Name: assaying dna damage in hippocampal neurons using the comet assay
Uploaded: 2012-12-19T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay at JoVE.com

यह काम विकिरण कैंसर विज्ञान, बर्मिंघम अलबामा यूनिवर्सिटी व्यापक कैंसर केंद्र, लड़ बच्चों के कैंसर फाउंडेशन, और गेबरियल एन्जिल फाउंडेशन (esy.) विभाग से प्रभाव पुरस्कार द्वारा समर्थित किया गया.

1. सेल संस्कृति <ol><li> संस्कृति neuronal कोशिकाओं और उन्हें इलाज के रूप में की जरूरत है. </li><li> 15 मिलीलीटर ट्यूब में हार्वेस्ट कोशिकाओं: Aspirate मीडिया, फॉस्फेट से कुल्ला buffered खारा (पीबीएस, कैल्शियम और मैग्नीशियम मुफ्त), t...

<ol>
	<li>Olive, P. L., Banath, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay:+a+method+to+measure+DNA+damage+in+individual+cells.">The comet assay: a method to measure DNA damage in individual cells.</a> Nat. Protoc. 1, 23-29 (2006).</li><li>Hovhannisyan, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+in+situ+hybridization+in+combination+with+the+comet+assay+and+micronucleus+test+in+genetic+toxicology.">Fluorescence in situ hybridization in combination with the comet assay and micronucleus test in genetic toxicology.</a> Mol. Cytogenet. 3, (2010).</li><li>Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay.+An+overview+of+techniques.">The comet assay. An overview of techniques.</a> Methods Mol. Biol. 203, 179-194 (2002).</li><li>Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+DNA+damage+in+individual+cells+by+analysis+of+histone+H2AX+phosphorylation.">Detection of DNA damage in individual cells by analysis of histone H2AX phosphorylation.</a> Methods Cell Biol. 75, 355-373 (2004).</li><li>Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Impact+of+the+comet+assay+in+radiobiology.">Impact of the comet assay in radiobiology.</a> Mutat. Res. 681, 13-23 (2009).</li><li>Olive, P. L., Banath, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Kinetics+of+H2AX+phosphorylation+after+exposure+to+cisplatin.">Kinetics of H2AX phosphorylation after exposure to cisplatin.</a> Cytometry B Clin. Cytom. 76, 79-90 (2009).</li><li>Olive, P. L., Durand, R. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heterogeneity+in+DNA+damage+using+the+comet+assay.">Heterogeneity in DNA damage using the comet assay.</a> Cytometry A. 66, 1-8 (2005).</li><li>Collins, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay+for+DNA+damage+and+repair.">The comet assay for DNA damage and repair.</a> Molecular biotechnology. 26, 249-261 (2004).</li><li>Fairbairn, D. W., Olive, P. L., O'Neill, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+comet+assay:+a+comprehensive+review.">The comet assay: a comprehensive review.</a> Mutation Research/Reviews in Genetic Toxicology. 339, 37-59 (1995).</li><li>Yang, E. S., Nowsheen, S., Wang, T., Thotala, D. K., Xia, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Glycogen+synthase+kinase+3B+inhibition+enhances+repair+of+DNA+double-strand+breaks+in+irradiated+hippocampal+neurons.">Glycogen synthase kinase 3B inhibition enhances repair of DNA double-strand breaks in irradiated hippocampal neurons.</a> Neuro-Oncology. 13, 459-470 (2011).</li><li>Yang, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lithium-mediated+protection+of+hippocampal+cells+involves+enhancement+of+DNA-PK+dependent+repair+in+mice.">Lithium-mediated protection of hippocampal cells involves enhancement of DNA-PK dependent repair in mice.</a> The Journal of clinical investigation. , 119-1124 (2009).</li><li>Collins, A. R., Harrington, V., Drew, J., Melvin, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nutritional+modulation+of+DNA+repair+in+a+human+intervention+study.">Nutritional modulation of DNA repair in a human intervention study.</a> Carcinogenesis. 24, 511-515 (2003).</li><li>Smith, C. C., O'Donovan, M. R., Martin, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=hOGG1+recognizes+oxidative+damage+using+the+comet+assay+with+greater+specificity+than+FPG+or+ENDOIII.">hOGG1 recognizes oxidative damage using the comet assay with greater specificity than FPG or ENDOIII.</a> Mutagenesis. 21, 185-190 (2006).</li><li>Rosenquist, T. A., Zharkov, D. O., Grollman, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+characterization+of+a+mammalian+8-oxoguanine+DNA+glycosylase.">Cloning and characterization of a mammalian 8-oxoguanine DNA glycosylase.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94, 7429-7434 (1997).</li><li>Radicella, J. P., Dherin, C., Desmaze, C., Fox, M. S., Boiteux, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cloning+and+characterization+of+hOGG1,+a+human+homolog+of+the+OGG1+gene+of+Saccharomyces+cerevisiae.">Cloning and characterization of hOGG1, a human homolog of the OGG1 gene of Saccharomyces cerevisiae.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 94, 8010-8015 (1997).</li><li>Banath, J. P., Klokov, D., MacPhail, S. H., Banuelos, C. A., Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Residual+gammaH2AX+foci+as+an+indication+of+lethal+DNA+lesions.">Residual gammaH2AX foci as an indication of lethal DNA lesions.</a> BMC Cancer. 10, 4 (2010).</li><li>Banath, J. P., Macphail, S. H., Olive, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Radiation+sensitivity,+H2AX+phosphorylation,+and+kinetics+of+repair+of+DNA+strand+breaks+in+irradiated+cervical+cancer+cell+lines.">Radiation sensitivity, H2AX phosphorylation, and kinetics of repair of DNA strand breaks in irradiated cervical cancer cell lines.</a> Cancer Res. 64, 7144-7149 (2004).</li><li>Bonner, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=[gamma]H2AX+and+cancer.">[gamma]H2AX and cancer.</a> Nat. Rev. Cancer. 8, 957-967 (2008).</li><li>Finney, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pulsed+Field+Gel+Electrophoresis.">Pulsed Field Gel Electrophoresis.</a> Current protocols in molecular biology. , (2000).</li><li>Electrophoresis, F. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Pulsed-field gel electrophoresis. , (2000).</li><li>Nowsheen, S., Bonner, J. A., Yang, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+poly+(ADP-Ribose)+polymerase+inhibitor+ABT-888+reduces+radiation-induced+nuclear+EGFR+and+augments+head+and+neck+tumor+response+to+radiotherapy.">The poly (ADP-Ribose) polymerase inhibitor ABT-888 reduces radiation-induced nuclear EGFR and augments head and neck tumor response to radiotherapy.</a> Radiotherapy and Oncology. , (2011).</li></ol>

धूमकेतु परख व्यक्ति की कोशिकाओं का विश्लेषण करने की अद्वितीय क्षमता है. यह कोशिकाओं के subpopulations है कि अंतर साइटोटोक्सिक एजेंटों के लिए जवाब प्रदर्शित की पहचान करने में फायदेमंद है. कुछ व्यावहारिक सीमाओ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक के नाम </td><td> कंपनी </td><td> कैटलॉग संख्या </td><td> टिप्पणियां (वैकल्पिक) </td></tr><tr><td> 1.5 मिलीलीटर ट्यूबों </td><td> सांता क्रूज़ जैव प्रौद्योगिकी, इंक </td><td> SC-200,271 </td><td></td></tr><tr><td> 10X tbe (Tris आधार, बोरिक एसिड, EDTA) </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> BP13331 </td><td></td></tr><tr><td> 15 मिलीलीटर ट्यूब </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 0553851 </td><td></td></tr><tr><td> Agarose </td><td> सिग्मा </td><td> A5093 </td><td></td></tr><tr><td> एल्यूमीनियम पन्नी </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 01213101 </td><td></td></tr><tr><td> बीकर </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> FB102300 </td><td></td></tr><tr><td> अपकेंद्रित्र </td><td> थर्मो वैज्ञानिक </td><td> 75004261PR </td><td></td></tr><tr><td> धूमकेतु परख सॉफ्टवेयर </td><td> धूमकेतु परख चतुर्थ छवि विश्लेषण प्रणाली </td><td></td><td></td></tr><tr><td> बेलन </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 08555F </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> GIBCO </td><td> 15575 </td><td></td></tr><tr><td> वैद्युतकणसंचलन चैम्बर </td><td> थर्मो वैज्ञानिक </td><td> 09528101 </td><td></td></tr><tr><td> इथेनॉल </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> A407P4 </td><td></td></tr><tr><td> फ्लोरोसेंट खुर्दबीन </td><td> Zeiss Axio विजन </td><td></td><td> हरी फिल्टर के साथ कोई फ्लोरोसेंट खुर्दबीन पर्याप्त होगा </td></tr><tr><td> Hemacytometer </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 0267152 </td><td></td></tr><tr><td> कम पिघलने बिंदु agarose </td><td> PROMEGA </td><td> V2111 </td><td></td></tr><tr><td> माइक्रोवेव </td><td> Sears </td><td></td><td></td></tr><tr><td> फास्फेट खारा, कैल्शियम, मैग्नीशियम, मुफ्त buffered </td><td> HyClone </td><td> SH3025601 </td><td></td></tr><tr><td> बिजली की आपूर्ति </td><td> BioRad </td><td> 1645050 </td><td></td></tr><tr><td> फ्रिज </td><td> Sears </td><td></td><td></td></tr><tr><td> शासक </td><td> स्टेपल्स </td><td></td><td></td></tr><tr><td> स्लाइड </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 12550143 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम क्लोराइड </td><td> सिग्मा </td><td> S7653 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम हीड्राकसीड </td><td> सिग्मा </td><td> S5881 </td><td></td></tr><tr><td> सोडियम सल्फेट sarcosinate </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> S529 </td><td></td></tr><tr><td> SYBR हरे रंग </td><td> Invitrogen </td><td> S7585 </td><td></td></tr><tr><td> ट्रे </td><td> वित्तीय संस्थाओंउसके वैज्ञानिक </td><td> 15242B </td><td></td></tr><tr><td> Tris बेस </td><td> सिग्मा </td><td> T6066 </td><td></td></tr><tr><td> ट्राइटन-X 100 </td><td> सिग्मा </td><td> T8787 </td><td></td></tr><tr><td> क्लोम - रस </td><td> HyClone </td><td> SH3023601 </td><td></td></tr><tr><td> भंवर </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 02216108 </td><td></td></tr><tr><td> जल स्नान </td><td> फिशर साइंटिफिक </td><td> 154622Q </td><td></td></tr></tbody></table>

assaying dna damage in hippocampal neurons using the comet assay

दवाओं के एक नंबर डीएनए की मरम्मत रास्ते लक्ष्य और प्रेरित सेल डीएनए की क्षति बनाकर मार. इस प्रकार, प्रक्रियाओं के लिए सीधे डीएनए की क्षति को मापने के लिए बड़े पैमाने पर मूल्यांकन किया गया है. पारंपरिक तरीकों समय लेने, महंगी संसाधन, गहन और नकल कोशिकाओं की आवश्यकता होती है. इसके विपरीत, धूमकेतु परख, एक एकल कोशिका जेल वैद्युतकणसंचलन परख, एक तेज, गैर इनवेसिव, सस्ती, डीएनए की क्षति और मरम्मत के प्रत्यक्ष और संवेदनशील उपाय है. डीएनए की मरम्मत के डीएनए के रूप में के रूप में अच्छी तरह से क्षति के सभी रूपों एकल कोशिका स्तर पर इस शक्तिशाली तकनीक का उपयोग करते हुए देखे जा सकते हैं. धूमकेतु परख अंतर्निहित सिद्धांत यह है कि कि बरकरार डीएनए अत्यधिक जबकि डीएनए की क्षति के इस संगठन को बाधित करने के लिए आदेश दिया है. agarose मैट्रिक्स में क्षतिग्रस्त डीएनए seeps और जब एक बिजली के क्षेत्र के अधीन है, नकारात्मक आरोप लगाया डीएनए कैथोड जो सकारात्मक आरोप लगाया है की ओर migrates. बड़े undamaged डीएनए strands नाभिक से दूर ओर पलायन कर नहीं कर रहे हैं. डीएनए की क्षतिछोटे डीएनए टुकड़े जो बरकरार डीएनए से दूर यात्रा बनाता है. धूमकेतु परख, एक छवि विश्लेषण सॉफ्टवेयर, उपाय और नाभिक में डीएनए कि नाभिक के बाहर चले गए है के साथ डीएनए के समग्र फ्लोरोसेंट तीव्रता तुलना. माइग्रेट डीएनए फ्लोरोसेंट संकेत से डीएनए की क्षति के आनुपातिक है. लंबा उज्जवल डीएनए पूंछ बढ़ डीएनए की क्षति का प्रतीक है. मापदंडों मापा जाता है कि कुछ पूंछ पल जो दोनों डीएनए की मात्रा और डीएनए की पूंछ, पूंछ की लंबाई में वितरण और पूंछ में डीएनए के प्रतिशत के एक उपाय है. इस परख डीएनए की मरम्मत के उपाय के रूप में अच्छी तरह से की अनुमति देता है के बाद से डीएनए की क्षति के संकल्प का प्रतीक है मरम्मत जगह ले ली है. संवेदनशीलता की सीमा लगभग द्विगुणित स्तनधारी सेल 1,2 प्रति 50 भूग्रस्त टूटता है. Etoposide के रूप में किसी भी डीएनए हानिकारक एजेंटों के साथ इलाज किया कोशिकाओं, एक सकारात्मक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है. इस प्रकार धूमकेतु परख डीएनए की क्षति को मापने के लिए एक त्वरित और कारगर प्रक्रिया है.

Watch this Scientific Journal Video about Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay at JoVE.com

Assaying DNA Damage in Hippocampal Neurons Using the Comet Assay

धूमकेतु परख क्षार अस्थायी साइटों और hippocampal न्यूरॉन्स सहित सभी कोशिकाओं में डीएनए पर DNA-DNA/DNA-protein पार लिंक सहित एकल और डबल भूग्रस्त टूटता है, का पता लगाने का एक कारगर तरीका है. विधि डीएनए के अंतर प्रवास के डीएनए की क्षति की राशि में अंतर की वजह से एक बिजली के क्षेत्र में लाभ लेता है.

Hippocampal न्यूरॉन्स में डीएनए की क्षति परख धूमकेतु परख का उपयोग

A number of drugs target the DNA repair pathways and induce cell kill by creating DNA damage. Thus, processes to directly measure DNA damage have been ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Nucleofection and Primary Culture of Embryonic Mouse Hippocampal and Cortical Neurons

Nucleofection और भ्रूण माउस hippocampal और cortical न्यूरॉन्स के प्राथमिक संस्कृति

Hippocampal and cortical neurons have been used extensively to study central nervous system (CNS) neuronal polarization, axon/dendrite outgrowth, and ...

Neuromodulation and Mitochondrial Transport: Live Imaging in Hippocampal Neurons over Long Durations

Neuromodulation और Mitochondrial परिवहन: लंबे durations पर hippocampal न्यूरॉन्स में लाइव इमेजिंग

To understand the relationship between mitochondrial transport and neuronal function, it is critical to observe mitochondrial behavior in live cultured ...

Isolation and Culture of Hippocampal Neurons from Prenatal Mice

अलगाव और जन्म के पूर्व चूहे से hippocampal न्यूरॉन्स की संस्कृति

Primary cultures of rat and murine hippocampal neurons are widely used to reveal cellular mechanisms in neurobiology. By isolating and growing individual ...

Dual Electrophysiological Recordings of Synaptically-evoked Astroglial and Neuronal Responses in Acute Hippocampal Slices

तीव्र hippocampal स्लाइस में Synaptically पैदा Astroglial और neuronal प्रतिक्रियाएँ की दोहरी electrophysiological रिकॉर्डिंग

Astrocytes form together with neurons tripartite synapses, where they integrate and modulate neuronal activity. Indeed, astrocytes sense neuronal inputs ...

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange (ABE)

Detection of Protein Palmitoylation in Cultured Hippocampal Neurons by Immunoprecipitation and Acyl-Biotin Exchange ABE

प्रोटीन Palmitoylation immunoprecipitation और एसाइल बायोटिन विनिमय (अबे) द्वारा संवर्धित hippocampal न्यूरॉन्स में जांच

Palmitoylation is a post-translational lipid  modification involving the attachment of a 16-carbon saturated fatty acid,  palmitate, to cysteine residues ...

Calcium Phosphate Transfection of Primary Hippocampal Neurons

प्राथमिक hippocampal न्यूरॉन्स की कैल्शियम फॉस्फेट अभिकर्मक

Calcium phosphate precipitation is a convenient and economical method for transfection of cultured cells. With optimization, it is possible to use this ...

Imaging Dendritic Spines of Rat Primary Hippocampal Neurons using Structured Illumination Microscopy

संरचित रोशनी माइक्रोस्कोपी का उपयोग चूहा प्राथमिक hippocampal न्यूरॉन्स के वृक्ष के समान spines इमेजिंग

Dendritic spines are protrusions emerging from the dendrite of a neuron and represent the primary postsynaptic targets of excitatory inputs in the brain. ...

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Fluorescence and Bioluminescence Imaging of Subcellular Ca2+ in Aged Hippocampal Neurons

Subcellular सीए की प्रतिदीप्ति और bioluminescence इमेजिंग<sup&gt; 2 +</sup&gt; वृद्ध hippocampal न्यूरॉन्स में

Susceptibility to neuron cell death associated to neurodegeneration and ischemia are exceedingly increased in the aged brain but mechanisms responsible ...

Stripe Assay to Study the Attractive or Repulsive Activity of a Protein Substrate Using Dissociated Hippocampal Neurons

धारी परख एक प्रोटीन सब्सट्रेट Dissociated hippocampal न्यूरॉन्स के प्रयोग के आकर्षक या प्रतिकारक गतिविधि का अध्ययन करने के लिए

Growing axons develop a highly motile structure at their tip, termed the growth cone. The growth cone contacts extracellular environmental cues to ...

Assessment of Hippocampal Dendritic Complexity in Aged Mice Using the Golgi-Cox Method

गोल्गी-कॉक्स विधि का उपयोग करते हुए वृद्ध चूहों में हिप्पोकैम्पल वृक्ष वृत्तीय जटिलता का आकलन

Dendritic spines are the protuberances from the neuronal dendritic shafts that contain&#160; excitatory synapses. The morphological and branching ...