Name: manual drainage of the zebrafish embryonic brain ventricles
Uploaded: 2012-12-16T12:00:00
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Ce travail a été soutenu par l&#39;Institut national pour la santé mentale, et la National Science Foundation. Un merci spécial à Dr. Jen Gutzman, le Dr Amanda Dickinson et d&#39;autres membres du laboratoire Sive pour de nombreuses discussions utiles et des critiques constructives, et à Olivier Paugois pour l&#39;élevage de poissons d&#39;experts.

1. Préparation Aiguilles microinjection cellulaire et Tram <ol><li> Remplissez Eppendorf CellTram huile microinjecteur appareil avec de l&#39;huile minérale selon les instructions du fabricant. </li><li> Préparer aiguilles de microinjection en tirant des tubes capillaires en utilisant extracteur Sutter aiguille instruments. </li><li> Monter l&#39;aiguille sur micromanipulateur connecté à Eppendorf CellTram. </li><li> Cassez délicatement la pointe de l&#39;aiguille. Pour la taille de la pointe uniforme, mesurer a...

<ol>
	<li>Chodobski, A., Szmydynger-Chodobska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Choroid+plexus:+target+for+polypeptides+and+site+of+their+synthesis.">Choroid plexus: target for polypeptides and site of their synthesis.</a> Microsc. Res. Tech. 52, 65-82 (2001).</li><li>Redzic, Z. B., Preston, J. E., Duncan, J. A., Chodobski, A., Szmydynger-Chodobska, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+choroid+plexus-cerebrospinal+fluid+system:+from+development+to+aging.">The choroid plexus-cerebrospinal fluid system: from development to aging.</a> Curr. Top. Dev. Biol. 71, 1-52 (2005).</li><li>Brown, P. D., Davies, S. L., Speake, T., Millar, I. 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D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+proteomic+analysis+of+human+and+rat+embryonic+cerebrospinal+fluid.">A comparative proteomic analysis of human and rat embryonic cerebrospinal fluid.</a> J. Proteome. Res. 6, 3537-3548 (2007).</li><li>Parvas, M., Parada, C., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+blood-CSF+barrier+function+controls+embryonic+CSF+protein+composition+and+homeostasis+during+early+CNS+development.">A blood-CSF barrier function controls embryonic CSF protein composition and homeostasis during early CNS development.</a> Dev. 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Biol. 301, 280-289 (2004).</li><li>Westerfield, M., Sprague, J., Doerry, E., Douglas, S., Grp, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Zebrafish+Information+Network+(ZFIN):+a+resource+for+genetic,+genomic+and+developmental+research.">The Zebrafish Information Network (ZFIN): a resource for genetic, genomic and developmental research.</a> Nucleic Acids Res. 29, 87-90 (2001).</li><li>Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Zebrafish+Brain+Ventricle+Injection.">Zebrafish Brain Ventricle Injection.</a> J. Vis. Exp. (26), e1218 (2009).</li><li>Parada, C., Gato, A., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=All-trans+retinol+and+retinol-binding+protein+from+embryonic+cerebrospinal+fluid+exhibit+dynamic+behaviour+during+early+central+nervous+system+development.">All-trans retinol and retinol-binding protein from embryonic cerebrospinal fluid exhibit dynamic behaviour during early central nervous system development.</a> Neuroreport. 19, 945-950 (2008).</li><li>Parada, C., Escola-Gil, J. C., Bueno, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Low-density+lipoproteins+from+embryonic+cerebrospinal+fluid+are+required+for+neural+differentiation.">Low-density lipoproteins from embryonic cerebrospinal fluid are required for neural differentiation.</a> J. Neurosci. 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A., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Initial+formation+of+zebrafish+brain+ventricles+occurs+independently+of+circulation+and+requires+the+nagie+oko+and+snakehead/atp1a1a.1+gene+products.">Initial formation of zebrafish brain ventricles occurs independently of circulation and requires the nagie oko and snakehead/atp1a1a.1 gene products.</a> Development. 132, 2057-2067 (2005).</li><li>Lowery, L. A., De Rienzo, G., Gutzman, J. H., Sive, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+classification+of+zebrafish+brain+morphology+mutants.">Characterization and classification of zebrafish brain morphology mutants.</a> Anat. Rec. (Hoboken). 292, 94-106 (2009).</li></ol>

L&#39;utilisation de cette technique pour purger manuellement ECSF à partir des ventricules cérébraux poisson zèbre sera utile pour déterminer l&#39;exigence de ECSF au cours du développement. En outre, cette technique permettra description du profil protéique ECSF au cours du développement embryonnaire. L&#39;identification des différentes protéines au cours de cette période permettra enquête plus approfondie sur la fonction de la LCR et son rôle potentiel au cours du développement du cerveau. En amniotes...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nom du réactif </td><td> Entreprise </td><td> Numéro de catalogue </td></tr><tr><td> Eppendorf CellTram huile </td><td> Eppendorf </td><td> 516 000.025 </td></tr><tr><td> Huile minérale </td><td> Sigma </td><td> M8410 </td></tr><tr><td> Tricaïne poudre </td><td> Sigma </td><td> A5040 </td></tr><tr><td> Tubes capillaires </td><td> FHC Inc </td><td> 30-30-1 </td></tr></tbody></table>

manual drainage of the zebrafish embryonic brain ventricles

Liquide céphalo-rachidien (LCR) est un liquide riche en protéine contenue dans les ventricules du cerveau. Il est présent pendant le développement embryonnaire précoce des vertébrés et persiste toute la vie. Adulte CSF est pensé pour amortir le cerveau, éliminer les déchets, et effectuer sécrétée 1,2 molécules. Dans l&#39;embryon adultes et plus, la majorité des CSF est faite par la choroïde, du plexus une série de régions hautement vascularisées sécrétrices situées à côté du cerveau ventricules 3-5. Chez le poisson zèbre, le plexus choroïde est entièrement formé à 144 après la fécondation heures (hpf) 6. Avant cela, dans les deux embryons de vertébrés poisson zèbre et autres, y compris la souris, une quantité importante de CSF embryonnaire (FFPE) est présent. Ces données et d&#39;études de poussin suggèrent que la neuro-épithélium sécrétoire est tôt dans le développement et peut-être la principale source de ECSF avant plexus choroïde développement 7. ECSF contient environ trois fois plus de protéines than adulte CSF, suggérant qu&#39;il peut jouer un rôle important au cours du développement 8,9. Studies in poussin et de la souris démontrent que les facteurs sécrétés dans la FFPE, la pression de fluide, ou une combinaison de ceux-ci, sont importantes pour la neurogenèse, la survie expression des gènes, la prolifération cellulaire et de cellules dans le neuroépithélium 10-20. Analyses protéomiques de l&#39;homme, le rat, la souris et poussin FFPE ont identifié de nombreuses protéines qui peuvent être nécessaires pour la fonction LCR. Ils comprennent des composants de la matrice extracellulaire, les apolipoprotéines, des protéines de régulation de la pression osmotique, et des protéines impliquées dans la mort cellulaire et la prolifération 21-24. Cependant, les fonctions complexes de la FFPE sont largement inconnues. Nous avons développé un procédé pour éliminer ECSF à partir des ventricules cérébraux poisson zèbre, permettant ainsi l&#39;identification des composants ECSF et pour l&#39;analyse de l&#39;exigence ECSF au cours du développement. Bien que plus ECSF peuvent être collectées à partir d&#39;autres systèmes avec des vertébrésvec embryons plus grands, ECSF peuvent être recueillies dès les premiers stades de développement du poisson zèbre, et dans des conditions génétiques ou environnementaux qui conduisent à volume cérébral anormal du ventricule ou de la morphologie. L&#39;enlèvement et la collecte de ECSF permet d&#39;analyse de masse, spectrométrie enquête de la fonction ECSF, et la réintroduction des facteurs de sélection dans les ventricules pour doser leur fonction. Ainsi, l&#39;accessibilité de l&#39;embryon du poisson zèbre précoce permet une analyse détaillée de la fonction ECSF au cours du développement.

Un exemple d&#39;un ventricule cérébral drainée est illustré à la figure 1B-C. Ventricules cérébraux sont effondrés car ils n&#39;ont pas ECSF (figure 1B vs C). Comme on le voit dans les images dorsales (figure 1B-C et la Figure 2A-D) neuroépithélium rhombencéphale ne conserve sa morphologie caractéristique et semble être ouverte malgré l&#39;absence de ECSF probablement en raison de robustes charnières points. Cependant, les vues latéra...

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Manual Drainage of the Zebrafish Embryonic Brain Ventricles

Nous présentons une méthode pour collecter le fluide céphalo-rachidien (LCR) et de créer un système qui manque de LCR dans le système ventriculaire du cerveau du poisson zèbre embryonnaire. Cela permet un examen plus approfondi de la composition du LCR et son exigence au cours du développement embryonnaire du cerveau.

Drainage Manuel des ventricules cérébraux embryonnaires de poisson-zèbre

Cerebrospinal fluid  (CSF) is a protein rich fluid contained within the brain ventricles. It is  present during early vertebrate embryonic development and ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

An Assay for Permeability of the Zebrafish Embryonic Neuroepithelium

Un test de perméabilité du neuro-épithélium embryonnaire poisson zèbre

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Recherche

Neurosciences

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Micromanipulation de l&#39;expression génique dans le cerveau de poisson zèbre adulte en utilisant microinjection Cerebroventricular d&#39;oligonucléotides Morpholino

Manipulation of gene expression in tissues is  required to perform functional studies. In this paper, we demonstrate the  cerebroventricular ...

Patch Clamp Recordings from Embryonic Zebrafish Mauthner Cells

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Mauthner cells (M-cells) are large  reticulospinal neurons located in the hindbrain of teleost fish. They are key  neurons involved in a characteristic ...

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The present paper describes a comprehensive protocol for manual tracing of the set of brain regions comprising the medial temporal lobe (MTL): amygdala, ...

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Enregistrement électrophysiologique dans le cerveau d&#39;Intact poisson zèbre adulte

Previously, electrophysiological studies in adult zebrafish have been limited to slice preparations or to eye cup preparations and electrorentinogram ...

Live Imaging of Mitosis in the Developing Mouse Embryonic Cortex

Imagerie en direct de la mitose dans les développement Cortex souris embryonnaires

Although of short duration, mitosis is a complex and dynamic multi-step process fundamental for development of organs including the brain. In the ...

Conditional Genetic Transsynaptic Tracing in the Embryonic Mouse Brain

Transsynaptique génétique conditionnelle traçage dans le cerveau embryonnaire de souris

Anatomical path tracing is of pivotal importance to decipher the relationship between brain and behavior. Unraveling the formation of neural circuits ...

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Multiciliated ependymal cells line the ventricles in the adult brain. Abnormal function or structure of ependymal cilia is associated with various ...

Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal

L&#39;exposition du porc du système nerveux central pour l&#39;analyse anatomopathologique: Un manuel pour Décapitation, Crâne d&#39;ouverture et cerveau suppression