Name: screening for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model
Uploaded: 2012-11-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model at JoVE.com

نشكر الدكتور ليونارد I. زون في المختبر الذي تم تطوير هذه التقنيات في البداية؛ كوان كريستين والراحل تشي شين بن لهدايا من البلازميدات المستخدمة في هذا العمل؛ جيمس معلن Raible ديفيد للمساعدة في تلوين الأجسام المضادة، وجيمس لNeiswender وحقن مكروي الفيديو. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R00AR056899-03 لCJC

1. الكشف عن المعدلات بداية ظهور سرطان الجلد <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> إنشاء بوابة دخول الحيوانات المستنسخة الأوسط من خلال تضخيم PCR كامل طول الإطار القراءة مفتوحة من الجينات ذات الاهتمام (GOI) وإعادة توحيد pDONR إلى 221 باستخدام BP clonase II (إينفيتروجن). ا...

<ol>
	<li>Beroukhim, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+landscape+of+somatic+copy-number+alteration+across+human+cancers.">The landscape of somatic copy-number alteration across human cancers.</a> Nature. 463, 899-905 (2010).</li><li>Curtin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+sets+of+genetic+alterations+in+melanoma.">Distinct sets of genetic alterations in melanoma.</a> N. Engl. J. Med. 353, 2135-2147 (2005).</li><li>Lin, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+genomic+diversity+and+tumor+dependency+in+malignant+melanoma.">Modeling genomic diversity and tumor dependency in malignant melanoma.</a> Cancer Res. 68, 664-673 (2008).</li><li>Patton, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+mutations+are+sufficient+to+promote+nevi+formation+and+cooperate+with+p53+in+the+genesis+of+melanoma.">BRAF mutations are sufficient to promote nevi formation and cooperate with p53 in the genesis of melanoma.</a> Curr. Biol. 15, 249-254 (2005).</li><li>Ceol, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+histone+methyltransferase+SETDB1+is+recurrently+amplified+in+melanoma+and+accelerates+its+onset.">The histone methyltransferase SETDB1 is recurrently amplified in melanoma and accelerates its onset.</a> Nature. 471, 513-517 (2011).</li><li>Kwan, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tol2kit:+a+multisite+gateway-based+construction+kit+for+Tol2+transposon+transgenesis+constructs.">The Tol2kit: a multisite gateway-based construction kit for Tol2 transposon transgenesis constructs.</a> Dev. Dyn. 236, 3088-3099 (2007).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide of the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).</li><li>Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants.">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nat. Immunol. 4, 1238-1246 (2003).</li></ol>

طريقة miniCoopR تمكن التعبير عن الجينات ذات الأهمية في الخلايا الصباغية الزرد. هذا النهج يستفيد من حقيقة أن هذا الجين يعمل الزرد mitfa الخلايا بشكل مستقل. لهذا السبب، الخلايا الصباغية انقاذهم من قبل الناقل miniCoopR من المؤكد أن تحتوي على الجينات أي minigene والاهتمام الذي يقت...

<table border="1" style=";text-align:right;direction:rtl"><tbody><tr><td> اسم كاشف </td><td> شركة </td><td> كتالوج رقم </td><td> تعليقات </td></tr><tr><td> الكواشف بوابة إعادة التركيب </td><td> إينفيتروجن </td><td></td><td></td></tr><tr><td> miniCoopR </td><td></td><td></td><td> المرجع 5 </td></tr><tr><td> Mitfa الأجسام المضادة </td><td></td><td></td><td> المرجع 5 </td></tr><tr><td> FITC الضد الماعز المضادة للأرنب مفتش </td><td> إينفيتروجن </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vectashield </td><td> ناقلات مختبرات </td><td> H-1000 </td><td></td></tr><tr><td> كاسبر اسماك الزرد </td><td></td><td></td><td> المرجع 9 </td></tr><tr><td> 701N 10 ميكرولتر الحقنة </td><td> هاميلتون / فيشر </td><td> 14-824 </td><td> ونبسب؛ </td></tr><tr><td> 40 ميكرون فلتر </td><td> BD فالكون / فيشر </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> إينفيتروجن </td><td> 26140079 </td><td></td></tr></tbody></table>

screening for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model

وقد أسفرت دراسات الجينية من السرطانات البشرية ثروة من المعلومات حول الجينات التي تتغير في الأورام 1،2،3. وثمة تحد الناشئة عن هذه الدراسات هو أن يتم تغيير العديد من الجينات، وأنه يمكن أن يكون من الصعب التمييز تغيرات جينية تكون الأورام التي دفعت من تلك التي نشأت بالمناسبة خلال التحول. لرسم هذا التمييز فإنه من المفيد أن يكون هناك مقايسة التي يمكن قياس كميا تأثير جين متغير على بدء الورم وغيرها من العمليات التي تمكن الأورام أن تستمر ونشر. هنا نقدم وسيلة سريعة لفحص أعداد كبيرة من معدلات سرطان الجلد مرشح في الزرد باستخدام نموذج الورم الأصليين 4 أن يشمل الخطوات المطلوبة لبدء سرطان الجلد والصيانة. A كاشف رئيسي في هذا الاختبار هو متجه miniCoopR، الذي أزواج نسخة من النوع البري من مواصفات mitfa عامل الخلايا الصباغية إلى عبارة كاسيت إعادة التركيب في أي من المرشحين ميلويمكن إعادة تجميع الجينات أنوما 5. الناقل miniCoopR لديه minigene الإنقاذ mitfa الذي يحتوي على المروج، فتح الإطار القراءة و3&#39;-غير مترجمة المنطقة من الجين mitfa من النوع البري. لأنها تتيح لنا لجعل البنى باستخدام كامل طول إطارات القراءة المفتوحة للمعدلات سرطان الجلد مرشح. ويمكن بعد هذه الحيوانات المستنسخة الفردية يتم حقنها في تيراغرام خلية واحدة (mitfa: BRAF V600E)؛ P53 (LF)؛ الأجنة الزرد mitfa (LF). يحصل دمج ناقلات miniCoopR من Tol2 بوساطة transgenesis 6 و ينقذ الخلايا الصباغية. لأن تقترن ماديا إلى minigene الإنقاذ mitfa، يتم التعبير عن الجينات المرشحة في الخلايا الصباغية انقاذ، والبعض منها سوف تتطور الى تحويل والأورام. ويمكن قياس تأثير الجين مرشح على بدء سرطان الجلد القتامي الخلية وخصائص منحنيات البقاء على قيد الحياة سرطان الجلد باستخدام خالية من المقايسات غزو، وتلطيخ الأجسام المضادة وفحوصات الزرع.

تم حقن الأجنة الزرد mitfa (LF) مع الناقل الذي يحتوي على الجين الورمي miniCoopR سرطان الجلد SETDB1 5 أو EGFP، كل منها تحت سيطرة المروج mitfa؛ P53 (LF)؛: واحد خلايا تيراغرام (BRAF V600E mitfa). وقد تم اختيار الأجنة مع الانقاذ الخلايا الصباغية وسمح لتنضج. في 2 أشهر من الع...

Watch this Scientific Journal Video about Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model at JoVE.com

Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model

ويقدم وسيلة سريعة للكشف عن سرطان الجلد باستخدام معدلات الزرد نموذج الورم الأصليين. فإنه يستفيد من ناقلات miniCoopR الذي يسمح للتعبير عن الجينات المرشحة سرطان الجلد في الخلايا الصباغية. يتم وصف طريقة للحصول على منحنيات البقاء على قيد الحياة خالية من سرطان الجلد، ومقايسة الغزو، بروتوكول للتلوين الأجسام المضادة الخلايا الصباغية نطاق وفحص زرع سرطان الجلد.

الكشف عن سرطان الجلد باستخدام المعدلات اسماك الزرد الموديل ورم الأصليين

Genomic studies of  human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered  in tumors1,2,3. A challenge arising from these ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

متعدد الفوتون التصوير من غزو خلايا الورم في الفأر نموذج مثلي الفم سرطان الخلايا الحرشفية

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

تقييم التغييرات المشوهة في نموذج الزرد من التعرض الكحول الجنينية

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

الإنسان الخلية السرطانية الهرموني العصبي خطوط بمثابة نموذج ثلاثي الأبعاد لدراسة الإنسان علاج ورم الغدد الصم العصبية

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

زراعة الخلايا المشتقة المريض وعزل CD133<sup&gt; +</sup&gt; خلايا الجذعية السرطانية المزعومين من الميلانوما

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

A Zebrafish Model of Diabetes Mellitus and Metabolic Memory

نموذج من اسماك الزرد مرض السكري والأيض الذاكرة

Diabetes mellitus currently affects 346 million individuals and this is projected to increase to 400 million by 2030. Evidence from both the laboratory ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

رواية عالية الدقة<em&gt; في الجسم الحي</em&gt; تقنية التصوير لدراسة الاستجابة الديناميكية للمنشآت داخل القحف لنمو الورم والتداوي

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

نموذج الزرد ممكن من مرض الكلى المتعدد الكيسات: ضربة قاضية لل<em&gt; wnt5a</em&gt; أسباب الخراجات في الكلى اسماك الزرد

Polycystic kidney disease (PKD) is one of the most common causes of end-stage kidney disease, a devastating disease for which there is no cure. The ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

ثلاثي الأبعاد نموذج المشارك الثقافة ل-ورم انسجة التفاعل

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Isolated Hepatic Perfusion as a Treatment for Liver Metastases of Uveal Melanoma

معزولة كبدي الإرواء كعلاج للالانبثاث الكبد من العنبية الميلانوما

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

تقييم-التسلل ورم خلايا الدم البيضاء مجموعات فرعية في ورم تحت الجلد نموذج

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...