Name: detection of the genome and transcripts of a persistent dna virus in neuronal tissues by fluorescent in situ hybridization combined with immunostaining
Uploaded: 2014-01-23T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining at JoV

Biz HSV-1 numune sağlamak için N. Sawtell (Cincinnati Çocuk Hastanesi Tıp Merkezi, Cincinnati, Ohio, ABD), S. Efstathiou&#39;dan (Cambridge Üniversitesi, Birleşik Krallık) ve James Hill, (LSU Sağlık Bilimleri Merkezi, New Orleans, ABD) teşekkür ederim sırasıyla, fare ve tavşan-enfekte ve reaktifler için, yararlı tartışmalar için H. Masumoto (Kazusa DNA Araştırma Enstitüsü, Chiba, Japonya) ve S. Khochbin (Institut Albert Bonniot, Grenoble, Fransa). Bu çalışma (PL, http://www.cnrs.fr için ATIP programı) Centre National de la Recherche Scientifique (CNRS) hibe, Fransız Ulusal Araştırma Ajansı (ANR) (ANR-05-Miim-tarafından finanse edildi 008-01, CENTROLAT, <a href="http://www.agencenationale-recherche.fr">http://www.agencenationale-recherche.fr</a> ), FINOVI Vakfı ( <a href="http://www.finovi.org/:fr:start">http://www.finovi.org/:fr:start</a> ), LabEX DEVweCAN (ANR-10-LabX-61 ) Université de Lyon, program dahilinde &quot;Investissements d&#39;Avenir &quot;(ANR-11-IDEX-0007) ANR tarafından işletilen ( <a href="http://www.agence-nationale-recherche.fr">http://www.agence-nationale-recherche.fr</a> ), l&#39;Association la Recherche contre le Yengeç (ARC-7979 ve ARC-dökün 4910, <a href="http://www.arc-cancer.net">http://www.arc-cancer.net</a> ), la Ligue Nationale Contre le Cancer (LNCC, <a href="http://www.ligue-cancer.net">http://www.ligue-cancer.net</a> ) ve İnka (EPIPRO programı, <a href="http://www.e-cancer.fr">http://www.e -cancer.fr</a> ). FC ve PL CNRS araştırmacılar vardır.

Bu yöntem, daha önce 22 yayınlanan bir çalışmada kullanılmıştır. ISH, IF ve FISH genel arka plan ve konvansiyonel manipülasyon açıklaması için, aşağıdaki mevcut literatürü 23 öneririz. 1.. Hayvan Enfeksiyon Deney hayvanları ile ilgili tüm işlemler Vizyon Araştırma Derneği ve Göz araştırmalarda hayvanların kullanımı için (ARVO) Bildirimi etik sorunlar uymakta ve Avrupa Birliği çerçevesinde UPR-3296-CNRS yere...

Burada açıklanan protokol Fare nöronal doku bölümlerinin nöronlar içinde HSV-1 genomu latent algılanmasını sağlar. Viral gen ekspresyonunu düzenleyen yollarının anladığımız nöronal dokular içinde in situ HSV-1 genomik DNA tespit etmek için bir yöntem eksikliği ile sınırlanmıştır. Genom kopya sayısı ve enfekte nöronların oranına ilişkin bilgiler ayrışmış nöronlar 11,12 PCR analiz ağırlıklı geldi. HSV-1 gecikme üzerindeki rolü teklif konak hücre nükleer mi...

<html> Herpes simpleks virüsü tip 1 (HSV-1) çoğaltmak ve yaymak için periyodik olarak yeniden etkinleştirir hangi periferal sinir sistemi, trigeminal ganglionların (TG) nöronlarda uzun vadeli bir latent enfeksiyon oluşturarak, kalıcı bir insan nörotropik virüsüdür. HSV-1 genomu bu konak hücre genomu içine entegre 1,2 yok gibi çok kopyalı chromatinized plazmidler kalır, ana nöronun çekirdeğine bir 150 kb dsDNA saptanması. Gecikme sırasında, HSV-1 replikatif döngü programı genetik kuvvetle bastırılır ve gen ekspresyonu gecikme kurulması yeniden aktive 3 başlaması için gecikme ile ilişkili transkripti (LAT) locus, sınırlandırılmıştır. LAT bir büyük 2 kb istikrarlı kement içine işlenmiş uzun 8.5 kb noncoding RNA ve birkaç miRNA 4-7 arası üretir. HSV-1 gecikme dolayısıyla viral genomik DNA, RNA LAT ve tespit replikatif döngüsü proteinlerinin yokluğunda varlığı ile karakterize edilir. &quot;ontent&gt; Hayvan modelleri, ağırlıklı olarak fare ve tavşan, insan gecikme çeşitli özellikleri yansıtan deneysel modellerdir. bu modellerin ana çıkarları biri de imünokompetan konaklarda HSV-1 gecikme fizyolojik yönlerini okuyan sağlamasıdır. Geçtiğimiz on yıl içinde , bu tür genetik olarak değiştirilmiş virüsler ve fareler gibi pek çok deneysel araçları, fizyoloji, genetik ve hayvan dokularından HSV-1 gecikme, hücresel biyolojisi incelemek için geliştirilmiştir. Şimdiye kadar, viral genomik DNA miktarı tespit edilir ve Southern lekeleme yolu ile ve daha ayrışmış-ra ikinci QPCR. Ancak, şu anda doku bölümleri 8. Sonuç olarak, gecikme rutin olarak in situ olarak melezleşme ile RNA LAT RNA&#39;nın saptanması yerine yoluyla histolojik bölümler üzerinde değerlendirilir in situ olarak melezleşme ile HSV-1 genomu tespit etmek için uygun bir yöntem yoktur viral genom tespiti. viral genomların varlığında thi göre, enfekte olmuş hücrelere karakterize etmek mümkün olmuştur çünküs teknik sınırlama bu tür viral genom, hücresel ve viral gen ekspresyonu ya da konakçı hücre-aracılı bağışıklık karşılığının 9,10 arasındaki ilişki olarak ana bilgisayar virüs etkileşimleri, birçok açıdan analizlerine büyük bir dezavantaj olmuştur. En önemlisi, gizli enfeksiyon, hücre-hücre heterojenlik nispeten keşfedilmemiş kalır ve SCID farelerde ve 11-17 farelere implante insan duyu ganglion nöronlarında gecikme önemli bir özelliği olduğu gösterilmiştir. Tipik olarak, bu hücre başına HSV-1 genomu kopya sayısının 5 ila birkaç yüz değişir qPCR gösterilmiştir. LAT gecikme ve reaktivasyonu önemli bir düzenleyici olarak görünse de, izole nöronların ve yerinde PCR QPCR veri latent enfekte nöronların sadece bir alt kümesi, 30 gibi düşük%, LAT lokusunu 11,12,18-21 ifade ettiğini belirtti. Ne konakçı hücre ve virüs gecikme kurulması ile ilgili doku etkisinin içindeki hücre ortamı veviral gen ekspresyonu açık değildir. Burada hayvan nöronal doku bölümleri içinde düşük kopya HSV-1 genomik DNA&#39;nın saptanması için etkin bir in situ hibridizasyon (FISH) yöntemi, güçlü bir floresan tarif eder. Bu yöntem, tasarlanmış ve konakçı hücre içi nükleer bileşenleri 22 ile viral genomun etkileşimini incelemek için gerekli olan yüksek çözünürlüklü mikroskopi görüntüleme erişmek için tarafımızdan kullanılmıştır. Ayrıca, viral gen ekspresyonunu düzenleyen virüs-host etkileşimleri için eşsiz bir araçtır RNA ve proteinler ile viral DNA, eş zamanlı olarak saptanması için bir çok boyama yöntemi açıklanmaktadır. Bu yöntem, aynı zamanda, bölme sayıda enfekte nöronlar miktarının gibi HSV-1 genomu latent saptanmasını gerektiren analizlerin geniş bir aralığı için uygulanabilir. Bir anahtar bir adım hibridizasyona viral DNA erişilebilir yapmak için antijen alımı tedavi uygulamaktır. Böylece, bu protokol, aynı zamanda saptanması için etkili olabilir,hayvansal dokular içinde geleneksel DNA FISH yaklaşımlarla anda algılanamaz diğer dsDNA virüslerin.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="822">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;width:203px;">Balb/c mice</td>
			<td style="width:189px;">Janvier, France</td>
			<td style="width:93px;"> </td>
			<td style="width:337px;">6 week-old females</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;">HSV-1 strains</td>
			<td>SC16 strain (wild type)</td>
			<td></td>
			<td style="width:337px;">See Labetoule, M. et al. (2003) Invest Ophthalmol Vis Sci 44: 217&#8211;225, for details on HSV-1 strain and virus stock preparation.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ketamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>K2753</td>
			<td rowspan="2" style="width:337px;">Intraperitoneal injection of a solution containing Ketamine (100mg/kg) and Xylazine (10mg/kg)</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Xylazine hydrochloride</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>X1251</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;">Paraformaldehyde (PFA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>158127</td>
			<td style="width:337px;">Suspend 4g of PFA in 90mL of water. Add 50&#181;L of 1N NaOH, and heat at 60&#176;C in a water bath with agitation. PFA dissolves in about 30min. Add 10mL of 10X PBS. This solution can be prepared in advance and stored at -20 &#176;C in 5mL tubes. Caution. Manipulate under a fume hood.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Physiological Saline</td>
			<td>Sigma</td>
			<td colspan="2">07982-100TAB-F</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">1X PBS, pH 7.4 (sterile)</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>10010-015</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Sucrose</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>84100</td>
			<td>Prepare a 20% sucrose solution in 1X PBS.</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:203px;">Cryosectionning embedding medium - Tissue-Tek OCT Compound -</td>
			<td>SAKURA</td>
			<td>4583</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">Large vector DNA purification kit</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>12462</td>
			<td style="width:337px;">To purify Cosmid or BAC vector containing HSV-1 genome and store at -20&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Nick translation kit</td>
			<td>Roche Applied Sciences</td>
			<td>10 976 776 001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Cy3-dCTP</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>PA53021</td>
			<td>Protect from light</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">0.5M EDTA</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E6758</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">G50 Mini spin column</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>27-5330-01 </td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Salmon sperm DNA 10mg/mL</td>
			<td>Invitrogen / Life Technologies</td>
			<td>15632-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ethanol molecular biology grade</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>87047</td>
			<td>Prepare a 70% solution</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Salmon sperm DNA</td>
			<td>Invitrogen / Life Technologies</td>
			<td>15632-011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Formamid Molecular biology grade</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F9037</td>
			<td>Caution. Manipulate under fume hood.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">HSV-1 biotinylated commercial probe </td>
			<td>Enzo Life Sciences</td>
			<td>ENZ-40838</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">ImmEdge hydrophobic pen</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-4000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="19">
			<td height="19" style="height:19px;">20X Saline Sodium Citrate (SSC)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S6639</td>
			<td>Prepare a 2X SSC solution in ddH20.</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">Triton X-100</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>T8787</td>
			<td style="width:337px;">Prepare a 10% stock solution in water and store at +4&#176;C. Prepare the 0.5% solution in 1X PBS right before use.</td>
		</tr>
		<tr height="102">
			<td height="102" style="height:102px;">10mM sodium citrate pH 6.0</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>S1804</td>
			<td style="width:337px;">Prepare a 100mM stock solution (10X). Weigh 10,5g of citric acid (MW 210.14. Caution, irritant and toxic, wear appropriate mask and gloves), and dissolve in 400mL water. Adjust pH at 6.0 with 1N NaOH (caution, irritant, wear gloves). Adjust to 500mL with distilled water. Dilute 10 times in distilled water before use.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Acetic Acid</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>320099</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Methanol, molecular biology grade</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>322415</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Dextran sulfate - MW 500 000</td>
			<td>Euromedex</td>
			<td>EU0606-A</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Denhardt&#39;s solution (100X)</td>
			<td>Euromedex</td>
			<td>1020-A</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Rubber Cement &#34;FixoGum&#34;</td>
			<td>Marabut</td>
			<td>290110000</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:203px;">DNA purification kit - Qiaquick PCR purification kit -</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>28104</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">T7 in vitro transcription kit</td>
			<td>Ambion / Life Technologies</td>
			<td>AM1314</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Biotin-16-UTP</td>
			<td>Roche Applied Sciences</td>
			<td>11388908910</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">RNA purification mini-column</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>73404</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Ribonucleoside Vanadyl Complex</td>
			<td>New England Biolabs</td>
			<td>S1402S</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">H2O2</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3410</td>
			<td style="width:337px;">Prepare a 3% solution in distilled water. Store at +4 &#176;C and protect from light.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Yeast tRNA</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15401011</td>
			<td style="width:337px;">prepare a 10mg/mL solution in RNAse free water</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Normal Goat Serum</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>PCN5000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="68">
			<td height="68" style="height:68px;">Primary antibodies</td>
			<td>Any supplier</td>
			<td></td>
			<td style="width:337px;">The following primary antibodies were used in the result section: anti-mouse CENP-A (rabbit mAb C51A7, Cell Signaling Technologies), and anti-ATRX H-300 (Santa Cruz Biotechnology)</td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;">Secondary fluorescent antibodies</td>
			<td>Invitrogen / Life Technologies</td>
			<td></td>
			<td style="width:337px;">The fluorescent secondary antibodies routinely used in our protocol are AlexaFluor labeled goat antibodies (IgG H+L). The antibody used in the result section is an anti-rabbit goat antibody labaled with AlexaFluor 488 (reference A11001)</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:203px;">Tyramide Signal Amplification (TSA) kit - Streptavidin + AlexaFluor 350 (blue fluorescence)</td>
			<td>Invitrogen / Life Technologies</td>
			<td>#T20937</td>
			<td rowspan="2" style="width:337px;">TSA kits are also available from Perkin Elmer</td>
		</tr>
		<tr height="51">
			<td height="51" style="height:51px;width:203px;">Tyramide Signal Amplification (TSA) kit - Streptavidin + AlexaFluor 488 (green fluorescence)</td>
			<td>Invitrogen / Life Technologies</td>
			<td>#T20932</td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;">Hoechst 33342</td>
			<td>Invitrogen / Life Technologies</td>
			<td>H3570</td>
			<td style="width:337px;">Prepare a 0.5&#181;g/mL solution in 1X PBS immediatly before use. Discard the remaining solution.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">22x50mm coverslip. n&#176;1.5 glass.</td>
			<td>Electron Microscopy Sciences</td>
			<td>72204-04</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="34">
			<td height="34" style="height:34px;width:203px;"> Mounting medium with anti-fading agent - Vectashield -</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1000</td>
			<td style="width:337px;">Another conventional product is Fluoromount G from electron microscopy Science</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Superfrost glass slides</td>
			<td>FisherScientific</td>
			<td>12-550-15</td>
			<td style="width:337px;"> </td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;"> </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">EQUIPMENT</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="18">
			<td height="18" style="height:18px;">Equipment / material</td>
			<td>Company</td>
			<td>Reference</td>
			<td>Note</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Needle for infection</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Glass micropipette hot drawn. Home made.</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Dissection equipement</td>
			<td>Moria, France</td>
			<td></td>
			<td>Microsurgical scissors and forceps</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Peristaltic pump</td>
			<td style="width:189px;">Cole Palmer Instruments</td>
			<td></td>
			<td>Easyload Masterflex</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Micro-syringe pump device (Nano Pump)</td>
			<td>kdScientific</td>
			<td>KDS310</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Cryostat</td>
			<td>Leica France</td>
			<td>CM 1510-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">-80 &#176;C freezer</td>
			<td>Sanyo</td>
			<td></td>
			<td>Ultra Low -80&#176;C</td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Domestic microwave oven</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Dry block heater</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>022670204</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Incubator Slide moat</td>
			<td>Boekel Scientific</td>
			<td>240000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Coplin Jar</td>
			<td>Dominique Dutscher</td>
			<td>68512</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="17">
			<td height="17" style="height:17px;">Staining glass container</td>
			<td>Dominique Dutscher</td>
			<td>68506</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="136">
			<td height="136" style="height:136px;">Fluorescent microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
			<td style="width:337px;">The images presented in the result section were collected with a Zeiss AxioObserver with objective x40 LD NeoFluor N.A 0.6, and x100 PlanApochromat N.A 1.3. Filter set #38, #43 and #43. HXP 120 fluorescence light source. Photometrics CoolSNAP HQ2 CCD camera. Signal will be more easily observed on a recent high efficiency microscope such as Zeiss AxioImager/AxioObserver series, Nikon Ti-E/Ni-E series or Leica DM/DMI6000 series</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

detection of the genome and transcripts of a persistent dna virus in neuronal tissues by fluorescent in situ hybridization combined with immunostaining

Bir genin tek hücre codetection, kendi ürün ve hücresel RNA, düzenleyici proteinler gen ekspresyonu düzenleme çalışma için çok önemlidir. Bu, viroloji alanında bir sorundur, özellikle de bir nükleer kopyalayan bir kalıcı DNA virüs kendi çalışma için hayvan modellerini içerir ki. Herpes simpleks virüsü tip 1 (HSV-1), çevresel nöronlarda bir ömür boyu latent enfeksiyon oluşturur. Latent virüsü reactivates ve yeni herpetik bölüm neden olan rezervuar olarak hizmet vermektedir. HSV-1 gecikme hücre biyolojisi, hayvan modellerinde in situ HSV-1 genomu tespit yöntemlerinin eksikliği, kısmen, az anlaşılmaktadır. Biz yaklaşımın verimli enfekte hayvan modellerinde nöronal dokularda kesimleri içinde düşük kopya viral genomları tespit situ hibridizasyon (FISH) bir DNA-floresan açıklar. Bu yöntem ısıya dayalı antijeninin ortaya çıkartılması dayanır ve direkt etiketlenmiş ev yapımı DNA probları ya da ticari olarak temin edilebilir sondalar. Biz üçlü stai geliştirdining yaklaşım, her boyama gereksinimi karşılamak için peroksidaz tabanlı sinyal amplifikasyonu kullanarak, RNA-FISH ve immünfloresansta ile DNA-FISH birleştirerek. Önemli bir gelişme konfokal mikroskopi ve geniş alan geleneksel epifluoresan yüksek çözünürlükte görüntülenebilir 10 um doku bölümleri, düşük arka plan sinyalleri içinde, elde etme yeteneğidir. Buna ek olarak, üç boyama, hücresel ve viral proteinlere karşı yönelik bir antikor yelpazesi ile çalışmıştır. Tüm protokol, doku içinde antikor ve prob girmesinin karşılamak için 2.5 gün sürer.

Kapsamlı test birkaç ay sonra, ısı bazlı kimyasal maskesinin floresan in situ hibridizasyon için latent HSV-1 genomu hazır olduğunu keşfetti. Bu işlem sırasında, çeşitli prosedürler maskesinin denenmiş ve sadece ısıya dayalı tedaviler (örneğin bir mikrodalga fırın içinde alt kaynama sıcaklığına kadar ısıtılması bölümleri) etkili ortaya çıktı. Biz sonra rutin 0.01 M pH 6.0 sitrat tamponu (hepimizin çalışmalarda kullanılan), 1x PBS, 1 mM EDTA, 0.1 M dahil epitopla...

Watch this Scientific Journal Video about Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining at JoV

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Bu hayvan modellerinin doku bölümleri içinde kalıcı bir DNA virüsü genomunun saptanması için in situ hibridizasyon protokolünde bir floresan kurulmuştur. Bu protokol, viral genomun codetection, kendi RNA ürünleri ve tek bir hücre içinde viral veya hücresel proteinleri tarafından enfeksiyon süreci üzerinde çalışırken sağlar.

Floresan Nöronal Dokularda Kalıcı DNA Virüs Genomu ve Transkriptlerinin Algılama In situ Melezleme immün ile birlikte

Single cell codetection of a gene, its RNA product and cellular regulatory proteins is critical to study gene expression regulation. This is a challenge ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Detection of the Genome and Transcripts of a Persistent DNA Virus in Neuronal Tissues by Fluorescent In situ Hybridization Combined with Immunostaining

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Double Fluorescence in situ Hybridization in Fresh Brain Sections

Çift Floresans In situ Taze Beyin Bölüm Hibridizasyon

Here we describe a modified version of a double fluorescence in situ hybridization (dFISH) method optimized for detecting two mRNAs of interest in fresh ...

Nörobilim

Fast Micro-iontophoresis of Glutamate and GABA: A Useful Tool to Investigate Synaptic Integration

Glutamat ve GABA hızlı Micro-iyontoforez: Synaptic Entegrasyon Araştırma yararlı bir araç

One of the fundamental interests in neuroscience is to understand the integration of excitatory and inhibitory inputs along the very complex structure of ...

Inducing Plasticity of Astrocytic Receptors by Manipulation of Neuronal Firing Rates

Nöronal Ateşleme Oranlarının Manipülasyon tarafından Astrositik reseptörleri Plastisite Inducing

Close to two decades of research has established that astrocytes in situ and in vivo express numerous G protein-coupled receptors (GPCRs) that can be ...

Intracerebroventricular Viral Injection of the Neonatal Mouse Brain for Persistent and Widespread Neuronal Transduction

Kalıcı ve yaygın Nöronal İletim için Yenidoğan Fare Beyin intraserooroventriküler Viral Enjeksiyon

With the pace of scientific advancement accelerating rapidly, new methods are needed for experimental neuroscience to quickly and easily manipulate gene ...

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Detection of Axonally Localized mRNAs in Brain Sections Using High-Resolution In Situ Hybridization

Yüksek Çözünürlük kullanma Beyin bölümlerde Axonally Lokalize mRNA&#39;larının Algılama<em&gt; In Situ</em&gt; Melezleme

mRNAs are frequently localized to vertebrate axons and their local translation is required for axon pathfinding or branching during development and for ...

Utilizing Combined Methodologies to Define the Role of Plasma Membrane Delivery During Axon Branching and Neuronal Morphogenesis

Kombine Metodolojileri kullanan Akson Dallanman ve Nöronal Morfogenez sırasında Plazma Membran Teslimat Rolü tanımlayın

During neural development, growing axons extend to multiple synaptic partners by elaborating axonal branches. Axon branching is promoted by extracellular ...

Extracellular Recording of Neuronal Activity Combined with Microiontophoretic Application of Neuroactive Substances in Awake Mice

Uyanık Farelerde Nöroaktif Maddelerin Microiontophoretic Uygulaması ile birlikte Nöronal Faaliyet dışı Kaydı

Differences in the activity of neurotransmitters and neuromodulators, and consequently different neural responses, can be found between anesthetized and ...

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

Combining Double Fluorescence In Situ Hybridization with Immunolabelling for Detection of the Expression of Three Genes in Mouse Brain Sections

Çift Floresan birleştiren<em&gt; In Situ</em&gt; Fare Beyin Bölüm Üç Genlerin İfade tespiti için immünoişaretleme ile Hibridizasyon

Detection of gene expression in different types of brain cells e.g., neurons, astrocytes, oligodendrocytes, oligodendrocyte precursors and microglia, can ...

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Localization of Odorant Receptor Genes in Locust Antennae by RNA In Situ Hybridization

Locust Antenlerinde Odorant Reseptör Genlerinin RNA ile Lokalizasyonu<em&gt; Yerinde</em&gt; Hibridizasyon

Insects have evolved sophisticated olfactory reception systems to sense exogenous chemical signals. These chemical signals are transduced by Olfactory ...

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Identification of Dopamine D1-Alpha Receptor Within Rodent Nucleus Accumbens by an Innovative RNA In Situ Detection Technology

Dopamin D1-Alfa reseptör kemirgen Nucleus Accumbens bir yenilikçi RNA Situ içinde hafiye teknoloji tarafından içinde tanımlaması

In the central nervous system, the D1-alpha subtype receptor (Drd1&#945;) is the most abundant dopamine (DA) receptor, which plays a vital role in ...