Name: retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate
Uploaded: 2013-09-11T15:30:00
Duration: 5 min 58 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate at JoVE.com

אנו מודים וונדי צ&#39;או על תמיכתה בסקירה ביקורתית. עבודה זו נתמכה על ידי Bausch &amp; Lomb vitreoretinal מלגה (HM), EY014104 מענק National Eye Institute (JWM), מחקר למניעת עיוורון קרן (DGV), אריות העין קרן מחקר (DGV), ותרומתה נדיבה של משפחת Yeatts (JWM וDGV).

כל הניסויים בבעלי החיים בוצעו בהתאם לאגודה לחקר חזון והצהרת רפואת עיניים לשימוש בבעלים חיים ברפואת עיניים וחזון מחקר, וההנחיות והתקנות שנקבעו על ידי העין ואוזן מסצ&#39;וסטס ועדת טיפול בבעלי חיים חולה. 1. טיפול מקדים <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הרדימי עכבר 8 שבועות בן עם זריקת intraperitoneal של תערובת של 60 מ&quot;ג / ק&quot;ג קטמין ו6 מ&quot;ג / קילוגרם xylazine. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את השפם. זה נעשה משום שהם מפריעים להדמיה ומיקום מכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרחיב את התלמיד עם phenylephrine 5% וtropicamide 0.5%. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חותכים את הריסים. זה נעשה גם בגלל שהם מפריעים להדמיה ומיקום מכשיר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל הרדמה מקומית (פתרון עיני 0.5% hydrochloride proparacaine). </li></ol> 2. ניתוח תחת מיקרוסקופ <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הגדר את העכבר בקופה לרוחבition עם האף כלפי המנתח. קמצוץ הבוהן מבוצע כדי לאשר הרדמה כירורגית, וכפפות סטריליות הם לבשו לפני תחילת ניתוח. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לחתוך את לחמית הזמנית בימבוס האחורי ולהפריד את הלחמית בלובן העין. הימנע חודרים בלובן העין. לאחר שלב זה, לתפוס את לחמית בימבוס עם מלקחיים כדי לשלוט על העין. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לעשות חתך scleral עצמי איטום באמצעות קצה מחט G 30 עם השיפוע כלפי מעלה. הפוך מנהרת scleral דרך לובן העין ולחדור בלובן העין לדמה העין (איור 1). הימנע חודר הרשתית. אם דימום כורוידאלית מתרחש ויוצא דרך פצע scleral, לבצע astriction עם חנית כירורגית עד שהדימום ייפסק. פצע scleral זה יהיה עם לחץ התוך עיני חתום עצמי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לנקב את הקרנית עם מחט 30 G כדי להפחית את לחץ התוך עיני. השתמש במקביל המחט לאיריס כדי למנוע פציעה של הקשתית והעדשה בדוארntry ללשכה הקדמית. לחץ התוך עיני יגרום לפצע לחותם עצמי. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> הכנס מחט G 33 מחוברת למזרק המילטון 10 μl לחלל subretinal עם השיפוע הצביע כלפי מטה (לכיוון העין הפנימית), ולהזריק hyaluronate נתרן 3.5 μl בעדינות כדי לנתק את רשתית נוירו מהרשתית שבבסיס. הימנע חודר הרשתית עם מחט 33 G כי hyaluronate נתרן ייכנס לחלל הזגוגית אך לא את רווח subretinal אם הרשתית חדרה. כמו כן, יש להימנע מהזרקה מהירה משום שהיא תיצור מדמיע בעל פה, וhyaluronate נתרן ידלוף ללשכה הקדמית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בואו ההומור המימית לזרום החוצה מלנקב בקרנית על ידי לחיצה על הקרנית מסביב לחור בקרנית עם מלקחיים כדי להתאים את לחץ התוך עיני. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> לאשר היעדרות של דליפה מפצע scleral באמצעות חנית כירורגית. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> כדי להפחית את הסיכון של דליפת hyaluronate נתרן, הנח דבק כירורגי cyanoacrylate עלפצע scleral. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חבר מחדש את הלחמית למיקום המקורי שלה באמצעות דבק כירורגי cyanoacrylate. זה יהיה עוד יותר להפחית את הסיכון של זליגת hyaluronate נתרן. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בדוק את הקרקעית באמצעות מכסה זכוכית ולאשר את הקמתה של RD bullous ללא דימום subretinal. </li></ol> 3. לאחר טיפול <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להחיל משחה אנטיביוטית הבסיטרצין לעין כדי להפחית את הסיכון לזיהום. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שמור על העכברים על כרית חימום כדי למנוע את ההרדמה (תערובת של קטמין ו xylazine) מגרימת טמפרטורת גוף נמוכה לאחר לחץ דם נמוך. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> שים את העכברים חזרה לכלוב בעלי החיים אחרי שהם מתעוררים מהרדמה. לפקח על העכברים יומיים לסיבוכים. אם כל עניינים מסתבכים, להרדים את העכברים כמתואר להלן. </li></ol> 4. הקרבה <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> להרדים את העכברים על ידי נקע בצוואר הרחם לאחר הזרקת intraperitoneal של 100 מ&quot;ג / ק&quot;ג pentobarbital נתרן, וenucleate העיניים בנקודות זמן מתאימים לכל ניסוי (לא מוצג). הימנע מהפעלה לחץ על העין במהלך אנוקלאציה כי hyaluronate נתרן עלול לדלוף החוצה. RDS bullous צריך להיות עקבי לפחות 14 ימים. </li></ol>

<ol>
	<li>Anderson, D. H., Guerin, C. J., Erickson, P. A., Stern, W. H., Fisher, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphological+recovery+in+the+reattached+retina.">Morphological recovery in the reattached retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 27, 168-183 (1986).</li><li>Cook, B., Lewis, G. P., Fisher, S. K., Adler, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Apoptotic+photoreceptor+degeneration+in+experimental+retinal+detachment.">Apoptotic photoreceptor degeneration in experimental retinal detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 36, 990-996 (1995).</li><li>Zacks, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Caspase+Activation+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Caspase Activation in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 44, 1262-1267 (2003).</li><li>Zacks, D. N., Han, Y., Zeng, Y., Swaroop, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+Signaling+Pathways+and+Stress-Response+Genes+in+an+Experimental+Model+of+Retinal+Detachment.">Activation of Signaling Pathways and Stress-Response Genes in an Experimental Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 47, 1691-1695 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+cytokine+responses+to+retinal+detachment+in+rats.">Characterization of cytokine responses to retinal detachment in rats.</a> Mol. Vis. 12, 867-878 (2006).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumor+Necrosis+Factor-Mediates+Photoreceptor+Death+in+a+Rodent+Model+of+Retinal+Detachment.">Tumor Necrosis Factor-Mediates Photoreceptor Death in a Rodent Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 1384-1391 (2011).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relocalization+of+apoptosis-inducing+factor+in+photoreceptor+apoptosis+induced+by+retinal+detachment+in+vivo.">Relocalization of apoptosis-inducing factor in photoreceptor apoptosis induced by retinal detachment in vivo.</a> Am. J. Pathol. 158, 1271-1278 (2001).</li><li>Hisatomi, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Critical+role+of+photoreceptor+apoptosis+in+functional+damage+after+retinal+detachment.">Critical role of photoreceptor apoptosis in functional damage after retinal detachment.</a> Curr. Eye Res. 24, 161-172 (2002).</li><li>Nakazawa, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Monocyte+chemoattractant+protein+1+mediates+retinal+detachment-induced+photoreceptor+apoptosis.">Monocyte chemoattractant protein 1 mediates retinal detachment-induced photoreceptor apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 104, 2425-2430 (2007).</li><li>Trichonas, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+interacting+protein+kinases+mediate+retinal+detachment-induced+photoreceptor+necrosis+and+compensate+for+inhibition+of+apoptosis.">Receptor interacting protein kinases mediate retinal detachment-induced photoreceptor necrosis and compensate for inhibition of apoptosis.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. 107, 21695-21700 (2010).</li><li>Roh, M. I., Murakami, Y., Thanos, A., Vavvas, D. G., Miller, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Edaravone,+an+ROS+Scavenger,+Ameliorates+Photoreceptor+Cell+Death+after+Experimental+Retinal+Detachment.">Edaravone, an ROS Scavenger, Ameliorates Photoreceptor Cell Death after Experimental Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 52, 3825-3831 (2011).</li><li>Mantopoulos, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tauroursodeoxycholic+acid+(TUDCA)+protects+photoreceptors+from+cell+death+after+experimental+retinal+detachment.">Tauroursodeoxycholic acid (TUDCA) protects photoreceptors from cell death after experimental retinal detachment.</a> PLoS One. 6, e24245 (2011).</li><li>Yang, L., Bula, D., Arroyo, J. G., Chen, D. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preventing+retinal+detachment-associated+photoreceptor+cell+loss+in+Bax-deficient+mice.">Preventing retinal detachment-associated photoreceptor cell loss in Bax-deficient mice.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 45, 648-654 (2004).</li><li>Cebulla, C. M., Ruggeri, M., Murray, T. G., Feuer, W. J., Hernandez, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spectral+domain+optical+coherence+tomography+in+a+murine+retinal+detachment+model.">Spectral domain optical coherence tomography in a murine retinal detachment model.</a> Exp. Eye Res. 90, 521-527 (2010).</li><li>Secondi, R., Kong, J., Blonska, A. M., Staurenghi, G., Sparrow, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fundus+Autofluorescence+Findings+in+a+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment.">Fundus Autofluorescence Findings in a Mouse Model of Retinal Detachment.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 5190-5197 (2012).</li><li>Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+retinal+detachment+in+the+owl+monkey.+IV.+The+reattached+retina.">Experimental retinal detachment in the owl monkey. IV. The reattached retina.</a> Am. J. Ophthalmol. 66, 1075-1091 (1968).</li><li>Ross, W., Lavina, A., Russell, M., Maberley, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+correlation+between+height+of+macular+detachment+and+visual+outcome+in+macula-off+retinal+detachments+of+&lt;+or+=+7+days'+duration.">The correlation between height of macular detachment and visual outcome in macula-off retinal detachments of &lt; or = 7 days' duration.</a> Ophthalmology. 112, 1213-1217 (2005).</li><li>Glatt, H., Machemer, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+subretinal+hemorrhage+in+rabbits.">Experimental subretinal hemorrhage in rabbits.</a> Am. J. Ophthalmol. 94, 762-773 (1982).</li><li>Toth, C. A., Morse, L. S., Hjelmeland, L. M., Landers, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrin+directs+early+retinal+damage+after+experimental+subretinal+hemorrhage.">Fibrin directs early retinal damage after experimental subretinal hemorrhage.</a> Arch. Ophthalmol. 109, 723-729 (1991).</li><li>Benner, J. D., Hay, A., Landers, M. B., Hjelmeland, L. M., Morse, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fibrinolytic-assisted+removal+of+experimental+subretinal+hemorrhage+within+7+days+reduces+outer+retinal+degeneration.">Fibrinolytic-assisted removal of experimental subretinal hemorrhage within 7 days reduces outer retinal degeneration.</a> Ophthalmology. , 101-672 (1994).</li><li>Bhisitkul, R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neuroprotective+effect+of+intravitreal+triamcinolone+acetonide+against+photoreceptor+apoptosis+in+a+rabbit+model+of+subretinal+hemorrhage.">Neuroprotective effect of intravitreal triamcinolone acetonide against photoreceptor apoptosis in a rabbit model of subretinal hemorrhage.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 4071-4077 (2008).</li><li>Zeng, R., Zhang, Y., Shi, F., Kong, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Novel+Experimental+Mouse+Model+of+Retinal+Detachment:+Complete+Functional+and+Histologic+Recovery+of+the+Retina.">A Novel Experimental Mouse Model of Retinal Detachment: Complete Functional and Histologic Recovery of the Retina.</a> Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 53, 1685-1695 (2012).</li><li>Leon, S., Yin, Y., Nguyen, J., Irwin, N., Benowitz, L. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lens+injury+stimulates+axon+regeneration+in+the+mature+rat+optic+nerve.">Lens injury stimulates axon regeneration in the mature rat optic nerve.</a> J. Neurosci. 20, 4615-4626 (2000).</li><li>Murakami, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibition+of+choroidal+neovascularization+via+brief+subretinal+exposure+to+a+newly+developed+lentiviral+vector+pseudotyped+with+Sendai+viral+envelope+proteins.">Inhibition of choroidal neovascularization via brief subretinal exposure to a newly developed lentiviral vector pseudotyped with Sendai viral envelope proteins.</a> Hum. Gene Ther. 21, 199-209 (2010).</li><li>Kong, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Self-complementary+AAV5+vector+facilitates+quicker+transgene+expression+in+photoreceptor+and+retinal+pigment+epithelial+cells+of+normal+mouse.">Self-complementary AAV5 vector facilitates quicker transgene expression in photoreceptor and retinal pigment epithelial cells of normal mouse.</a> Exp. Eye Res. 90, 546-554 (2010).</li></ol>

יש העיניים מסצ&#39;וסטס ומרפאת אוזן זכות בעלות בשלושה פטנטים בארה&quot;ב מופנים לשימוש בverteporfin. בנוסף, יש לו את העיניים מסצ&#39;וסטס ומרפאת אוזן זכות בעלות בבקשות לפטנטים מסוימות מופנות להרס סלקטיבי של neovasculature כורוידאלית subretinal לטיפול בניוון מקולרי והפרעות אחרות. העיניים מסצ&#39;וסטס ומרפאת אוזן מקבלים תמלוגים כתוצאה מפטנטים אלו ובקשות לפטנטים, ד&quot;ר מילר מקבל חלק מאותו בהתאם לעיני מסצ&#39;וסטס ומדיניות של אוזן מרפאת המוסדית פטנטים ונהלים, הכוללת הוראות תמלוגים שיתוף. המחבר, ד&quot;ר ג&#39;ואן וו מילר, הוא חבר מועצה בעבר ובבעלי מניות לשעבר של Alcon, Inc, וכיום משמש כיועץ לאלקון; Imagen ביוטק, Inc; תרופות ISIS; תרופות Kalvista; Regeneron Pharmaceuticals, Inc ו ONL Therapeutics, LLC. ד&quot;ר Demetrios ג Vavvas משמשכיועץ לחברת רוש, ג&#39;ננטק, Kala תרופות.

מספר שיטות להקמת מודל RD בעיני מכרסמים דווחו 3-15, 22. רובם לנצל הזרקת subretinal של hyaluronate נתרן כי זה הוא חומר צמיג המשמש בדרך כלל במהלך הניתוח תוך עיני בבני אדם, וזה לא קשור עם כל רעילות עינית ידועה 1-15. hyaluronate נתרן, ולא יותר מהרגיל מלח או פוספט שנאגרו מלוח (PBS), מגדיל את משך הזמן של RD. השיטות להזרקת subretinal של hyaluronate נתרן להשתמש באחת משתי גישות: גישת transvitreal 3-6 או גישת transscleral 7-15. שני השיטות מבוצעות בהתבוננות בקרקעית העין. בגישת transvitreal, מזרק subretinal הוא הציג לתוך חלל הזגוגית, retinotomy נוצר ברשתית ההיקפית, וhyaluronate נתרן מוזרק לתוך חלל subretinal. בשיטה זו, שתי דמעות רשתית נעשות, מה שמגביר את הסיכון לרשתיתדימום ליטר שעשוי להיכנס למרחב subretinal. בנוסף, קיים סיכון של פגיעה בעדשה כאשר retinotomy נוצר. ישנן מספר שיטות שונה לגישת transscleral. ברוב השיטות האלה 7-12, לאחר הפחתת לחץ התוך עיני עם לנקב לשכה קדמית, מחט G 30 מחוברת למזרק מלא hyaluronate נתרן מוכנס ישירות לתוך חלל subretinal דרך הלחמית, לובן העין, דמית העין, והרשתית. Hyaluronate נתרן מוזרק לאחר מכן לחלל subretinal. הסיכון לפציעה מדמיע ועדשת רשתית בשיטה transscleral זה הוא פחות מזה בגישת transvitreal. עם זאת, החור שנעשה בלובן העין על ידי מחט 30 G הוא גדול, במיוחד לעיני עכבר, וhyaluronate נתרן מוזרק לתוך חלל subretinal קלות דליפות מהעין דרך פצע scleral. זה מוביל ל, RD פחות עיקש נמוך יותר ומוות של תאי קולטי אור משתנה יותר. יתר על כן, אם דימום כורוידאלית מתרחש בצעד ניקוב scleral, הדימום יתפשט לחלל subretinal כי לחץ התוך עיני הופחת לפני הזרקת hyaluronate subretinal. מספר גורמים יכולים להשפיע על ההשפעה של RD על הרשתית מנותקת, ובכלל זה גם דימום subretinal והגובה והתמדה של RD 16-21. עליות מוות של תאי קולטי אור בגובה הולך וגדל של RD 16, 17, ונזק לתאי קולטי אור עשויות להיות נרחבות יותר בגלל דיפוזיה מופחתת של חמצן וחומרים מזינים חיוניים מchoriocapillaris עם RD גבוה יותר בהשוואה לRD הרדוד. דימום subretinal הוא גם רעיל לתאי קולטי אור 18-21; מנגנונים אפשריים של רעילות זו ברשתית מנותקת כוללים היפוקסיה ושיבוש מטבולים על ידי דימום subretinal כמחסום דיפוזיה, ורעילות עצבית ישירה הנגרמת על ידי מרכיבי דם (כגון ברזל). פציעת עדשה, אשר כבר דווחה לנו השפעה מגינה על retiתאי הגנגליון nal 23, עשויים להשפיע גם על מוות של תאי קולטי אור אחרי הגיוס של RD. בנוסף, אם אתר פצע הכניסה אינו אטום, hyaluronate נתרן עלול לדלוף החוצה עם מניפולציה העין במהלך אנוקלאציה. זה עשוי להוביל לסיווג שגוי של RD הרדוד, שעשוי בתורו משפיע על הפרשנות של התוצאות. אנחנו שינינו את שיטת transscleral להזרקת subretinal של hyaluronate נתרן כדי להגדיל את שחזור של RDS ולהפחית את שיעור דימום subretinal. השלב הקריטי של פרוטוקול זה הוא יצירת חתך scleral עצמית איטום באמצעות מחט G 30, המונעת דליפה של hyaluronate נתרן לאחר הזרקה. בניגוד לשיטות קודמות, פרוטוקול זה מבוצע ללא התבוננות בקרקעית כך תשומת לב רבה יותר מוקדשת לפצע scleral. יישום של דבק גם מונע hyaluronate נתרן מ דולף החוצה של העין. מניסיוננו, השיעור של דימום subretinal עם פרוטוקול זה wכמשמעותי פחות מזה עם פרוטוקולים אחרים. אם דימום כורוידאלית מתרחש במהלך שלב חתך scleral, זה יהיה לצאת מהעין דרך פצע scleral כי צעד זה מתבצע לפני הפחתת לחץ התוך עיני. אם דימום כורוידאלית מתרחש לאחר ההפחתה של הלחץ וניתוק של רשתית נוירו התוך עיני, הדם יהיה לנתח לחלל subretinal. מצאנו שזה יקרה בכ -5% מהמקרים בניגוד לכ 10-20% עם טכניקות האחרות. צריכים להיות שלילי בעלי חיים אלה מניתוח. גם טכניקה זו יכולה לשמש להזרקת subretinal של העברת גנים בתיווך וקטור למקד תאי קולטי אור או הרשתית 24, 25. בגלל הרכב הטיפוסי (PBS, מלוח) לזריקות הללו הוא באופן משמעותי פחות צמיג מ hyaluronate נתרן, טכניקות סטנדרטיות הם הטרידו יותר הדלפות. הטכניקה המתוארת במסמך, על ידי צמצום סיכון זה, עושה ניסויי העברת וקטור יותר לשחזור ואמין.

מוות של תאי קולטי אור והירידה חזותית הבאה מתרחש כאשר קולטני האור מופרד מאפיתל הפיגמנט ברשתית הבסיסי. הפרדה פיזית של קולטני אור שבמחל רשתית שונות, כוללים ניוון הקשור לגיל (AMD), chorioretinopathy הצפק המרכזי, רטינופתיה סוכרתית ורטינופתיה של פגות, כמו גם rhegmatogenous (הנגרם על ידי כלומר הפסקה ברשתית) היפרדות רשתית ( RD). הזרקת subretinal של hyaluronate נתרן היא מודל מקובל ליצירת RD שמוביל למותם של תאי קולטי אור, המספקים תובנה הפתופיזיולוגיה של ניוון קולטי האור 1-15. יש ניוון קולטי אור הנגרם על ידי הזרקת hyaluronate נתרן subretinal, הוצג לראשונה בשנת 2001 7, היתרון של קורס זמן סביר (ימים עד שבועות). עם זאת, זה יכול להיות שונה משמעותי של אובדן תאי קולטי אור מבעלי החיים להאנימהl בשל שני גורמים עיקריים המשפיעים על מוות של תאי קולטי אור לאחר RD: גובה 1) ומשך זמן של RD, ו -2) את המופע של דימום subretinal. יש עקומה למידה תלולה טכנית לשיטה שתורמת לשני הגורמים. עליות התנוונות תאי קולטי אור בגובה של RD, כמו המרחק בין אפיתל הפיגמנט ברשתית (RPE) שכבה וקולטנית אור מגבירים 16-17. עולה בקנה אחד עם דיווחים אלה, הניסויים הקודמים שלנו הראו יותר מות קולטי אור בRDS bullous מ RDS הרדוד. זה כבר דווח גם כי דימום subretinal הוא רעיל לתאי קולטי אור ומשפיע על תאי קולטי אור המוות 18-21. כמו כן, יש לנו ציינו עוד מות קולטי אור בRDS עם דימום subretinal מ RDS ללא דימום subretinal. לפיכך, טכניקות כדי למזער את השונות צריכים להתמקד בהשגת גבהים של RD עקביים, תוך הימנעות דימום subretinal. השיטה שונה שלנו של בducing RD יכול לעשות בולוס לשחזור וRD המתמשך על אותה העמדה של העין עם התרחשות נדירה של דימום subretinal. ביצענו ניתוח באמצעות גישה זמנית משום שהוא קל יותר להשגת שדה ניתוח רחב יותר בהשוואה לאתרים אחרים. לאחר החתך של הלחמית, חתך scleral עצמי איטום נעשה באמצעות מחט G 30. מנהרת scleral נוצר, ואחרי חדירת scleral לדמה העין. אם דימום כורוידאלית מתרחש בשלב זה, הדימום יהיה לצאת מהעין דרך פצע scleral, והדימום ניתן לעצור על ידי astriction עם חנית כירורגית. לנקב לשכה קדמית מבוצע לאחר מכן מהקרנית כדי להפחית את לחץ התוך עיני. זהו צעד חשוב, כי הזרקת subretinal לבד תוביל ללחץ התוך עיני מוגבר עם חסימת עורק רשתית כתוצאה ואיסכמיה של הרשתית הפנימית. מחט G 33 מחוברת למזרק μl המילטון 10 מוכנסת לאחר מכן לתוך חלל subretinal, ו3.5 μ; Hyaluronate נתרן ליטר מוזרק בעדינות כדי לנתק את רשתית נוירו מהרשתית שבבסיס. בניגוד לשיטות אחרות של RD גרימת המבוצעים תחת השגחה הפונדוס, טכניקה זו מבוצעת תחת השגחה ישירה. מאז פצע scleral הוא אטימה עצמית, hyaluronate נתרן לא ידלוף החוצה לאחר הזרקה. לבסוף, דבק הוא לשים על פצע scleral, והלחמית היא לחבר מחדש למקומו המקורי. אלה נמשכים צעדים גם להפחית את הסיכון של דליפת hyaluronate נתרן. ההזרקה של 3.5 hyaluronate נתרן μl יוצרת RDS לשעתק (50% מהרשתית) בעיניהם של עכברים 8 שבועות בן. יצירת הפצע העצמי איטום היא הצעד החשוב ביותר בהליך שונה שלנו משום שהוא מונע hyaluronate נתרן מוזרק מ דולף החוצה של העין, ובכך מאפשר בולוס לשחזור וRDS המתמשך.

<table border="1">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ketaject</td>
 <td>Phoenix</td>
 <td>2010025</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>AnaSed</td>
 <td>LLOYD</td>
 <td>4004821</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>5% Phenylephrine / 0.5% Tropicamide</td>
 <td>Massachusetts Eye and Ear Pharmacy</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>0.5% Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution</td>
 <td>AKORN</td>
 <td>17478-263-12</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Provics</td>
 <td>Alcon</td>
 <td>8065183085</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Webglue</td>
 <td>Patterson Veterinary</td>
 <td>07-8566128</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Microscope</td>
 <td>Leica</td>
 <td>MG90</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>30G1/2 PrecisionGlide Needle</td>
 <td>BD</td>
 <td>305106</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Weck-Cel Eye Spears</td>
 <td>Beaver-Visitec</td>
 <td>0008685</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>10 Microliter Syringe</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7635-01</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>33 gauge, 0.5 inch needle</td>
 <td>Hamilton</td>
 <td>7803-05</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>18x18mm Cover Glass</td>
 <td>Fisher Scientific</td>
 <td>18-548A</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

retinal detachment model in rodents by subretinal injection of sodium hyaluronate

הזרקת subretinal של hyaluronate נתרן היא שיטה מקובלת של גרימת היפרדות רשתית (RD). עם זאת, הגובה ומשך הזמן של RD או ההתרחשות של דימום subretinal יכולים להשפיע על המוות של תאי קולטי אור ברשתית מנותקת. מכאן, זה יתרון ליצור RDS לשעתק ללא דימום subretinal להערכת מוות של תאי קולטי אור. אנחנו שונה שיטה שדווחה בעבר כדי ליצור בולוס וRDS המתמשך במיקום שחזור עם התרחשות נדירה של דימום subretinal. השלב הקריטי של שיטה זו שונה הוא יצירת חתך scleral עצמית איטום, אשר יכול למנוע דליפה של hyaluronate נתרן לאחר ההזרקה לחלל subretinal. כדי להפוך את החתך העצמי איטום scleral, מנהרת scleral נוצר, ואחרי חדירת scleral לדמה עין עם מחט G 30. למרות דימום כורוידאלית עלול להתרחש במהלך שלב זה, astriction עם חנית כירורגית מפחית את השיעור של מכפלת כורוידאליתorrhage. שיטה זו מאפשרת מודל לשחזור יותר ואמין של מות קולטי אור במחלות שכרוכות RD כגון rhegmatogenous RD, רטינופתיה של פגות, רטינופתיה סוכרתית, chorioretinopathy הצפק המרכזי, וניוון הקשור לגיל (AMD).

כדי להעריך את ההתמדה של RD נעשה על ידי פרוטוקול זה, cryosections נעשה בימים 3, 7, ו14 לאחר הגיוס של RD. שש עיניים שימשו עבור כל נקודת זמן. מכתים Hematoxylin ו eosin (HE) שימש כדי להמחיש את החלקים. כל הסעיפים הראו RD bullous מתקרב לעדשה (איור 2). עין אחת הראתה דימום subretinal ביום 7. אין עיניים הראו כל סימנים של זיהום או פגיעה בעדשה. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1.jpg" alt="איור 1" fo:content-width="4.5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig1highres.jpg" /> איור 1. יצירת חתך scleral איטום עצמי. סכמטי זה מראה תמונת חתך של עין עכבר רגילה. קו אדום מציין את חתך scleral איטום העצמי. מנהרת scleral אחרי חדירת scleral לדמתה עין עם מחט G 30 יוצרת חתך scleral איטום עצמי. פצע scleral זהיהיה עם לחץ התוך עיני, שיכול למנוע דליפה של hyaluronate נתרן לאחר ההזרקה לחלל subretinal ולהשיג היפרדות רשתית bullous מתמשכת חתום עצמי. <img src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2.jpg" alt="איור 2" fo:content-width="5in" fo:src="/files/ftp_upload/50660/50660fig2highres.jpg" /> איור 2. מהלך זמן של היפרדות רשתית. תמונה הפונדוס זה מראה היפרדות רשתית bullous ללא דימום subretinal מייד לאחר ניתוח. Cryosections עם hematoxylin ו eosin ניתוק (HE) מופע מכתים מתמשך bullous רשתית ללא דימום subretinal לפחות עד היום 14.

Watch this Scientific Journal Video about Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate at JoVE.com

Retinal Detachment Model in Rodents by Subretinal Injection of Sodium Hyaluronate

רשתית דגם ניתוק במכרסמים על ידי הזרקת subretinal של נתרן Hyaluronate

יצירת הפרדות רשתית ניסיונית עם גובה לשעתק ומתמשך של ניתוק, וללא דימום subretinal, היא חשובה ללימוד הפתופיזיולוגיה של אובדן תאי קולטי אור ברשתית מחלה והערכה של התערבויות טיפוליות פוטנציאליות. כאן אנו מדווחים שיטה כזו בפירוט.

Subretinal injection of sodium hyaluronate is a widely accepted method of inducing retinal detachment (RD). However, the height and duration of RD or the ...

Research

JoVE Journal

Medicine

Subretinal Injection of Gene Therapy Vectors and Stem Cells in the Perinatal Mouse Eye

הזרקת subretinal של וקטורי ריפוי גנטי ותאי גזע לעיניים המאוסות

The loss of sight affects approximately 3.4 million people in the United States and is expected to increase in the upcoming years.1 Recently, gene therapy ...

Performing Subretinal Injections in Rodents to Deliver Retinal Pigment Epithelium Cells in Suspension

ביצוע subretinal זריקות במכרסמים כדי לספק תאי הרשתית פיגמנט האפיתל בהשעיה

The conversion of light into electrical impulses occurs in the outer retina and is accomplished largely by rod and cone photoreceptors and retinal pigment ...

A Step by Step Protocol for Subretinal Surgery in Rabbits

צעד אחר פרוטוקול שלב לכירורגיה subretinal בארנבונים

Age related macular degeneration (AMD), retinitis pigmentosa, and other RPE related diseases are the most common causes for irreversible loss of vision in ...

Ultrahigh Resolution Mouse Optical Coherence Tomography to Aid Intraocular Injection in Retinal Gene Therapy Research

טומוגרפיה אופטית קוהרנטית העכבר הרזולוציה על קוליים כדי לסייע הזרקה תוך-עיני במחקר ריפוי גנטי ברשתית

HR-SD-OCT is utilized to monitor the progression of photoreceptor degeneration in live mouse models, assess the delivery of therapeutic agents into the ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

Contractility איזומטרי מדידה של עורק מצע המעי העליון העכבר באמצעות חוט Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Studying Left Ventricular Reverse Remodeling by Aortic Debanding in Rodents

לימוד שיפוץ הפוך חדרי שמאלי על ידי ניתוק האבניים במכרסמים

To better understand the left ventricular (LV) reverse remodeling (RR), we describe a rodent model wherein, after aortic banding-induced LV remodeling, ...

Osteoarthritis Pain Model Induced by Intra-Articular Injection of Mono-Iodoacetate in Rats

מודל כאב אוסטאוארתריטיס המושרה על ידי הזרקה תוך-מפרקית של מונו-יודואצטט בחולדות

The current animal models of osteoarthritis (OA) can be divided into spontaneous models and induced models, both of which aim to simulate the ...

Oxygen-Induced Retinopathy Model for Ischemic Retinal Diseases in Rodents

מודל רטינופתיה הנגרמת על ידי חמצן למחלות רשתית איסכמיות במכרסמים

One of the commonly used models for ischemic retinopathies is the oxygen-induced retinopathy (OIR) model. Here we describe detailed protocols for the OIR ...

A Murine Model of Ischemic Retinal Injury Induced by Transient Bilateral Common Carotid Artery Occlusion

דגם מורין של פגיעה איסכמית ברשתית הנגרמת על ידי חסימת עורקים דו-צדדית משותפת חולפת

Diverse vascular diseases such as diabetic retinopathy, occlusion of retinal veins or arteries and ocular ischemic syndrome can lead to retinal ischemia. ...

Retinal Pigment Epithelium Transplantation in a Non-human Primate Model for Degenerative Retinal Diseases

השתלת אפיתל פיגמנט רשתית במודל פרימטים לא אנושי למחלות רשתית ניוונית

Retinal pigment epithelial (RPE) transplantation holds great promise for the treatment of inherited and acquired retinal degenerative diseases. These ...