Name: derivation of adult human fibroblasts and their direct conversion into expandable neural progenitor cells
Uploaded: 2015-07-29T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Adult Human Fibroblasts and their Direct Conversion into Expandable Neural Progenitor Cells at JoVE.com

Vi vil gjerne takke alle medlemmer av Stem Cell og regenerativ medisin Gruppe ved Universitetet i Würzburg for nyttige forslag og Martina Gebhardt samt Heike Arthen for god teknisk støtte. Dette arbeidet ble støttet med tilskudd fra Deutsche Forschungsgemeinschaft DFG (ED79 / 1-2), det tyske departementet for utdanning og forskning BMBF (01 GN 0813), den bayerske forskningsnettverk Induced Pluripotent stamceller &quot;forIPS&quot; og &quot;Stiftung Sibylle Assmus &quot;. Figur 1 ble produsert med Servier Medical Art, tilgjengelig fra www.servier.com.

De menneskelige fibroblaster brukt i denne studien ble hentet fra en hud punsj biopsi etter å bli informert samtykke og etisk avklaring fra etikkutvalg ved Universitetet i Würzburg, Tyskland (etisk rapport no: 96/11 datert 10.06.2011). 1. Punch Biopsi <ol><li> Desinfiser huden på pasienten. Bedøve huden som delvis biopsi vil bli tatt fra (fortrinnsvis en mindre sol-eksponert område) bruker 0,5 til 1 ml mepivakain hydrochloride intrakutant og forberede huden biopsi med en steril 3mm bi...

Her viser vi isolasjon og direkte konvertering av humane fibroblaster inn utvidtransgene fritt nevrale stamceller og deres differensiert avkom som en antatt grunnlag for celle-erstatning terapi eller program i narkotika screening-analyser. Direkte avstamning omdannelse av somatiske celler i NPC har blitt oppnådd ved tvungen ekspresjon av lineage-spesifikke transkripsjonsfaktorer 26,33,34. Men i mange tilfeller føtale fibroblaster ble anvendt for transdifferensiering eksperimenter 33,34. For biome...

I 2006 Yamanaka og kolleger kunne viser for første gang muligheten for omprogrammering av somatiske celler i et pluripotente tilstand 1. Dette dedifferentiation ble oppnådd ved overekspresjon av fire transkripsjonsfaktorer Oct4, Sox2, Klf4, og c-myc i murine fibroblaster. De genererte såkalte induserte pluripotente stamceller (iPSCs) viser funksjonell ekvivalens til embryonale stamceller (ESCS) og kan dermed bli differensiert i alle celletyper i den voksne organismen. Ett år senere omprogrammering til iPSCs kan også oppnås for humane fibroblaster to. Eksperimenter i dyremodeller viser at IPSC-avledet celler kan vanligvis brukes for celle replacement therapy, for eksempel ved Parkinsons sykdom (PD) 3-5. Men flere begrensninger knyttet til bruk av iPSCs representerer veisperringer for full realisering av deres terapeutiske potensial. Først av alt, omprogrammering av celler inn i en pluripotent tilstand og etterfølgendekvalitetskontroll er vanligvis en tidkrevende og ineffektiv prosess ettergivende i en omfattende og dermed kostbare cellekultur prosedyrer. For det andre, iPSCs må re-differensiert i den ønskede celletype av interesse før biomedisinsk anvendelse og sannsynligheten for gjenværende pluripotente celler i populasjonen differensiert havner en betydelig tumorfremkallende potensiale og dermed viser en høy risiko etter celletransplantasjon 6. For det tredje er omprogrammering prosessen vanligvis oppnås ved å fremkalle reprogrammerings faktorene ved lenti- eller retroviral infeksjon. Integreringen av disse virus i vertsgenomet, kan det føre til insertional mutagenese og / eller ukontrollert aktivering av transgener 7,8. Ikke-integrerende systemer har blitt utviklet for å levere de reprogrammerings-faktorene til målceller, noe som minimerer risikoen for insertional mutagenese og transgenet reaktivering. Eksempler på disse transgene frie tilnærminger er omprogrammering av celler ved hjelp av ikke-integreringAdeno eller Sendai-virus 9,10, DNA-baserte vektorer 11 eller anvendelse av DNA-fri metoder, som transfeksjon av syntetisk mRNA 12 eller transduksjon av rekombinante proteiner 13,14. En annen lovende metode for avledning av transgene frie IPSC er bruken av loxP-modifisert lentiviral reprogrammerings-konstruksjoner og etterfølgende delesjon av transgener ved hjelp av Cre-loxP DNA rekombinasjon system 15,16. En enklere måte å generere neuralceller for celle erstatning terapi representerer direkte konvertering av fibroblaster i post-mitotiske nevroner 17-20. Vierbuchen et al. Rapporterte at overekspresjon av transkripsjonsfaktorer Ascl1, Brn2 og Myt1l resulterer i genereringen av 20% neuroner fra murine fibroblaster 17. I 2011 ble det vist at de samme tre transkripsjonsfaktorer i kombinasjon med overuttrykte NeuroD1 aktivere transdifferensiering av humane fibroblaster inn neuRons 19. Menneskeskapte nevroner kan også genereres ved overuttrykte Ascl1 og Ngn2 henhold dual SMAD- og GSK3β- hemming 20. Spesielt, direkte konvertering av fibroblaster i nerveceller genererer en non-proliferativ, post-mitotisk cellepopulasjon som ikke tillater videre ekspansjon og biobanker. Nylig ble direkte konvertering av fibroblaster i en voksende neural stilk / stamcelle befolkningen rapporterte 21-26. For ordens skyld, vil alle disse celletypene bli navngitt som induserte nevrale stamceller (iNPCs) i denne rapporten. Han et al. Overexpressed Brn4, Sox2, c-myc og Klf4 å generere iNPCs. Som sine nevrale stamcelle kolleger avledet fra enten primære vev eller pluripotente celler disse iNPCs er tripotential og kan bli differensiert i nevroner, astrocytter og oligodendrocytter 21. Vår gruppe rapporterte en litt annen konvertering protokollen involverer overuttrykte Sox2, Klf4Og c-myc og indusert Oct4 utfoldelse for 5 dager bare. Med denne tilnærmingen kan vi generere stabilt prolifererende iNPCs fra murine embryonale og voksne fibroblaster som viser komplett stanse av omprogrammering faktorer 22. I motsetning til iPSCs, trenger iNPCs ikke utvise en tumorigent potensiale etter transplantasjon 27. Vi brukte celler omdannet med hell i en dyremodell av demyelinisering, myelin mangel rotter, og dette demonstrerer at iNPCs er klinisk nyttig 22. Inntil da, kan NPCer bli bare genereres fra pluripotente stamceller eller primær nervevev 28-32. iNPCs er stabilt utvidbare celler som kan fryses ned og er i stand til å differensiere til neuroner, astrocytter og oligodendrocytter. Mye arbeid er gjort for å tilpasse direkte konvertering protokollen fra mus til menneskeceller 23,26,33,34. I 2012 ble det publisert at overekspresjon av den enkeltfaktoren Sox2 i fibroblaster er tilstrekkelig til å generere murine og humane iNPCs <sopp&gt; 33. Forfatterne rapporterte generasjon av menneskelige iNPCs fra foster forhudsfibroblaster og preget dem ved farging mot Sox2 og nestin. Imidlertid målcellene som brukes for omprogrammering representerer en meget spesiell celletype som ikke vil være tilgjengelig i klinisk praksis, og det var ingen funksjonell karakterisering av konvertert celler ved transplantasjon i en dyremodell utført. En nyere publikasjon beskriver generasjon av nevrale begrenset stamceller menneskelige foster fibroblaster fra ved overuttrykte Sox2, c-myc og enten Brn2 eller Brn4 34. De genererte cellelinjer viste selvfornyelse kapasitet og kan bli differensiert i ulike terminal nevroner. Imidlertid er bruken av føtale fibroblaster ugunstig, siden disse cellene er av heterogene opprinnelse og man kan ikke utelukke tilstedeværelse av gjenværende f.eks neural crest stamceller i preparatene. I 2014, Zhu et al. Rapporterte direkte konvertering av voksent menneske og neonatal fibroblaster i tripotential nevrale stamceller etter overuttrykte Sox2 sammen med Oct4 eller Oct4 alene og tillegg av små molekyler til cellekulturmedier. Spesielt, basert på deres studier Sox2 alene var ikke nok til å indusere direkte konvertering 26. Mer nylig, Lu et al., Rapporterte at overekspresjon av Yamanaka faktorer Oct4-, Sox2-, Klf4-, c-Myc av Sendai-virus i 24 timer og etterfølgende inaktivering av viruset ved øket temperatur resulterer i genereringen av ekspanderbare tripotential neural forløpercellene 23. Som konklusjon, selv om omdannelses publiserte protokoller for humane celler hittil har det til felles overekspresjon av minst ett eller flere av de faktorer Yamanaka, ofte på en riktig måte begrenset, er det ingen klar indikasjon på den minimale molekyl faktorer som trengs for å kjøre direkte konvertering til iNPCs. Rettidig begrenset overuttrykte Oct4 av enten genetiske midler, transfeksjon med syntetisk mRNA, eller cell-permeant protein sammen med konstitutiv ekspresjon av Sox2, Klf-4, og c-myc ikke resulterer i stabile humane iNPC linjer ennå. Således, til anvendelsen av Sendai-virus som overuttrykker alle Yamanaka faktorer og tidsmessig begrenser deres aktivitet ved varmeinaktivering av viruset 23 sammen med optimaliserte neurale media induksjonsbetingelser 22,31 representerer foret hittil. Flere studier viser mobil funksjonaliteten NSCs eller deres differensierte kolleger i ulike dyresykdomsmodeller. Nevrale stamceller fra menneskelige pluripotente stamceller har blitt transplantert i musemodeller av neuroinflammatoriske multippel sklerose 35,36. Anvendeligheten hESC-avledet nevrale stamceller i EAE (eksperimentell autoimmun encefalomyelitt) -mice ble først vist i 2008 35. Multipotente neurale forløperceller ble injisert inn i ventriklene i musehjerne, og transplantasjon resultated i reduksjon av kliniske tegn på EAE. Kim et al. Generert oligodendroglial forløpere fra hESCs og transplantert de intracerebroventrikulært inn EAE-mus. Selv om transplantasjoner ikke overlevde i mer enn 10 dager, mus viste signifikant forbedring av nevrologisk funksjon og reduksjon av proinflammatoriske immunceller i hvit substans 36. Stamcelleterapi har også blitt brukt for preklinisk målretting av Parkinsons sykdom som NPCer kan med hell brukes i de respektive dyremodeller. For dette ble stamceller enten avledet fra fosterets hjerne vev 37 differensiert fra pluripotente stamceller 38-40 eller stamceller 41 ble brukt. I 2012 viste vi at mus iNPCs er i stand til å produsere proteolipidprotein, hoved myelin proteinkomponenten, etter transplantasjon inn i hjernen til myelin-manglende (MD) 22 rotter. Ved at proof-of-prinsippet eksperiment terapeutisk applicabilligheten av iNPCs ble først påvist og snart bekreftet av en annen studie 32. Imidlertid gjenstår det fulle potensialet i terapeutisk bruk av menneskelige iNPCs å bli utforsket. Her vises en robust og integrert prosess (i) avledning av humane primære celler fra voksne pasienter via hud biopsi, (ii) direkte omdannelse av humane fibroblaster i en neural progenitor tilstand og (iii) evnen til iNPCs å bli differensiert i neuronal og gliale linjene. Bruk av denne protokollen vil bidra til å øke hastigheten på generasjon av autologe humane celler for terapeutiske anvendelser.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Astrocyte media</td>
			<td>ScienCell</td>
			<td align="right">1801</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>B27</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>17504-044</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>BDNF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>450-02</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Biopsy Punch</td>
			<td>pfm medical</td>
			<td align="right">48301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cAMP</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A6885</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CHIR99021</td>
			<td>Axon medchem</td>
			<td align="right">1386</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase Type2</td>
			<td>Worthington Biochemical</td>
			<td>LS004177</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dispase</td>
			<td>PAN&#160;</td>
			<td>P10-032100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>41966-029</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM F12</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>11320-033</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMSO</td>
			<td>Roth</td>
			<td align="right">4720</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DPBS</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>14190-094</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGF</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>PHG0313</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FCS</td>
			<td>Biochrom AG</td>
			<td align="right">50115</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GDNF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>450-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gentamicin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G1397</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GFAP-antibody</td>
			<td>Dako</td>
			<td>Z0334</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GlutaMAX</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>35050-038</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>hLIF</td>
			<td>Peprotech</td>
			<td>300-05</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insulin</td>
			<td>Seralab</td>
			<td>GEM-700-112-P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ki67-antibody</td>
			<td>NeoMarkers</td>
			<td>RM-9106-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>25030-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laminin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>17502-048</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nestin-antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB1259</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neurobasal</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>21103-049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Non-essential amino acids</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td>11140-050</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NSC freezing media</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>C6295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oct4-antibody</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc9081</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pax6-antibody</td>
			<td>Covance</td>
			<td>PRB-278P</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SB431542</td>
			<td>Invivogen</td>
			<td>inh-sb43</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sendai virus: CytoTune Sendai Reprogramming Kit</td>
			<td>&#160;LifeTechnologies</td>
			<td>A1378001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sodiumpyruvate</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>11360-039</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sox1-antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>AF3369</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sox2-antibody</td>
			<td>R&#38;D Systems</td>
			<td>MAB2018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T3</td>
			<td>Santa Cruz</td>
			<td>sc-205725</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TUJ1-antibody</td>
			<td>Covance</td>
			<td>MMS-435P-250</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vitamin C</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A4544</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Y27632</td>
			<td>Calbiochem</td>
			<td>CAS 146986-50-7</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#946;-Mercaptoethanol</td>
			<td>LifeTechnologies</td>
			<td align="right">21985023</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

derivation of adult human fibroblasts and their direct conversion into expandable neural progenitor cells

Generering av indusert pluripotent stamcelle (iPSCs) fra voksne hudfibroblaster og påfølgende differensiering i somatiske celler gir spennende muligheter for avledning av autologe transplantasjoner som omgår histokompatibili-tets barrierer. Men progresjon gjennom en pluripotent tilstand og etterfølgende komplett differensiering i ønskede linjene er fortsatt en hindring for den kliniske betydningen av IPSC teknologi på grunn av den tilhørende neoplastisk potensial og genomisk ustabilitet. Nylig har vi og andre har vist at somatiske celler ikke bare kan omdannes til iPSCs men også i forskjellige typer av multipotente somatiske stamceller ved å bruke definerte faktorer, for derved å omgå progresjon gjennom pluripotent tilstand. Spesielt er den direkte omdannelse av humane fibroblaster inn indusert nevrale stamceller (iNPCs) varsler muligheten for en ny autolog celle kilde for ulike applikasjoner som for eksempel celle erstatning, sykdom modelleringog narkotika screening. Her beskriver vi isolering av voksne humane primære fibroblaster av hud biopsi og deres effektiv direkte omdannelse til iNPCs ved rettidig begrenset ekspresjon av Oct4, Sox2, Klf4, samt c-myc. Sox2-positive neuroepithelial kolonier vises etter 17 dager med induksjon og iNPC linjer kan etableres effektivt ved monoklonalt isolasjon og ekspansjon. Nøyaktig justering av viral multiplisitet av infeksjon og utfylling av leukemi-inhiberende faktor i induksjonsfasen representerer kritiske faktorer for å oppnå konvertering virkningsgrader på opp til 0,2%. Hittil kunne pasientspesifikke iNPC linjer utvides for flere enn 12 passeringer og jevnt viser morfologiske og molekylære trekk ved neuralstamceller / stamceller, som uttrykk for nestin og Sox2. De iNPC linjene kan differensieres i nevroner og astrocytter som bedømt ved farging mot TUJ1 og GFAP hhv. I konklusjonen, rapporterer vi en robust protokoll for avledning og direct konvertering av humane fibroblaster i stabilt utvid nevrale stamceller som kan gi et mobil kilde for biomedisinske applikasjoner som autolog nevrale celle utskifting og sykdom modellering.

Her presenterer vi beskrivelse av en integrert prosess som tillater generering av induserte nevrale stamceller (iNPCs) fra humane fibroblaster som er et resultat av en punch biopsi fra hud i løpet av mindre enn 8 uker (Figur 1). Pasient specifc iNPCs kan bli ytterligere differensiert i nevronale og gliaceller linjene og havnen stort potensial for celle erstatning terapi og sykdom modellering. Infeksjon i fibroblaster med Oct4-, Klf4-, Sox2- og c-myc- Sendai virus 23</s...

Watch this Scientific Journal Video about Derivation of Adult Human Fibroblasts and their Direct Conversion into Expandable Neural Progenitor Cells at JoVE.com

Derivation of Adult Human Fibroblasts and their Direct Conversion into Expandable Neural Progenitor Cells

Generering av induserte pluripotente stamceller gir spennende muligheter for avledning av autologe transplantasjoner. Men progresjon gjennom en pluripotent tilstand og møysommelig gjen differensiering fortsatt hindrer klinisk oversettelse. Her beskriver vi avledning av voksne humane fibroblaster og deres direkte omdannelse til induserte nevrale stamceller og den etterfølgende differensiering i nevrale linjene.

Avledning av voksent menneske fibroblaster og deres direkte konvertering til Utvid Neural stamceller

Generation of&#160;induced pluripotent stem cell (iPSCs) from adult skin fibroblasts and subsequent differentiation into somatic cells provides ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Neural-Colony Forming Cell Assay: An Assay To Discriminate Bona Fide Neural Stem Cells from Neural Progenitor Cells

The neurosphere assay (NSA) is one of the most frequently used methods to isolate, expand and also calculate the frequency of neural stem cells (NSCs). ...

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Live-cell Imaging of Sensory Organ Precursor Cells in Intact Drosophila Pupae

Since the discovery of Green Fluorescent Protein (GFP), there has been a revolutionary change in the use of live-cell imaging as a tool for understanding ...

Lineage-reprogramming of Pericyte-derived Cells of the Adult Human Brain into Induced Neurons

Lineage-omprogrammering av Pericyte-deriverte celler av den voksne Human Brain inn Utførte Nerveceller

Direct lineage-reprogramming of non-neuronal cells into induced neurons (iNs) may provide insights into the molecular mechanisms underlying neurogenesis ...

Feeder-free Derivation of Neural Crest Progenitor Cells from Human Pluripotent Stem Cells

Feeder-free Utledning av Neural Crest stamceller fra menneskelige pluripotent stamceller

Human pluripotent stem cells (hPSCs) have great potential for studying human embryonic development, for modeling human diseases in the dish and as a ...

Cell Sorting of Neural Stem and Progenitor Cells from the Adult Mouse Subventricular Zone and Live-imaging of their Cell Cycle Dynamics

Cell Sortering av Neural stilk og stamceller fra Adult Mouse subventricular Zone og Live-avbildning av deres Cell Cycle Dynamics

Neural stem cells (NSCs) in the subventricular zone of the lateral ventricles (SVZ) sustain olfactory neurogenesis throughout life in the mammalian brain. ...

Development of a Refined Protocol for Trans-scleral Subretinal Transplantation of Human Retinal Pigment Epithelial Cells into Rat Eyes

Utvikling av en raffinert protokoll for Trans-Innbukking Subretinal transplantasjon av menneskelig netthinnens Pigment epitelceller i rotte øyne

Degenerative retinal diseases such as age-related macular degeneration (AMD) are the leading cause of irreversible vision loss worldwide. AMD is ...

Homochronic Transplantation of Interneuron Precursors into Early Postnatal Mouse Brains

Homochronic transplantasjon av Interneuron forløpere til tidlig Postnatal musen hjerner

Neuronal fate determination and maturation requires an intricate interplay between genetic programs and environmental signals. However, disentangling the ...

Identifying Cell Surface Markers of Primary Neural Stem and Progenitor Cells by Metabolic Labeling of Sialoglycan

Identifisere Cell Surface markører for primær neural Stem og stamceller ved metabolsk merking av Sialoglycan

Neural stem and progenitor cells (NSPCs) are the cellular basis for the complex structures and functions of the brain. They are located in specialized ...

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells (iPSCs) into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Conversion of Human Induced Pluripotent Stem Cells iPSCs into Functional Spinal and Cranial Motor Neurons Using PiggyBac Vectors

Konvertering av Human indusert pluripotent Stem Cells (iPSCs) i funksjonell spinal og skallen motor neurons bruke PiggyBac vektorer

We describe here a method to obtain functional spinal and cranial motor neurons from human induced pluripotent stem cells (iPSCs). Direct conversion into ...