Name: tracking microbial contamination in retail environments using fluorescent powder - a retail delicatessen environment example
Uploaded: 2014-03-05T17:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tracking Microbial Contamination in Retail Environments Using Fluorescent Powder - A Retail Delicatessen Environment Example at JoVE.com

Forfatterne ønsker å takke alle de mattrygghet lab studenter og frivillige som hjalp til med denne studien. Denne forskningen har vært finansiert av en USDA National Integrated Food Safety Initiative (NIFSI) stipend (Award # 10507316).

En. Standard Curve <ol><li> Vei 37,5 mg fluorescerende pulver og oppløses i 6 ml 200 proof etanol. Gjør to-fold serielle fortynninger av denne løsningen i 200 proof etanol. </li><li> Vortex alle prøvene i 10 sekunder og måling av absorbansen ved 370 nm. </li><li> Beregne mengden av fluoriserende pulver per 1 ml 200 proof etanol. </li><li> Klargjør standardkurve (konsentrasjon i mg / ml på y-aksen, og absorbansen ved 370 nm på x-aksen) for å demonstrere absorbansen basert på fluorescerende pulver konsentrasjo...

<ol>
	<li>Sheen, S., Hwang, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mathematical+modeling+the+cross-contamination+of+Escherichia+coli+O157:+H7+on+the+surface+of+ready-to-eat+meat+product+while+slicing.">Mathematical modeling the cross-contamination of Escherichia coli O157: H7 on the surface of ready-to-eat meat product while slicing.</a> Food Microbiol. 27, 37-43 (2010).</li><li>Crandall, P., Neal, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Minimizing+the+risk+of+Listeria+monocytogenes+in+retail+delis+by+developing+employee+focused,+cost+effective+training.">Minimizing the risk of Listeria monocytogenes in retail delis by developing employee focused, cost effective training.</a> Agric. Food Anal. Bacteriol. 1, 159-174 (2011).</li><li>Koo, O. K., Sirsat, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Physical+and+chemical+control+of+Salmonella+in+ready-to-eat+products.">Physical and chemical control of Salmonella in ready-to-eat products.</a> Agric. Food Anal. Bacteriol. 2, 56-68 (2012).</li><li>Hanning, I. B., Johnson, M. G., Ricke, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Precut+prepackaged+lettuce:+a+risk+for+listeriosis?.">Precut prepackaged lettuce: a risk for listeriosis?.</a> Foodborne Pathog. Dis. 5, 731-746 (2008).</li><li>Hanning, I. B., Nutt, J. D., Ricke, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Salmonellosis+outbreaks+in+the+United+States+due+to+fresh+produce:+sources+and+potential+intervention+measures.">Salmonellosis outbreaks in the United States due to fresh produce: sources and potential intervention measures.</a> Foodborne Pathog. Dis. 6, 635-648 (2008).</li><li>Zhu, M., Du, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Control+of+Listeria+monocytogenes+contamination+in+ready&#8208;to&#8208;eat+meat+products.">Control of Listeria monocytogenes contamination in ready&#8208;to&#8208;eat meat products.</a> Compr. Rev. Food Sci. Food Safety. 4, 34-42 (2005).</li><li>Lianou, A., Sofos, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+review+of+the+incidence+and+transmission+of+Listeria+monocytogenes+in+ready-to-eat+products+in+retail+and+food+service+environments.">A review of the incidence and transmission of Listeria monocytogenes in ready-to-eat products in retail and food service environments.</a> J. Food Protect. 70, 2172-2198 (2007).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+risk+assessment+of+relative+risk+to+public+health+from+foodborne+Listeria+monocytogenes+among+selected+categories+of+ready-to-eat+foods.">Quantitative risk assessment of relative risk to public health from foodborne Listeria monocytogenes among selected categories of ready-to-eat foods.</a> , .</li><li>Endrikat, S., Gallagher, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comparative+risk+assessment+for+Listeria+monocytogenes+in+prepackaged+versus+retail-sliced+deli+meat.">A comparative risk assessment for Listeria monocytogenes in prepackaged versus retail-sliced deli meat.</a> J. Food Protect. 73, 612-619 (2010).</li><li>Pradhan, A. K., Ivanek, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+public+health+impact+of+Listeria+monocytogenes+product-to-product+and+environment-to-product+contamination+of+deli+meats+at+retail.">Comparison of public health impact of Listeria monocytogenes product-to-product and environment-to-product contamination of deli meats at retail.</a> J. Food Protect. 74, 1860-1868 (2011).</li><li>Jones, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Handwashing+Technique+Analysis.">Handwashing Technique Analysis.</a> Patent number 5900067. , (1999).</li><li>Gibson, K. E., Koo, O. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observation+and+relative+quantification+of+cross-contamination+within+a+mock+retail+delicatessen+environment.">Observation and relative quantification of cross-contamination within a mock retail delicatessen environment.</a> Food Control. 31, 116-124 (2013).</li><li>Xiao, M., Zheng, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+and+System+for+Fecal+Detection.">Method and System for Fecal Detection.</a> Patent number 5821546. , (1998).</li><li>Waldroup, A., Kirby, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Method+and+System+for+Fecal+Detection.">Method and System for Fecal Detection.</a> Patent number 5621215. , (1997).</li><li>Ashby, K. D., Wen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescence+of+dietary+porphyrins+as+a+basis+for+real-time+detection+of+fecal+contamination+on+meat.">Fluorescence of dietary porphyrins as a basis for real-time detection of fecal contamination on meat.</a> J. Agric. Food Chem. 51, 3502-3507 (2003).</li><li>Cabrera-Diaz, E., Moseley, T. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+protein+marked+Escherichia+coli+biotype+I+strains+as+surrogates+for+enteric+pathogens+in+validation+of+beef+carcass+interventions.">Fluorescent protein marked Escherichia coli biotype I strains as surrogates for enteric pathogens in validation of beef carcass interventions.</a> J. Food Protect. 72, 295-303 (2009).</li><li>Byrd, J., Hargis, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+marker+for+the+detection+of+crop+and+upper+gastrointestinal+leakage+in+poultry+processing+plants.">Fluorescent marker for the detection of crop and upper gastrointestinal leakage in poultry processing plants.</a> Poult. Sci. 81, 70-74 (2002).</li><li>Vorst, K. L., Todd, E. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transfer+of+Listeria+monocytogenes+during+mechanical+slicing+of+turkey+breast+bologna,+and+salami..">Transfer of Listeria monocytogenes during mechanical slicing of turkey breast bologna, and salami..</a> J. Food Protect. 69, 619-626 (2006).</li></ol>

Det overordnede målet med denne studien var å vise hvordan bakteriell krysskontaminering kan oppstå i en retail deli miljø for å utvikle strategier for å kontrollere og redusere risikoen for matbåren sykdom. Den detalj deli miljøet har en spesielt høy risiko for L. monocytogenes forurensning. USDA-FSIS rapportert at deli kjøtt skiver på butikk har en syv ganger høyere forening med listeriose som deli kjøtt i skiver og pakket i et føderalt inspisert anlegget ni. <p class="jove_conten...

Krysskontaminering av matbårne patogener i matlaging miljø, særlig i person delen, er et stort problem på grunn av en økt risiko for matbåren sykdom fra en rekke kilder, inkludert de kjøtt samt grønnsakene 1-5. Oftest, bakterielle patogener inn detaljhandelen miljøet gjennom forurensede matvarer seks. Klar til å spise mat tilberedt på detaljistnivå er spesielt opptatt av så er det vanligvis ingen ytterligere inngrep eller behandling (dvs. matlaging eller oppvarming) før konsum 7. Videre kan patogener stede på forurenset RTE mat da bli overført til andre matvarer eller mat kontaktflater i detaljhandelen miljøet. Mens krysskontaminering kan skje innen praktisk talt alle typer detaljhandel mat miljø, delikatessebutikker er av særlig interesse, spesielt på grunn av foreningen av RTE kjøttpålegg med patogen Listeria monocytogEnes to. Basert på en risikovurdering analyser utført av US Food and Drug Administration (FDA) og US Department of Agriculture Food Safety and Inspection Service (USDA-FSIS), forurenset kjøttpålegg er trolig ansvarlig for 90% av tilfellene av listeriose - en sjelden ennå alvorlig sykdom hos mennesker forårsaket av L. monocytogenes - i USA 8. Generelt har kjøttpålegg skiver på detaljhandel og serveringssteder vært forbundet med en høyere risiko for L. monocytogenes i forhold til på forhånd oppskårede kjøttpålegg i en USDA inspisert anlegget av produsenten 9. Dette kan være på grunn av den økte sannsynligheten for innføring av patogener av mat handlers, innkommende råvarer, eller bearbeidet mat som kan bli forurenset etter behandling 7. Samlet sett utgjør listeriose for ca 28% av de estimerte dødsfall forårsaket av matbåren sykdom per år i USA På grunn av den inøkt risiko for L. monocytogenes forurensning i kjøttpålegg skiver på sluttbrukernivå, har delikatesseforretning kutte seg selv blitt identifisert som en viktig faktor for overflate overføring av matbårne patogener i detaljhandelen miljøet 2,10. Som det fremgår av Sheen 1, er kutte det siste behandlingstrinnet før konsumering, og derfor bør den deli høvelen bli betraktet som en viktig kontrollpunktet for både å forstå og å hindre krysskontaminering 1.. Det overordnede målet med denne studien var å utvikle en metode for å spore forurensning i person deli miljøet ved hjelp av et fluorescerende pulver som Glo Germ. Dette er en fluoriserende forbindelse som har vært brukt til å simulere bakteriell krysskontaminering og sanitære praksis 11,12. Denne studien er designet for å spore patogen overføring fra forurenset kjøtt til høvelen, omgivelsene, og andre kjøttpålegg. Det er avgjørende å forstå de samme veiene som fortsavgangsprøve å utvikle både effektive intervensjoner og pedagogisk materiell for detaljhandel ansatte og ledere. En lignende tilnærming kan brukes for å simulere patogen overføring i andre behandlingsmiljøer (f.eks fjørfe og biff), gårder, og sykehus.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="637">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Glo-Germ Powder</td>
			<td style="width:71px;">Glo Germ Co</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;">Purchased from vendor</td>
			<td style="width:64px;"></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Ethanol</td>
			<td style="width:71px;">Sigma</td>
			<td style="width:119px;">E7023</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Permanent markets</td>
			<td style="width:71px;">Sharpie</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td colspan="2">Purchased from stationary store</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Gloves</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">82026-424</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Deli Meat</td>
			<td style="width:71px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td colspan="2">Bologna Chub from regular grocery store</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Cutting Board</td>
			<td style="width:71px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td colspan="2">A regukar kitchen cutting board</td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Knife</td>
			<td style="width:71px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>A regular kitchen knife&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">5 x 5 cm sterile templates</td>
			<td style="width:71px;">NA</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td colspan="2">Aluminium foil templates cut into 5x 5 cm templates and sterilized&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">15 ml polypropylene centrifuge tubes</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">89039-664</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Cotton swabs</td>
			<td style="width:71px;">Puritan</td>
			<td style="width:119px;">25-806</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Glass cuvettes</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">470019-186</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Vortex</td>
			<td style="width:71px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;">58816-121</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Flip camera</td>
			<td style="width:71px;">Flip Ultra HD</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td>Purchased online</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Deli slicer</td>
			<td style="width:71px;">Bizerba</td>
			<td style="width:119px;">SE-12</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="43">
			<td height="43" style="height:43px;width:216px;">Deli refrigerator</td>
			<td style="width:71px;">True company</td>
			<td style="width:119px;">TDBD-722</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="22">
			<td height="22" style="height:22px;width:216px;">Scale</td>
			<td style="width:71px;"></td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="85">
			<td height="85" style="height:85px;width:216px;">Spectrophotometer</td>
			<td style="width:71px;">Milton Roy Spectronic 20D</td>
			<td style="width:119px;">NA</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tracking microbial contamination in retail environments using fluorescent powder - a retail delicatessen environment example

Krysskontaminering av matbårne patogener i detaljhandelen miljøet er et betydelig folkehelseproblem bidrar til en økt risiko for matbåren sykdom. Ready-to-eat (RTE) bearbeidede matvarer som kjøttpålegg, ost, og i noen tilfeller ferske råvarer, har vært involvert i matbårne sykdomsutbrudd på grunn av forurensning med patogener som Listeria monocytogenes. Med hensyn til L. monocytogenes, deli høvler er ofte den viktigste kilden for krysskontaminering. Målet med denne studien var å bruke et fluorescerende stoff å simulere bakteriell forurensning og spore denne forurensningen i en detaljhandel innstilling. En mock deli kjøkkenet er designet for å simulere butikkmiljø. Deli kjøtt ble vaksinert med fluorescerende stoff og frivillige ble rekruttert til å fullføre et sett med oppgaver som ligner på de som forventes av en mat detaljhandel ansatt. De frivillige ble bedt om å skjære, pakke, og oppbevare kjøttet i en delikatesse kjøleskap. Potensialetkrysskontaminering ble sporet i mock butikkmiljø av swabbing bestemte områder, og å måle den optiske tetthet av penslet med et spektrofotometer. Resultatene indikerte at kjøleskapet (dvs. deli tilfellet) grep og ulike områder på høvelen hadde høyest risiko for krysskontaminering. Resultatene av denne undersøkelse kan anvendes for å utvikle mer fokusert treningsmateriell for butikkansatte. I tillegg, kan lignende metoder også brukes til å spore mikrobiell forurensning i mat produksjonsmiljøer (f.eks små gårder), sykehus, sykehjem, cruiseskip og hoteller.

Figur 1 representerer de områdene av slicer som ble penslet etter de frivillige gjennomført de oppgaver. De frivillige ble videofilmet å analysere den gjennomsnittlige frekvensen til håndkontakt på disse ulike overflater. Hyppigheten av håndkontakt ble analysert ved hjelp av fire forskjellige observatører og gjennomsnitt beregnet. Disse resultater er vist i figur 2.. Dataene viser at kjøttet grep, deli kjøtt wrapper, deli kjøtt og delikatesse papiret hadde de høyeste tallene ...

Watch this Scientific Journal Video about Tracking Microbial Contamination in Retail Environments Using Fluorescent Powder - A Retail Delicatessen Environment Example at JoVE.com

Tracking Microbial Contamination in Retail Environments Using Fluorescent Powder - A Retail Delicatessen Environment Example

Det overordnede målet med denne studien var å demonstrere potensialet krysskontaminering mekanisme av matbåren patogen Listeria monocytogenes i en butikk deli innstilling. Denne metoden kan anvendes på en rekke forskjellige omgivelser for å spore patogen forurensning.

Sporing mikrobiell forurensning i Retail miljø Ved hjelp av fluorescerende pulver - En Retail Delicatessen Miljø Eksempel

Cross contamination of foodborne pathogens in the retail environment is a significant public health issue contributing to an increased risk for foodborne ...

Research

JoVE Journal

Environment

Determination of Microbial Extracellular Enzyme Activity in Waters, Soils, and Sediments using High Throughput Microplate Assays

Fastsettelse av Microbial Ekstracellulær enzymaktivitet i Waters, jord og sedimenter ved hjelp av høy gjennomstrømming for mikro Analyser

Much of the nutrient cycling and carbon  processing in natural environments occurs through the activity of extracellular  enzymes released by ...

Technique for Studying Arthropod and Microbial Communities within Tree Tissues

Teknikk for å studere Arthropod og mikrobielle samfunn innen Tre Vev

Phloem tissues of pine are habitats for many thousands of organisms.  Arthropods and microbes use phloem and cambium tissues to seek mates, lay eggs, rear ...

An Aquatic Microbial Metaproteomics Workflow: From Cells to Tryptic Peptides Suitable for Tandem Mass Spectrometry-based Analysis

En Aquatic Microbial Metaproteomics Arbeidsflyt: Fra celler til Tryptic Peptider Passer for Tandem massespektrometri basert analyse

Meta-omic technologies such as metagenomics, metatranscriptomics and metaproteomics can aid in the understanding of microbial community structure and ...

Extraction and Analysis of Microbial Phospholipid Fatty Acids in Soils

Utvinning og analyse av Microbial fosfolipid fettsyrer i jordsmonn

Phospholipid fatty acids (PLFAs) are key components of microbial cell membranes. The analysis of PLFAs extracted from soils can provide information about ...

Image-based Lagrangian Particle Tracking in Bed-load Experiments

Bildebasert lagrangisk partikkelsporing i bed-load eksperimenter

Image analysis has been increasingly used for the measurement of river flows due to its capabilities to furnish detailed quantitative depictions at a ...

Isolation and Analysis of Microbial Communities in Soil, Rhizosphere, and Roots in Perennial Grass Experiments

Isolering og analyse av mikrobielle samfunn i jord, Rhizosphere og røtter i staude gresset eksperimenter

Plant and soil microbiome studies are becoming increasingly important for understanding the roles microorganisms play in agricultural productivity. The ...

Sampling, Sorting, and Characterizing Microplastics in Aquatic Environments with High Suspended Sediment Loads and Large Floating Debris

Prøvetaking, sortering og karakteriserer Microplastics i akvatiske miljøer med høy suspendert Sediment laster og stort flytende avfall

The ubiquitous presence of plastic debris in the ocean is widely recognized by the public, scientific communities, and government agencies. However, only ...

Detection of 3-Nitrotyrosine in Atmospheric Environments via a High-performance Liquid Chromatography-electrochemical Detector System

Detection of 3-Nitrotyrosine in Atmospheric Environments via a High-performance Liquid Chromatography-electrochemical Detector System

Påvisning av 3-Nitrotyrosine i atmosfæriske miljøer via en høy-ytelse flytende kromatografi-elektrokjemiske merker System

3-nitrotyrosine (3-NT) is generated from the tyrosine residue in atmospheric bio-aerosol proteins via a reaction with ozone (O3) and nitrogen dioxide ...

Fluorescently Labeled Bacteria as a Tracer to Reveal Novel Pathways of Organic Carbon Flow in Aquatic Ecosystems

Fluorescensmerkete merket bakterier som Tracer å avdekke Novel trasé organisk Carbon Flow i akvatiske økosystemer

Elucidating trophic interactions, such as predation and its effects, is a frequent task for many researchers in ecology. The study of microbial ...

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Enrichment and Detection of Clostridium perfringens Toxinotypes in Retail Food Samples

Berikelse og påvisning av perfringens Toxinotypes i Retail mat samples

Clostridium perfringens (C. perfringens) is a prolific toxin producer and causes a wide range of diseases in various hosts. C. perfringens is categorized ...