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Derivation of Adult Human Fibroblasts and their Direct Conversion into Expandable Neural Progenitor Cells

Generation of&#160;induced pluripotent stem cell (iPSCs) from adult skin fibroblasts and subsequent differentiation into somatic cells provides ...

University of Bonn

German Cancer Research Center, Heidelberg

&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E3A;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E86;&#x5F15;&#x4EBA;&#x5165;&#x80DC;&#x7684;&#x524D;&#x666F;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x5408;&#x80FD;&#x529B;&#x518D;&#x6B21;&#x672C;&#x8EAB;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5206;&#x5316;&#x6210;&#x4E13;&#x95E8;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7C7B;&#x578B;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x9996;&#x6B21;&#x5206;&#x79BB;&#x7684;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (ES) &#x7684;&#x5927;&#x7EA6; 30 &#x5E74;&#x524D;&#xFF0C;&#x6709;&#x4E00;&#x7CFB;&#x5217;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x5F7B;&#x5E95;&#x6539;&#x53D8;&#x73B0;&#x4EE3;&#x751F;&#x547D;&#x79D1;&#x5B66;&#x7684;&#x7A81;&#x7834;&#x6027;&#x53D1;&#x73B0;&#x3002;&#x5F88;&#x957F;&#x65F6;&#x95F4;&#xFF0C;&#x4E3A;&#x80DA;&#x80CE;&#x6216;&#x80DA;&#x82BD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E90;&#x6027;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD; &mdash; &mdash; &#x5728;&#x8FC7;&#x53BB;&#x5341;&#x5E74;&#x671F;&#x95F4;&#x53D7;&#x5230;&#x8D28;&#x7591;&#x7684;&#x6559;&#x6761;&#x7684;&#x552F;&#x4E00;&#x6765;&#x6E90;&#x3002;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7ED3;&#x679C;&#x663E;&#x793A;&#x4ECE; (&#x5E72;) &#x7EC6;&#x80DE;&#x5230;&#x6210;&#x719F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#x5E76;&#x4E0D;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x7684;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3002;&#x5E95;&#x5C42;&#x7EC6;&#x80DE;&#x91CD;&#x7F16;&#x7A0B;&#x4E86;&#x89E3;&#x751A;&#x5C11;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x3002;&#x786E;&#x5B9A;&#x5982;&#x4F55;&#x8BC4;&#x9009;&#x7EF4;&#x62A4;&#x8FDB;&#x884C;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7814;&#x7A76;&#x53EF;&#x4EE5;&#x5E2E;&#x52A9;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E86;&#x89E3;&#x5982;&#x4F55;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x89C4;&#x7BA1;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BA1;&#x67E5;&#x9886;&#x57DF;&#x7684;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8C03;&#x63A7;&#x91CD;&#x70B9;&#x5173;&#x952E;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E;&#x975E;&#x7F16;&#x7801; Rna &#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x6700;&#x65B0;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

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Stem cells provide fascinating prospects for biomedical applications by combining the ability to renew themselves and to differentiate into specialized cell types. Since the first isolation of embryonic stem (ES) cells about 30 years ago, there has been a series of groundbreaking discoveries that have the potential to revolutionize modern life science. For a long time, embryos or germ cell-derived cells were thought to be the only source of pluripotency--a dogma that has been challenged during the last decade. Several findings revealed that cell differentiation from (stem) cells to mature cells is not in fact an irreversible process. The molecular mechanism underlying cellular reprogramming is poorly understood thus far. Identifying how pluripotency maintenance takes place in ES cells can help us to understand how pluripotency induction is regulated. Here, we review recent advances in the field of stem cell regulation focusing on key transcription factors and their functional interplay with non-coding RNAs.

Deciphering the stem cell machinery as a basis for understanding the molecular mechanism underlying reprogramming.

Les cellules souches offrent des perspectives fascinantes pour des applications biom&#xE9;dicales, en combinant la capacit&#xE9; de se renouveler et &#xE0; se diff&#xE9;rencier en types de cellules sp&#xE9;cialis&#xE9;es. Depuis le premier isolement de souches embryonnaires (ES) des cellules d&#x26;#39;environ 30 ans, il ya eu une s&#xE9;rie de d&#xE9;couvertes r&#xE9;volutionnaires qui ont le potentiel de r&#xE9;volutionner la science la vie moderne. Pendant longtemps, les embryons ou de cellules germinales-cellules d&#xE9;riv&#xE9;es ont &#xE9;t&#xE9; pens&#xE9;s pour &#xEA;tre la seule source de la pluripotence - un dogme qui a &#xE9;t&#xE9; contest&#xE9;e au cours de la derni&#xE8;re d&#xE9;cennie. Plusieurs constatations ont r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que la diff&#xE9;renciation des cellules de tige () cellules &#xE0; cellules matures n&#x26;#39;est pas en fait un processus irr&#xE9;versible. Le m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire qui sous-tend la reprogrammation cellulaire est mal comprise &#xE0; ce jour. D&#xE9;terminer comment l&#x26;#39;entretien se d&#xE9;roule dans la pluripotence des cellules ES peuvent nous aider &#xE0; comprendre comment l&#x26;#39;induction pluripotence est r&#xE9;glement&#xE9;e. Ici, nous passons en revue les progr&#xE8;s r&#xE9;cents dans le domaine de la r&#xE9;glementation sur les cellules souches en se concentrant sur les facteurs de transcription cl&#xE9;s et leur interaction fonctionnelle avec ARN non-codants.

D&#xE9;cryptage de la machinerie sur les cellules souches tant que base pour comprendre le m&#xE9;canisme mol&#xE9;culaire sous-jacent Reprogrammation

Stammzellen bieten faszinierende Aussichten f&uuml;r Biomedizinische Anwendungen durch die Kombination von der F&auml;higkeit, sich selbst zu erneuern und in spezialisierten Zelltypen differenzieren. Seit die erste Isolierung embryonaler (ES) Stammzellen vor etwa 30 Jahren, gab es eine Reihe von bahnbrechenden Entdeckungen, die modernen Biowissenschaften revolutionieren k&ouml;nnen. F&uuml;r eine lange Zeit galten Embryonen oder Keimzellen gewonnenen Zellen als die einzige Quelle der Pluripotenz--ein Dogma, das w&auml;hrend der letzten zehn Jahre in Frage gestellt hat. Mehrere Feststellungen ergeben, dass Zelldifferenzierung aus (Stammzellen) Zellen Reifen nicht in der Tat ein unumkehrbarer Prozess. Die molekularen Mechanismen zugrunde liegenden zellul&auml;re Neuprogrammierung ist bisher schlecht verstanden. Identifizieren, wie Pluripotenz Wartung in ES-Zellen stattfindet kann uns helfen zu verstehen, wie die Pluripotenz Induktion geregelt ist. Hier &uuml;berpr&uuml;fen wir die j&uuml;ngsten Fortschritte auf dem Gebiet der Stammzellen-Verordnung, die konzentriert sich auf wichtige Transkriptionsfaktoren und ihrer funktionalen Wechselwirkungen mit nicht-kodierenden RNAs.

Entschl&uuml;sselung der Stammzell-Maschine als Grundlage f&uuml;r das Verst&auml;ndnis der molekularen Mechanismen zugrunde liegenden Neuprogrammierung.

Le cellule staminali offrono affascinanti prospettive per applicazioni biomediche combinando la capacit&agrave; di rinnovarsi e di differenziarsi in tipi di cellule specializzate. Poich&eacute; il primo isolamento di embrionali (ES) cellule staminali circa 30 anni fa, c&#39;&egrave; stata una serie di scoperte rivoluzionarie che hanno il potenziale per rivoluzionare la scienza della vita moderna. Per lungo tempo, embrioni o cellule germinali derivate si pensiero di essere l&#39;unica fonte di pluripotenza - un dogma che &egrave; stato contestato durante l&#39;ultimo decennio. Diversi ritrovamenti ha rivelato che differenziazione delle cellule da maturare le cellule (staminali) non &egrave; in realt&agrave; un processo irreversibile. Il meccanismo molecolare riprogrammazione cellulare sottostante &egrave; capita male finora. Identificare come la pluripotenza manutenzione avviene in cellule ES pu&ograve; aiutarci a capire come &egrave; regolamentata la pluripotenza induzione. Qui, passiamo in rassegna i recenti progressi nel campo delle cellule staminali regolazione messa a fuoco sui fattori di trascrizione chiave e la loro interazione funzionale con non-coding RNAs.

Decifrando i macchinari delle cellule staminali come base per la comprensione del meccanismo molecolare sottostante riprogrammazione.

&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x81EA;&#x5206;&#x81EA;&#x8EAB;&#x3092;&#x66F4;&#x65B0;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x7279;&#x6B8A;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x306B;&#x5206;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x3001;&#x751F;&#x7269;&#x533B;&#x5B66;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x9B45;&#x60D1;&#x7684;&#x306A;&#x898B;&#x901A;&#x3057;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7D04;30&#x5E74;&#x524D;&#x306B;&#x80DA;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;ES&#x7D30;&#x80DE;&#xFF09;&#x306E;&#x6700;&#x521D;&#x306E;&#x5206;&#x96E2;&#x4EE5;&#x6765;&#x3001;&#x73FE;&#x4EE3;&#x306E;&#x751F;&#x547D;&#x79D1;&#x5B66;&#x306B;&#x9769;&#x547D;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x79D8;&#x3081;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x753B;&#x671F;&#x7684;&#x306A;&#x4E00;&#x9023;&#x306E;&#x767A;&#x898B;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x904E;&#x53BB;10&#x5E74;&#x9593;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x6311;&#x6226;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30C9;&#x30B0;&#x30DE; - &#x9577;&#x3044;&#x9593;&#x3001;&#x80DA;&#x53C8;&#x306F;&#x751F;&#x6B96;&#x7D30;&#x80DE;&#x7531;&#x6765;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x306E;&#x552F;&#x4E00;&#x306E;&#x6E90;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3068;&#x8003;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x77E5;&#x898B;&#x306F;&#x3001;&#x6210;&#x719F;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#xFF08;&#x5E79;&#xFF09;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x5B9F;&#x969B;&#x306B;&#x306F;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x3067;&#x306F;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x200B;&#x200B;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x306A;&#x308B;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x7406;&#x89E3;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x7DAD;&#x6301;&#x306F;&#x3001;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x3067;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x884C;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x304B;&#x3092;&#x8B58;&#x5225;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x898F;&#x5236;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x3092;&#x52A9;&#x3051;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;RNA&#x3067;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x306A;&#x76F8;&#x4E92;&#x4F5C;&#x7528;&#x306B;&#x7126;&#x70B9;&#x3092;&#x5F53;&#x3066;&#x305F;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x5206;&#x91CE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x9032;&#x6B69;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;

&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x68B0;&#x3092;&#x89E3;&#x8AAD;

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&#xBD84;&#xC790; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xAE30;&#xBCF8; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xACC4; &#xD574;&#xB3C5;.

Las c&#xE9;lulas madre ofrecen perspectivas fascinantes para aplicaciones biom&#xE9;dicas mediante la combinaci&#xF3;n de la capacidad de renovarse y diferenciarse en tipos celulares especializados. Desde el primer aislamiento de madre embrionarias (ES) las c&#xE9;lulas de hace unos 30 a&#xF1;os, ha habido una serie de descubrimientos revolucionarios que tienen el potencial de revolucionar la ciencia de la vida moderna. Durante mucho tiempo, los embriones o c&#xE9;lulas derivadas de c&#xE9;lulas germinales se pensaba que eran la &#xFA;nica fuente de pluripotencia - un dogma que ha sido cuestionada durante la &#xFA;ltima d&#xE9;cada. Varios hallazgos revelaron que la diferenciaci&#xF3;n celular a partir de (STEM) las c&#xE9;lulas a las c&#xE9;lulas maduras en realidad no es un proceso irreversible. El mecanismo molecular que subyace a la reprogramaci&#xF3;n celular es poco conocida hasta el momento. Identificar c&#xF3;mo se lleva a cabo el mantenimiento pluripotencia en c&#xE9;lulas madre embrionarias pueden ayudar a entender c&#xF3;mo la inducci&#xF3;n de pluripotencialidad est&#xE1; regulado. En este sentido, revisar los avances recientes en el campo de la regulaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas madre se centra en los factores de transcripci&#xF3;n claves y su interacci&#xF3;n funcional con los ARNs no codificantes.

Descifrar el mecanismo de c&#xE9;lulas madre como una base para comprender el mecanismo molecular subyacente Reprogramaci&#xF3;n

&#x56E0;&#x4E3A;&#x6CA1;&#x6709;&#x80DA;&#x80CE;&#x6216;&#x5375;&#x6BCD;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9700;&#x8981;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; (iPS) &#x7684;&#x751F;&#x6210;&#x5C06;&#x4EE3;&#x8868;&#x5438;&#x5F15;&#x529B;&#x7684;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x75C5;&#x4EBA;&#x5177;&#x4F53;&#xFF0C;&#x63A8;&#x5BFC;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x5173;&#x952E;&#x7684;&#x5B89;&#x5168;&#x95EE;&#x9898;&#x5FC5;&#x987B;&#x4E88;&#x4EE5;&#x89E3;&#x51B3;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4FBF;&#x521B;&#x5EFA;&#x4EBA;&#x7C7B; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x4E0A;&#x5F88;&#x6709;&#x7528;&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x53E4;&#x5178;&#x7684; iPS &#x6280;&#x672F;&#x6D89;&#x53CA;&#x6C38;&#x4E45;&#x7684;&#x9057;&#x4F20;&#x64CD;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x80BF;&#x7624;&#x5F62;&#x6210;&#x3002;&#x63D0;&#x51FA;&#x4E86;&#x5404;&#x79CD;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7B56;&#x7565;&#x6765;&#x5B8C;&#x6210;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4F7F;&#x7528;&#x975E;&#x96C6;&#x6210;&#x65E0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x75C5;&#x6BD2;&#x3001; &#x7F51;&#x7AD9;&#x5177;&#x4F53;&#x628A;&#x8981;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#xFF0C;&#x6216; RNA &#x8F6C;&#x67D3;&#x540E;&#x7684;&#x6D88;&#x8D39;&#x7A0E;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x3002;&#x86CB;&#x767D;&#x8F6C;&#x5BFC;&#xFF0C;&#x5373;&#x76F4;&#x63A5;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7684;&#x5177;&#x6709;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x7528;&#x4E8E;&#x751F;&#x6210; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5DF2;&#x88AB;&#x53D1;&#x73B0;&#x6709;&#x5F88;&#x4F4E;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x3002;&#x4E8B;&#x5B9E;&#x4E0A;&#xFF0C;&#x6210;&#x529F;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x5DEE;&#x548C;&#x6EB6;&#x89E3;&#x5EA6;&#x7684;&#x91CD;&#x7EC4;&#x56E0;&#x7D20;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x7A77;&#x4EBA; endosomal &#x91CA;&#x653E;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x53D7;&#x5230;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6700;&#x8FD1;&#x62A5;&#x9053;&#x7684;&#x4EE3;&#x7EC6;&#x80DE; permeant &#x7248;&#x672C;&#x7684; Oct4&#x3001; Sox2 &#x548C;&#x663E;&#x793A;&#x90FD;&#x53EF;&#x4EE5;&#x819C;&#x5C42;&#x5177;&#x6709;&#x751F;&#x7269;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4EA4;&#x4ED8;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x63A2;&#x7D22;&#x589E;&#x5F3A;&#x578B;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x4EA4;&#x8D27;&#x6761;&#x4EF6;&#x6210;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x96C7;&#x7528;&#x6761;&#x4EF6;&#x4F18;&#x5316;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BC1;&#x660E; Oct4 &#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x4F20;&#x9012;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4EE3;&#x66FF; Oct4 &#x75C5;&#x6BD2;&#x9AD8;&#x4EA7; iPS &#x63A8;&#x5BFC;&#x6548;&#x679C;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E;&#x56DB;&#x4E2A;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x8702;&#x7FA4;&#x662F;&#x4E25;&#x683C;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x5242;&#x91CF;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C; permeant Oct4 &#x66DD;&#x5149;&#x6301;&#x7EED;&#x65F6;&#x95F4;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x671F;&#x671B;&#x6211;&#x4EEC;&#x8F6C;&#x5BFC;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x8FBE;&#x5230;&#x8FC4;&#x4ECA;&#x6CA1;&#x6709;&#x5B9E;&#x73B0;&#x5BF9;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x63A7;&#x5236;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x6D3B;&#x52A8;&#xFF0C;&#x628A;&#x5B83;&#x53D8;&#x6210;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7F16;&#x7A0B;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x65E0;&#x8F6C;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684; iPS &#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x7684;&#x5B9D;&#x8D35;&#x5DE5;&#x5177;&#x3002;

&#x63A2;&#x7D22;&#x91CD;&#x7EC4; Oct4 &#x86CB;&#x767D;&#x7CBE;&#x5236;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x7F16;&#x7A0B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

The generation of human induced pluripotent stem (iPS) cells would represent an appealing option for the derivation of pluripotent patient-specific cells, as no embryos or oocytes are required. However, crucial safety issues have to be addressed in order to create human iPS cells that are clinically useful, as the classical iPS technique involves permanent genetic manipulation that may result in tumor formation. Various experimental strategies have been suggested to accomplish transgene-free derivation of iPS cells, including the use of non-integrating viruses, site specific recombinases to excise transgenes after reprogramming, or RNA transfection. Protein transduction, i.e. the direct delivery of biologically active proteins into cells, has been employed to generate iPS cells but has been found to have very low efficiency. In fact, success of protein transduction is limited by poor stability and solubility of recombinant factors, as well as their poor endosomal release. We recently reported the generation of cell-permeant versions of Oct4 and Sox2 and showed that both can be delivered intracellularly as biologically active proteins. Here we explore conditions for enhanced protein stabilization and delivery into somatic cells. Employing optimized conditions, we demonstrate that Oct4 protein delivery can substitute for Oct4 virus, yielding iPS derivation efficacy comparable to a four virus transduction protocol. The number of colonies is strictly dependent on the dose and duration of cell-permeant Oct4 exposure. We expect our transduction system to reach a thus far unattained level of control over reprogramming activity, turning it into a valuable tool for both the analysis of the reprogramming mechanism and the derivation of transgene-free iPS cells.

Exploring refined conditions for reprogramming cells by recombinant Oct4 protein.

La g&#xE9;n&#xE9;ration de l&#x26;#39;homme induites par cellules souches pluripotentes (iPS) repr&#xE9;senterait une option int&#xE9;ressante pour le calcul de pluripotentes sp&#xE9;cifiques &#xE0; un patient des cellules, comme aucun des embryons ou des ovocytes sont n&#xE9;cessaires. Toutefois, les questions cruciales de s&#xE9;curit&#xE9; doivent &#xEA;tre abord&#xE9;s afin de cr&#xE9;er de cellules iPS humaines qui sont cliniquement utiles, comme la technique classique consiste &#xE0; iPS permanente de manipulation g&#xE9;n&#xE9;tique qui peut entra&#xEE;ner la formation de tumeurs. Diverses strat&#xE9;gies exp&#xE9;rimentales ont &#xE9;t&#xE9; propos&#xE9;es pour accomplir transg&#xE8;ne sans d&#xE9;rivation de cellules iPS, y compris l&#x26;#39;utilisation de la non-int&#xE9;gration des virus, des recombinases site sp&#xE9;cifique pour les transg&#xE8;nes d&#x26;#39;accise apr&#xE8;s la reprogrammation, ou transfection d&#x26;#39;ARN. Transduction de la prot&#xE9;ine, c&#x26;#39;est &#xE0; dire la prestation directe de prot&#xE9;ines biologiquement actives dans les cellules, a &#xE9;t&#xE9; utilis&#xE9; pour g&#xE9;n&#xE9;rer des cellules iPS, mais a &#xE9;t&#xE9; trouv&#xE9; pour avoir une efficacit&#xE9; tr&#xE8;s faible. En fait, le succ&#xE8;s de la prot&#xE9;ine de transduction est limit&#xE9;e par une mauvaise stabilit&#xE9; et la solubilit&#xE9; des facteurs recombinants, ainsi que leur lib&#xE9;ration pauvres endosomal. Nous avons r&#xE9;cemment rapport&#xE9; la production de cellules infiltrant les versions de Oct4 et Sox2 et a montr&#xE9; que les deux peuvent &#xEA;tre livr&#xE9;s intracellulaire sous forme de prot&#xE9;ines biologiquement actives. Nous explorons ici les conditions pour la stabilisation des prot&#xE9;ines accrue et la livraison dans les cellules somatiques. Employant des conditions optimis&#xE9;es, nous d&#xE9;montrons que la d&#xE9;livrance de prot&#xE9;ines Oct4 peut se substituer &#xE0; Oct4 virus, ce qui donne une efficacit&#xE9; de d&#xE9;rivation iPS comparable &#xE0; un protocole de transduction du virus quatre ans. Le nombre de colonies est strictement d&#xE9;pendante de la dose et la dur&#xE9;e de la cellule-perm&#xE9;ant exposition Oct4. Nous pr&#xE9;voyons que notre syst&#xE8;me de transduction pour atteindre un niveau jusque-l&#xE0; in&#xE9;gal&#xE9;e de contr&#xF4;le sur l&#x26;#39;activit&#xE9; de reprogrammation, le transformant en un outil pr&#xE9;cieux tant pour l&#x26;#39;analyse du m&#xE9;canisme de la reprogrammation et la d&#xE9;rivation de cellules iPS sans transg&#xE8;ne.

Exploration Conditions raffin&#xE9;s pour les cellules de reprogrammation par la prot&#xE9;ine recombinante Oct4

Die Generation der menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (iPS) w&uuml;rde eine attraktive Option f&uuml;r die Ableitung von pluripotenten patientenspezifische Zellen, darstellen, da keine Embryonen oder Eizellen erforderlich sind. Allerdings haben wichtige Sicherheitsfragen behandelt werden, um menschliche iPS-Zellen zu schaffen, die klinisch n&uuml;tzlich sind, wie die klassische iPS-Technik permanent Genmanipulation beinhaltet, die Tumorbildung f&uuml;hren kann. Verschiedene experimentelle Strategien haben vorgeschlagen worden, um Transgene-freie Ableitung von iPS-Zellen, einschlie&szlig;lich der Verwendung von nicht-Integration zu erreichen Viren, Standort spezifische Recombinases, transgene nach Umprogrammierung oder RNA-Transfektion Verbrauchsteuern. Protein Transduktion, d.h. die direkte Anlieferung der biologisch aktive Proteine in Zellen, noch besch&auml;ftigt waren, iPS-Zellen zu generieren, aber sehr geringe Wirksamkeit besitzen gefunden wurde. In der Tat, ist Erfolg der Protein-Transduktion durch mangelnden Stabilit&auml;t und L&ouml;slichkeit von rekombinanten Faktoren sowie ihre Arme Endosomen Freilassung begrenzt. Wir haben vor kurzem berichtete die Generation der Zelle-permeant Versionen von Oct4 und Sox2 und zeigte, dass sowohl intrazellul&auml;r als biologisch aktive Proteine geliefert werden k&ouml;nnen. Hier erkunden wir die Voraussetzungen f&uuml;r erh&ouml;hte Protein-Stabilisierung und Lieferung in somatischen Zellen. Einsatz optimierte Bedingungen, zeigen wir, dass Oct4 Protein Lieferung kann Ersatz f&uuml;r Oct4 Virus, woraus iPS Ableitung Wirksamkeit vergleichbar mit vier Virus Transduktion Protokoll. Die Anzahl der Kolonien ist streng abh&auml;ngig von der Dosis und Dauer der Zelle-permeant Oct4-Exposition. Wir erwarten, dass unser System Transduktion erreicht ein bisher unerreichter Kontrolle &uuml;ber eine Anpassung der Aktivit&auml;t, verwandelte sie in ein wertvolles Werkzeug f&uuml;r sowohl die Analyse der Mechanismus der Neuprogrammierung und die Ableitung des Transgens-freie iPS-Zellen.

Erkunden raffinierte Bedingungen f&uuml;r die Neuprogrammierung der Zellen durch rekombinante Oct4 Protein.

La generazione di cellule staminali (iPS) umane pluripotenti indotte rappresenterebbe un&#39;opzione attraente per la derivazione di cellule pluripotenti paziente-specifici, come nessun embrioni o ovociti sono richiesti. Tuttavia, questioni di sicurezza cruciali devono essere affrontate al fine di creare le cellule umane iPS che sono clinicamente utili, come la tecnica classica iPS coinvolge manipolazione genetica permanente che pu&ograve; causare formazione di tumore. Varie strategie sperimentali sono state suggerite per compire derivazione transgene-libero delle cellule iPS, compreso l&#39;uso di non-integrazione virus, ricombinasi specifico sito di accise transgeni dopo la riprogrammazione o la transfezione di RNA. Trasduzione della proteina, cio&egrave; la consegna diretta di proteine biologicamente attive nelle cellule, &egrave; stato impiegato per generare le cellule iPS, ma &egrave; stato trovato per avere rendimento molto basso. Infatti, successo di trasduzione della proteina &egrave; limitata dalla scarsa stabilit&agrave; e solubilit&agrave; di fattori ricombinanti, come pure loro rilascio poveri endosomal. Recentemente abbiamo segnalato la generazione delle cellule-permeant versioni di Oct4 e Sox2 e ha mostrato che entrambe possono essere consegnate intracellularly come proteine biologicamente attive. Qui esploriamo le condizioni per la stabilizzazione proteica avanzata e consegna in cellule somatiche. Impiegando condizioni ottimizzate, dimostreremo che consegna proteina Oct4 pu&ograve; sostituire per Oct4 virus, producendo efficacia di derivazione iPS paragonabile a un protocollo di trasduzione quattro virus. Il numero di colonie &egrave; strettamente dipendente dalla dose e la durata dell&#39;esposizione di Oct4 permeant-cell. Ci aspettiamo che il nostro sistema di trasduzione di raggiungere un livello di controllo sulla riprogrammazione attivit&agrave;, finora superiore trasformandolo in uno strumento prezioso per entrambi l&#39;analisi del meccanismo di riprogrammazione e la derivazione di cellule iPS transgene-libero.

Esplorare condizioni raffinate per la riprogrammazione delle cellule di Oct4 proteina ricombinante.

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3;&#x5BC6;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x60C5;&#x5831;&#x4F1D;&#x9054;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x304C;&#x518D;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x306E;iPS&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x8CB4;&#x91CD;&#x306A;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x56DE;&#x3059;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x3092;&#x5236;&#x5FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x3053;&#x308C;&#x307E;&#x3067;&#x672A;&#x5230;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306B;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x671F;&#x5F85;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x7D44;&#x63DB;&#x3048;Oct4&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3067;&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x6D17;&#x7DF4;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x63A2;&#x308B;

&#xBC30;&#xC544; &#xB610;&#xB294; oocytes &#xD544;&#xC694;&#xB294; &#xC778;&#xAC04; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; (iPS) &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131; pluripotent &#xD658;&#xC790; &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xB798;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xB825;&#xC801;&#xC778; &#xC635;&#xC158;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; &#xAC83; &#xC774;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC548;&#xC804; &#xBB38;&#xC81C;&#xB294; &#xC784;&#xC0C1;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC720;&#xC6A9; &#xD074;&#xB798;&#xC2DD; iPS &#xAE30;&#xC220;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xC885;&#xC591;&#xC758; &#xD615;&#xC131;&#xC5D0; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xC601;&#xAD6C; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC870;&#xC791; &#xC778;&#xAC04; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xD574;&#xACB0; &#xD574;&#xC57C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. -&#xD1B5;&#xD569;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD55C; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xB798; transgene &#xBB34;&#xB8CC;&#xB97C; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC801;&#xC778; &#xC804;&#xB7B5; &#xC81C;&#xC548; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;, &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xD2B9;&#xC815; recombinases transgenes &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;, &#xB610;&#xB294; RNA transfection &#xD6C4; &#xC18C;&#xBE44; &#xC138;&#xB97C;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xB2EC;, &#xC989; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xD65C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC9C1;&#xC811; &#xBC30;&#xB2EC; iPS &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xACE0;&#xC6A9; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xB0AE;&#xC740; &#xD6A8;&#xC728;&#xC744;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0; &#xBC1C;&#xACAC; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC0AC;&#xC2E4;, &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC804;&#xB2EC;&#xC758; &#xC131;&#xACF5; &#xAC00;&#xB09C;&#xD55C; &#xC548;&#xC815;&#xC131; &#xBC0F; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xC694;&#xC18C;&#xC758; &#xC6A9; &#xD574;&#xB3C4; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBD88; &#xC30D; &#xD55C; endosomal &#xCD9C;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xCD5C;&#xADFC; Oct4 &#xBC0F; Sox2 &#xC140; permeant &#xBC84;&#xC804;&#xC758; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xC744; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD558; &#xACE0; &#xBAA8;&#xB450; &#xCE68; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xD65C;&#xC131; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC73C;&#xB85C; &#xC804;&#xB2EC; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC8FC;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCCB4;&#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD5A5;&#xC0C1; &#xB41C; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC548;&#xC815;&#xD654; &#xBC0F; &#xBC30;&#xB2EC; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C;. &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB41C; &#xC870;&#xAC74; &#xACE0;&#xC6A9; &#xC2DC;&#xC5F0; Oct4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC30;&#xB2EC; Oct4 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCCB4;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; iPS &#xD30C;&#xC0DD; &#xD6A8;&#xB2A5; 4 &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC804;&#xB2EC; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC800;&#xC870;&#xD55C;. &#xC2DD;&#xBBFC;&#xC9C0; &#xC218;&#xB294; &#xC5C4;&#xACA9; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xC140; permeant Oct4 &#xB178;&#xCD9C; &#xAE30;&#xAC04;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBD84;&#xC11D; &#xBC0F; transgene &#xBB34;&#xB8CC; iPS &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC720;&#xB798;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xB3C4;&#xAD6C;&#xB85C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBCC0;&#xD658; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xD65C;&#xB3D9;, &#xD1B5;&#xC81C;&#xC758; &#xC9C0;&#xAE08;&#xAE4C;&#xC9C0; unattained &#xC218;&#xC900;&#xC5D0; &#xB3C4;&#xB2EC; &#xAE30;&#xB300; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Oct4 &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC7AC;&#xC870;&#xD569; &#xD558; &#xC5EC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xC81C; &#xB41C; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xD0D0;&#xAD6C;.

La generaci&#xF3;n de humanos madre pluripotentes inducidas (iPS) a las c&#xE9;lulas que representan una opci&#xF3;n atractiva para la derivaci&#xF3;n de pacientes pluripotentes c&#xE9;lulas espec&#xED;ficas, ya que no los embriones u ovocitos son obligatorios. Sin embargo, las cuestiones cruciales de seguridad tienen que ser abordados con el fin de crear las c&#xE9;lulas iPS humanas que son de utilidad cl&#xED;nica, ya que la t&#xE9;cnica cl&#xE1;sica de iPS implica la manipulaci&#xF3;n gen&#xE9;tica permanente que puede resultar en la formaci&#xF3;n de tumores. Diversas estrategias experimentales han sugerido para llevar a cabo libre de transgenes derivaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas iPS, incluyendo el uso de la no integraci&#xF3;n de los virus, recombinasas sitio espec&#xED;fico para los transgenes sobre el consumo despu&#xE9;s de la reprogramaci&#xF3;n o la transfecci&#xF3;n de ARN. Transducci&#xF3;n de prote&#xED;nas, es decir, la entrega directa de prote&#xED;nas biol&#xF3;gicamente activas en las c&#xE9;lulas, se ha empleado para generar c&#xE9;lulas iPS pero se ha encontrado que tienen una eficiencia muy baja. De hecho, el &#xE9;xito de la transducci&#xF3;n de la prote&#xED;na est&#xE1; limitada por una mala estabilidad y solubilidad de los factores recombinantes, as&#xED; como su liberaci&#xF3;n endosomal pobres. Recientemente hemos informado de la generaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas permeables versiones de Oct4 y Sox2 y mostraron que tanto se puede enviar intracelularmente como prote&#xED;nas biol&#xF3;gicamente activas. Aqu&#xED; exploramos las condiciones para una mayor estabilizaci&#xF3;n de la prote&#xED;na y la entrega en las c&#xE9;lulas som&#xE1;ticas. El empleo de condiciones &#xF3;ptimas, nos demuestran que la prote&#xED;na Oct4 la entrega puede sustituir a la Oct4 virus, dando eficacia iPS derivaci&#xF3;n comparable a un protocolo de virus de la transducci&#xF3;n de cuatro. El n&#xFA;mero de colonias es estrictamente dependiente de la dosis y la duraci&#xF3;n de la exposici&#xF3;n de c&#xE9;lulas permeable Oct4. Esperamos que nuestro sistema de transducci&#xF3;n de llegar a un nivel hasta ahora inalcanzado de control sobre la actividad de la nueva programaci&#xF3;n, convirti&#xE9;ndolo en una herramienta valiosa tanto para el an&#xE1;lisis del mecanismo de reprogramaci&#xF3;n y la derivaci&#xF3;n de los transgenes libre de c&#xE9;lulas iPS.

Explorando Condiciones refinados para reprogramar las c&#xE9;lulas de la prote&#xED;na recombinante Oct4

Recent advances have suggested that direct induction of neural stem cells (NSCs) could provide an alternative to derivation from somatic tissues or pluripotent cells. Here we show direct derivation of stably expandable NSCs from mouse fibroblasts through a curtailed version of reprogramming to pluripotency. By constitutively inducing Sox2, Klf4, and c-Myc while strictly limiting Oct4 activity to the initial phase of reprogramming, we generated neurosphere-like colonies that could be expanded for more than 50 passages and do not depend on sustained expression of the reprogramming factors. These induced neural stem cells (iNSCs) uniformly display morphological and molecular features of NSCs, such as the expression of Nestin, Pax6, and Olig2, and have a genome-wide transcriptional profile similar to that of brain-derived NSCs. Moreover, iNSCs can differentiate into neurons, astrocytes, and oligodendrocytes. Our results demonstrate that functional NSCs can be generated from somatic cells by factor-driven induction.

Direct conversion of fibroblasts into stably expandable neural stem cells.

Induced pluripotent stem (iPS) cells represent an attractive option for the derivation of patient-specific pluripotent cells for cell replacement therapies as well as disease modeling. To become clinically meaningful, safe iPS cells need to be generated exhibiting no permanent genetic modifications that are caused by viral integrations of the reprogramming transgenes. Recently, various experimental strategies have been applied to accomplish transgene-free derivation of iPS cells, including the use of nonintegrating viruses, episomal expression, or excision of transgenes after reprogramming by site-specific recombinases or transposases. A straightforward approach to induce reprogramming factors is the direct delivery of either synthetic mRNA or biologically active proteins. We previously reported the generation of cell-permeant versions of Oct4 (Oct4-TAT) and Sox2 (Sox2-TAT) proteins and showed that Oct4-TAT is reprogramming-competent, that is, it can substitute for Oct4-encoding virus. Here, we explore conditions for enhanced Sox2-TAT protein stabilization and functional delivery into somatic cells. We show that cell-permeant Sox2 protein can be stabilized by lipid-rich albumin supplements in serum replacement or low-serum-supplemented media. Employing optimized conditions for protein delivery, we demonstrate that Sox2-TAT protein is able to substitute for viral Sox2. Sox2-piPS cells express pluripotency-associated markers and differentiate into all three germ layers.

Marc Thier

Institute of Reconstructive Neurobiology

University of Bonn

Derivation of Adult Human Fibroblasts and their Direct Conversion into Expandable Neural Progenitor Cells

Marc Thier

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University of Bonn

Derivation of Adult Human Fibroblasts and their Direct Conversion into Expandable Neural Progenitor Cells

Institute of Reconstructive Neurobiology