Name: screening for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model
Uploaded: 2012-11-13T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model at JoVE.com

Мы благодарим д-р Леонард I. Зон, в лаборатории которого эти методы были первоначально разработаны, Кристен Кван и конце Чи-Бин Чен подарки плазмид, использованных в работе, Джеймс и Дэвид Листер Raible за помощью антител окрашивания и Джеймс Neiswender для микроинъекции видео. Эта работа финансировалась NIH грант R00AR056899-03 в ЗАО

1. Скрининг на модификаторы Меланома Onset <ol><li> Создание шлюза клонов среднего запись с помощью ПЦР усиления полнометражный открытые рамки считывания генов интересов (ГОИ) и рекомбинации в pDONR 221 использовании BP clonase II (Invitrogen). Используйте многоузлового шлюз технологий (Invitrogen) для рекомби?...

<ol>
	<li>Beroukhim, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+landscape+of+somatic+copy-number+alteration+across+human+cancers.">The landscape of somatic copy-number alteration across human cancers.</a> Nature. 463, 899-905 (2010).</li><li>Curtin, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Distinct+sets+of+genetic+alterations+in+melanoma.">Distinct sets of genetic alterations in melanoma.</a> N. Engl. J. Med. 353, 2135-2147 (2005).</li><li>Lin, W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+genomic+diversity+and+tumor+dependency+in+malignant+melanoma.">Modeling genomic diversity and tumor dependency in malignant melanoma.</a> Cancer Res. 68, 664-673 (2008).</li><li>Patton, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=BRAF+mutations+are+sufficient+to+promote+nevi+formation+and+cooperate+with+p53+in+the+genesis+of+melanoma.">BRAF mutations are sufficient to promote nevi formation and cooperate with p53 in the genesis of melanoma.</a> Curr. Biol. 15, 249-254 (2005).</li><li>Ceol, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+histone+methyltransferase+SETDB1+is+recurrently+amplified+in+melanoma+and+accelerates+its+onset.">The histone methyltransferase SETDB1 is recurrently amplified in melanoma and accelerates its onset.</a> Nature. 471, 513-517 (2011).</li><li>Kwan, K. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tol2kit:+a+multisite+gateway-based+construction+kit+for+Tol2+transposon+transgenesis+constructs.">The Tol2kit: a multisite gateway-based construction kit for Tol2 transposon transgenesis constructs.</a> Dev. Dyn. 236, 3088-3099 (2007).</li><li>Rosen, J. N., Sweeney, M. F., Mably, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microinjection+of+Zebrafish+Embryos+to+Analyze+Gene+Function.">Microinjection of Zebrafish Embryos to Analyze Gene Function.</a> J. Vis. Exp. (25), e1115 (2009).</li><li>Westerfield, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The zebrafish book. A guide of the laboratory use of zebrafish (Danio rerio). , (2000).</li><li>White, R. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transparent+adult+zebrafish+as+a+tool+for+in+vivo+transplantation+analysis.">Transparent adult zebrafish as a tool for in vivo transplantation analysis.</a> Cell Stem Cell. 2, 183-189 (2008).</li><li>Traver, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+in+vivo+imaging+of+multilineage+engraftment+in+zebrafish+bloodless+mutants.">Transplantation and in vivo imaging of multilineage engraftment in zebrafish bloodless mutants.</a> Nat. Immunol. 4, 1238-1246 (2003).</li></ol>

Метод позволяет miniCoopR экспрессии генов интерес у рыбок данио меланоцитов. Этот подход имеет преимущество в том, что геном данио mitfa действует клеточной автономно. По этой причине, меланоциты спас вектор miniCoopR наверняка содержат минигена и любого интересующего гена, к которому он фи...

<table border="1"><tbody><tr><td> Название реагента </td><td> Компания </td><td> Номер в каталоге </td><td> Комментарии </td></tr><tr><td> Реагенты шлюз рекомбинации </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> miniCoopR </td><td></td><td></td><td> Ссылка 5 </td></tr><tr><td> Mitfa антител </td><td></td><td></td><td> Ссылка 5 </td></tr><tr><td> FITC козьего анти-IgG антител кролика </td><td> Invitrogen </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Vectashield </td><td> Vector Labs </td><td> H-1000 </td><td></td></tr><tr><td> Каспер данио рерио </td><td></td><td></td><td> Ссылка 9 </td></tr><tr><td> 701N 10 мкл шприц </td><td> Hamilton / Fisher </td><td> 14-824 </td><td> ИNbsp; </td></tr><tr><td> 40 мкМ фильтр </td><td> BD Falcon / Fisher </td><td> 352340 </td><td></td></tr><tr><td> FBS </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr></tbody></table>

screening for melanoma modifiers using a zebrafish autochthonous tumor model

Геномных исследований рака у человека дали огромное количество информации о генах, которые изменяются в опухолях 1,2,3. Задача, вытекающие из этих исследований является то, что многие гены меняются, и это может быть трудно отличить генетические изменения, которые привели опухолей из тех, что возникли случайно во время преобразования. Чтобы нарисовать это различие это полезно иметь тест, который можно количественно измерить влияние измененного гена в раковых клеток и другие процессы, которые позволяют опухоли сохраняются и распространение. Здесь мы представляем быстрое средство для скрининга большого количества модификаторов кандидата меланомы у рыбок данио использованием автохтонных 4 модели опухоль, которая включает в себя шаги, необходимые для начала меланомы и технического обслуживания. Ключевым реагентом в этом анализе есть вектор miniCoopR, что пары дикого типа копия mitfa меланоцитов фактор спецификации кассету рекомбинации шлюз, в котором кандидат Меланомалий генов могут быть объединены 5. Вектор miniCoopR имеет минигена mitfa спасения, который содержит промотор, открытые рамки считывания и 3&#39;-нетранслируемой области гена дикого типа mitfa. Это позволяет нам производить конструкций с использованием полной длины открытые рамки считывания модификаторов кандидата меланомы. Эти отдельные клоны могут быть введены в одной ячейке Tg (mitfa: BRAF V600E); p53 (LF); mitfa (LF) эмбрионы рыбок данио. Вектор miniCoopR получает интегрированы Tol2-опосредованной трансгенез 6 и спасает меланоцитов. Потому что они физически соединены с mitfa спасения минигена, кандидат гены экспрессируются в спасена меланоцитов, некоторые из которых будут преобразовывать и развивать в опухоли. Влияние генов-кандидатов о возбуждении меланомы и свойства клеток меланомы может быть измерена с помощью меланомы выживаемость без кривые, вторжение анализы, окрашивание антител и трансплантации анализов.

Один клеток Tg (mitfa: BRAF V600E); p53 (LF); mitfa (LF) эмбрионы рыбок данио вводили miniCoopR вектора, содержащего онкоген меланомы SETDB1 5 или EGFP, каждый под контролем промотора mitfa. Эмбрионы с меланоцитов спасательных были отобраны и позволил, чтобы созреть. На 2-месячного возраста жи...

Watch this Scientific Journal Video about Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model at JoVE.com

Screening for Melanoma Modifiers using a Zebrafish Autochthonous Tumor Model

Быстрый способ для выявления меланомы модификаторы помощью рыбок данио автохтонных модели опухоли представлены. Он использует miniCoopR вектор, который позволяет для выражения кандидата меланомы генов в меланоциты. Способ получения меланомы выживаемость без кривые, вторжение анализа, протокол для окрашивания антител масштаба меланоцитов и анализа меланомы трансплантации описаны.

Скрининг на Меланома Модификаторы помощью рыбок данио автохтонные модели опухоли

Genomic studies of  human cancers have yielded a wealth of information about genes that are altered  in tumors1,2,3. A challenge arising from these ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Многофотонная изображений опухолевой инвазии сотовый в Ортотопическая Модель мыши устного плоскоклеточный рак

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

Assessing Teratogenic Changes in a Zebrafish Model of Fetal Alcohol Exposure

Оценка Тератогенные Изменения в модели данио рерио внутриутробного развития плода алкоголь

Fetal alcohol syndrome (FAS) is a severe manifestation of embryonic exposure to ethanol. It presents with characteristic defects to the face and organs, ...

Human Neuroendocrine Tumor Cell Lines as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Neuroendocrine Tumor Therapy

Человека нейроэндокринной опухоли клеточных линий в качестве трехмерных моделей по изучению прав нейроэндокринные опухоли терапия

Neuroendocrine tumors (NETs) are rare tumors, with an incidence of two per 100,&#x200A;000 individuals per year, and they account for 0.5% of all human ...

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Patient Derived Cell Culture and Isolation of CD133+ Putative Cancer Stem Cells from Melanoma

Пациент Производные культуре клеток и выделение CD133<sup&gt; +</sup&gt; Предполагаемые раковых стволовых клеток от меланомы

Despite improved treatments options for melanoma available today, patients with advanced malignant melanoma still have a poor prognosis for ...

A Zebrafish Model of Diabetes Mellitus and Metabolic Memory

Данио рерио модели сахарного диабета и метаболических памяти

Diabetes mellitus currently affects 346 million individuals and this is projected to increase to 400 million by 2030. Evidence from both the laboratory ...

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

A Novel High-resolution In vivo Imaging Technique to Study the Dynamic Response of Intracranial Structures to Tumor Growth and Therapeutics

Роман с высоким разрешением<em&gt; В естественных условиях</em&gt; Изображений методика исследования динамических характеристик внутричерепных структур к росту опухоли и терапии

We have successfully integrated previously established Intracranial window (ICW) technology 1-4 with intravital 2-photon confocal microscopy to develop a ...

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

A Possible Zebrafish Model of Polycystic Kidney Disease: Knockdown of wnt5a Causes Cysts in Zebrafish Kidneys

Возможно данио рерио Модель поликистоза почек: Нокдаун<em&gt; Wnt5a</em&gt; Причины кисты у рыбок данио почек

Polycystic kidney disease (PKD) is one of the most common causes of end-stage kidney disease, a devastating disease for which there is no cure. The ...

Three-dimensional Co-culture Model for Tumor-stromal Interaction

Трехмерная Co-культура Модель опухолью стромы взаимодействия

Cancer progression (initiation, growth, invasion and metastasis) occurs through interactions between malignant cells and the surrounding tumor stromal ...

Isolated Hepatic Perfusion as a Treatment for Liver Metastases of Uveal Melanoma

Изолированные печени перфузии для лечения метастазов в печени сосудистой меланомы

Isolated hepatic perfusion (IHP) is a procedure where the liver is surgically isolated and perfused with a high concentration of the chemotherapeutic ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Оценка опухоли инфильтрирующие лейкоцитов подмножеств в подкожной опухоли модели

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...