Name: a simple method for automated solid phase extraction of water samples for immunological analysis of small pollutants
Uploaded: 2016-01-01T14:00:00
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This work was funded by the European Union Seventh Framework Program FP7/2007-2013 under grant agreement no. 265721. The authors thank the RIKILT Institute for Food Safety (NL) for their support in this project.

참고 : 다음 프로토콜은 SPE가 50 % v / V를 메탄올로 C18 흡착제 및 용출 100 ml의 물 샘플에서 수행에 대해 설명합니다. 농축 샘플 (ELISA) 키트를 분석 면역 연결 효소 분석하기 전에 10 % v / V를 메탄올에 도달하기 위해 희석한다. 1. 시약 준비 <ol><li> 물 샘플을 준비 <ol><li> 이전의 임의의 다른 단계에, 0.2 ㎛의 공극 크기의 필터를 각각 100 ml의 물 샘플을 필터링. </li><li> 물의 부피 기...

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	<li>Chang, H. S., Choo, K. H., Choi, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+methods+of+identification,+analysis+and+removal+of+endocrine+disrupting+compounds+(EDCs)+in+water.">The methods of identification, analysis and removal of endocrine disrupting compounds (EDCs) in water.</a> J. Hazard. Matter. 172, 1-12 (2009).</li><li>Azzouz, A., Souhail, B., Ballesteros, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Continuous+solid-phase+extraction+and+gas+chromatography-mass+spectrometry+determination+of+pharmaceuticals+and+hormones+in+water+samples.">Continuous solid-phase extraction and gas chromatography-mass spectrometry determination of pharmaceuticals and hormones in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1217, 2956-2963 (2010).</li><li>Tomsikova, H., Aufartova, J., Solich, P., Novakova, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+sensitivity+analysis+of+female-steroid+hormones+in+environ-mental+samples.">High sensitivity analysis of female-steroid hormones in environ-mental samples.</a> Trends Anal. Chem. 34, 35-58 (2012).</li><li>Ciofi, L., Fibbi, D., Chiuminatto, U., Coppini, E., Checchini, L., Del Bubba, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fully+automated+on-line+solid+phase+extraction+coupled+to+high-performance+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometric+analysis+at+sub-ng/L+levels+of+selected+estrogens+in+surface+water+and+wastewater.">Fully automated on-line solid phase extraction coupled to high-performance liquid chromatography-tandem mass spectrometric analysis at sub-ng/L levels of selected estrogens in surface water and wastewater.</a> J. Chromatogr. A. 1283, 53-61 (2013).</li><li>Robles-Molina, J., Lara-Ortega, F. J., Gilbert-Lopez, B., Garcia-Reyes, J. F., Molina-Diaz, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-residue+method+for+the+determination+of+over+400+priority+and+emerging+pollutants+in+water+and+wastewater+by+solid-phase+extraction+and+liquid+chromatography-time-of-flight+mass+spectrometry.">Multi-residue method for the determination of over 400 priority and emerging pollutants in water and wastewater by solid-phase extraction and liquid chromatography-time-of-flight mass spectrometry.</a> J. Chromatogr. A. 1350, 30-43 (2014).</li><li>Huang, C. H., Sedlak, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+estrogenic+hormones+in+municipal+waste+water+effluent+and+surface+water+using+enzyme-linked+immunosorbent+assay+and+gas+chromatography/tandem+mass+spectrometry.">Analysis of estrogenic hormones in municipal waste water effluent and surface water using enzyme-linked immunosorbent assay and gas chromatography/tandem mass spectrometry.</a> Environ. Toxicol. Chem. 20, 133-139 (2001).</li><li>Hintemann, T., Schneider, C., Sch&#246;ler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Field+study+using+two+immunoassays+for+the+determination+of+estradiol+and+ethinylestradiol+in+the+aquatic+environment.">Field study using two immunoassays for the determination of estradiol and ethinylestradiol in the aquatic environment.</a> Water Res. 40, 2287-2294 (2006).</li><li>Farr&#233;, M., Kuster, M., Brix, R., Rubio, F., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+an+estradiol+enzyme-linked+immunosorbent+assay+kit,+liquid+chromatography-tandem+mass+spectrometry,+and+ultra-performance+liquid+chromatography-quadrupole+time+of+flight+mass+spectrometry+for+part-per-trillion+analysis+of+estrogens+in+water+samples.">Comparative study of an estradiol enzyme-linked immunosorbent assay kit, liquid chromatography-tandem mass spectrometry, and ultra-performance liquid chromatography-quadrupole time of flight mass spectrometry for part-per-trillion analysis of estrogens in water samples.</a> J. Chromatogr. A. 1160, 166-175 (2007).</li><li>Pu, C., Wu, Y. F., Yang, H., Deng, A. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Trace+analysis+of+contraceptive+drug+levonorgestrel+in+waste+water+samples+by+a+newly+developed+indirect+competitive+enzyme-linked+immunosorbent+assay+(ELISA)+coupled+with+solid+phase+extraction.">Trace analysis of contraceptive drug levonorgestrel in waste water samples by a newly developed indirect competitive enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) coupled with solid phase extraction.</a> Anal. Chim. Acta. 628, 73-79 (2008).</li><li>Van Emon, J. M., Gerlach, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+status+report+on+field-portable+immunoassay.">A status report on field-portable immunoassay.</a> Environ. Sci. Technol. 29 (7), 312A-317A (1995).</li><li>Farr&#233;, M., Brix, R., Barcel&#242;, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Screening+water+for+pollutants+using+biological+techniques+under+European+Union+funding+during+the+last+10+years.">Screening water for pollutants using biological techniques under European Union funding during the last 10 years.</a> Trends Anal. Chem. 24 (6), 532-545 (2005).</li><li>Schneider, C., Sch&#246;ler, H. F., Schneider, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+enzyme-linked+immunosorbent+assay+for+ethinylestradiol+using+a+long-chain+biotinylated+EE2+derivative.">A novel enzyme-linked immunosorbent assay for ethinylestradiol using a long-chain biotinylated EE2 derivative.</a> Steroids. 69, 245-253 (2004).</li><li>Heub, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+and+portable+solid+phase+extraction+platform+for+immuno-detection+of+17&#946;-estradiol+in+water.">Automated and portable solid phase extraction platform for immuno-detection of 17&#946;-estradiol in water.</a> J. Chrom. A. 1381, 22-28 (2015).</li><li>Petrovic, M., Eljarrat, E., Lopez de Alda, M. J., Barcelo, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endocrine+disrupting+compounds+and+other+merging+contaminants+in+the+environment:+a+new+survey+on+new+monitoring+strategies+and+occurrence+data.">Endocrine disrupting compounds and other merging contaminants in the environment: a new survey on new monitoring strategies and occurrence data.</a> Anal. Bioanal. Chem. 378, 549-562 (2004).</li><li>Richardson, S. D., Ternes, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Water+analysis:+Emerging+contaminants+and+current+issues.">Water analysis: Emerging contaminants and current issues.</a> Anal. Chem. 86, 2813-2848 (2014).</li></ol>

면역 분석을 사용하여 분석 하였다 물 샘플의 제조를위한 새로운 방법이 제안되었다. 악기가 자동 사용자 친화적 방식으로 고체상 추출을 수행 할 수있다. 종래의 시스템에 주입 물 샘플의 여과는 매우 중요하다. 용액에 존재하는 임의의 미립자는 여전히 잠재적으로 유체 망의 막힘을 일으키고 SPE 칼럼을 방해한다. 다른 중요한 단계는 SPE 칼럼의 제조이다. 열에있는 입자의 ...

샘플은 분석 준비 과정에서 중요한 단계이다. 특히, 매트릭스 효과, 간섭의 감소, 및 분석 물의 농축 제거하여 정확한 결과를 획득하고 검출 하한에 도달하는 데 필요한. 내분비 방해 화합물 (EDCs)은 인해 생물에 대한 자신의 행동에 특별한 관심의 경우에도 환경에서 현재 매우 낮은 수준. 천연 호르몬 17β-에스트라 디올은 유럽 물 기본 지침에 의해 규제되는 우선 순위 물질 목록에 추가 할 수있는 유럽 연합 (EU)의 수질 오염 감시 목록에 현재와 경향이있다. 고체 상 추출 (SPE)는 일반적으로 화학 양 1-5 (크로마토 그래피, 질량 분광 분석) 6-9 및 면역 학적 검출 방법으로, 작은 물 오염 물질의 분석에 적용된다. 후자는 면역이 형식의 대형 다양한에서 사용할 수있는 TA에 고유 한, 환경 모니터링 분야에 대한 관심을 얻었다피검 rget 및 검출 하한에 도달한다. 6, 7, 10, 11, 각종 효소 결합 면역 분석법 (ELISA)은 시판되고 멀티 웰 플레이트에 한 번에 여러 개의 시료를 분석 가능하게한다. 절차는 몇 시간이 걸릴 수있는 연속 반응 단계에있다. 반응의 최종 생성물은 검량선에 기초하여 상기 표적 분자의 농도를 결정하기 위해 광학적으로 검출 할 수있다. 고전 SPE 절차는 용출액의 증발에 의해 흡착 프리 컨디셔닝 (pre-conditioning), 샘플 추출, 세척, 용출 및 농도를 포함한다. 이 추출물을 희석에 사용되는 용제는 검출 방법에 따라 선택된다. 면역 학적 방법에 대해서는, 강하게 유기 용매의 영향에있어서의 감도의 양. 12 회수 및 미리 농도 성능 외에도, 방법은 간단하고 효율적인 비용이 필요하다. procedur의 자동화전자는 인간의 관련 오류를 줄일 수 있습니다. 우리의 이전 연구 13에서 우리는 자동화 된 SPE에 대한 우리의 프로토 타입을 소개하고, 우리의 방법은 해수 시료에서 자연 호르몬 17β-에스트라 디올의 분석에 적용 하였다. 본 동영상으로 우리는 SPE 및 면역 반응에 의해 감지와의 특별한 호환성 기존의 오프라인과 온라인에 비해 우리의 방법의 기술적 인 장점을 강조하고 싶습니다. 우리는 17β-에스트라 디올의 검출 물 샘플에 적용된 프로토콜을 설명한다. SPE는 옥타 데실 실리카 (C18) 흡수제 및 용출 단계가 희석 된 메탄올 행한다 행한다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="609">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Filter membrane 0.2 &#956;m pore size</td>
			<td style="width:107px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">GNWP04700</td>
			<td style="width:167px;">For sample filtration</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Nylon membrane 11 &#956;m pore size</td>
			<td style="width:107px;">Merck Millipore</td>
			<td style="width:119px;">NY1104700</td>
			<td>For SPE column</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Disposable biopsy punch 5 mm</td>
			<td style="width:107px;">Medical Budget</td>
			<td style="width:119px;">39302439</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Nucleodur C18 ec&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Macherey Nagel</td>
			<td style="width:119px;">713550.01</td>
			<td>50 &#956;m particle diameter</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Synthetic sea water</td>
			<td style="width:107px;">Sigma Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">SSWS500-500ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Methanol</td>
			<td style="width:107px;">VWR</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">17beta-estradiol standard</td>
			<td style="width:107px;">Enzo Life Science</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td>300 ng/ml</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">17beta-estradiol ELISA kit&#160;</td>
			<td style="width:107px;">Enzo Life Science</td>
			<td style="width:119px;">ADI-900-008</td>
			<td>96 wells, range 30 - 3000 ng/L</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a simple method for automated solid phase extraction of water samples for immunological analysis of small pollutants

환경 물 샘플의 고체 상 추출 (SPE)을위한 새로운 방법을 제안한다. 개발 된 프로토 타입은 비용 효율적이고 사용자 친화적이며, 신속한 자동화 및 간단한 SPE을 수행 할 수 있습니다. 예비 농축액 낮은 유기 용매 함량, 면역 측정법에 의한 분석과 호환 가능하다. 방법은 100 mL의 물을 샘플에 천연 호르몬 17β-에스트라 디올의 추출 및 미리 농도를 설명한다. 역상 SPE는 옥타 - 실리카 흡착제로 수행되고 용출 메탄올 50 % V / V를 200 μL로 이루어집니다. 용출액은 메탄올의 양을 낮추는 디 물을 첨가하여 희석한다. 수동 SPE 칼럼을 준비한 후, 전체 절차는 1 시간 이내에 자동으로 수행된다. 프로세스의 끝에서, 에스트라 디올 농도 상업용 효소 결합 면역 흡착제 분석법 (ELISA)을 이용하여 측정된다. 100 배 사전 농도를 달성하고 10 %의 V / V에서 메탄올 내용. 분자의 전체 복구1 NG로 달성된다 / L은 드 이온화 및 합성 해수 샘플을 아군.

흡착재 충전부의 재현성이 건조에 의해 평가하고 유리 바이알에 피펫 흡착제 가중치 및 초기 및 사전에도 2. 농도로 나타낸 바와 같이 결과는, 100 mL의 시료에 대해 시험 하였다 주입시의도 1. 재현성에 도시 된 농축 된 샘플은 17β-에스트라위한 상용 ELISA 키트를 사용하여 측정하고,도 3에 도시되어 아군. <p class="jove_content" fo:keep-toget...

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A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants (Video) | JoVE

A protocol for the extraction and pre-concentration of estradiol from water samples by using an automated and miniaturized system is presented.

작은 오염 물질의 면역 학적 분석을위한 물 샘플의 자동화 된 고체상 추출을위한 간단한 방법

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

Research

JoVE Journal

Environment

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Small-scale concentration of viruses (sample volumes 1-10 L, here simulated with spiked 100 ml water samples) is an efficient, cost-effective way to ...

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