Name: determination of the relative cell surface and total expression of recombinant ion channels using flow cytometry
Uploaded: 2016-09-28T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Determination of the Relative Cell Surface and Total Expression of Recombinant Ion Channels Using Flow Cytometry at JoVE.com

We thank Mr. Serge S&#233;n&#233;chal and Dr. Jacques Thibodeau for sharing their expertise and granting us access to their flow cytometry and cell sorting platform. This work was completed with the operating grant 130256 from the Canadian Institutes of Health Research, a grant-in-aid from the Canadian Heart and Stroke Foundation, and support from the "Fondation de l'Institut de Cardiologie de Montr&#233;al" to L.P.

1. Çifte Etiketli DNA yapıları <ol><li> Mevkiye yönelik mutagenez (Şekil 3B) 20 ile D676 ve R677 ile Ca V α2δ1 hücre dışı bağlayıcısı HA epitopu (YPYDVPDYA) yerleştirin. İleri primer gccggattatgcgGGAAAACTCCAAACAACC kullanın ve astar acatcatacggataTCAATAAATTCATTGAAATTTAAAAGAAATTC Ters. </li><li> SacI ve SalI siteleri (Şekil 3B) 20 arasında mCherry N-terminine kaynaştırılmış proteini ifade etmek için tasarlanan bir memeli pmCher...

<ol>
	<li>Delisle, B. P., Anson, B. D., Rajamani, S., January, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biology+of+Cardiac+Arrhythmias:+Ion+Channel+Protein+Trafficking.">Biology of Cardiac Arrhythmias: Ion Channel Protein Trafficking.</a> Circ. Res. 94, 1418-1428 (2004).</li><li>Birault, V., Solari, R., Hanrahan, J., Thomas, D. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correctors+of+the+basic+trafficking+defect+of+the+mutant+F508del-CFTR+that+causes+cystic+fibrosis.">Correctors of the basic trafficking defect of the mutant F508del-CFTR that causes cystic fibrosis.</a> Curr Opin Chem Biol. 17, 353-360 (2013).</li><li>Balijepalli, S. Y., Anderson, C. L., Lin, E. C., January, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rescue+of+Mutated+Cardiac+Ion+Channels+in+Inherited+Arrhythmia+Syndromes.">Rescue of Mutated Cardiac Ion Channels in Inherited Arrhythmia Syndromes.</a> J. Cardiovas Pharm. 56, 113-122 (2010).</li><li>Gargus, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unraveling+Monogenic+Channelopathies+and+Their+Implications+for+Complex+Polygenic+Disease.">Unraveling Monogenic Channelopathies and Their Implications for Complex Polygenic Disease.</a> Am. J. Hum. Genet. 72, 785-803 (2003).</li><li>Abriel, H., Zaklyazminskaya, E. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cardiac+channelopathies:+Genetic+and+molecular+mechanisms.">Cardiac channelopathies: Genetic and molecular mechanisms.</a> Gene. 517, 1-11 (2013).</li><li>Behr, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sudden+arrhythmic+death+syndrome:+familial+evaluation+identifies+inheritable+heart+disease+in+the+majority+of+families.">Sudden arrhythmic death syndrome: familial evaluation identifies inheritable heart disease in the majority of families.</a> Eur Heart J. 29, 1670-1680 (2008).</li><li>Catterall, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+regulation+of+voltage-gated+Ca2++channels.">Structure and regulation of voltage-gated Ca2+ channels.</a> Annu. Rev. Cell Dev.Biol. 16, 521-555 (2000).</li><li>Peterson, B. Z., DeMaria, C. D., Adelman, J. P., Yue, D. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calmodulin+is+the+Ca2++sensor+for+Ca2++-dependent+inactivation+of+L-+type+calcium+channels.">Calmodulin is the Ca2+ sensor for Ca2+ -dependent inactivation of L- type calcium channels.</a> Neuron. 22, 549-558 (1999).</li><li>Dolphin, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Calcium+channel+diversity:+multiple+roles+of+calcium+channel+subunits.">Calcium channel diversity: multiple roles of calcium channel subunits.</a> Curr.Opin.Neurobiol. 19, 237-244 (2009).</li><li>Dai, S., Hall, D. D., Hell, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Supramolecular+assemblies+and+localized+regulation+of+voltage-gated+ion+channels.">Supramolecular assemblies and localized regulation of voltage-gated ion channels.</a> Physiol Rev. 89, 411-452 (2009).</li><li>Gao, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+and+subcellular+localization+of+the+subunits+of+L-type+calcium+channels+and+adenylyl+cyclase+in+cardiac+myocytes.">Identification and subcellular localization of the subunits of L-type calcium channels and adenylyl cyclase in cardiac myocytes.</a> J. Biol. Chem. 272, 19401-19407 (1997).</li><li>Carl, S. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunolocalization+of+sarcolemmal+dihydropyridine+receptor+and+sarcoplasmic+reticular+triadin+and+ryanodine+receptor+in+rabbit+ventricle+and+atrium.">Immunolocalization of sarcolemmal dihydropyridine receptor and sarcoplasmic reticular triadin and ryanodine receptor in rabbit ventricle and atrium.</a> J. Cell Biol. 129, 673-682 (1995).</li><li>Abriel, H., Rougier, J. S., Jalife, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ion+Channel+Macromolecular+Complexes+in+Cardiomyocytes:+Roles+in+Sudden+Cardiac+Death.">Ion Channel Macromolecular Complexes in Cardiomyocytes: Roles in Sudden Cardiac Death.</a> Circ. Res. 116, 1971-1988 (2015).</li><li>Bourdin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Molecular+Determinants+of+the+Cavb-induced+Plasma+Membrane+Targeting+of+the+Cav1.2+Channel.">Molecular Determinants of the Cavb-induced Plasma Membrane Targeting of the Cav1.2 Channel.</a> J. Biol. Chem. 285, 22853-22863 (2010).</li><li>Raybaud, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+the+GX9GX3G+Motif+in+the+Gating+of+High+Voltage-activated+Calcium+Channels.">The Role of the GX9GX3G Motif in the Gating of High Voltage-activated Calcium Channels.</a> J. Biol. Chem. 281, 39424-39436 (2006).</li><li>Burashnikov, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mutations+in+the+cardiac+L-type+calcium+channel+associated+with+inherited+J-wave+syndromes+and+sudden+cardiac+death.">Mutations in the cardiac L-type calcium channel associated with inherited J-wave syndromes and sudden cardiac death.</a> Heart Rhythm. 7, 1872-1882 (2010).</li><li>Hennessey, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+CACNA1C+Variant+Associated+with+Reduced+Voltage-Dependent+Inactivation,+Increased+Cav1.2+Channel+Window+Current,+and+Arrhythmogenesis.">A CACNA1C Variant Associated with Reduced Voltage-Dependent Inactivation, Increased Cav1.2 Channel Window Current, and Arrhythmogenesis.</a> PLoS ONE. 9, e106982 (2014).</li><li>Adan, A., Alizada, G., Kiraz, Y., Baran, Y., Nalbant, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Flow+cytometry:+basic+principles+and+applications.">Flow cytometry: basic principles and applications.</a> Crit Rev Biotechnol. , 1-14 (2016).</li><li>Graham, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Coulter+Principle:+Foundation+of+an+Industry.">The Coulter Principle: Foundation of an Industry.</a> J. Lab. Autom. 8, 72-81 (2003).</li><li>Baumgarth, N., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+practical+approach+to+multicolor+flow+cytometry+for+immunophenotyping.">A practical approach to multicolor flow cytometry for immunophenotyping.</a> J. Immunol. Methods. 243, 77-97 (2000).</li><li>Rothe, G., Sack, U., Tarnok, A., Rothe, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Cellular Diagnostics. Basics, Methods and Clinical Applications of Flow Cytometry. , 53-88 (2009).</li><li>Bourdin, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+Characterization+of+Cavalpha2delta+Mutations+Associated+with+Sudden+Cardiac+Death.">Functional Characterization of Cavalpha2delta Mutations Associated with Sudden Cardiac Death.</a> J. Biol. Chem. 290, 2854-2869 (2015).</li><li>Tetreault, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+glycosylation+sites+essential+for+surface+expression+of+the+Cavalpha2delta1+subunit+and+modulation+of+the+cardiac+Cav1.2+channel+activity.">Identification of glycosylation sites essential for surface expression of the Cavalpha2delta1 subunit and modulation of the cardiac Cav1.2 channel activity.</a> J. Biol. Chem. 291, 4826-4843 (2016).</li><li>Senatore, A., Boone, A. N., Spafford, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimized+Transfection+Strategy+for+Expression+and+Electrophysiological+Recording+of+Recombinant+Voltage-Gated+Ion+Channels+in+HEK-293T+Cells.">Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells.</a> J Vis Exp. (47), (2011).</li><li>Herzenberg, L. A., Tung, J., Moore, W. A., Herzenberg, L. A., Parks, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Interpreting+flow+cytometry+data:+a+guide+for+the+perplexed.">Interpreting flow cytometry data: a guide for the perplexed.</a> Nat.Immunol. 7, 681-685 (2006).</li><li>Shakeri, B., Bourdin, B., Demers-Giroux, P. O., Sauve, R., Parent, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quartet+of+Leucine+residues+in+the+Guanylate+Kinase+domain+of+Cavbeta+determines+the+plasma+membrane+density+of+the+Cav2.3+channel.">A quartet of Leucine residues in the Guanylate Kinase domain of Cavbeta determines the plasma membrane density of the Cav2.3 channel.</a> J Biol Chem. 287, 32835-32847 (2012).</li><li>Morton, R. A., Baptista-Hon, D. T., Hales, T. G., Lovinger, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Agonist-+and+antagonist-induced+up-regulation+of+surface+5-HT3A+receptors.">Agonist- and antagonist-induced up-regulation of surface 5-HT3A receptors.</a> Br. J. Pharmacol. 172, 4066-4077 (2015).</li><li>Hoffmann, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+labeling+of+tetracysteine-tagged+proteins+in+intact+cells.">Fluorescent labeling of tetracysteine-tagged proteins in intact cells.</a> Nat. Protocols. 5, 1666-1677 (2010).</li><li>Cockcroft, C. J., Gamper, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Ion Channels: Methods and Protocols. , 233-241 (2013).</li><li>Gonzalez-Gutierrez, G., Miranda-Laferte, E., Neely, A., Hidalgo, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Src+Homology+3+Domain+of+the+beta-Subunit+of+Voltage-gated+Calcium+Channels+Promotes+Endocytosis+via+Dynamin+Interaction.">The Src Homology 3 Domain of the beta-Subunit of Voltage-gated Calcium Channels Promotes Endocytosis via Dynamin Interaction.</a> J. Biol.Chem. 282, 2156-2162 (2007).</li><li>Galizzi, J. P., Borsotto, M., Barhanin, J., Fosset, M., Lazdunski, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+and+photoaffinity+labeling+of+receptor+sites+for+the+Calcium+channel+inhibitors+d-cis-diltiazem,+(+/-)-bepridil,+desmethoxyverapamil,+and+(+)-PN+200-110+in+skeletal+muscle+transverse+tubule+membranes.">Characterization and photoaffinity labeling of receptor sites for the Calcium channel inhibitors d-cis-diltiazem, (+/-)-bepridil, desmethoxyverapamil, and (+)-PN 200-110 in skeletal muscle transverse tubule membranes.</a> J. Biol.Chem. 261, 1393-1397 (1986).</li><li>Bezanilla, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+voltage+sensor+in+voltage-dependent+ion+channels.">The voltage sensor in voltage-dependent ion channels.</a> Physiol.Rev. 80, 555-592 (2000).</li><li>Sigworth, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+variance+of+sodium+current+fluctuations+at+the+node+of+Ranvier.">The variance of sodium current fluctuations at the node of Ranvier.</a> J Physiol. 307, 97-129 (1980).</li><li>Bailey, M. A., Grabe, M., Devor, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+PCMBS-dependent+modification+of+KCa3.1+channel+gating.">Characterization of the PCMBS-dependent modification of KCa3.1 channel gating.</a> J. Gen. Physiol. 136, 367-387 (2010).</li><li>Fletcher, P. A., Scriven, D. R., Schulson, M. N., Moore, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multi-Image+Colocalization+and+Its+Statistical+Significance.">Multi-Image Colocalization and Its Statistical Significance.</a> Biophys. J. 99, 1996-2005 (2010).</li><li>Lizotte, E., Tremblay, A., Allen, B. G., Fiset, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+subcellular+protein+fractions+from+mouse+heart.">Isolation and characterization of subcellular protein fractions from mouse heart.</a> Anal. Biochem. 345, 47-54 (2005).</li><li>Mattheyses, A. L., Simon, S. M., Rappoport, J. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+with+total+internal+reflection+fluorescence+microscopy+for+the+cell+biologist.">Imaging with total internal reflection fluorescence microscopy for the cell biologist.</a> J. Cell Sci. 123, 3621-3628 (2010).</li><li>Yamamura, H., Suzuki, Y., Imaizumi, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=New+light+on+ion+channel+imaging+by+total+internal+reflection+fluorescence+(TIRF)+microscopy.">New light on ion channel imaging by total internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy.</a> J. Pharmacol. Sci. 128, 1-7 (2015).</li><li>Wible, B. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=HERG-Lite-R:+A+novel+comprehensive+high-throughput+screen+for+drug-induced+hERG+risk.">HERG-Lite-R: A novel comprehensive high-throughput screen for drug-induced hERG risk.</a> J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 52, 136-145 (2005).</li><li>Wilde, A. A. M., Brugada, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Phenotypical+Manifestations+of+Mutations+in+the+Genes+Encoding+Subunits+of+the+Cardiac+Sodium+Channel.">Phenotypical Manifestations of Mutations in the Genes Encoding Subunits of the Cardiac Sodium Channel.</a> Circ. Res. 108, 884-887 (2011).</li><li>Milano, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sudden+Cardiac+Arrest+and+Rare+Genetic+Variants+in+the+Community.">Sudden Cardiac Arrest and Rare Genetic Variants in the Community.</a> Circ Cardiovasc Genet. , (2016).</li><li>Schnell, U., Dijk, F., Sjollema, K. A., Giepmans, B. N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunolabeling+artifacts+and+the+need+for+live-cell+imaging.">Immunolabeling artifacts and the need for live-cell imaging.</a> Nat. Meth. 9, 152-158 (2012).</li></ol>

Bu akış sitometri tabanlı deney başarılı Voltaj geçitli kalsiyum kanalları 14,22,26 gözenek oluşturucu etiketli-flüoresan ve ilgili alt birimlerin göre toplam ve hücre yüzeyi seviyelerinin ölçümü uygulanmıştır. Genetik değişimin etkisini araştıran en iyi şekilde kullanılır ve böylece etiketli-floresan etiketli doğal tipte yapının iç floresan yoğunluğu floresan etiketli etiketlenmemiş yapının floresan yoğunluğu daha büyük 100 kat, en az 10 olması gerekir olduğu . Bu ...

Bu çalışma, mevcut akış sitometrisi teknolojisi kullanılarak rekombinant hücrelerde eksprese iyon kanalları gibi zar proteinlerinin nispi hücre yüzey ekspresyonunu bildirmek için güvenilir bir tahlil içerir. İyon kanalları, hücre zarından iyonların akışını yolluk elektrik sinyallerini kontrol etmek için sorumlu olan gözenek oluşturan zar proteinlerdir. Bu, aktivasyon mekanizması, doğa ve lokalize gözenek transit iyon türü seçicilik göre sınıflandırılır. Hücre ve doku düzeylerinde, iyon kanalları aracılığıyla makroskopik iyon akıları biyofiziksel (yolluk ve nüfuz), biyokimyasal (fosforilasyon), ve biyogenezine (sentez, glikosilasyon, insan ticareti ve bozulma) özelliklerinin 1 ürünüdür. Bu işlemlerin her biri, iyon kanallarının her tür için benzersiz olan ve iyon kanalının fizyolojik rolü yerine getirmek için optimize edilmiştir. Sonuç olarak, bir ile bu ince ayarlanmış işlemlerin herhangi değişikliklerkalıtsal ya da çoğu zaman &quot;kanal bozukluğu&quot; olarak ifade edilen bir genetik modifikasyon, hücre homeostazının için zararlı olabilir. Hücre yüzeyinde iyon kanallarının &quot;doğru&quot; miktarda teslim hücre homeostazında kritik olduğunu vurgulamak önemlidir. Hatta küçük artışlar (kazanç fonksiyon-) ve iyon kanal aktivitesinin küçük düşüşler (zarar fonksiyon-) bir ömür boyunca ciddi bir patoloji neden olma potansiyeli var. Olgun iyon kanallarının hücre yüzey teslim Kusur kistik fibrozis (CFTR iyon kanalı) 2 ve uzun QT sendromu şeklinde (kardiyak potasyum kanalları) 3 kardiyak aritmiler gibi birçok kanalopatiler, önemli bir belirleyicisidir. Kanalopatiler kardiyak ani ölüm 4 ile ilişkilidir. 2,000-1: Bireysel 5 başına 3,000 ve ani aritmik kardiyak ölüm ca yaklaşık yarısından sorumlu olan tüm kardiyak kanalopatiler mevcut dünya çapında yaygınlık en az 1 olduğu düşünülmektedirses 6. Kalp voltaj bağımlı sodyum-, potasyum-disfonksiyon ve kalsiyum seçici iyon kanalları bu süreçte önemli bir rol oynadığı bilinmektedir. L-tipi Ca V 1.2 voltaj bağımlı kalsiyum kanal senkronize kalp kas kasılmasını başlatmak için gereklidir. Kalp L-tipi Ca V 1.2 kanallı yardımcı alt birimden 7-12 α2δ1 ana gözenek oluşturucu Ca V α1 alt birimi ve Ca Vss ve Ca V oluşan çoklu bir alt birim protein kompleksidir. Bu alt birimleri kalp 13 normal elektrik fonksiyonunu desteklemek için gerekli olan arasındaki yardımcı alt birimlerin tam tamamlayıcı plazma membranında fonksiyonel Ca V 1.2 kanal ve dinamik etkileşimleri üretmek için gerekli olduğunu unutmayın. Ca Vss Ca V hücre yüzey ifadesi bir kovalent olmayan nanomolar hidrofobik etkileşim 14 ile 1.2 kanal teşvik etmektedir. Ca V α2δ1 altbirim wi Eş-ifadesiinci Ca V ß-bağlı Ca V α1 pik akımı ifade (5 ila 10 kat) uyarır ve daha olumsuz gerilimlerde kanal aktivasyonunu teşvik etmektedir. Kazanç fonksiyon-Ca V 1.2 L-tipi Ca V 1.2 kanal oluşturan üç ana alt birimden nokta mutasyonları bir dizi ise uzun QT sendromu 15 olarak adlandırılan ventriküler aritmi bir form ile ilişkili olan gözenek oluşturucu alt biriminin mutasyonlar kısa QT sendromu formunda 16,17 aritmi muzdarip hastalarda tespit edilmiştir. İyon kanalları biyokimyasal bakış açısı (protein kimyası) incelenmiştir veya bu tamamlayıcı yaklaşımlar kullanılarak sık sık elektrofizyolojik araçları (akım üreten makineler) kullanılarak olabilir membran proteinlerdir. Elektrofizyoloji, özellikle bütün hücre patch-klemp olarak, iyon kanalları 15 işlevini aydınlatmak için uygun bir yaklaşımdır ama onların biyofizik değişiklikler protein kaçakçılığı değişiklik çözemezseözellikleri. Protein kimyası, ancak çoğu zaman daha küçük çözünür proteinler göre büyük zar proteinlerinin, nispeten düşük ekspresyonuna kullanımı sınırlıdır. floresan okuma kullanarak Sağlam yüksek verimli yöntemleri özellikle iyon kanallarının hücre yüzeyinde ifade değişikliklerini neden protein biyogenezine kusurları gidermek için geliştirilmesi gerekmektedir. Flow sitometri, hücre sayımı, sıralama, biyomarkır tespiti ve protein mühendisliği 18 kullanılan bir biyofiziksel teknolojidir. Canlı hücreler ya da parçacıkların bir numunesi çözeltisi bir akış sitometresinde enjekte edildiğinde, hücreler makinenin tespit sistemi (Şekil 1) problanabilir tek bir akış halinde sıralanır. 1956 19 üretilen alet sitometresi ilk akış tek bir parametre tespit ama modern akış sitometrelerinde birden lazerler ve 30&#39;dan fazla floresan parametrelerinin 20,21 algılanmasına izin floresan dedektörleri var.Filtreler ve aynalar (emisyon optik) şiddetine orantılı olarak ışık dönüştürmek bir elektronik ağ (fotodiyot ve dedektörler) hücrelerin ışık yayılımı veya floresan ışık yönlendirir. Dijital veri özel yazılım kullanılarak analiz edilmektedir ve birincil çıkış nokta arsa 21 olarak görüntülenir. <img alt="Şekil 1" src="/files/ftp_upload/54732/54732fig1.jpg" /> Şekil 1:. Akış biyofiziksel prensipleri sitometrisi sıralama tek hücre, bir veya daha fazla lazer sorgulama noktaları arasında taşır kılıf sıvısı akımı içinde yüksek basınç altında bir ağızlıktan itilir. ışık ışını geçirerek hücreleri tarafından saptırılır ve ileri doğrultuda (ileri dağılım, hem FCS) içinde toplanır ışık hücre büyüklüğü ile orantılı bir sinyal içine ışık dönüştüren bir fotodiyot gönderilir. Işık ayrıca lazer yolu 90 ° açıyla toplanmış ve dedektörler (de denir fotoçoğaltıcılar (PMT)) gönderilir.heyecan fluorochromes hücresinde mevcut ise, bu ışık hücreleri içinde ayrıntı gösterir yana saçılım sinyali (SSC) saptanmasına izin dikroik aynalar ve floresan emisyonu yoluyla yönlendirilir. Üç dedektörleri (Yeşil, Sarı ve Kırmızı) farklı fluorochromes eş zamanlı algılama sağlayan, farklı dalga boyu bant geçiren filtreler ile temsil edilmektedir. Farklı sinyaller harici bilgisayar tarafından sayısallaştırılmış ve hücrelerin özelliklerini ölçmek için analiz edilecektir veri dönüştürülür. <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54732/54732fig1large.jpg" target="_blank">Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a> Akış sitometrelerinde yüksek verimlilik kapasitesi rekombinant yabani tip ve ticareti-eksik voltaj bağımlı L-tipi Ca V 1.2 kanalları ve canlı hücrelerde ilişkili alt birimleri göreli membran ifadesini ölçmek için istismar edilmiştir. cDNA co oluştururproteinler için Ding çift eş zamanlı olarak geçirgen olmayan bir floresan konjuge antikoru ve yapısal olarak floresan boylu bir intra-ile tespit edilebilir bir hücre dışı floresan olmayan epitopu taşıdığı etiketlendi. Her iki C-terminal sonra eklenen proteinin hücre dışı bir döngüde yerleştirilmiş hücre-dışı epitop, ve hücre içi flüorofor, protein ile çevrilir. Bu deney serisinde, Ca V α2δ1 proteini içsel hücre içi florofor gibi anti-HA ve mCherry konjüge edilmiş bir hücre dışı hemagglutinin (HA) epitop geçirimsiz FITC (floresein izotiyosiyanat) tarafından tespit edilen (YPYDVPDYA) ifade etmek için tasarlanmış edildi. MCherry-Ca-V α2δ1 HA-etiketli proteinin nispi hücre yüzey ifadesi seviyesini belirlemek için, füzyon proteinini eksprese eden rekombinant hücreler transfeksiyondan sonra hasat ve FITC ile konjüge edilmiş bir fare monoklonal anti-HA epitopu etiketi Antibod ile boyanmıştıry (Şekil 2). FITC Dolayısıyla biyolojik fonksiyonuna müdahale etmek için olası değildir enzim muhabir önemli ölçüde daha küçük olan ve bir organik flüoresan bileşiktir. TSA-201cells aşırı eksprese mCherry- Ca V α2δ1-HA, iki boyutlu araziler 22 FITC floresan ve MCherry floresanın belirgin bir 3-günlük bir artış sağlar. HA epitopunun proteinin hücre-dışı kısmına yerleştirilir olduğu göz önüne alındığında, FITC floresan yoğunluğu sağlam hücrelerin varlığında elde edilen HA-etiketli protein, hücre yüzeyi ekspresyonu göreli indeksi göstermektedir. yapıları HA epitopunun erişilebilirlik sistematik hücre permeabilization sonra FITC sinyali ölçerek doğrulanır. FITC için göreli floresan yoğunlukları göreceli floresan değerleri fo için niteliksel karşılaştırılabilir permeabilize hücrelerde tahmin beri bu önlem de normalize toplam protein ifadesini doğrulayacak hizmetr MCherry permeabilize ve non-permeabilize koşullar 22,23 altında ölçülür. Içsel floresans spektrumu permeabilization sonra daha yüksek değerlere doğru kaydırılır olduğunu ancak kontrol yapı ile karşılaştırıldığında olarak rapor ediliyor tek değer floresan değişiklik olduğuna dikkat etmek önemlidir. Test yapıları için floresan göreli değişiklikler her fluorofor (mCherry veya FITC) için ΔMean Floresan Yoğunluğu (ΔMFI) değerleri kullanılarak hesaplanmıştır. Deneyler florofor bağlı antikor iç floresan deneysel varyasyon sınırlamak için aynı şartlar altında ifade kontrol yapısı floresan yoğunluğunun test yapısı göreceli olarak floresans yoğunluğunu ölçmek için tasarlanmıştır. İki zarı proteinleri başarıyla bu testi kullanılarak incelenmiştir: L-tipi voltaj bağımlı kalsiyum kanal Ca V 1.2 14,22 ve farklı bir seride gözenek oluşturucu alt birimDeneyler, hücre dışı yardımcı Ca V α2δ1 alt birim 22,23. Aşağıdaki protokol 1.2 kanallı kontrol koşulları altında ve iyon kanalının sonrası modifikasyon etkileyen mutasyonların sonrasında kalp L-tipi Ca V Ca V α2δ1 alt biriminin hücre yüzey ekspresyonunu belirlemek için kullanılmıştır. Standart deney koşullarında, FITC floresan hücre yüzeyi MCherry-Ca-V α2δ1-HA proteinleri (referans 22, Şekil 5) için kodlama yapan cDNA ifadesi ile yarı-doğrusal artar. <img alt="şekil 2" src="/files/ftp_upload/54732/54732fig2.jpg" /> Şekil 2:. Deney protokolünde akım sitometri toplam ve membran etiketleme şematik gösterimi şeması gerekli ana adımlardan bazıları fl rekombinant iyon kanallarının göreli total ve hücre yüzey ifadesi ölçmek için özetliyorow sitometri. Hücreler (1) TSA-201 hücrelerinde çift etiketli yapım MCherry-Ca-V α2δ1-HA transfekte edilmiş ve önce veya geçirgenliği sonra boyanır (2). (3) çok değişkenli analiz için (4). Sitometresi multiparameter veri akımı elde edilir <a href="http://ecsource.jove.com/files/ftp_upload/54732/54732fig2large.jpg" target="_blank">, bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.</a>

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="763">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Q5 Site-Directed Mutagenesis Kit</td>
			<td style="width:143px;">New England Biolabs</td>
			<td style="width:123px;">E0554S</td>
			<td style="width:281px;">Can be substitute with QuickChange site-directed mutagenesis Kit (Agilent, #200523).</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tubes 1,5 mL</td>
			<td style="width:143px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:123px;">72-690-001</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Tubes 15 mL&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:123px;">&#160;62-554-002</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Disposable graduated Tranfer Pipets&#160;</td>
			<td style="width:143px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">160001-192&#160;</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">100-mm culture dish</td>
			<td style="width:143px;">Corning</td>
			<td style="width:123px;">430167</td>
			<td style="width:281px;">For standard culture of HEKT cells.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">35-mm culture dish</td>
			<td style="width:143px;">Falcon</td>
			<td style="width:123px;">353001</td>
			<td style="width:281px;">For standard culture of HEKT cells.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Serological pipette 1 ml</td>
			<td style="width:143px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:123px;">86.1251.001</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Serological pipette 5 ml</td>
			<td style="width:143px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:123px;">86.1253.001</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Serological pipette 10 ml</td>
			<td style="width:143px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:123px;">86.1254.001</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Serological pipette 25ml</td>
			<td style="width:143px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:123px;">86.1285.001</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dulbecco&#39;s high-glucose medium</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">12100-046</td>
			<td style="width:281px;">Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Fetal Bovine Serum, qualified, heat inactivated, US origin</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">16140-071</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">15140-122</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Lipofectamine 2000&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">11668-019</td>
			<td style="width:281px;">For liposomal transfection. Can be substituted with calcium phosphate transfection.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Opti-MEM I Reduced Serum Medium</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">31985-070</td>
			<td style="width:281px;">Warm in 37&#176;C water bath before use.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Trypsin-EDTA (1X) 0.05%, phenol red</td>
			<td style="width:143px;">Life Technologies</td>
			<td style="width:123px;">25300-062</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1.5 mL microtubes</td>
			<td style="width:143px;">Sarstedt</td>
			<td style="width:123px;">72.690.001</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">&#160;Phosphate Buffered Saline 1X</td>
			<td style="width:143px;">Fisher</td>
			<td style="width:123px;">BP661-10</td>
			<td style="width:281px;">Can be &#34;home-made&#34;.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">Anti-HA FITC conjugated antibody</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">H7411</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:216px;">IgG1&#8722;FITC Isotype Control antibody</td>
			<td style="width:143px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">F6397</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="61" rowspan="2" style="height:61px;width:216px;">BD Cytofix/Cytoperm Fixation/Permeabilization Solution Kit</td>
			<td style="width:143px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">554714</td>
			<td style="width:281px;">Fixation/Permeabilization. Permeabilization/Wash solution, store at 4 &#176;C.</td>
		</tr>
		<tr height="41">
			<td height="41" style="height:41px;width:143px;"></td>
			<td style="width:123px;"></td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Hemacytometer</td>
			<td style="width:143px;">Fisher</td>
			<td style="width:123px;">49105161</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trypan Blue</td>
			<td style="width:143px;">Fisher</td>
			<td style="width:123px;">15250061</td>
			<td style="width:281px;">To access cell viability.</td>
		</tr>
		<tr height="48">
			<td height="48" style="height:48px;width:216px;">Refrigerated Microcentrifuge, 5430R</td>
			<td style="width:143px;">Eppendorf&#160;</td>
			<td style="width:123px;">A14H172200</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:216px;">Forma Steri-Cycle CO2 Incubator</td>
			<td style="width:143px;">Fisher</td>
			<td style="width:123px;">370</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Laboratory Platform Rocker</td>
			<td style="width:143px;">Fisher</td>
			<td style="width:123px;">545034</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Water Bath</td>
			<td style="width:143px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">89032-216</td>
			<td style="width:281px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">BD FACSARIA III&#160;</td>
			<td style="width:143px;">BD Biosciences</td>
			<td style="width:123px;">648282</td>
			<td style="width:281px;">Flow cytometer.</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FlowJo Software v10</td>
			<td style="width:143px;">FlowJo</td>
			<td style="width:123px;">FlowJo v10 Dongle</td>
			<td style="width:281px;">For data analysis.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

determination of the relative cell surface and total expression of recombinant ion channels using flow cytometry

Inherited or de novo mutations in cation-selective channels may lead to sudden cardiac death. Alteration in the plasma membrane trafficking of these multi-spanning transmembrane proteins, with or without change in channel gating, is often postulated to contribute significantly in this process. It has thus become critical to develop a method to quantify the change of the relative cell surface expression of cardiac ion channels on a large scale. Herein, a detailed protocol is provided to determine the relative total and cell surface expression of cardiac L-type calcium channels CaV1.2 and membrane-associated subunits in tsA-201 cells using two-color fluorescent cytometry assays. Compared with other microscopy-based or immunoblotting-based qualitative methods, flow cytometry experiments are fast, reproducible, and large-volume assays that deliver quantifiable end-points on large samples of live cells (ranging from 104 to 106 cells) with similar cellular characteristics in a single flow. Constructs were designed to constitutively express mCherry at the intracellular C-terminus (thus allowing a rapid assessment of the total protein expression) and express an extracellular-facing hemagglutinin (HA) epitope to estimate the cell surface expression of membrane proteins using an anti-HA fluorescence conjugated antibody. To avoid false negative, experiments were also conducted in permeabilized cells to confirm the accessibility and proper expression of the HA epitope. The detailed procedure provides: (1) design of tagged DNA (deoxyribonucleic acid) constructs, (2) lipid-mediated transfection of constructs in tsA-201 cells, (3) culture, harvest, and staining of non-permeabilized and permeabilized cells, and (4) acquisition and analysis of fluorescent signals. Additionally, the basic principles of flow cytometry are explained and the experimental design, including the choice of fluorophores, titration of the HA antibody and control experiments, is thoroughly discussed. This specific approach offers objective relative quantification of the total and cell surface expression of ion channels that can be extended to study ion pumps and plasma membrane transporters.

Bu makalede, tahlilinde sitometri iki renkli akımı ile TSA-201cells olarak eksprese edilen rekombinant iyon kanallarının toplam hücre yüzeyi ölçmek için güvenilir bir protokol açıklamaktadır. Bir örnek olarak, görece hücre yüzeyi ve total protein sentezleme Ca V α2δ1subunit için ölçülmüştür. Tahlilinde sitometri iki renkli akış gerçekleştirmek için, Ca V α2δ1 iki kat, bir anti-HA FITC ile konjüge edilmiş antikor ve bir kurucu flüo...

Watch this Scientific Journal Video about Determination of the Relative Cell Surface and Total Expression of Recombinant Ion Channels Using Flow Cytometry at JoVE.com

Determination of the Relative Cell Surface and Total Expression of Recombinant Ion Channels Using Flow Cytometry

Kalıtsal kardiyak aritmiler genellikle bir veya daha fazla iyon kanallarının yüzey teslim değiştiren mutasyonlar neden olur. Burada, TSA-201 hücrelerinde eksprese edilen rekombinant iyon kanallarının göreli ve toplam hücre yüzeyi protein ekspresyonunun bir ölçümünü sağlamak için tahliller flow sitometri uyum sağlar.

Akım Sitometri Kullanımı rekombinant İyon Kanallarının göreli Hücre Yüzey ve toplam İfade tayini

Inherited or de novo mutations in cation-selective channels may lead to sudden cardiac death. Alteration in the plasma membrane trafficking of these ...

Research

JoVE Journal

Biology

RNA Extraction from Neuroprecursor Cells Using the Bio-Rad Total RNA Kit

Bio-Rad Total RNA Kiti Kullanarak Neuroprecursor Hücreler RNA Ekstraksiyon

Patch Clamp Recording of Ion Channels Expressed in  Xenopus Oocytes

Xenopus Oosit ifade İyon Kanalları Patch Kelepçe Kaydı

Since its development by Sakmann and Neher 1, 2, the patch clamp has become established as an extremely useful technique for electrophysiological ...

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Expression of Recombinant Proteins in the Methylotrophic Yeast Pichia pastoris

Rekombinant Proteinlerin Metilotropik maya İfade Pichia pastoris</em

Protein expression in the microbial eukaryotic host Pichia pastoris offers the possibility to generate high amounts of recombinant protein in a fast and ...

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

Patch Clamp and Perfusion Techniques for Studying Ion Channels Expressed in Xenopus oocytes

İyon Kanalları incelenmesi için yama Kelepçe ve Perfüzyon Teknikleri cinsinden ifade edilir Xenopus Oosit

The protocol presented here is designed to study the activation of the large conductance, voltage- and Ca2+-activated K+ (BK) channels. The protocol may ...

Optimized Transfection Strategy for Expression and Electrophysiological Recording of Recombinant Voltage-Gated Ion Channels in HEK-293T Cells

İfade ve HEK-293T Hücreler Rekombinant Gerilim Gated İyon Kanalları Elektrofizyolojik Kayıt için optimize edilmiş Transfeksiyon Strateji

The in vitro expression and electrophysiological recording of recombinant voltage-gated ion channels in cultured human embryonic kidney cells (HEK-293T) ...

Flow Cytometry Purification of Mouse Meiotic Cells

Fare Mayotik Hücreler Sitometrisi Arıtma

The heterogeneous nature of cell types in the testis and the absence of meiotic cell culture models have been significant hurdles to the study of the ...

Assessment of GFP Expression and Viability Using the Tali Image-Based Cytometer

Tali Görüntü Tabanlı Sitometre kullanarak GFP İfade ve Canlılık Değerlendirilmesi

Single-cell and population information are commonly obtained either by flow cytometry or fluorescence microscopy. However, these two methods provide ...

Avidity-based Extracellular Interaction Screening (AVEXIS) for the Scalable Detection of Low-affinity Extracellular Receptor-Ligand Interactions

Avidity-based Extracellular Interaction Screening AVEXIS for the Scalable Detection of Low-affinity Extracellular Receptor-Ligand Interactions

Düşük afiniteli Ekstrasellüler Reseptör-ligand Etkileşimlerinin Ölçeklenebilir Algılama için Avidite tabanlı Ekstrasellüler Etkileşim Gösterimi (AVEXIS)

Extracellular protein:protein interactions between secreted or membrane-tethered proteins are critical for both initiating intercellular communication and ...

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Flow Cytometry-based Purification of S. cerevisiae Zygotes

Akış Sitometri tabanlı Arıtma<em&gt; S. cerevisiae</em&gt; Zigot

Zygotes are essential intermediates between haploid and diploid states in the life cycle of many organisms, including yeast (Figure 1) 1. S. cerevisiae ...