Name: assessment of calcium sparks in intact skeletal muscle fibers
Uploaded: 2014-02-24T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers at JoVE.com

Detta arbete stöddes av RO1-AG028614 till JM, RO1-AR063084to NLW, och RO1-AR057404 till JZ.

1. Ställa in Osmotisk-stress Perfusion System Figur 1 är en schematisk protokoll av kalcium gnistor bedömning i intakta skelettmuskelfibrerna. <ol><li> Sätt upp en tre-axeln (xyz) mikromanipulator kapabel att placera utloppsspets perfusionssystemet innehåller minst två kanaler. Detta kan göras med engångs Luer-sprutbehållare med bifogad tre - sätt Luer - Lok kranen för att slå på och / eller stänga av flödet av infusionsvätskor. Dessa infu...

<ol>
	<li>Stutzmann, G. E., Mattson, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endoplasmic+reticulum+Ca2++handling+in+excitable+cells+in+health+and+disease.">Endoplasmic reticulum Ca2+ handling in excitable cells in health and disease.</a> Pharmacol. Rev. 63 (3), 700-727 (2011).</li><li>Cheng, H., Lederer, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+sparks.">Calcium sparks.</a> Physiol. Rev. 88 (4), 1491-1545 (2008).</li><li>Brochet, D. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elementary+calcium+release+events+from+the+sarcoplasmic+reticulum+in+the+heart.">Elementary calcium release events from the sarcoplasmic reticulum in the heart.</a> Adv. Exp. Med. Biol. 740, 499-509 (2012).</li><li>Brochet, D. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quarky+calcium+release+in+the+heart.">Quarky calcium release in the heart.</a> Circ. Res. 108 (2), 210-218 (2011).</li><li>Guatimosim, S., Guatimosim, C., Song, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+calcium+sparks+in+cardiac+myocytes.">Imaging calcium sparks in cardiac myocytes.</a> Methods Mol. Biol. 689, 205-214 (2011).</li><li>Dulhunty, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Excitation-contraction+coupling+from+the+1950s+into+the+new+millennium.">Excitation-contraction coupling from the 1950s into the new millennium.</a> Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 33 (9), 763-772 (2006).</li><li>Dulhunty, A. F., Casarotto, M. G., Beard, N. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+ryanodine+receptor:+a+pivotal+Ca2++regulatory+protein+and+potential+therapeutic+drug+target.">The ryanodine receptor: a pivotal Ca2+ regulatory protein and potential therapeutic drug target.</a> Curr. Drug Targets. 12 (5), 709-723 (2011).</li><li>Kirsch, W. G., Uttenweiler, D., Fink, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Spark-+and+ember-like+elementary+Ca2++release+events+in+skinned+fibres+of+adult+mammalian+skeletal+muscle.">Spark- and ember-like elementary Ca2+ release events in skinned fibres of adult mammalian skeletal muscle.</a> J. Physiol. 537, 379-389 (2001).</li><li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+probable+role+of+dihydropyridine+receptors+in+repression+of+Ca2++sparks+demonstrated+in+cultured+mammalian+muscle.">A probable role of dihydropyridine receptors in repression of Ca2+ sparks demonstrated in cultured mammalian muscle.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 290 (2), 539-553 (2006).</li><li>Zhou, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++sparks+and+embers+of+mammalian+muscle.">Ca2+ sparks and embers of mammalian muscle.</a> Properties of the sources. J. Gen. Physiol. 122 (1), 95-114 (2003).</li><li>Wang, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Uncontrolled+calcium+sparks+act+as+a+dystrophic+signal+for+mammalian+skeletal+muscle.">Uncontrolled calcium sparks act as a dystrophic signal for mammalian skeletal muscle.</a> Nat. Cell. Biol. 7 (5), 525-530 (2005).</li><li>Teichmann, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inhibitory+control+over+Ca2++sparks+via+mechanosensitive+channels+is+disrupted+in+dystrophin+deficient+muscle+but+restored+by+mini-dystrophin+expression.">Inhibitory control over Ca2+ sparks via mechanosensitive channels is disrupted in dystrophin deficient muscle but restored by mini-dystrophin expression.</a> PLoS One. 3 (11), e3644 (2008).</li><li>Shkryl, V. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reciprocal+amplification+of+ROS+and+Ca2++signals+in+stressed+mdx+dystrophic+skeletal+muscle+fibers.">Reciprocal amplification of ROS and Ca2+ signals in stressed mdx dystrophic skeletal muscle fibers.</a> Pflugers. Arch. 458 (5), 915-928 (2009).</li><li>Lovering, R. M., Michaelson, L., Ward, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Malformed+mdx+myofibers+have+normal+cytoskeletal+architecture+yet+altered+EC+coupling+and+stress-induced+Ca2++signaling.">Malformed mdx myofibers have normal cytoskeletal architecture yet altered EC coupling and stress-induced Ca2+ signaling.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 297 (3), 571-580 (2009).</li><li>Weisleder, N., Ma, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ca2++sparks+as+a+plastic+signal+for+skeletal+muscle+health,+aging,+and+dystrophy.">Ca2+ sparks as a plastic signal for skeletal muscle health, aging, and dystrophy.</a> Acta. 27 (7), 791-798 (2006).</li><li>Weisleder, N., Zhou, J., Ma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+of+calcium+sparks+in+intact+and+permeabilized+skeletal+muscle+fibers.">Detection of calcium sparks in intact and permeabilized skeletal muscle fibers.</a> Methods Mol. Biol. 798, 395-410 (2012).</li><li>Picht, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=SparkMaster:+automated+calcium+spark+analysis+with+ImageJ.">SparkMaster: automated calcium spark analysis with ImageJ.</a> Am. J. Physiol. Cell. Physiol. 293 (3), 1073-1081 (2007).</li><li>Weisleder, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Muscle+aging+is+associated+with+compromised+Ca2++spark+signaling+and+segregated+intracellular+Ca2++release.">Muscle aging is associated with compromised Ca2+ spark signaling and segregated intracellular Ca2+ release.</a> J. Cell. Biol. 174 (5), 639-645 (2006).</li><li>Weisleder, N., Ma, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Altered+Ca2++sparks+in+aging+skeletal+and+cardiac+muscle.">Altered Ca2+ sparks in aging skeletal and cardiac muscle.</a> Ageing Res. Rev. 7 (3), 177-188 (2008).</li><li>Yi, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mitochondrial+calcium+uptake+regulates+rapid+calcium+transients+in+skeletal+muscle+during+excitation-contraction+(E-C)+coupling.">Mitochondrial calcium uptake regulates rapid calcium transients in skeletal muscle during excitation-contraction (E-C) coupling.</a> J. Biol. Chem. 286 (37), 32436-32443 (2011).</li><li>Tjondrokoesoemo, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Type+1+inositol+(1,4,5)-trisphosphate+receptor+activates+ryanodine+receptor+1+to+mediate+calcium+spark+signaling+in+adult+Mammalian+skeletal+muscle.">Type 1 inositol (1,4,5)-trisphosphate receptor activates ryanodine receptor 1 to mediate calcium spark signaling in adult Mammalian skeletal muscle.</a> J. Biol. Chem. 288, 2103-2109 (2013).</li><li>Martins, A. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reactive+oxygen+species+contribute+to+Ca2++signals+produced+by+osmotic+stress+in+mouse+skeletal+muscle+fibres.">Reactive oxygen species contribute to Ca2+ signals produced by osmotic stress in mouse skeletal muscle fibres.</a> J. Physiol. 586 (1), 197-210 (2008).</li><li>Apostol, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Local+calcium+signals+induced+by+hyper-osmotic+stress+in+mammalian+skeletal+muscle+cells.">Local calcium signals induced by hyper-osmotic stress in mammalian skeletal muscle cells.</a> J. Muscle Res. Cell Motil. 30 (3-4), 97-109 (2009).</li><li>Jiang, Y. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nicotinic+acid+adenine+dinucleotide+phosphate+(NAADP)+Activates+Global+and+Heterogeneous+Local+Ca2++Signals+from+NAADP-+and+Ryanodine+Receptor-gated+Ca2++Stores+in+Pulmonary+Arterial+myocytes.">Nicotinic acid adenine dinucleotide phosphate (NAADP) Activates Global and Heterogeneous Local Ca2+ Signals from NAADP- and Ryanodine Receptor-gated Ca2+ Stores in Pulmonary Arterial myocytes.</a> J. Biol. Chem. 288 (15), 10381-10394 (2013).</li></ol>

Denna metod för att bedöma Ca 2 +-gnistor i intakt skelettmuskel är ett användbart verktyg för muskelfysiologi och forsknings sjukdom. Vi visade att Ca 2 + gnista responsen ändras under olika förhållanden, inklusive muskeldystrofi 11, åldrande 18, 19, såväl som i ALS 20. Vår senaste undersökning visade också funktionell koppling mellan IP 3-receptorn och RyR representerar en kritisk komponent som bidrar till Ca 2 +-gnistor</s...

Intracellulär fri Ca 2 + ([Ca2 +] i) är en mångsidig och viktig sekundär budbärare som reglerar flera cellulära funktioner i retbara celler såsom neuroner, hjärt-, skelett-och glatt muskulatur (för översikt se Stutzmann och Mattson 1). Reglerad Ca 2 + mobilisering och överhörning mellan sarko retiklet (SR) och T-tubuli (TT) membran är grundläggande regulatorer av muskelfysiologi. Dessutom förändringar i Ca2 +-signalering hade visat sig vara en underliggande mekanism av kontraktil dysfunktion i olika muskelsjukdomar. Ca2 +-gnistor är lokaliserade elementära Ca 2 + frisättning händelser härrör från öppningen av ryanodinreceptorn (RyR) kanal på sarko retiklet (SR) membran 2. I hjärtmuskeln, gnistor uppstår spontant genom öppnandet av RyR2 kanalen med en Ca2 +-inducerad Ca2 + release (CICR) mekanism 3-5. I skelettmuskulatur, är RyR1 noga kontrolleras av spänningssensorn vid TT membran 6,7. Således Ca 2 +-gnistor undertrycks och sällan upptäcks i vilande förhållanden i intakta skelettmuskelfibrerna. Tills nyligen, till sarcolemmal membranet behövde störas av olika kemiska eller mekaniska &quot;flås&quot; metoder för att koppla loss undertryckandet av spänningssensorn på RyR1 och tillåtet för Ca2 + gnista händelser som ska detekteras i skelettmuskel 8,9. En metod som tidigare beskrivits krävs permeabilization av membranet av muskelfibrer genom saponin tvättmedel 10. År 2003 upptäckte vi att antingen övergående hypoosmotisk stress eller hyperosmotisk stress kan inducera perifer Ca2 + gnistor intill sarcolemmal membranet i intakta muskelfibrer 11. Denna metod har sedan modifierats för att studera den molekylära mekanismen, och modulering av Ca 2 + </sup&gt; utsläpp och dynamik 12-16. Här redogör vi detaljerna i vår experimentella metod för induktion, detektion och analys av Ca 2 +-gnistor i intakt skelettmuskulatur. Vi presenterar också våra specialbyggda spark analys program som kan användas för att kvantifiera de elementära egenskaper hos enskilda Ca2 +-gnistor i skelettmuskulaturen, t ex tänd frekvens och amplitud (Δ f/f0, vilket speglar den öppna sannolikheten för Ryr-kanaler och Ca 2 + belastning inne i SR), tid till maximal (stigtid) och varaktighet (FDHM, full varaktighet vid halv-maximal amplitud) av gnistor, samt den rumsliga fördelningen av Ca 2 +-gnistor. Dessutom presenterar vi bevis som länkar förändrad Ca2 +-gnistor till de olika patofysiologiska tillstånd i skelettmuskulaturen, såsom muskeldystrofi och amyotrofisk lateralskleros. Fördelen med denna teknik innefattar förmågan att mäta Ca 2 + i relativt fria från skadoråldrade celler, istället för strippmuskelfibrerna, vilket gör inspelning av Ca 2 + gnistor i förhållanden närmare fysiologiska. Dessutom ger vårt specialutformat program mer exakta beräkningar av egenskaperna hos den gnista i förhållande till muskelfibrerna.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="790">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;">Dissecting microscope</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:367px;">Dissect out fibers and check muscle integrity</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:195px;">Dissection tools -scissors, and fine tip forceps</td>
			<td style="width:111px;">Fine Science Tools</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:195px;">Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit</td>
			<td>DOW CORNING</td>
			<td style="width:119px;">184 SIL ELAST KIT</td>
			<td style="width:367px;">&#160;Make ahead of time for fiber dissection. Mix 5 ml liquid Sylgard components and pour into a 60-mm glass Petri dish and waiting 48 hr to let the Sylgard compound become clear, colorless solid substrate.&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">60-mm glass petri dish&#160;</td>
			<td style="width:111px;">Pyrex</td>
			<td style="width:119px;">3160</td>
			<td>Fiber dissection</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Isotonic Tyrode Solution&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Minimal Ca2+ Tyrode Solution</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Hypotonic Tyrode Solution&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;">collagenase type I&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>C-5138</td>
			<td>Fiber digestion&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">Fluo-4 AM&#160;</td>
			<td style="width:111px;">Invitrogen</td>
			<td>F14201</td>
			<td>Fluorescent Ca2+ imaging dyes&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">TMRE</td>
			<td style="width:111px;">Invitrogen</td>
			<td>T669</td>
			<td>mitochondrial membrane potential fluorescent dyes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Delta TPG dishes&#160;</td>
			<td>Bioptechs</td>
			<td style="width:119px;">0420041500C</td>
			<td>35 mm glass bottom dish for imaging</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:195px;">Spark Fit software</td>
			<td style="width:111px;"></td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>data analysis software</td>
		</tr>
		<tr height="84">
			<td height="84" style="height:84px;width:195px;">Radiance 2100 laser scanning confocal microscope or equivalent microscope</td>
			<td style="width:111px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:195px;">3 axis micromanipulator</td>
			<td style="width:111px;">Narishige International</td>
			<td style="width:119px;">MHW-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:195px;">temperature controllable orbital shaker</td>
			<td style="width:111px;">New Brunswick scientific</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>Fiber dissociation</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assessment of calcium sparks in intact skeletal muscle fibers

Att upprätthålla homeostatiska Ca2 +-signalering är en grundläggande fysiologisk process i levande celler. Ca 2 +-gnistorna är de elementära enheter av Ca2 +-signalering i tvärstrimmiga muskelfibrer som visas som mycket lokal Ca 2 + frisättning händelser medierade av ryanodinreceptorn (RyR) Ca2 + släppa kanaler på sarko retikulum (ER)-membranet. Korrekt bedömning av muskel Ca2 +-gnistor skulle kunna ge information om de intracellulära Ca2 + hanteringsegenskaper för friska och sjuka tvärstrimmiga musklerna. Trots att Ca2 + gnistor händelser är vanliga i vila cardiomyocytes, de är sällan hos vilande skelett muskelfibrer, och därför finns det ett behov av metoder för att generera och analysera gnistor i skelettmuskelfibrerna. Detaljerad här är ett experimentellt protokoll för mätning av Ca 2 +-gnistor i isolerade flexor digitorm brevis (FDB) muskelfibrer använder fluorescent Ca2 +-indikatorer och laserskanning konfokalmikroskopi. I detta synsätt, är isolerade FDB fibrer utsätts för övergående hypoosmotisk spänning följt av en återgång till isoton fysiologisk lösning. Under dessa förhållanden gnistor en robust Ca2 +, svar detekteras i anslutning till sarcolemmal membranet hos unga friska FDB muskelfibrer. Altered Ca2 + gnistor svar detekteras i dystrofiska eller åldrade skelettmuskelfibrerna. Detta tillvägagångssätt har nyligen visat att membranavgränsade signalering omfattar överhörning mellan inositol (1,4,5)-trifosfat-receptorn (IP 3 R) och RyR bidrar till Ca2 + gnista aktivering i skelettmuskulaturen. Sammanfattningsvis våra studier med osmotisk stress Ca 2 + gnistor visade att denna intracellulära svar reflekterar en muskel signaleringsmekanismen inom fysiologi och åldrande / sjukdomstillstånd, inklusive musmodeller av muskel dystrofi (mdx möss) eller amyotrofisk lateralskleros (ALS modell).

Tidigare studier har visat att övergående hypoosmotisk stressen inducerad perifer Ca2 + sparks intill sarcolemmal membranet i intakta muskelfibrer 11. Figur 1 visar bilder av intakta enstaka muskelfibrer med blank sarcolemmal membranet och karakteristiska tydliga strimmor. Figur 2 visar typiska Ca 2 + gnistor (som xy-bilder) inducerades av övergående (100 sek) behandling med en hypoosmotisk lösning som sväller de FDB muskelfibrer från ung...

Watch this Scientific Journal Video about Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers at JoVE.com

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers (Video) | JoVE

Beskrivs här är en metod för att direkt mäta kalcium gnistor, de elementära enheter av Ca2 + släppa från sarko retiklet i intakta skelettmuskelfibrerna. Denna metod använder osmotisk stress medierad utlösning av Ca 2 + frisättning från ryanodinreceptorn i enstaka muskelfibrer. Dynamiken och homeostatiska kapacitet intracellulär Ca2 +-signalering kan användas för att bedöma muskelfunktion i hälsa och sjukdom.

I Intakta Skeletal Muscle Fibers Bedömning av Kalcium Sparks

Maintaining homeostatic Ca2+ signaling is a fundamental physiological process in living cells. Ca2+ sparks are the elementary units of Ca2+ signaling in ...

Research

JoVE Journal

Biology

Assessment of Calcium Sparks in Intact Skeletal Muscle Fibers

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells

Adult and Embryonic Skeletal Muscle Microexplant Culture and Isolation of Skeletal Muscle Stem Cells (Video) | JoVE

Adulta och embryonala skelettmuskler Microexplant Kultur och Isolering av skelettet muskelceller Stem

Cultured embryonic and adult skeletal muscle cells have a number of different uses. The micro-dissected explants technique described in this chapter is a ...

Respirometric Oxidative Phosphorylation Assessment in Saponin-permeabilized Cardiac Fibers

Respirometric Oxidative Phosphorylation Assessment in Saponin-permeabilized Cardiac Fibers (Video) | JoVE

Respirometric oxidativ fosforylering Bedömning i Saponin-permeabilized Cardiac Fibrer

Investigation of mitochondrial function represents an important parameter of cardiac physiology as mitochondria are involved in energy metabolism, ...

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber

Fluorescence-based Measurement of Store-operated Calcium Entry in Live Cells: from Cultured Cancer Cell to Skeletal Muscle Fiber (Video) | JoVE

Fluorescens-baserad Mätning av Store-drivs kalcium Entry i levande celler: från odlade Cancer Cell till skelettmuskulatur Fiber

Store operated Ca2+ entry (SOCE), earlier termed capacitative Ca2+ entry, is a tightly regulated mechanism for influx of extracellular Ca2+ into cells to ...

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles

Ex Vivo Assessment of Contractility, Fatigability and Alternans in Isolated Skeletal Muscles (Video) | JoVE

Ex vivo Bedömning av kontraktilitet, fatigability och Alternans i isolerade skelettmuskler

 
Described here is a method to measure contractility of isolated skeletal muscles. Parameters such as muscle force, muscle power, contractile kinetics, ...

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements

Isolation of Intact Mitochondria from Skeletal Muscle by Differential Centrifugation for High-resolution Respirometry Measurements (Video) | JoVE

Isolering av Intakt Mitokondrier från skelettmuskulatur genom differentialcentrifugering för Högupplösta respirometri Mätningar

Mitochondria are involved in cellular energy metabolism and use oxygen to produce energy in the form of adenosine triphosphate (ATP). Differential ...

High-Throughput Contractile Measurements of Hydrogel-Embedded Intact Mouse Muscle Fibers Using an Optics-Based System

High-Throughput Contractile Measurements of Hydrogel-Embedded Intact Mouse Muscle Fibers Using an Optics-Based System (Video) | JoVE

Kontraktila mätningar med hög genomströmning av hydrogelinbäddade intakta musmuskelfibrer med hjälp av ett optikbaserat system

In vitro cell culture is a powerful tool to assess cellular processes and test therapeutic strategies. For skeletal muscle, the most common approaches ...

Functional Site-Directed Fluorometry in Native Skeletal Muscle Cells

Functional Site-Directed Fluorometry in Native Cells to Study Skeletal Muscle Excitability

Functional Site-Directed Fluorometry in Native Cells to Study Skeletal Muscle Excitability (Video) | JoVE 

Funktionell platsriktad fluorometri i nativa celler för att studera skelettmuskulaturens retbarhet

Functional site-directed fluorometry has been the technique of choice to investigate the structure-function relationship of numerous membrane proteins, ...

Quantification of Skeletal Muscle Fatty Infiltration via Decellularization

Decellularization-Based Quantification of Skeletal Muscle Fatty Infiltration

Decellularization-Based Quantification of Skeletal Muscle Fatty Infiltration (Video) | JoVE 

Decellulariseringsbaserad kvantifiering av skelettmuskelfettinfiltration

Fatty infiltration is the accumulation of adipocytes between myofibers in skeletal muscle and is a prominent feature of many myopathies, metabolic ...

Construct Design for Transfecting Cysteine-Engineered Voltage-Gated Ca2+ Channels in Murine Isolated Skeletal Muscle Fibers

Construct Design for Transfecting Cysteine-Engineered Voltage-Gated Ca2+ Channels in Murine Isolated Skeletal Muscle Fibers (Video) | JoVE 

Konstruktionsdesign för transfektering av cysteinkonstruerade spänningsstyrda ca2+ kanaler i murina isolerade skelettmuskelfibrer

Decellularization of Skeletal Muscle

Decellularization of Skeletal Muscle  (Video) | JoVE 

Decellularisering av skelettmuskulaturen 