Name: yeast luminometric and xenopus oocyte electrophysiological examinations of the molecular mechanosensitivity of trpv4
Uploaded: 2013-12-31T13:15:00
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हम उत्कृष्ट तकनीकी सहायता के लिए एंड्रिया Kremsreiter धन्यवाद देना चाहूंगा. मैडिसन - हमारी प्रयोगशाला में काम एनआईएच GM096088 और विस्कॉन्सिन विश्वविद्यालय के विलास ट्रस्ट द्वारा समर्थित है.

1. खमीर Luminometry तरीके Saccharomyces cerevisiae के तनाव BYYT का प्रयोग करें. यह BY4741 (माता, ura3D0, his3D1, leu2D0, lys2D0, yvc1 :: HIS3, tok1 :: kanMX4) की एक yvc1-tok1 व्युत्पन्न है. Batiza एट अल. 26 और Loukin एट अल. 24 में वर्णित के रूप में, लियू चय?...

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	<li>Ramsey, I. S., Delling, M., Clapham, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+introduction+to+TRP+channels.">An introduction to TRP channels.</a> Annu. Rev. Physiol. 68, 619-647 (2006).</li><li>Nilius, B., Owsianik, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+transient+receptor+potential+family+of+ion+channels.">The transient receptor potential family of ion channels.</a> Genome Biol. 12, 218 (2011).</li><li>Everaerts, W., Nilius, B., Owsianik, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vallinoid+transient+receptor+potential+channel+Trpv4:+From+structure+to+disease.">The vallinoid transient receptor potential channel Trpv4: From structure to disease.</a> Prog. Biophys. Mol. 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परिचय में कहा गया है, आमतौर पर TRPV4 कार्यों का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया तरीकों कभी कभी विसंगतियों और विवादों में हुई. यहाँ वर्णित विधियों में से दो सेट कुछ लाभ प्रदान करते हैं और मौजूदा तरीकों पूर?...

टीआरपी (क्षणिक रिसेप्टर क्षमता) का संवेदी कार्यों 1,2 कि सेवा कटियन चैनलों के सात subfamilies शामिल. स्तनधारियों, TRPV में, टीआरपी की vanilloid उपपरिवार, छह किस्मों की है. TRPV4 (प्रकार 4) गर्मी के लिए 3,4 जवाब है, कुछ रसायनों, आसमाटिक सूजन, या कतरनी तनाव. TRPV4 जीन बार बार उम्मीदवार जीन और / या 5-8 क्लोनिंग अभिव्यक्ति से अलग किया गया था. बाद विधि हाइपो-परासारिता लिए जीन उत्पाद की प्रतिक्रिया का पीछा किया. TRPV4 कई भिन्न प्रकार की कोशिकाओं 3,4 के विकास, फिजियोलॉजी, या विकृति में लगभग सभी अंगों और कार्यों में व्यक्त किया है. हड़ताली परिधीय न्यूरोपैथी और / या कंकाल dysplasias (कंकाल विकास में असामान्यताएं) 9-11, जिससे&gt; 50 मानव autosomal प्रमुख TRPV4 म्यूटेशनों हैं. कंकाल dysplasias लेकर कर हल्के brachyomia प्रकार 3 (टाइप -3 बौनापन), spondylometaphyseal dysplasia Kozlowski प्रकार, seve करने सेdysplasias फिर से, कुछ नवजात या भ्रूण मृत्यु के कारण. तंत्र के सभी शिष्टाचार संभव प्रतीत हालांकि, कोई भी विविधता, जटिलता, परिवर्तनशीलता, और इन रोगों 4 के कभार overlaps बताते हैं. अन्य टीआरपी चैनलों 1 की तरह, TRPV4 एक tetramer है. चूहे या मानव TRPV4 में, प्रत्येक सबयूनिट 871 अवशेषों के शामिल है. इसका केंद्रीय तत्व छह transmembrane संभावना वोल्टेज gated कश्मीर + चैनलों के समान तरीके में व्यवस्थित कर रहे हैं जो एक हेलिक्स (S1-S6), है. वहाँ, S4 को S1 एक परिधीय डोमेन फार्म और S5 और S6 पारगमन ताकना डोमेन के रूप में. S5 और TRPV4 की S6 के बीच संभवतः कटियन फ़िल्टर बनाने के लिए एकाग्र जिनमें से चार अनुक्रम LDLFKLTIGMGDL इसके बाद एक छोटी ताकना हेलिक्स है. 470 अवशेषों एन टर्मिनल cytoplasmic खंड प्रोटीन या छोटे ligands बाध्य करने के लिए जाना जाता है 6 ankyrin दोहराता है, शामिल हैं. सी टर्मिनल 152 अवशेषों cytoplasmic खंड ओ.टी. कि बाँध अन्य संभावित स्थलों के बीच एक calmodulin बाध्यकारी अनुक्रम शामिलउसके तत्वों 3. TRPV4 अनिवार्य रूप से anions 1 शामिल नहीं है कि एक कटियन चैनल है. अपनी शारीरिक समारोह सीए 2 + बाढ़ उत्तेजनाओं transduce के लिए है, यह एक पी सीए द्विसंयोजक पक्ष भी एक Eisenman चतुर्थ पारगम्यता अनुक्रम के साथ अन्य फैटायनों के लिए पारगम्य है: पी ना ~ 7 12. एकल चैनल प्रवाहकत्त्व ~ 90 ps जावक और ~ 40 ps आवक 6,13,14 पर rectifies. Heterologously व्यक्त (नीचे) वर्तमान हाइपो आसमाटिक सूजन, कतरनी तनाव, या गर्मी में 15 से सक्रिय किया जा सकता है. यह भी पॉलीअनसेचुरेटेड फैटी एसिड 16,17 और सिंथेटिक phorbal एस्टर 18 4αPDD से सक्रिय है. वर्तमान में, दोनों उच्च throughput, छोटे आणविक स्क्रीन द्वारा की खोज की, 10 -9 -8 से 10 एम 20 में प्रभावी, सबसे शक्तिशाली एगोनिस्ट GSK1016790A 19 है और प्रतिपक्षी GSK2193874 है. TRPV4 अनुसंधान के दो प्रमुख क्षेत्रों भ्रमित रहते हैं: (1) TRPV4 काफी हद तक इसके mechanosensitivity के लिए अध्ययन कर रहा है के रूप में भी, अपनी आणविक आधार विवादास्पद है. एक मॉडल, hypo-परासारिता किसी भी तरह एक epoxygenase द्वारा एसिड (EET) epoxyeicosatrienoic में बदल जाती है जो पॉलीअनसेचुरेटेड फैटी एसिड (PUFA) arachidonic एसिड (एए), निर्माण करने के लिए phospholipase A2 (PLA2) सक्रिय हो जाता है, और EET के बंधन TRPV4 16 सक्रिय है वर्णन करता है 17. फिर भी, TRPV4 ही सीधे एक सरल व्याख्या उपलब्ध कराने, झिल्ली खिंचाव 14 (नीचे) के लिए प्रतिक्रिया करने के लिए दिखाया गया है. (2) TRPV4 उत्परिवर्ती विकृतियों bewildering रहे हैं. फाउंडेशन, एक रोगों के झड़ने, कमी, या चैनल गतिविधियों की वृद्धि की वजह से कर रहे हैं कि क्या पता की जरूरत है. यहां भी, साहित्य स्पष्ट से दूर है. कई कंकाल-dysplasia alleles उच्च गतिविधियों की सूचना मिली है, जबकि (लाभ के समारोह, GOF) 4,21, कई गतिविधियों (नुकसान के समारोह, LOF) 10,22 कम कर दिया है की सूचना मिली. 14 alleles की एक व्यवस्थित अध्ययन करने के लिए उन्हें मिल गयासभी GOF जा म्यूटेशन (नीचे) 23. TRPV4 समारोह का एक पूरा नुकसान के बावजूद केवल मामूली दोष के साथ व्यवहार्य या उपजाऊ हैं जो पीटकर माउस,,, - कुछ LOFs दावा है कि TRPV4-/ के phenotype खंडन करने के लिए लगता है. इन विवादों का एक हिस्सा पद्धति मूल है. प्रयोगशालाओं विभिन्न तरीकों, या एक विधि के संस्करण का उपयोग करें, और अलग पहचानने मानकों को रोजगार. सबसे अधिक, TRPV4 transiently (HEK, चो, हेला) और एगोनिस्ट या hypotonic उत्तेजना पर आंतरिक [2 Ca +] की वृद्धि सीए 2 + संवेदनशील फ्लोरोसेंट रंजक, Fura-2 के साथ पंजीकृत है सुसंस्कृत स्तनधारी कोशिकाओं में व्यक्त किया है. इस fluorometric परख पर अधिक निर्भरता 1 आलोचना की गई है. विभिन्न आबादी में अभिव्यक्ति के स्तर, उसमें वितरण, साथ ही प्रभावी डाई एकाग्रता, नियंत्रित और दस्तावेज की जरूरत है. अधिक विश्वसनीय प्रत्यक्ष electrophysiological परीक्षाओं है. यहां तक ​​कि इस के रूप में commonlY अभ्यास, समस्याओं के बिना भी नहीं है. व्यक्तिगत संवर्धित कोशिकाओं में अभिव्यक्ति के स्तर को नियंत्रित करने के लिए मुश्किल हैं, क्योंकि पूरे सेल धाराओं बड़े बदलाव है. धाराओं छोटे हैं, क्योंकि इसके अलावा, विश्वसनीय आंकड़े अक्सर व्यावहारिक नहीं बड़े नमूना आकार, पर भरोसा करना होगा. पैच दबाना परीक्षाओं शायद ही कभी प्रदर्शन किया गया है. कुछ ऐसे रिकॉर्डिंग 16,17 सांख्यिकीय मूल्यांकन चुनौतीपूर्ण बनाने कि गतिविधि फटने के समूहों को दिखाने के. बेहतर आणविक mechanosensitivity समझते हैं, हम TRPV4 की जांच के लिए दो अतिरिक्त सिस्टम विकसित किया है. (1) दूर अपने सामान्य स्तनधारी भागीदारों से TRPV4 को अलग करने के लिए, हम खमीर 24 नवोदित में चूहे TRPV4 व्यक्त की है. इस evolutionarily दूर संदर्भ में TRPV4 के कार्यात्मक अभिव्यक्ति यह अभी भी अपने सामान्य भागीदारों बिना आसमाटिक बल का जवाब सकता था. खमीर ऐसे ए.ए. या EET रूप में कोई PUFAs बनाता है, और इसके जीनोम, इस expre कोई PLA2 या epoxygenase जीन है क्योंकिssion भी TRPV4 बल भावना के लिए के लिए वे आवश्यक नहीं कर रहे हैं कि पता चलता है. आणविक जीव विज्ञान के अनुसार सबसे अधिक उत्तरदायी eukaryotes में TRPV4 होने का भी कुशल आगे या रिवर्स आनुवंशिक जोड़तोड़ 25 की अनुमति देता है. (2) TRPV4 की गहराई biophysical विश्लेषण के लिए, हम Xenopus oocytes में TRPV4 व्यक्त किया. ना (10 -10 10 -9 ए) धाराओं के उप ना निकलेगा जो सभ्य कोशिकाओं के विपरीत, एक oocyte μA के (10 -6 -4 10 ए) में धाराओं को व्यक्त करता है. शोर पर बहुत बड़ा संकेत बेहतर मात्रा का ठहराव और अधिक विश्वास तुलना की अनुमति देता है. TRPV4, इसलिए व्यक्त की, यह भी एक पैच दबाना का उपयोग व्यक्तिगत अणुओं के रूप में जांच की जा सकती. एक एकल oocyte फिर मात्रा का ठहराव अधिक विश्वसनीय बनाने, दोहराया पैच नमूने की अनुमति देता है. इस तरह के अध्ययन TRPV4 चैनल ही सीधे झिल्ली खिंचाव बल 14 से सक्रिय किया जा सकता है कि दिखाया. विश्लेषण भी 14 प्रतिनिधि कंकाल-dysplasia alleles के सभी लाभ के समारोह म्यूटेशनों हैं कि पता चला है. इसके अलावा, degrइस विधान सीए 2 + रिसाव की ई कंकाल रोगों 23 की गंभीरता समानताएं. क्योंकि उनके नवीनता और उपयोगिता की, इन दोनों तरीकों की विस्तृत प्रक्रियाओं TRPV4 या इसी तरह के चैनलों पर भविष्य के अनुसंधान में अनुकरण अनुमति देने के लिए यहां इकट्ठा कर रहे हैं.

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	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Vapor Pressure Osmometer</td>
			<td style="width:93px;">Wescor</td>
			<td style="width:119px;">Wescor 5500</td>
			<td style="width:167px;">Logan, UT, USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Sirius Single Tube Luminometer </td>
			<td style="width:93px;">Titertek-Berhold</td>
			<td style="width:119px;">Sirius </td>
			<td>Huntsville, LA, USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microplate luminometer</td>
			<td style="width:93px;">Titertek-Berthold </td>
			<td style="width:119px;">Mithras LB940</td>
			<td>Huntsville, LA, USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Luminometry software</td>
			<td style="width:93px;">Titertek-Berthold</td>
			<td style="width:119px;">MikroWin2000</td>
			<td>Huntsville, LA, USA</td>
		</tr>
		<tr height="210">
			<td height="210" style="height:210px;width:216px;">Patch clamp and software</td>
			<td style="width:93px;">Axon Instrument</td>
			<td style="width:119px;">HS2A headstage, VG-2Ax100 virtual grounded bath clamp, GeneClamp 500 amplifier, digidata 1440 digitizer, pClamp10 software </td>
			<td>Union City, CA, USA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">manometer</td>
			<td style="width:93px;">Bio-Tec</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>Winooski, VT, USA</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Pipet puller</td>
			<td style="width:93px;">Sutter Instrument Co</td>
			<td style="width:119px;">Model P-97</td>
			<td>Novata, CA, USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microinjector</td>
			<td style="width:93px;">Drummond Scientific</td>
			<td style="width:119px;">Nanoinject II</td>
			<td>Broomall, PA, USA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Material:</td>
			<td style="width:93px;"> </td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">luciferin coelenterazine</td>
			<td style="width:93px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>Carlsbad, CA, USA</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">T7 RNA polymerase reaction</td>
			<td style="width:93px;">Ambion</td>
			<td style="width:119px;">mMessage mMachine</td>
			<td>Austin, TX, USA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">gentamicin</td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ruthenium red </td>
			<td style="width:93px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">micropipets </td>
			<td style="width:93px;">Drummond</td>
			<td style="width:119px;">100 microliter micropipets</td>
			<td>Broomall, PA, USA</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">high-fidelity PfuUtra polymerase </td>
			<td style="width:93px;">Stratagene</td>
			<td style="width:119px;"> </td>
			<td>La Jolla, CA, USA</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

yeast luminometric and xenopus oocyte electrophysiological examinations of the molecular mechanosensitivity of trpv4

TRPV4 (क्षणिक रिसेप्टर क्षमता, vanilloid परिवार, प्रकार 4) व्यापक रूप से कशेरुकी ऊतकों में व्यक्त किया जाता है और यांत्रिक बलों द्वारा सहित कई उत्तेजनाओं, द्वारा सक्रिय है. कुछ TRPV4 उत्परिवर्तन मानव में जटिल वंशानुगत हड्डी या neuronal विकृतियों का कारण. जंगली प्रकार या उत्परिवर्ती TRPV4 transgenes सामान्यतः सुसंस्कृत स्तनधारी कोशिकाओं में व्यक्त की और Fura-2 fluorometry द्वारा और इलेक्ट्रोड से जांच कर रहे हैं. Mechanosensitivity और रोगों की आणविक अड्डों के तंत्र के संदर्भ में, वर्तमान साहित्य भ्रामक और विवादास्पद है. मौजूदा तरीकों के पूरक हैं, हम TRPV4 की आणविक संपत्तियों की जांच के लिए दो अतिरिक्त विधियों का वर्णन. (1) चूहा TRPV4 और एक aequorin transgene नवोदित खमीर में तब्दील कर रहे हैं. Transformant आबादी का एक hypo-osmtic झटका TRPV4 चैनल के माध्यम से जारी होने के कारण सीए 2 + साथ aequorin के संयोजन के लिए एक luminometric संकेत पैदावार. यहाँ TRPV4 अपने सामान्य स्तनधारी साथी प्रोटीन से अलग हैऔर अपनी ही mechanosensitivity का पता चलता है. (2) TRPV4 की क्रेना Xenopus oocytes में इंजेक्ट किया जाता है. ऊष्मायन के लिए एक उपयुक्त अवधि के बाद, macroscopic TRPV4 वर्तमान में एक दो इलेक्ट्रोड वोल्टेज क्लैंप के साथ जांच की है. oocyte स्नान से निष्क्रिय osmoticum के हटाने पर मौजूदा वृद्धि mechanosensitivity का संकेत है. oocytes से microAmpere (10 -6 ए -4 10) धाराओं साफ quantifications और अधिक आत्मविश्वास आकलन उपज संवर्धित कोशिकाओं से nanoAmpere subnano से (10 -10 ए -9 से 10 तक) की धाराओं से ज्यादा बड़े होते हैं. व्यक्तिगत चैनल प्रोटीन की गतिविधियों को दर्शाती सूक्ष्म धाराओं भी सीधे पर सेल या excised मोड में, एक पैच दबाना के तहत पंजीकृत किया जा सकता है. एक ही oocyte बेहतर डेटा प्रतिकृति की अनुमति, कई पैच नमूने प्रदान करता है. पैच को लागू suctions सीधे mechanosensitivity का आकलन करने के लिए TRPV4 सक्रिय कर सकते हैं. इन तरीकों में भी टीआरपी चैनलों के अन्य प्रकार के अध्ययन में उपयोगी होना चाहिए.

एक ठेठ luminometry प्रयोग में, 400-1,200 mOsm नीचे hypotonic झटके से एक सीमा 1,400 mOsm में संस्कृति के 20 μl के लिए अलग कम परासारिता के सदमे समाधान के 200 μl जोड़कर हासिल की है. खमीर कोशिकाओं खाली p416GPDV4 प्लाज्मिड या आयन फिल्टर में एक उत्परि?...

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Yeast Luminometric and Xenopus Oocyte Electrophysiological Examinations of the Molecular Mechanosensitivity of TRPV4

TRPV4 का अध्ययन करने के लिए आमतौर पर इस्तेमाल किया तरीकों के पूरक हैं, दो तरीकों से वर्णित हैं: अपने mechanosensitivity हाइपो आसमाटिक चुनौती पर ट्रांसजेनिक खमीर में सीए 2 + aequorin luminometry द्वारा अध्ययन किया जा सकता है. यह भी TRPV4 शाही सेना में जांच की जा सकती है पर सेल या excised मोड में दबाना पूरे सेल दो इलेक्ट्रोड वोल्टेज दबाना या पैच द्वारा Xenopus oocytes इंजेक्शन.

खमीर Luminometric और<em&gt; Xenopus</emTRPV4 की आण्विक Mechanosensitivity के&gt; Oocyte Electrophysiological परीक्षा

TRPV4 (Transient Receptor Potentials, vanilloid family, type 4) is widely expressed in vertebrate tissues and is activated by several stimuli, including ...

Research

JoVE Journal

Biology

Yeast Luminometric and Xenopus Oocyte Electrophysiological Examinations of the Molecular Mechanosensitivity of TRPV4

A Rapid Technique for the Visualization of Live Immobilized Yeast Cells

लाइव immobilized खमीर कक्ष के विज़ुअलाइज़ेशन के लिए एक रैपिड तकनीक

We present here a simple, rapid, and extremely flexible technique for the immobilization and visualization of growing yeast cells by epifluorescence ...

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Xenopus oocytes में व्यक्त आयन चैनल के पैच दबाना रिकॉर्डिंग

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing RNA Localization in Xenopus Oocytes

Visualizing शाही सेना स्थानीयकरण में Xenopus Oocytes

RNA localization is a conserved mechanism of establishing cell polarity.  Vg1 mRNA localizes to the vegetal pole of Xenopus laevis oocytes and acts to ...

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

A Fluorescence Microscopy Assay for Monitoring Mitophagy in the Yeast Saccharomyces cerevisiae

खमीर में एक निगरानी Mitophagy के लिए प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी परख Saccharomyces cerevisiae

Autophagy is important for turnover of cellular components under a range of different conditions. It serves an essential homeostatic function as well as a ...

Mouse Oocyte Microinjection, Maturation and Ploidy Assessment

माउस Oocyte Microinjection परिपक्वता, और Ploidy आकलन

Mistakes in chromosome segregation lead to aneuploid cells.  In somatic cells, aneuploidy is associated with cancer but in gametes, aneuploidy leads to ...

Competitive Genomic Screens of Barcoded Yeast Libraries

Barcoded खमीर पुस्तकालय के प्रतियोगी जीनोमिक स्क्रीन

By virtue of advances in next generation sequencing technologies, we have access to new genome sequences almost daily.  The tempo of these advances is ...

Chromatographic Purification of Highly Active Yeast Ribosomes

अति सक्रिय खमीर Ribosomes के chromatographic शोधन

Eukaryotic ribosomes are much more labile as compared to their eubacterial and archael counterparts, thus posing a significant challenge to researchers.  ...

The Green Monster Process for the Generation of Yeast Strains Carrying Multiple Gene Deletions

खमीर एकाधिक जीन विलोपन ले उपभेदों की पीढ़ी के लिए ग्रीन दानव प्रक्रिया

Phenotypes  for a gene deletion are often revealed only when the mutation is tested in a  particular genetic background or environmental condition1,2. ...

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

The Xenopus Oocyte Cut-open Vaseline Gap Voltage-clamp Technique With Fluorometry

<em&gt; Xenopus</emFluorometry साथ&gt; Oocyte कट खुला वैसलीन गैप वोल्टेज दबाना तकनीक

The cut-open oocyte Vaseline gap (COVG) voltage clamp technique allows for analysis of electrophysiological and kinetic properties of heterologous ion ...

Surface Spreading and Immunostaining of Yeast Chromosomes

भूतल फैल रहा है और खमीर गुणसूत्रों के immunostaining

The small size of nuclei of the budding yeast Saccharomyces cerevisiae limits the utility of light microscopy for analysis of the subnuclear distribution ...