Name: screening for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model
Uploaded: 2012-11-13T13:00:00
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और जेम्स Neiswender, िईद्भस्टेन Kwan और देर ची बिन plasmids के उपहार के लिए इस काम में इस्तेमाल Chien, जेम्स लिस्टर और एंटीबॉडी धुंधला के साथ सहायता के लिए दाऊद Raible हम डॉ. लियोनार्ड मैं Zon जिनकी प्रयोगशाला में इन तकनीकों को शुरू में विकसित किया गया धन्यवाद microinjection वीडियो. इस काम CJC NIH अनुदान R00AR056899-03 द्वारा वित्त पोषित किया गया था

1. मेलेनोमा शुरुआत संशोधक के लिए स्क्रीनिंग <ol><li> पीसीआर हित के जीन के पूर्ण लंबाई खुला पढ़ने फ्रेम (भारत सरकार) amplifying और 221 pDONR में recombining बी.पी. clonase द्वितीय (Invitrogen) का उपयोग गेटवे बीच प्रविष्टि क्लोनों बनाएँ. Recombine p...

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	<li>Beroukhim, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+landscape+of+somatic+copy-number+alteration+across+human+cancers.">The landscape of somatic copy-number alteration across human cancers.</a> Nature. 463, 899-905 (2010).</li><li>Curtin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+sets+of+genetic+alterations+in+melanoma.">Distinct sets of genetic alterations in melanoma.</a> N. Engl. J. Med. 353, 2135-2147 (2005).</li><li>Lin, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+genomic+diversity+and+tumor+dependency+in+malignant+melanoma.">Modeling genomic diversity and tumor dependency in malignant melanoma.</a> Cancer Res. 68, 664-673 (2008).</li><li>Patton, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+mutations+are+sufficient+to+promote+nevi+formation+and+cooperate+with+p53+in+the+genesis+of+melanoma.">BRAF mutations are sufficient to promote nevi formation and cooperate with p53 in the genesis of melanoma.</a> Curr. Biol. 15, 249-254 (2005).</li><li>Ceol, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+histone+methyltransferase+SETDB1+is+recurrently+amplified+in+melanoma+and+accelerates+its+onset.">The histone methyltransferase SETDB1 is recurrently amplified in melanoma and accelerates its onset.</a> Nature. 471, 513-517 (2011).</li><li>Kwan, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tol2kit:+a+multisite+gateway-based+construction+kit+for+Tol2+transposon+transgenesis+constructs.">The Tol2kit: a multisite gateway-based construction kit for Tol2 transposon transgenesis constructs.</a> Dev. Dyn. 236, 3088-3099 (2007).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide of the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).</li><li>Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants.">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nat. Immunol. 4, 1238-1246 (2003).</li></ol>

miniCoopR विधि zebrafish melanocytes में ब्याज की जीन की अभिव्यक्ति के लिए सक्षम बनाता है. इस दृष्टिकोण तथ्य यह है कि zebrafish mitfa जीन सेल autonomously में कार्य करता है का लाभ लेता है. इस कारण से, वेक्टर miniCoopR द्वारा बचाया melanocytes minigene और हित ?...

<table border="1"><tbody><tr><td> अभिकर्मक के नाम </td><td> कंपनी </td><td> सूचीपत्र संख्या </td><td> टिप्पणियां </td></tr><tr><td> गेटवे पुनर्संयोजन अभिकर्मकों </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> miniCoopR </td><td></td><td></td><td> 5 संदर्भ </td></tr><tr><td> Mitfa एंटीबॉडी </td><td></td><td></td><td> 5 संदर्भ </td></tr><tr><td> FITC बकरी विरोधी खरगोश आईजीजी एंटीबॉडी </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vectashield </td><td> वेक्टर लैब्स </td><td> H-1000 </td><td></td></tr><tr><td> कैस्पर Zebrafish </td><td></td><td></td><td> 9 संदर्भ </td></tr><tr><td> 701N 10 μl सिरिंज </td><td> हैमिल्टन / फिशर </td><td> 14-824 </td><td> औरnbsp; </td></tr><tr><td> 40 फिल्टर सुक्ष्ममापी </td><td> BD फाल्कन / फिशर </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr></tbody></table>

screening for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model

मानव कैंसर के जीनोमिक अध्ययन जीन कि 1,2,3 ट्यूमर में बदल रहे हैं के बारे में जानकारी का एक धन मिले. इन अध्ययनों से उत्पन्न होने वाली चुनौती यह है कि कई जीनों बदल रहे हैं, और यह आनुवंशिक परिवर्तन कि tumorigenesis से है कि उन परिवर्तन के दौरान संयोग पड़ी चलाई भेद करना मुश्किल हो सकता है. इस अंतर को आकर्षित करने के लिए यह फायदेमंद है एक परख है कि मात्रात्मक ट्यूमर दीक्षा और अन्य प्रक्रियाओं है कि ट्यूमर जारी रहती है और का प्रसार सक्षम पर एक बदल जीन के प्रभाव के उपाय कर सकते हैं. यहाँ हम एक तेजी से एक autochthonous ट्यूमर मॉडल 4 कि मेलेनोमा दीक्षा और रखरखाव के लिए आवश्यक कदम शामिल हैं का उपयोग कर zebrafish में उम्मीदवार मेलेनोमा संशोधक की बड़ी संख्या स्क्रीन का मतलब उपस्थित थे. इस परख में एक प्रमुख अभिकर्मक miniCoopR वेक्टर, जो एक गेटवे पुनर्संयोजन कैसेट जंगली प्रकार mitfa melanocyte विनिर्देश कारक की एक प्रतिलिपि जोड़ों उम्मीदवार जो मेल मेंAnoma जीन 5 recombined जा सकता है. इस miniCoopR वेक्टर एक mitfa बचाव minigene जो प्रमोटर, खुला पढ़ने फ्रेम और जंगली प्रकार mitfa जीन की 3&#39;-untranslated क्षेत्र शामिल है. यह हमारे उम्मीदवार मेलेनोमा संशोधक की पूरी लंबाई खुला पढ़ने फ्रेम का उपयोग constructs बनाने के लिए अनुमति देता है. (वामो) p53; mitfa (वामो) zebrafish भ्रूण: ये व्यक्ति क्लोनों तो एकल कक्ष (BRAF V600E mitfa) टीजी में इंजेक्ट किया जा सकता है. miniCoopR वेक्टर Tol2 की मध्यस्थता transgenesis 6 से एकीकृत हो जाता है और melanocytes बचाता है. क्योंकि वे शारीरिक रूप से mitfa बचाव minigene मिलकर कर रहे हैं, उम्मीदवार जीनों बचाया melanocytes, जिनमें से कुछ को बदलने और ट्यूमर में विकसित में व्यक्त कर रहे हैं. मेलेनोमा दीक्षा और मेलेनोमा सेल गुण पर एक उम्मीदवार जीन के प्रभाव मेलेनोमा मुक्त अस्तित्व घटता, आक्रमण assays, एंटीबॉडी धुंधला हो और प्रत्यारोपण assays का उपयोग करके मापा जा सकता है.

एक सेल (mitfa: BRAF V600E) टीजी, p53 (वामो); mitfa (वामो) zebrafish भ्रूण miniCoopR मेलेनोमा ओंकोजीन 5 SETDB1 EGFP या mitfa प्रमोटर के नियंत्रण के तहत प्रत्येक युक्त वेक्टर इंजेक्शन के साथ थे. Melanocyte बचाव के साथ भ्रूण का चयन किया गया और ...

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Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model

मेलेनोमा एक zebrafish autochthonous ट्यूमर मॉडल का उपयोग संशोधक के लिए स्क्रीन करने के लिए एक तेजी से जिस तरह से प्रस्तुत किया है. यह miniCoopR वेक्टर जो उम्मीदवार melanocytes में मेलेनोमा जीन की अभिव्यक्ति के लिए अनुमति देता है का लाभ लेता है. मेलेनोमा से मुक्त अस्तित्व घटता, एक आक्रमण परख पैमाने melanocytes के एंटीबॉडी धुंधला के लिए एक प्रोटोकॉल और एक मेलेनोमा प्रत्यारोपण परख प्राप्त करने के लिए एक तरीका वर्णित हैं.

मेलेनोमा संशोधक एक Zebrafish autochthonous ट्यूमर मॉडल का उपयोग करने के लिए स्क्रीनिंग

Genomic studies of  human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered  in tumors1,2,3. A challenge arising from these ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

मौखिक स्क्वैमस सेल कार्सिनोमा के एक Orthotopic माउस मॉडल में ट्यूमर सेल आक्रमण की मल्टी फोटॉन इमेजिंग

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

भ्रूण शराब एक्सपोजर Zebrafish मॉडल में teratogenic परिवर्तन का आकलन

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

मानव मानव neuroendocrine ट्यूमर चिकित्सा के अध्ययन के लिए एक तीन आयामी मॉडल के रूप में neuroendocrine ट्यूमर सेल लाइनों

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

रोगी व्युत्पन्न सेल संस्कृति और CD133 का अलगाव<sup&gt; +</sup&gt; मेलेनोमा से ख्यात कैंसर स्टेम सेल

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

A Zebrafish Model of Diabetes Mellitus and Metabolic Memory

मधुमेह और मेटाबोलिक मेमोरी का एक zebrafish मॉडल

Diabetes mellitus currently affects 346 million individuals and this is projected to increase to 400 million by 2030. Evidence from both the laboratory ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

एक उपन्यास उच्च संकल्प<em&gt; विवो में</emट्यूमर के विकास और चिकित्सा विज्ञान के लिए Intracranial संरचनाएं के गतिशील प्रतिक्रिया का अध्ययन करने के लिए&gt; इमेजिंग तकनीक

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

पॉलीसिस्टिक गुर्दा रोग के संभावित zebrafish मॉडल: की पछाड़ना<em&gt; Wnt5a</em&gt; Zebrafish गुर्दे में अल्सर का कारण बनता है

Polycystic kidney disease (PKD) is one of the most common causes of end-stage kidney disease, a devastating disease for which there is no cure. The ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

ट्यूमर स्ट्रोमल इंटरेक्शन के लिए तीन आयामी सह संस्कृति मॉडल

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Isolated Hepatic Perfusion as a Treatment for Liver Metastases of Uveal Melanoma

Uveal मेलेनोमा के जिगर metastases के लिए एक इलाज के रूप पृथक यकृत छिड़काव

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

एक चमड़े के नीचे ट्यूमर मॉडल में ट्यूमर घुसपैठ ल्युकोसैट कैंपेन्स के मूल्यांकन

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...