Name: imaging glioma initiation in vivo through a polished and reinforced thin-skull cranial window
Uploaded: 2012-11-20T12:00:00
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Este trabajo es apoyado por The Jackson Laboratory Cancer Center Pilot Grant y La Fundación del Cáncer de Maine.

1. Protocolo <ol><li> Se anestesia el ratón con ketamina y xilazina a dosis de ketamina 0,1 mg y 0,01 mg de xilazina por 1 g de peso corporal. Carprofeno (0,005 mg por 1 g de peso corporal) se utiliza para la analgesia y se administra antes de la cirugía. </li><li> Todas las herramientas quirúrgicas, como la broca dental, son esterilizados con vapor en un autoclave. Si cirugías lotes se van a realizar, las puntas de los instrumentos quirúrgicos deben ser re-esterilizado con un esterilizador de cuentas de vidrio (...

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	<li>Paulino, A. C., Teh, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Treatment+of+brain+tumors.">Treatment of brain tumors.</a> N. Engl. J. Med. 352, 2350-2353 (2005).</li><li>Stupp, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiotherapy+plus+concomitant+and+adjuvant+temozolomide+for+glioblastoma.">Radiotherapy plus concomitant and adjuvant temozolomide for glioblastoma.</a> N. Engl. J. Med. 352, 987-996 (2005).</li><li>Singh, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+human+brain+tumour+initiating+cells.">Identification of human brain tumour initiating cells.</a> Nature. 432, 396-401 (2004).</li><li>Hanahan, D., Weinberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hallmarks+of+cancer:+the+next+generation.">Hallmarks of cancer: the next generation.</a> Cell. 144, 646-674 (2011).</li><li>Cheng, L., Bao, S., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+therapeutic+implications+of+cancer+stem+cells+in+glioblastoma.">Potential therapeutic implications of cancer stem cells in glioblastoma.</a> Biochem. Pharmacol. 80, 654-665 (2010).</li><li>Cheng, L., Ramesh, A. V., Flesken-Nikitin, A., Choi, J., Nikitin, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mouse+models+for+cancer+stem+cell+research.">Mouse models for cancer stem cell research.</a> Toxicol. Pathol. 38, 62-71 (2010).</li><li>Dirks, P. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Brain+tumor+stem+cells:+the+cancer+stem+cell+hypothesis+writ+large.">Brain tumor stem cells: the cancer stem cell hypothesis writ large.</a> Mol. Oncol. 4, 420-430 (2010).</li><li>Ebben, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+cancer+stem+cell+paradigm:+a+new+understanding+of+tumor+development+and+treatment.">The cancer stem cell paradigm: a new understanding of tumor development and treatment.</a> Expert Opin. Ther. Targets. 14, 621-632 (2010).</li><li>Germano, I., Swiss, V., Casaccia, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Primary+brain+tumors,+neural+stem+cell,+and+brain+tumor+cancer+cells:+where+is+the+link.">Primary brain tumors, neural stem cell, and brain tumor cancer cells: where is the link.</a> Neuropharmacology. 58, 903-910 (2010).</li><li>Park, D. M., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+glioma+cancer+stem+cells.">Biology of glioma cancer stem cells.</a> Mol. Cells. 28, 7-12 (2009).</li><li>Bao, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Stem+cell-like+glioma+cells+promote+tumor+angiogenesis+through+vascular+endothelial+growth+factor.">Stem cell-like glioma cells promote tumor angiogenesis through vascular endothelial growth factor.</a> Cancer Res. 66, 7843-7848 (2006).</li><li>Calabrese, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+niche+for+brain+tumor+stem+cells.">A perivascular niche for brain tumor stem cells.</a> Cancer Cell. 11, 69-82 (2007).</li><li>Barami, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationship+of+neural+stem+cells+with+their+vascular+niche:+implications+in+the+malignant+progression+of+gliomas.">Relationship of neural stem cells with their vascular niche: implications in the malignant progression of gliomas.</a> J. Clin. Neurosci. 15, 1193-1197 (2008).</li><li>Gilbertson, R. J., Rich, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Making+a+tumour's+bed:+glioblastoma+stem+cells+and+the+vascular+niche.">Making a tumour's bed: glioblastoma stem cells and the vascular niche.</a> Nat. Rev. Cancer. 7, 733-736 (2007).</li><li>Cho, R. W., Clarke, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+advances+in+cancer+stem+cells.">Recent advances in cancer stem cells.</a> Curr. Opin. Genet. Dev. 18, 48-53 (2008).</li><li>Drew, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chronic+optical+access+through+a+polished+and+reinforced+thinned+skull.">Chronic optical access through a polished and reinforced thinned skull.</a> Nat. Methods. 7, 981-984 (2010).</li></ol>

La clave de una ventana craneal puertos exitoso es el adelgazamiento y pulido. Mientras que el adelgazamiento inicial puede ser realizada rápidamente, se debe tener cuidado para asegurar homogénea adelgazamiento del cráneo sobre un área grande. Nos típicamente aplicar una capa delgada de solución salina al cráneo, y luego delgada del cráneo una pasada a la vez, tal que la solución salina se evapora poco después de la microtaladro ha pasado sobre el cráneo una vez. Esto nos permite lenta pero más homogénea d...

<table border="1"><tr><td> Nombre de reactivo </td><td> Empresa </td><td> Número de catálogo </td><td> Comentarios (opcional) </td></tr><tr><td> DMEM/F12 (1:1) con piruvato de sodio </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SH3026101 </td><td></td></tr><tr><td> B-27 Suplemento libre de suero (50x) </td><td> Invitrogen </td><td> 17504-044 </td><td></td></tr><tr><td> GlutaMax-1 Supplement </td><td> Invitrogen </td><td> 35050061 </td><td></td></tr><tr><td> Solución de penicilina-estreptomicina </td><td> Thermo Sci Hyclone </td><td> SV30010 </td><td></td></tr><tr><td> Accutase-enzima Tono Medio Desprendimiento </td><td> eBiosciences </td><td> 00-4555-56 </td><td></td></tr><tr><td> T25 frascos de ventilación tapa verde </td><td> SARSTEDT </td><td> 83.1810.502 </td><td></td></tr><tr><td> 70% de alcohol </td><td> JAX LAHS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 10% solución de povidona yodada tópica </td><td> JAX LAHS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> La ketamina HCl </td><td> Mayordomo Animal Health Supply </td><td> NDC # 11695-0550-1 </td><td></td></tr><tr><td> Xilazina </td><td> Akorn, Inc. </td><td> NADA # 139-236 </td><td></td></tr><tr><td> Carprofen </td><td> JAX LAHS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> De pomada oftálmica </td><td> Dechra veterinarios </td><td> 17033-211-38 </td><td></td></tr><tr><td> 0,5% de lidocaína HCl </td><td> REGENT, Inc. </td><td> NDC 0517-0625-25 </td><td></td></tr><tr><td> Pegamento de cianoacrilato </td><td> Henkel Corp. </td><td> 46551 </td><td></td></tr><tr><td> Los hisopos estériles </td><td> Fisher Scientific </td><td> 23-400-114 </td><td></td></tr><tr><td> Diamond pasta </td><td> Widget de suministro </td><td> BBE60 </td><td></td></tr><tr><td> Óxido de estaño </td><td> LORTONE, Inc. </td><td> 591-038 </td><td></td></tr><tr><td> Liner Bond 2V </td><td> Kuraray Medical Inc. </td><td> 1921-KA </td><td></td></tr><tr><td> Clearfil AP-X </td><td> Kuraray Medical Inc. </td><td> 1721-KA </td><td></td></tr><tr><td> Salina </td><td> JAX LAHS </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Cubierta de vidrio </td><td> Warner Instruments </td><td> 64-0720 </td><td></td></tr><tr><td> Tuerca hexagonal </td><td> Small Parts, Inc. </td><td> HNX-0090-C </td><td></td></tr><tr><td> Syringe Pump </td><td> Syringepump.com </td><td> NE-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Two-Photon Imaging System </td><td> Hecha a la medida (Cualquier sistema comercial seríatrabajar) </td><td></td><td></td></tr></table>

imaging glioma initiation in vivo through a polished and reinforced thin-skull cranial window

El glioma es el de las formas más letales de cáncer humano. La terapia del glioma más eficaz hasta la fecha de la cirugía seguida de radiación con el tratamiento ofrece al paciente modestos beneficios, como la mayoría de los pacientes no sobreviven más de cinco años después del diagnóstico debido a glioma 1,2 recaída. El descubrimiento de las células madre del cáncer en los tumores cerebrales humanos promete tener un impacto enorme en el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas para el glioma 3. Las células madre cancerosas se definen por su capacidad tanto de auto-renovación y diferenciar a, y se cree que son las únicas células en un tumor que tiene la capacidad de iniciar nuevos tumores 4. Glioma terapia de recaída después de la radiación se cree que surgen de la resistencia de las células madre de glioma (GSCS) a la terapia 5-10. In vivo, GSCS se muestran a residir en un nicho perivascular que es importante para mantener sus madre similares a células características 11-14 . Central a la organizaciónción del nicho GSC son las células endoteliales vasculares 12. La evidencia actual sugiere que GSCS y su interacción con las células endoteliales vasculares son importantes para el desarrollo del tumor, e identificar GSCS y su interacción con las células endoteliales como importantes dianas terapéuticas para el glioma. La presencia de GSCS se determina experimentalmente mediante su capacidad de iniciar nuevos tumores en trasplante ortotópico 15. Esto se consigue normalmente mediante la inyección de un número específico de células aisladas de tumores GBM humanos en los cerebros de severamente inmuno-ratones deficientes, o de células de ratón de GBM en los cerebros de los ratones receptores congénicos. Los ensayos para el crecimiento del tumor se realiza entonces después de un tiempo suficiente para permitir GSCS entre las células inyectadas GBM para dar lugar a nuevos tumores-típicamente de varias semanas o meses. Por lo tanto, los ensayos existentes no permiten examinar el importante proceso patológico de la iniciación del tumor de GSCS solteras en vivo. Por consiguiente, es esencial quensights en las funciones específicas de GSCS y su interacción con las células endoteliales vasculares en las primeras etapas de la iniciación del tumor se carece. Estas ideas son fundamentales para el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas para el glioma, y ​​tendrá grandes implicaciones para la prevención de recaídas en pacientes con glioma. Aquí se han adaptado los puertos procedimiento de ventana craneal 16 e in vivo de dos fotones microscopía para permitir la visualización de la iniciación del tumor a partir de células de GBM inyectados en el cerebro de un ratón vivo. Nuestra técnica allanará el camino para los futuros esfuerzos por esclarecer los mecanismos clave de señalización entre GSCS y células endoteliales vasculares durante el inicio del glioma.

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Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

Mediante la combinación de un pulido y reforzado delgada cráneo (puertos) craneal ventana y glioblastoma (GBM) la inyección de células, se puede observar la iniciación glioma y el crecimiento de las células de GBM inyectados en el cerebro de un ratón vivo longitudinalmente.

Imágenes Glioma Iniciación<em&gt; En Vivo</em&gt; A través de un pulido y reforzado fina calavera ventana craneal

Glioma is the one of the most lethal forms of human cancer. The most effective glioma therapy to date-surgery followed by radiation treatment-offers ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Imaging Glioma Initiation In Vivo Through a Polished and Reinforced Thin-skull Cranial Window

In vivo Near Infrared Fluorescence (NIRF) Intravascular Molecular Imaging of Inflammatory Plaque, a Multimodal Approach to Imaging of Atherosclerosis

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En vivo en el infrarrojo cercano fluorescencia (NIRF) imagen intravascular molecular de placa inflamatoria, un enfoque multimodal de imágenes de la aterosclerosis

The vascular response to injury is a well-orchestrated inflammatory response triggered by the accumulation of macrophages within the vessel wall leading ...

Investigación

Medicina

In vivo Dual Substrate Bioluminescent Imaging

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En vivo doble sustrato bioluminiscentes imagen

Our understanding of how and when breast cancer cells transit from established primary tumors to metastatic sites has increased at an exceptional rate ...

Heterotypic Three-dimensional In Vitro Modeling of Stromal-Epithelial Interactions During Ovarian Cancer Initiation and Progression

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Heterotípicos tridimensional<em&gt; In Vitro</em&gt; Modelado de estromal-epitelial interacciones durante la iniciación y progresión del cáncer de ovario

Epithelial ovarian cancers (EOCs) are the leading cause of death from gynecological malignancy in Western societies. Despite advances in surgical ...

Utilizing a Cranial Window to Visualize the Middle Cerebral Artery During Endothelin-1 Induced Middle Cerebral Artery Occlusion

Utilizando una ventana craneal para visualizar la arteria cerebral media Durante la endotelina-1 inducida por oclusión de la arteria cerebral media

Creation of a cranial window is a method that allows direct visualization of structures on the cortical surface of the brain1-3. This technique can be ...

3D-Neuronavigation In Vivo Through a Patient's Brain During a Spontaneous Migraine Headache

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3D-Neuronavegación<em&gt; En Vivo</em&gt; A través del cerebro de un paciente durante una espontánea migraña

A growing body of research, generated primarily from MRI-based studies, shows that migraine appears to occur, and possibly endure, due to the alteration ...

Sequential In vivo Imaging of Osteogenic Stem/Progenitor Cells During Fracture Repair

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Secuencial<em&gt; En vivo</em&gt; Imagen de células madre / progenitoras osteogénicas durante la reparación de la fractura

Bone turns over continuously and is highly regenerative following injury. Osteogenic stem/progenitor cells have long been hypothesized to exist, but in ...

Combined In vivo Optical and &#181;CT Imaging to Monitor Infection, Inflammation, and Bone Anatomy in an Orthopaedic Implant Infection in Mice

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Combinado<em&gt; En vivo</em&gt; Óptica y μCT imágenes para vigilar la infección, inflamación y Hueso anatomía en una infección de implantes ortopédicos en ratones

Multimodality imaging has emerged as a common technological approach used in both preclinical and clinical research. Advanced techniques that combine in ...

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Intrauterine Telemetry to Measure Mouse Contractile Pressure In Vivo

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