Name: isolation of perivascular multipotent precursor cell populations from human cardiac tissue
Uploaded: 2016-10-08T13:00:00
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The authors wish to thank Shonna Johnston, Claire Cryer, Fiona Rossi and Will Ramsay at the University of Edinburgh and Alison Logar and Megan Blanchard at the University of Pittsburgh for their expert assistance with flow cytometry. We also wish to thank Anne Saunderson and Lindsay Mock for their help with obtaining human tissues. Human adult and fetal heart tissue samples were procured with full ethics permission of the NHS Scotland Tayside Committee on Medical Research Ethics and the NHS Lothian Research Ethics Committee (REC08/S1101/1) respectively. This work was supported by grants from the Medical Research Council (BP), British Heart Foundation (BP), Commonwealth of Pennsylvania (BP), Children's Hospital of Pittsburgh (BP), National Institute of Health R01AR49684 (JH) and R21HL083057 (BP), and the Henry J. Mankin Endowed Chair at University of Pittsburgh (JH). JEB was supported by a British Heart Foundation Centre of Research Excellence doctoral training award (RE/08/001/23904). WC was supported in part by an American Heart Association predoctoral fellowship (11PRE7490001).

1. Tratamiento de la Muestra cardiaca humana <ol><li> Asegúrese de que todos los fluidos, contenedores, los instrumentos y el área operativa dedicada son estériles. </li><li> Coloque la muestra de tejido cardíaco (adquiridos por el banco de tejidos, equipo quirúrgico) en el medio de almacenamiento se compone del medio refrigerado por Dulbecco modificado de Eagle (DMEM) que contiene 20% de suero fetal bovino (FBS) y 1% de penicilina-estreptomicina (P / S) en el hielo para el transporte 3. </li><li> Reti...

<ol>
	<li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans.">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science (New York, N.Y.). 324 (5923), 98-102 (2009).</li><li>Laflamme, A., Murry, C. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Heart+regeneration.">Heart regeneration.</a> Nature. 473 (7347), 326-335 (2011).</li><li>Chen, W. C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+myocardial+pericytes:+multipotent+mesodermal+precursors+exhibiting+cardiac+specificity.">Human myocardial pericytes: multipotent mesodermal precursors exhibiting cardiac specificity.</a> Stem cells (Dayton, Ohio). 33 (2), 557-573 (2015).</li><li>Campagnoli, C., Roberts, I. A., Kumar, S., Bennett, P. R., Bellantuono, I., Fisk, N. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+mesenchymal+stem/progenitor+cells+in+human+first-trimester+fetal.">Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal.</a> Blood. 98 (8), 2396-2402 (2001).</li><li>Zuk, P. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adipose+tissue+is+a+source+of+multipotent+stem+cells.">Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells.</a> Molecular biology of the cell. 13 (12), 4279-4295 (2002).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+on+left+ventricular+function+of+intracoronary+transplantation+of+autologous+bone+marrow+mesenchymal+stem+cell+in+patients+with+acute+myocardial+infarction.">Effect on left ventricular function of intracoronary transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cell in patients with acute myocardial infarction.</a> The American journal of cardiology. 94 (1), 92-95 (2004).</li><li>Ringd&#233;n, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+for+treatment+of+therapy-resistant+graft-versus-host+disease.">Mesenchymal stem cells for treatment of therapy-resistant graft-versus-host disease.</a> Transplantation. 81 (10), 1390-1397 (2006).</li><li>Kharaziha, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+liver+function+in+liver+cirrhosis+patients+after+autologous+mesenchymal+stem+cell+injection:+a+phase+I-II+clinical+trial.">Improvement of liver function in liver cirrhosis patients after autologous mesenchymal stem cell injection: a phase I-II clinical trial.</a> European journal of gastroenterology &amp; hepatology. 21 (10), 1199-1205 (2009).</li><li>Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Inflammation+and+tumor+microenvironments:+defining+the+migratory+itinerary+of+mesenchymal+stem+cells.">Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells.</a> Gene therapy. 15 (10), 730-738 (2008).</li><li>Yan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Injured+microenvironment+directly+guides+the+differentiation+of+engrafted+Flk-1(+)+mesenchymal+stem+cell+in+lung.">Injured microenvironment directly guides the differentiation of engrafted Flk-1(+) mesenchymal stem cell in lung.</a> Experimental hematology. 35 (9), 1466-1475 (2007).</li><li>Van Poll, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cell-derived+molecules+directly+modulate+hepatocellular+death+and+regeneration+in+vitro+and+in+vivo.">Mesenchymal stem cell-derived molecules directly modulate hepatocellular death and regeneration in vitro and in vivo.</a> Hepatology (Baltimore, Md.). 47 (5), 1634-1643 (2008).</li><li>Popp, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stem+cells+can+induce+long-term+acceptance+of+solid+organ+allografts+in+synergy+with+low-dose+mycophenolate.">Mesenchymal stem cells can induce long-term acceptance of solid organ allografts in synergy with low-dose mycophenolate.</a> Transplant immunology. 20 (1-2), 55-60 (2008).</li><li>Li, Z., Zhang, C., Weiner, L. P., Zhang, Y., Zhong, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+characterization+of+heterogeneous+mesenchymal+stem+cells+with+single-cell+transcriptomes.">Molecular characterization of heterogeneous mesenchymal stem cells with single-cell transcriptomes.</a> Biotechnology advances. 31 (2), 312-317 (2013).</li><li>Crisan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+perivascular+origin+for+mesenchymal+stem+cells+in+multiple+human+organs.">A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs.</a> Cell stem cell. 3 (3), 301-313 (2008).</li><li>Ozerdem, U., Stallcup, W. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+contribution+of+pericytes+to+angiogenic+sprouting+and+tube+formation.">Early contribution of pericytes to angiogenic sprouting and tube formation.</a> Angiogenesis. 6 (3), 241-249 (2003).</li><li>Rucker, H. K., Wynder, H. J., Thomas, W. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+mechanisms+of+CNS+pericytes.">Cellular mechanisms of CNS pericytes.</a> Brain research bulletin. 51 (5), 363-369 (2000).</li><li>Betsholtz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Insight+into+the+physiological+functions+of+PDGF+through+genetic+studies+in+mice.">Insight into the physiological functions of PDGF through genetic studies in mice.</a> Cytokine &amp; Growth Factor Reviews. 15 (4), 215-228 (2004).</li><li>Gerhardt, H., Betsholtz, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Endothelial-pericyte+interactions+in+angiogenesis.">Endothelial-pericyte interactions in angiogenesis.</a> Cell and tissue research. 314 (1), 15-23 (2003).</li><li>Crisan, M., Chen, C. W., Corselli, M., Andriolo, G., Lazzari, L., P&#233;ault, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perivascular+multipotent+progenitor+cells+in+human+organs.">Perivascular multipotent progenitor cells in human organs.</a> Annals of the New York Academy of Sciences. 1176, 118-123 (2009).</li><li>Kang, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+perivascular+localization+of+mesenchymal+stem+cells+from+mouse+brain.">Isolation and perivascular localization of mesenchymal stem cells from mouse brain.</a> Neurosurgery. 67 (3), 711-720 (2010).</li><li>Chen, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+pericytes+for+ischemic+heart+repair.">Human pericytes for ischemic heart repair.</a> Stem cells (Dayton, Ohio). 31 (2), 305-316 (2013).</li><li>Campagnolo, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+adult+vena+saphena+contains+perivascular+progenitor+cells+endowed+with+clonogenic+and+proangiogenic+potential.">Human adult vena saphena contains perivascular progenitor cells endowed with clonogenic and proangiogenic potential.</a> Circulation. 121 (15), 1735-1745 (2010).</li><li>Katare, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+of+human+pericyte+progenitor+cells+improves+the+repair+of+infarcted+heart+through+activation+of+an+angiogenic+program+involving+micro-RNA-132.">Transplantation of human pericyte progenitor cells improves the repair of infarcted heart through activation of an angiogenic program involving micro-RNA-132.</a> Circulation research. 109 (8), 894-906 (2011).</li><li>Corselli, M., Chen, C. W., Sun, B., Yap, S., Rubin, J. P., P&#233;ault, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Tunica+Adventitia+of+Human+Arteries+and+Veins+As+a+Source+of+Mesenchymal+Stem+Cells.">The Tunica Adventitia of Human Arteries and Veins As a Source of Mesenchymal Stem Cells.</a> Stem Cells and Development. 21 (8), 1299-1308 (2012).</li><li>Crisan, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Purification+and+long-term+culture+of+multipotent+progenitor+cells+affiliated+with+the+walls+of+human+blood+vessels:+myoendothelial+cells+and+pericytes.">Purification and long-term culture of multipotent progenitor cells affiliated with the walls of human blood vessels: myoendothelial cells and pericytes.</a> Methods in cell biology. 86, 295-309 (2008).</li></ol>

aumento de la evidencia apoya una limitada capacidad de regeneración del corazón humano adulto después de la lesión. Identificación y caracterización de células precursoras nativas responsables de tales respuestas regenerativas en los corazones lesionados son fundamentales tanto para la comprensión de los mecanismos y vías de señalización asociadas y el desarrollo de métodos para utilizar estas células terapéuticamente. Protocolos anteriores han descrito el aislamiento de los s...

El corazón ha sido considerado como un órgano de post-mitótico. Sin embargo, estudios recientes han demostrado la presencia de la facturación de los cardiomiocitos limitada en los corazones humanos adultos 1. Las células madre / progenitoras nativas con potencial de diferenciación de los cardiomiocitos también se han identificado dentro del miocardio en roedores adultos y los corazones humanos, incluyendo Sca-1 +, c-kit +, cardioesfera formando, y, más recientemente, las células precursoras perivasculares 2,3. Estas células representan candidatos atractivos para las terapias dirigidas a la mejora cardiaca reparación / regeneración a través de trasplante de células o la estimulación de la proliferación in-situ. Mesenquimales madre / células del estroma (MSC) se han aislado a partir de casi todos los tejidos humanos 4,5 Los ensayos clínicos de las aplicaciones terapéuticas de MSC se han llevado a cabo para varias condiciones patológicas tales como la reparación cardiovascular 6, del injerto contra el anfitrión de la enfermedad 7 </sup&gt;, Y la cirrosis hepática 8. Los efectos beneficiosos se han atribuido a la capacidad de las MSC a: el hogar de los sitios de inflamación 9; diferenciarse en diferentes tipos de células 10; secretar moléculas pro-reparadoras 11; y modular respuestas inmunes del huésped 12. El aislamiento de las MSC se ha basado tradicionalmente en su adhesión preferencial a los sustratos de plástico. Sin embargo, la población resultante de células es típicamente marcadamente heterogénea 13. Mediante el uso de células activadas por fluorescencia (FACS) con una combinación de marcadores de células perivasculares clave, hemos sido capaces de aislar y purificar una población precursor MSC-como multipotentes (CD146 + / CD31 - / CD34 - / CD45 - / CD56 -) a partir de múltiples tejidos humanos, incluyendo adultos músculo esquelético y la grasa blanca 14. poblaciones de células perivasculares en varios tejidos no cardíacos han demostrado tener propiedades madre / células progenitoras unand están siendo investigados para su uso clínico en el ajuste cardiovascular. Pericitos, uno de los más conocidos de los subconjuntos de células perivasculares, son una población heterogénea que juegan varios papeles fisiopatológicos incluidos en el desarrollo de nuevos vasos 15, la regulación de la presión arterial 16, y el mantenimiento de la integridad vascular 17,18. Como se muestra en múltiples tejidos, subconjuntos específicos de pericitos de forma nativa expresan antígenos MSC y sostener sus fenotipos MSC-como en cultivo primario después de la purificación FACS 14. Por otra parte, estas células establemente mantienen sus fenotipos largo plazo dentro de la cultura y exhiben potencial de diferenciación multi-linaje, similar a las MSC 19,20. Estos resultados sugieren que los pericitos son uno de los orígenes de la MSC 14 difícil de alcanzar. El potencial terapéutico de los pericitos se ha demostrado con una reducción en la cicatrización del miocardio y mejorar la función cardíaca después de un trasplante en lesionado por isquemia21 corazones. Recientemente, nos purifica con éxito pericitos del miocardio humano y demostrar sus fenotipos MSC-como múltiple y capacidad (adipogénesis, condrogénesis y osteogénesis) con la ausencia de la miogénesis esquelético 3. Además, los pericitos miocardio exhibieron diferenciales capacidades potenciales y angiogénicos cardiomiogénico en comparación con sus homólogos purificados a partir de otros órganos. Una segunda población de células madre / progenitoras multipotentes perivasculares, la célula de la adventicia, se ha aislado de las venas safena humana sobre la base de la expresión de CD34 positivo 22. Células adventicias venosos han demostrado tener un potencial clonogénico, capacidad de diferenciación mesodérmica y el potencial proangiogénico in vitro. El trasplante de estas células en los corazones lesionados por isquemia de los ratones resultó en una reducción en la fibrosis intersticial, un aumento de la angiogénesis y el flujo sanguíneo miocárdico, la reducción de dil ventricularación, y el aumento de la fracción de eyección cardíaca 23. Curiosamente, se ha demostrado que células adventicias adiposas a perder la expresión de CD34 y regular al alza la expresión de CD146 en cultivo en respuesta al tratamiento angiopoyetina II, lo que sugiere la adopción de un fenotipo de pericitos con la estimulación 24. Dentro del corazón, sin embargo, la población de células de la adventicia todavía no se ha purificado de forma prospectiva por FACS y / o bien caracterizado. Utilizando los procedimientos de aislamiento de células que se describen en las siguientes secciones, actualmente estamos caracterizando células adventicias miocardio e investigar su potencial para aplicaciones regenerativas. Aquí se describe un método para aislar y purificar dos subpoblaciones de células madre / progenitoras perivasculares de miocardio fetal o adulto humano. Este método de aislamiento de células prospectivo permitirá a los investigadores para obtener subconjuntos de células madre / progenitoras perivasculares isogénicas de biopsias cardíacas humanas para estudios comparativos y further explorar su potencial terapéutico en diversas condiciones patológicas cardíacas.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>AbC Anti-mouse Bead Kit</td>
			<td>Molecular Probes</td>
			<td>A-10344</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase I</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17100-017</td>
			<td rowspan="3">Reconstitute powder as required and filter sterilise</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase II</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17101-015</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase IV</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>17104-019</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human CD34-PE</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>555822</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human CD45-APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>557833</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human CD56-PE-Cy7</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>557747</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human CD144-PerCP-Cy5.5</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>561566</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>anti-human CD146-AF647</td>
			<td>AbD Serotec</td>
			<td>MCA2141A647</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EGM2-BulletKit</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>CC-3162</td>
			<td>For collection of cells and culture until adhered</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM, high glucose, GlutaMAX without sodium pyruvate</td>
			<td>ThermoFischer Scientific</td>
			<td>10566-016</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum</td>
			<td>ThermoFischer Scientific</td>
			<td>10500-064</td>
			<td>Freeze in aliquots and keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>G1393</td>
			<td>Dilute with sterile water</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG1k-PE</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>559320</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG1k-APC-Cy7</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>557873</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG1k-PE-Cy7</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>557872</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG1k-PerCP-Cy5.5</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td>561566</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IgG1k-647</td>
			<td>AbD Serotec</td>
			<td>MCA1209A647</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse serum</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>M5905</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraffin Film - Parafilm M</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P7793</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin-Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15979-063</td>
			<td>Freeze in aliquots and keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate buffered saline pH 7.4</td>
			<td>ThermoFischer Scientific</td>
			<td>10010-023</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>R7757</td>
			<td>Keep sterile</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypan Blue Solution</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>T8154</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin-EDTA 0.5%(10X)</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>15400-054</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>&#160;FACSARIA FUSION</td>
			<td>BD Pharmingen</td>
			<td></td>
			<td>Fluorescence Activated Cell Sorter</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

isolation of perivascular multipotent precursor cell populations from human cardiac tissue

Multipotent mesenchymal stem/stromal cells (MSC) were conventionally isolated, through their plastic adherence, from primary tissue digests whilst their anatomical tissue location remained unclear. The recent discovery of defined perivascular and MSC cell marker expression by perivascular cells in multiple tissues by our group and other researchers has provided an opportunity to prospectively isolate and purify specific homogenous subpopulations of multipotent perivascular precursor cells. We have previously demonstrated the use of fluorescent activated cell sorting (FACS) to purify microvascular CD146+CD34- pericytes and vascular CD34+CD146- adventitial cells from human skeletal muscle. Herein we describe a method to simultaneously isolate these two perivascular cell subsets from human myocardium by FACS, based on the expression of a defined set of cell surface markers for positive and negative selections. This method thus makes available two specific subpopulations of multipotent cardiac MSC-like precursor cells for use in basic research and/or therapeutic investigations.

Las células individuales se distinguen de escombros y dobletes sobre la base de dispersión frontal y lateral distribuciones. Las células vivas fueron identificados por su incapacidad para asumir el tinte DAPI. La estrategia gating fue elegido sobre la base de etiquetado de control de isotipo de este vivo, la disociación de células enteras cardíaca (Figura 1). A partir de las células vivas, las células CD45 + fueron cerrada primero, seguido de CD56 <sup...

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Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue

tejido cardíaco humano alberga poblaciones de células precursoras multipotentes perivasculares que pueden ser adecuados para la regeneración miocárdica. La técnica descrita aquí permite el aislamiento simultáneo y purificación de dos poblaciones de células estromales multipotentes asociados con vasos nativos sangre, es decir CD146 + CD34 - pericitos y CD34 + CD146 - células adventicias, desde el miocardio humano.

Aislamiento de Perivasculares Multipotentes poblaciones de células precursoras de Cardíaca Tejido humano

Multipotent mesenchymal stem/stromal cells (MSC) were conventionally isolated, through their plastic adherence, from primary tissue digests whilst their ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Isolation and Quantitative Immunocytochemical Characterization of Primary Myogenic Cells and Fibroblasts from Human Skeletal Muscle

Aislamiento y Caracterización cuantitativa inmunocitoquímica de células miogénicas Primarias y fibroblastos de músculo esquelético humano

The repair and regeneration of skeletal muscle requires the action of satellite cells, which are the resident muscle stem cells. These can be isolated ...

Investigación

Biología del Desarrollo

Assaying Blood Cell Populations of the Drosophila melanogaster Larva

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