marker+for+gene+expression.">Green fluorescent protein as a marker for gene expression.</a> Science. 263, 802-805 (1994).</li><li>Wiedenmann, J., Oswald, F., Nienhaus, G. U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+proteins+for+live+cell+imaging:+Opportunities,+limitations,+and+challenges.">Fluorescent proteins for live cell imaging: Opportunities, limitations, and challenges.</a> IUBMB Life. 61, 1029-1042 (2009).</li></ol>

Çıkar çatışması ilan etti.

Biz tavuk embriyonik kesit kültürü hücre davranışlarını izlemek için buraya yeni bir time-lapse görüntüleme testi sunuyoruz. 24-48 saat arasında zaman kareleri yakalamak daha kolay olmasına rağmen Bu testte, 70 saate kadar canlı doku için yüksek çözünürlüklü görüntüleme sağlar. Yüksek NA petrol objektif ve zaman noktaları arasında nispeten kısa aralıklarla kullanımı de bize genellikle hızlı gelişir hücre davranışlarını izlemek için izin olarak, yüksek çözünürlükte görüntü toplama sağlar, ve kolayca konfokal kullanarak geleneksel time-lapse görüntüleme sırasında atlanabilir mikroskopi. Bu testin önemli avantajı uzun süreler boyunca görüntü hücrelere yeteneğidir. 7 mikroskobu konfokal lazer yerine geniş alan 6 kullanımı bunun için önemlidir. Konfokal mikroskop geleneksel optik kesitler alıp doğrudan odak bilgi dışarı ortadan kaldırmak için yeteneği de dahil, geniş alan mikroskopisi karşı çeşitli avantajlar sundu <sup&gt; 7, ancak bir iğne deliği kullanımını önemli bir bilgi miktarı hariç, ve daha uzun maruz kalma süresi gerektiren, dedektör 8 ışık kaybına yol açmaktadır. Geniş alan mikroskopisi, diğer taraftan tam saha aydınlatma kullanan ve amacı ile, tüm geçen ışık dedektörü gönderilir. Bir yüksek kuantum verimliliği ile birleşince birleştiğinde cihaz (CCD) kamerası çok hızlı pozlama süreleri ile konfokal mikroskopi 9, göre gürültü oranı yüksek bir sinyal ile görüntüleme sağlar soğutulur. Bizim uygulama, biz uzun süre, kayıt 3D yığınları ve sonuçta küçük yakın kırınım sınırlı yapıları çözmek için görüntü gerekir. Konfokal mikroskopi hiç dedektör ulaşmasını out-of-focus ışığı engeller ve böylece önemli ölçüde kalın, yoğun-etiketli örnekleri 7, 8 arka plan azaltmakla birlikte, sadece çok daha fazla ışık girişi ile kullanılabilir bir sinyal-gürültü oranı elde geniş alan mikroskopisi 10. Çok ışığa duyarlı sparsel içinBizim electroporated omurilik dilimleri gibi y-etiketli örnekleri, bu nedenle, geniş alan mikroskopisi konfokal mikroskopi daha iyi yapar. Dekonvolüsyonun tarafından görüntü restorasyonu ile birlikte, hangi odak bilgi dışarı çıkarır ve geliştirir kontrast, geniş alan, küçük, loş nesnelerin 11 tespiti için özellikle iyi o olduğunu. Her doku görüntüleme deney için uygun olmasa da, bu yaklaşım bizim canlı hücre görüntüleme uygulaması için çok etkili olmuştur. Floresan protein seçimi hücre yaşamını etkileyebilen önemli bir faktördür. Biz iyi sonuçları bir belirteç olarak yeşil floresan protein (GFP) 12 kullanımı yapıları elde görürüz. Şu anda etkin bir şekilde iki kanallı zaman ihmallerini GFP ile kombinasyon halinde de kullanılabilir kırmızı floresan proteinleri bir dizi değerlendirilmesi bulunmaktadır. 13 kullanılabilir Bu tür proteinleri bir dizi vardır. Birçok protein bir floresan protein füzyon olarak stabil olmasına rağmen, Bazı proteinler düşük hücre canlılığı ile sonuçlanan, füzyon ile kararsız kılınabilir. Bu gibi durumlarda, dahili bir ribozom giriş sitesi (IRES) içeren yapıları kullanımı flüoresan protein ilgili proteini ayırmak için yararlıdır. Zaman görüntüleme spinal kord dilimleri, bakım floresan ışığına maruz kalma en aza indirmek için alınması gerekir. Mikroskop mercekleri dilimleri bulun ve pozisyona geçen ışık (aydınlık) ile kullanılabilir olmalıdır. Floresan resimler her zaman az pozlama süreleri kullanarak mikroskop yazılımı kullanılarak elde edilmelidir. Bunlar, 5-50 ms aralığında tutulması ve nötr yoğunluğu filtrelerin kullanımının deneyler edilmelidir. Uzun pozlama süreleri başlangıçta daha net görüntüler üretmek olsa da, floresan ışıkta fototoksik etkilerini hücre ölümüne yol açabilir. Bu bölgede sırasında zarar görmüş olabilen doku içerir coverslip en yakın olan doku ilk 5-10 mikron görüntülenmiştir edilmemelidirdilimleme. Burada sunulan örnekler HH aşaması 10 ve daha sonra fazla görüntülü 6-7 saat electroporated embriyo olmakla birlikte, bu yöntem aşaması 18 HH embriyosu için kullanılabilmektedir. Daha sonraki aşamalarda, spinal kord doku çok daha büyük olduğu ve bu yüzden, elle dilim zordur. Bu durumlarda, düşük erime noktası agaroz içinde embriyo yerleştirilmesi ve bir vibratome ile kesit daha iyi sonuçlar verebilir. Biz gelişmekte olan omurilik görüntüleme hücreleri için bir yöntem olarak bu testte sunmak olsa da, bu yaklaşım aynı zamanda duyusal placodes 3 dahil olmak üzere görüntü diğer embriyonik dokular için modifiye edilmiştir.

<table border="1"><tbody><tr><td> Reaktif </td><td> Şirket </td><td> Katalog numarası </td><td> Yorumlar </td></tr><tr><td> WillCo Bulaşık </td><td> WillCo Wells </td><td> GWst-3522 </td><td></td></tr><tr><td> poli-L-Lizin </td><td> Sigma </td><td> P8970 </td><td> Tris% 0.1 </td></tr><tr><td> Borosilikat cam kılcal </td><td> Harvard Aletleri </td><td> GC100-10 </td><td> 1.0mm dış çaplı, 0.58mm iç çapı </td></tr><tr><td> Elektrotlar (Genetrodes, ovo içinde, L-şekilli </td><td> BTX </td><td> 10-001850-01 </td><td> 5mm altın kaplama </td></tr><tr><td> ECM 830 kare dalga üreteci </td><td> BTX </td><td> 45-0002 </td><td> ovo electroopration içinde için </td></tr><tr><td> Fast Green </td><td> Sigma </td><td> F7258 </td><td></td></tr><tr><td> Ben sıçan kollajen yazın </td><td> Sigma </td><td> C3857 </td><td></td></tr><tr><td> L-15 orta (toz) </td><td> Sigma </td><td></td><td> 2.76 g / L damıtılmış su içinde 5x çözüm </td></tr><tr><td> Sodyum bikarbonat </td><td> Sigma </td><td> S8761 </td><td> % 7.5 çözümü </td></tr><tr><td> Neurobasal orta </td><td> Invitrogen </td><td> 12348-017 </td><td> fenol kırmızısı olmadan </td></tr><tr><td> Glutamax </td><td> Invitrogen </td><td> A1286001 </td><td> 100x çözüm </td></tr><tr><td> B-27 takviyesi </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> Gentamisin </td><td> Invitrogen </td><td> 15710049 </td><td> 10 mg / ml </td></tr><tr><td> L15 orta (sıvı 1x) </td><td> Invitrogen </td><td> 11415-049 </td><td></td></tr><tr><td> Microknife </td><td> Altomed </td><td> A10102 </td&gt; <td> 15 derecelik eğim </td></tr><tr><td> Paslanmaz çelik başsız pimler </td><td> Watkins ve Doncaster </td><td> E6871 </td><td> A1 boyutu </td></tr><tr><td> Sylgard 184 elastomer </td><td> VWR </td><td> 634165S </td><td></td></tr><tr><td> DeltaVision Çekirdek mikroskop sistemi </td><td> Uygulamalı Hassas </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Coolsnap HQ2 CCD kamera </td><td> Fotometri </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

high-resolution live imaging of cell behavior in the developing neuroepithelium

Embriyonik spinal kord merkezi sinir sistemi (MSS) ve nöronal gliyal hücreleri büyük bir yüzdesi yol sinir hücrelerini progenitör bisiklet oluşur. Kadar moleküler mekanizmaları desen spinal kord hakkında bilinen ve nöronal farklılaşma 1, 2 ortaya çıkarmak olmasına rağmen, bu hücre davranış seviyesinde bu ilk etkinlik derin bir anlayış yoksundur. Onlar nörogenez geçerken, gerçek zamanlı olarak nöral progenitörlerin davranışlarını incelemek böylece önemlidir. Erken embriyonik doku geçmişte, gerçek zamanlı görüntü hücre / doku kültüründe canlılığı gibi floresan görüntüleme fototoksik etkileri ile sınırlı kalmıştır. Burada yeni bir ex-vivo kesit kültürü protokolü ve geniş alan floresan mikroskobu (Şekil 1) kullanarak, uzun süreler için görüntüleme gibi doku için yeni bir test sunuyoruz. Bu yaklaşım civciv embriyonik s uzun vadeli time-lapse izleme ulaşıryüksek uzaysal ve zamansal çözünürlüğe sahip Pinal kablosu progenitör hücreler. Bu testte geni faaliyeti için hücresel ve alt-hücresel davranışları, yeni bir gelişme ve çok hassas Muhabirlerin gözlem ek görüntü embriyonik dokular 3, 4, bir dizi ile değiştirilebilir (örneğin, Çentik sinyalleşme 5) Bu testte yapar sinyalizasyon nasıl anlamak için güçlü bir araç embriyonik gelişim sırasında hücre davranışı düzenler.

Watch this Scientific Journal Video about High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium at JoVE.com

High-resolution Live Imaging of Cell Behavior in the Developing Neuroepithelium

Gerçek zamanlı görüntüleme embriyonik doku uzun süre boyunca meydan okuyor. Burada yüksek uzaysal ve zamansal çözünürlüğe sahip uzun süre civciv omurilik hücresel ve alt hücresel değişikliklerin izlenmesi için bir test sunuyoruz. Bu teknik, sinir sistemi ve geliştirme embriyo diğer bölgeleri için adapte edilebilir.

Gelişmekte Neuroepithelium Hücre Davranış Yüksek çözünürlüklü Canlı Görüntüleme

The embryonic spinal cord consists of cycling neural progenitor cells that give rise to a large percentage of the neuronal and glial cells of the central ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Gelişmekte olan Zebra balığı önbeyin klonal olarak ilişkilidir Sinir Progenitör Hücreler Zaman atlamalı Canlı Görüntüleme

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Live Imaging of Dorsal Root Axons after Rhizotomy

Rizotomi sonra Dorsal Kök Aksonlar Canlı Görüntüleme

The primary sensory axons injured by spinal root injuries fail to regenerate into the spinal cord, leading to chronic pain and permanent sensory loss. ...

High-resolution Functional Magnetic Resonance Imaging Methods for Human Midbrain

İnsan orta beyin için yüksek çözünürlüklü Fonksiyonel Manyetik Rezonans Görüntüleme Yöntemleri

Functional MRI (fMRI) is a widely used tool for non-invasively measuring correlates of human brain activity. However, its use has mostly been focused upon ...

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Live Imaging of Single Cell Divisions in Mouse Neuroepithelium

Ex vivo Fare neuroepithelium Tek Hücre Bölümler Canlı Görüntüleme

We developed a system that integrates live imaging of fluorescent markers and culturing slices of embryonic mouse neuroepithelium. We took advantage of ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Gelişmekte Fare Embriyonik Cortex mitoz Canlı Görüntüleme

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

High-resolution In Vivo Manual Segmentation Protocol for Human Hippocampal Subfields Using 3T Magnetic Resonance Imaging

High-resolution In Vivo Manual Segmentation Protocol for Human Hippocampal Subfields Using 3T Magnetic Resonance Imaging

Yüksek çözünürlük<em&gt; İn Vivo</em&gt; 3T Manyetik Rezonans Görüntüleme kullanma İnsan hipokampal alanlar için Manuel Segmentasyon Protokolü

The human hippocampus has been broadly studied in the context of memory and normal brain function and its role in different neuropsychiatric disorders has ...

Live Imaging of Nicotine Induced Calcium Signaling and Neurotransmitter Release Along Ventral Hippocampal Axons

Nikotin Kaynaklı Kalsiyum Sinyali ve ventral Hipokampal Aksonlar boyunca Nörotransmitter Release Canlı Görüntüleme

Sustained enhancement of axonal signaling and increased neurotransmitter release by the activation of pre-synaptic nicotinic acetylcholine receptors ...

High-resolution Structural Magnetic Resonance Imaging of the Human Subcortex In Vivo and Postmortem

High-resolution Structural Magnetic Resonance Imaging of the Human Subcortex In Vivo and Postmortem

İnsan Subcortex yüksek çözünürlüklü yapısal Manyetik Rezonans Görüntüleme<I&gt; İn Vivo</I&gt; Ve Postmortem

The focus of this study was to test the resolution limits of structural MRI of a postmortem brain compared to living human brains. The resolution of ...

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

High-resolution Quantification of Odor-guided Behavior in Drosophila melanogaster Using the Flywalk Paradigm

Koku kılavuzluğunda Davranış Yüksek çözünürlüklü Niceleme<em&gt; Drosophila melanogaster</emKullanma&gt;<em&gt; Flywalk</em&gt; Paradigma

In their natural environment, insects such as the vinegar fly Drosophila melanogaster are bombarded with a huge amount of chemically distinct odorants. To ...

High-Resolution Quantitative Immunogold Analysis of Membrane Receptors at Retinal Ribbon Synapses

Retina Şerit Sinapslar at Membran Reseptör Yüksek Çözünürlüklü Sayısal immunogold Analizi

Retinal ganglion cells (RGCs) receive excitatory glutamatergic input from bipolar cells. Synaptic excitation of RGCs is mediated postsynaptically by NMDA ...