Name: an hs-mrm assay for the quantification of host-cell proteins in protein biopharmaceuticals by liquid chromatography ion mobility qtof mass spectrometry
Uploaded: 2018-04-17T12:30:00
Duration: 11 min 9 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry at JoV

الكتاب يود أن يشكر مالين ليزلي وتوني كاتلين من شركة المياه لإعداد الرقم 6 المخطوطة.

<ol>
	<li>Doneanu, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+host-cell+proteins+in+biotherapeutic+proteins+by+comprehensive+online+two-dimensional+liquid+chromatography/mass+spectrometry.">Analysis of host-cell proteins in biotherapeutic proteins by comprehensive online two-dimensional liquid chromatography/mass spectrometry.</a> MAbs. 4, 24-44 (2012).</li><li>Schenauer, M. R., Flynn, G. C., Goetze, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+host-cell+protein+impurities+in+biotherapeutics+using+mass+spectrometry.">Identification of host-cell protein impurities in biotherapeutics using mass spectrometry.</a> Anal Biochem. 428, 150-157 (2012).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+tracking+of+host-cell+proteins+during+monoclonal+antibody+purifications+using+mass+spectrometry.">Comprehensive tracking of host-cell proteins during monoclonal antibody purifications using mass spectrometry.</a> MAbs. 6, 659-670 (2014).</li><li>Farrell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+host-cell+protein+analysis+using+two-dimensional+data+independent+LC-MS(E).">Quantitative host-cell protein analysis using two-dimensional data independent LC-MS(E).</a> Anal Chem. 87, 9186-9193 (2015).</li><li>Doneanu, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+detection+of+low-abundance+host+cell+protein+impurities+in+high-purity+monoclonal+antibodies+down+to+1+ppm+using+ion+mobility+mass+spectrometry+coupled+with+multidimensional+liquid+chromatography.">Enhanced detection of low-abundance host cell protein impurities in high-purity monoclonal antibodies down to 1 ppm using ion mobility mass spectrometry coupled with multidimensional liquid chromatography.</a> Anal Chem. 87, 10283-10291 (2015).</li><li>Doneanu, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+identification+and+quantification+of+host+cell+proteins+(HCPs)+in+biotherapeutics+using+liquid+chromatography+mass+spectrometry.">Improved identification and quantification of host cell proteins (HCPs) in biotherapeutics using liquid chromatography mass spectrometry.</a> Technologies for therapeutic monoclonal antibody characterization, vol. 3: Defining the next generation of analytical and biophysical techniques. , 357-393 (2015).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+co-elution+of+host-cell+proteins+with+monoclonal+antibodies+during+protein+A+purification.">Characterization of the co-elution of host-cell proteins with monoclonal antibodies during protein A purification.</a> Biotechnol Prog. 32, 708-717 (2016).</li><li>Reisinger, V., Toll, H., Mayer, R. E., Visser, J., Wolschin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mass+spectrometry+based+approach+to+host+cell+protein+identification+and+its+application+in+a+comparatibility+exercise.">A mass spectrometry based approach to host cell protein identification and its application in a comparatibility exercise.</a> Anal Biochem. , 1-6 (2014).</li><li>Madsen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+the+complete+characterization+of+host-cell+proteins+in+biotherapeutics+via+affinity+depletions,+LC/MS/MS+and+multivariate+analysis.">Toward the complete characterization of host-cell proteins in biotherapeutics via affinity depletions, LC/MS/MS and multivariate analysis.</a> MAbs. 7, 1128-1137 (2015).</li><li>Giles, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+a+trevelling+wave-based+radio-frequency-only+stacked+ring+ion+guide.">Applications of a trevelling wave-based radio-frequency-only stacked ring ion guide.</a> Rapid Commun Mass Spectrom. 18, 2401-2414 (2004).</li><li>Anderson, V., Hunter, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+mass+spectrometric+multiple+reaction+monitoring+assays+for+major+plasma+proteins.">Quantitative mass spectrometric multiple reaction monitoring assays for major plasma proteins.</a> Mol Cell Proteomics. 5, 573-588 (2006).</li><li>Lange, V., Picotti, P., Domon, B., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selected+reaction+monitoring+for+quantitative+proteomics:+a+tutorial.">Selected reaction monitoring for quantitative proteomics: a tutorial.</a> Mol Syst Biol. 4, 1-14 (2008).</li><li>Picotti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+generation+of+selected+reaction-monitoring+assays+for+proteins+and+proteomes.">High-throughput generation of selected reaction-monitoring assays for proteins and proteomes.</a> Nat Methods. 7, 43-46 (2010).</li><li>Zhao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+proteins+using+peptide+immunoaffinity+enrichment+coupled+with+mass+spectrometry.">Quantification of proteins using peptide immunoaffinity enrichment coupled with mass spectrometry.</a> J Vis Exp. (53), (2011).</li><li>Liebler, D. C., Zimmerman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+quantitation+of+proteins+by+mass+spectrometry.">Targeted quantitation of proteins by mass spectrometry.</a> Biochemistry. 52, 3797-3806 (2013).</li><li>Manes, N. P., Mann, J. M., Nita-Lazar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selected+reaction+monitoring+mass+spectrometry+for+absolute+protein+quantification.">Selected reaction monitoring mass spectrometry for absolute protein quantification.</a> J Vis Exp. (102), (2015).</li><li>Ebhardt, H. A., Sabido, E., Huttenhain, R., Collins, B., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Range+of+protein+detection+by+selected/multiple+reaction+monitoring+mass+spectrometry+in+an+unfractioned+human+cell+culture+lysate.">Range of protein detection by selected/multiple reaction monitoring mass spectrometry in an unfractioned human cell culture lysate.</a> Proteomics. 12, 1185-1193 (2012).</li><li>Picotti, P., Bodenmiller, B., Mueller, L. N., Domon, B., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+dynamic+range+proteome+analysis+of+S.+cerevisiae+by+targetted+proteomics.">Full dynamic range proteome analysis of S. cerevisiae by targetted proteomics.</a> Cell. 138, 795-806 (2009).</li><li>Sherman, J., McKay, M. J., Ashman, K., Molloy, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+specific+is+my+SRM:+the+issue+of+precursor+and+product+ion+reductancy.">How specific is my SRM: the issue of precursor and product ion reductancy.</a> Proteomics. 9, 1120-1123 (2009).</li><li>Abbatiello, S. E., Mani, D. R., Keshishian, H., Carr, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+detection+of+innacurate+and+imprecise+transitions+in+peptide+quantification+by+multiple+reaction+monitoring+mass+spectrometry.">Automated detection of innacurate and imprecise transitions in peptide quantification by multiple reaction monitoring mass spectrometry.</a> Clin Chem. 56, 291-305 (2010).</li><li>Rost, H., Malmstrom, L., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+computational+tool+to+detect+and+avoid+redundancy+in+selected+reaction+monitoring.">A computational tool to detect and avoid redundancy in selected reaction monitoring.</a> Mol Cell Proteomics. 11, 540-549 (2012).</li><li>Bao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+correction+of+interference+in+SRM+analysis.">Detection and correction of interference in SRM analysis.</a> Methods. 61, 299-303 (2013).</li><li>Maclean, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+collision+energy+optimization+on+the+measurement+of+peptides+by+selected+reaction+monitoring+(SRM)+mass+spectrometry.">Effect of collision energy optimization on the measurement of peptides by selected reaction monitoring (SRM) mass spectrometry.</a> Anal Chem. 82, 10116-10124 (2010).</li><li>Mbasu, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+quadrupole+and+time-of-flight+mass+spectrometry+for+peptide+MRM+based+translational+reserch+analysis.">Advances in quadrupole and time-of-flight mass spectrometry for peptide MRM based translational reserch analysis.</a> Proteomics. 16, 2206-2220 (2016).</li></ol>

جميع المؤلفين هم موظفون في شركة المياه، وهو منتج للعديد من الكواشف والأدوات المستخدمة في هذه المقالة.

عالية الدقة (Rs > 20,000) تستخدم الطيف الكتلي بشكل روتيني لتوصيف الهيكلية للبروتينات العلاجية على مجموعة متنوعة من المنصات الصك. على النقيض من ذلك، تحديد مقدار البروتين المستندة إلى MS عادة يؤديها SRM/إليه الرصد والإبلاغ على دقة منخفضة (Rs ~ 1,000) جنبا إلى جنب الرباعي الشامل مطيافات استخدام التوقيع الببتيدات الناتجة عن الانقسام الانزيمية للبروتينات11،12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23-كما لا يمكن حل فصل الكروماتوغرافي أحادية البعد الكامل خلائط الببتيد المعقدة التي تنتجها الهضم الأنزيمي، شطف المشارك الببتيد أمر شائع، وحتى في حالة خلاصة البروتين وحيد. يمكن أن تتأثر للنبذ البروتين معقدة جداً (مثلاً، للتحديد الكمي للتجهيز 1-100 من الأطراف المتعاقدة السامية حضور خلفية الببتيد الغنية التي تنتجها البروتينات العلاجية)، وحساسية، ودقة أو الخطي SRM/إليه الرصد والإبلاغ بالانزيم التدخل.
وقد فحوصات SRM/الآلية الانتقائية الأحادي البعد، والاعتماد فقط على الجمع بين الجماهير السلائف/بلغة "فريدة من نوعها". ولهذا السبب، تفشل هذه الاختبارات في الحالات عند تغيير الخلفية الببتيد بشكل غير متوقع (مثلاً للعينات الصيدلانية البيولوجية الحصول عليها من إجراءات تنقية مختلفة). للتغلب على هذه القيود، فإننا نقترح هنا مقايسة (HS) الآلية انتقائية عالية نفذت في أيون تمكين التنقل الرباعي عالية الدقة وقت طيران (قطوف) هجين شامل مطياف (للرسم التخطيطي الصك، انظر الشكل 6).
الصك يفصل على سلائف ببتيد الفائدة من السلائف الأخرى الببتيد التينج المشترك (التدخل) في الخلية التنقل أيون ويعزل المغلف كامل النظائر من السلائف في الرباعي وشظايا أنه مع م ثابتة في خلية الاصطدام. كما تم تعزيز الإشارات التي تنتجها، بلغة الببتيد الأكثر وفرة بضبط تردد دافع (تعزيز الهدف)، الذي يدفع بشكل انتقائي المناطق ذات الاهتمام الجماهيري في الأنبوب الرحلة، بدلاً من أيونات كافة، كما هو الحال مع فحص كامل. الببتيد الكمي تتم باستخدام إشارات عالية--مرض التصلب العصبي المتعدد-القرار (Rs ~ 30,000) التي تنتجها هذه الشظايا أيون. مقارنة مع فحوصات SRM/إليه الرصد والإبلاغ، والمقايسة HS-الآلية يقدم اثنين من مستويات إضافية من الانتقائية: واحدة يتم توفيرها من قبل فصل أيون السلائف-مستوى التنقل، في حين تقدم الثاني بالقرار الجماعي المتزايد من محلل TOF. النتائج الناجمة عن هذه التحسينات الانتقائية مرئية في تشروماتوجرامس HS-الآلية المعروضة في الشكل 7، وخالية من التدخلات عبر ثلاثة أوامر من حجم.
خلافا لفحوصات SRM/إليه الرصد والإبلاغ، وهناك العديد من المعلمات التي يمكن تعديلها لتحسين فحوصات HS-الآلية: الإطار RT حول السلائف الببتيد (عادة تعيين في 0.2 دقيقة)، نافذة العزلة الرباعي (دا 4)، الإطار الزمني الانجراف المحيطة السلائف (± FWHM الذروة السلائف من موبيلوجرام أيون المقابلة)، وحل مرض التصلب العصبي المتعدد أيون يفتت (20,000-40,000). فحوصات HS-الآلية حساسة جداً: أدنى مبلغ الكشف لكل الببتيدات بو 1 فيمتومولي في عمود (أو 0.1 نانومتر من حيث تركيز الببتيد). عند النظر في الببتيد ميغاواط (انظر الجدول 1 لدقة موس)، تم الكشف عن المبلغ في العمود أمر pg 1-2، بينما يتم تحميل العمود بمبلغ أعلى بكثير (2 ميكروغرام) من الببتيدات الخلفية من هضم الإنسان والمحيط الحيوي.
بالنظر في الوزن الجزيئي للبروتين بو كامل طول (97.2 كاتشين) التي تستمد منها الببتيدات ارتفعت، التحليل قادراً على الكشف عن 50 جزءا من المليون شوائب البروتين حضور أيونات الخلفية وفرة عالية. الحدود الدنيا للكشف عن (5-10 جزء في المليون) قابلة للوزن الجزيئي أقل الأطراف المتعاقدة السامية (كاتشين 10-20). ويغطي المقايسة ثلاثة أوامر من حجم (كما هو موضح في المنحنيات المعايرة من الشكل 8)، مما يعني أنه يمكن قياس الأطراف المتعاقدة السامية في النطاق 1 1,000 جزء في المليون. أيضا، إمكانية تكرار نتائج لفحوصات HS-الآلية، يتضح في الجدول 3، تطابق جيد جداً مع إمكانية تكرار نتائج لفحوصات SRM/الآلية جزيء صغير، مع ذروة منطقة رسدس أفضل من 15%.
نحن استكشاف قدرات التحليل رواية للتحديد الكمي لمعايير الببتيد ارتفعت في خلاصة [مونوكلونل] جسم (ماب) وقد أظهرت حساسية والأداة المساعدة لتغطية النطاق الديناميكي الواسع (على الأقل ثلاثة أوامر من حجم) عادة واجه في تحليل المندوبية. تم الكشف عن جميع المعايير الببتيد الستة بتركيزات منخفضة تصل إلى 0.1 نانومتر (محملة على 2.1 ملم معرف عمود الكروماتوغرافي 1 فيمتومولي) وجود خلفية ببتيد وفرة عالية (2 ميكروغرام ماب هضم محملة على-عمود). من خلال دمج نظام إدارة الموارد البشرية المستهدفة وفصل أيون التنقل السلائف، مقايسة HS-الآلية إمكانات كبيرة لكي تصبح مقايسة رصد السريع، الفائق لمتعددة الأطراف المتعاقدة السامية عبر عدة دفعات من صيدلية.

يستند التقدير الكمي للجزيئات الحيوية الكبيرة (البروتينات) في إعدادات الصناعية حاليا تحديدكم (مثلاً، الساس)، أساسا بسبب العديد من المزايا: حساسية والإنتاجية العالية وسهولة الاستخدام ومنخفضة التكلفة لكل عينة. عندما يطبق على تحليل الشوائب وفرة منخفضة البروتين (1-100 جزء من المليون من الخلية المضيفة البروتينات (الأطراف المتعاقدة السامية)) موجودة في البروتين المداواة، هذه الاختبارات البيولوجية توفر عادة التركيز الكلي المندوبية (يعبر عنها عادة في جزء في المليون أو نغ ماب المندوبية/mg)، لكنها لا يمكن تحديد وقياس الملوثات المندوبية الفردية. ووضعت مؤخرا عدة فحوصات المستندة إلى MS لتكملة الساس أو لتوفير المعلومات التي تفشل في الساس لتقديم1،2،3،4،،من56 , 7 , 8 , 9-بسبب تعقيد عينة واشتراط الكشف عن الببتيدات المندوبية عبر مجموعة واسعة ديناميكية في تركيز (3 على الأقل من حيث الحجم)، يكون متعدد الأبعاد الكروماتوغرافي أساليب المناقصة وجود عينة واسعة النطاق استخدمت تقليديا للمساعدة في تحديد وفرة منخفضة الأطراف المتعاقدة السامية1،2،3،4،5،،من67.
خطوة طبيعية بعد تحديد المندوبية والتحقق من الصحة يتم تتبع المندوبية (الرصد) عبر عدة دفعات من صيدلية. في هذه الحالة، قد تم أحادية البعد LC/MS الأساليب المقترحة لتحسين العينة الإجمالية8،9. ومع ذلك، دقة وقياسات النطاق الديناميكي للمندوبية قد تتأثر في مقايسة LC/MS د 1 وجود الساحقة من الببتيدات الصيدلانية البيولوجية. مقارنة بفصل متعددة الأبعاد، يتم زيادة إمكانات إشارة تدخل19،20،،من2122 في فصل الكروماتوغرافي أحادية البعد لأن الاحتمال يتم زيادة السلائف الببتيد أكثر أن يكون المشترك التينج. ومن الواضح سيكون من المفيد إدراج الوسائل متعامد للفصل سلائف الببتيد دون تمديد الوقت الفصل الكروماتوغرافي. السفر الموجه أيون التنقل (سيارتك)10 لديها القدرة على حل ازدحام مرض التصلب العصبي المتعدد الأطياف بالمللي ثانية. يمكن أن يؤديها حوالي 500 التنقل الفواصل أثناء شطف من الببتيد واحد، على افتراض عرض كامل الكروماتوغرافي ذروة من 10 s والنظر إلى أن وقت التشغيل فصل الدردشة على الصك التنقل أيون 20 مللي ثانية.
وضعت كتلة والمطيافيه فحوصات لتحديد مقدار البروتين بنجاح على مدى العقد استخدام مقبولة تماما تحديد رد الفعل (متعددة) رصد النهج (أسلوب SRM/الآلية) تنفذ جنبا إلى جنب مطيافات الشامل11، 12،13،،من1415،16،17،،من1819،20،21 ،،من2223. أحد أوجه القصور في هذا التحليل الشامل والمطيافيه منخفضة الدقة هو تدخل الظاهرة19،20،21،22 لاحظت عند الببتيد لمصلحة له "نفس" السلائف ويفتت الببتيدات التينج المشاركة الجماعية الأخرى الموجودة في العينة (ضمن إطار 1-دا). هناك طريقتان لتحسين دقة أساليب إدارة المخاطرة الاستراتيجية/الآلية: خيار واحد ينطوي على خطوة فصل إضافي على مستوى السلائف لإزالة الأيونات السلائف التدخل، في حين أن الخيار الآخر لزيادة دقة مرض التصلب العصبي المتعدد للكشف عن السلائف/يفتت إلى تجنب تداخل إشارات مرض التصلب العصبي المتعدد. الانتقائية العالية الآلية (HS) اقتناء الموصوفة هنا يستفيد الوضع كل من هذين النهجين باقتران فصل الحراك أيون السلائف الببتيد مع عالية الدقة (Rs ~ 30,000) الكشف عن مرض التصلب العصبي المتعدد من الشظايا الببتيد. المقايسة وصف هنا تغطي على الأقل ثلاثة أوامر من حجم، وهو النطاق الديناميكي عادة لاحظت في إدارة المخاطرة الاستراتيجية/الآلية البروتيوميات تجارب17،،من1824.
الأداة المساعدة للمقايسة HS-الآلية للقياس الكمي المندوبية تجلى رصد الخطي للإشارات التي تنتجها ستة معايير الببتيد ارتفعت تركيزات مختلفة (0.1 إلى 100 نانومتر النطاق) في خلاصة [مونوكلونل] جسم.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Vion IMS Qtof mass spectrometer</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186009214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquity H-Class Quaternary solvent manager (QSM)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186015041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquity H-Class FTN Sample Manager (SM)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186015040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquity H-Class Column Manager (CM)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186015043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile (ACN)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A996-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>40867-50G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.1 x 150 mm CSH C18 UPLC column, 1.8 &#181;m particles</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186005298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5545-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid, eluent additive for LC/MS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>56302-10X1ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hi3 rabbit phosphorylase (PHO) MassPREP standard</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186006011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodoacetamide (IAM)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I-1149-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC vials (12x32 mm glass vials, screw neck)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186000327c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leucine Enkephalin acetate salt hydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L9133-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein LoBind 2.0 mL tubes (2x50)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22431102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapiGest SF</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186001861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/Lys-C enzyme mix, mass spec grade (5 x 20 &#181;g)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V5073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, LC/MS grade</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>39253-1L-R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an hs-mrm assay for the quantification of host-cell proteins in protein biopharmaceuticals by liquid chromatography ion mobility qtof mass spectrometry

تحليل لمستوى منخفض (1-100 جزء في المليون) البروتين الشوائب (مثلاً بروتينات الخلية المضيفة (الأطراف المتعاقدة السامية)) في بيوثيرابيوتيكس البروتين مقايسة صعبة التي تحتاج إلى حساسية عالية ودينامية واسعة نطاق. عادة ما تشمل فحوصات الكمي الشامل القائم على قياس الطيف الكتلي للبروتينات هضم البروتين يتبعه رد فعل رد فعل انتقائي رصد متعددة الرصد الكمي (SRM/MRM) من الببتيدات ذات الدقة منخفضة (Rs ~ 1,000) جنبا إلى جنب باستخدام مطياف كتلة الرباعي. أحد أوجه القصور في هذا النهج هو ظاهرة التدخل لاحظ عندما ببتيد الاهتمام قد السلائف "نفس" والجماهيري يفتت (من حيث القيم m/z) الببتيدات التينج المشترك الأخرى الموجودة في العينة (ضمن إطار 1-دا). لتجنب هذه الظاهرة، فإننا نقترح نهجاً بديلاً والمطيافيه الجماعية، مقايسة الآلية انتقائية عالية (HS) الذي يجمع بين فصل الحراك أيون السلائف الببتيد مع عالية الدقة (Rs ~ 30,000) الكشف عن مرض التصلب العصبي المتعدد من الشظايا الببتيد. وبحثنا في قدرات هذا النهج لتحديد معايير الببتيد وفرة المنخفضة ارتفعت في خلاصة [مونوكلونل] جسم (ماب)، وأثبتت أن لديها حساسية والنطاق الديناميكي (على الأقل 3 أوامر من حجم) عادة ما يتحقق في المندوبية تحليل. تم الكشف عن جميع المعايير الببتيد الستة بتركيزات منخفضة تصل إلى 0.1 نانومتر (محملة على 2.1 ملم معرف عمود الكروماتوغرافي 1 فيمتومولي) وجود خلفية ببتيد وفرة عالية (2 ميكروغرام ماب هضم محملة على-عمود). عند النظر في ميغاواط من الأرانب فوسفوريلاز (97.2 كاتشين)، التي تستمد منها الببتيدات ارتفعت لوق من هذا التحليل أقل من 50 جزء من المليون. النسبي الانحرافات المعيارية (RSD) من مناطق الذروة (n = 4 replicates) كانت أقل من 15% عبر تركيز كامل نطاق التحقيق (0.1-100 نانومتر أو 1 1,000 جزء في المليون) في هذه الدراسة.

تسلسل الفردية ب فوسفوريلاز ستة الببتيد المعايير الواردة في خليط الببتيد بو ترد في الجدول 1، جنبا إلى جنب مع مرات الاحتفاظ بهم وسلائفها الأكثر وفرة في HDMSه التجربة. الخطوة الأولى في تطوير المقايسة إليه الرصد والإبلاغ (HS) الانتقائية العالية هو الحصول على مجموعة البيانات HDMSه إنشاء أوقات شطف كل الببتيد بو، جنبا إلى جنب مع معظم المقابلة لها السلائف وفيرة والأجزاء الثلاثة الأكثر وفرة. يعرض الرقم 2 أطياف HDMSه المكتسبة لواحد من الببتيدات بو (بيب 6) ارتفعت في الخلاصة infliximab. بعد إنشاء أفضل 3 "التحولات" (مجموعات من الجماهير السلائف ويفتت) لكل الببتيد، يتم إجراء تجربة Tof-الآلية لإيجاد الطاقة الاصطدام الأمثل تحقيق أقصى قدر من الإشارات التي تم إنشاؤها لكل الببتيد. ويرد في الجدول 2 نتائج التجربة الأمثل CE. والرزن HS-الآلية النهائية (انظر الشكل 4) يحتفظ فقط أفضل "انتقالية" لكل الببتيد ويستخدم لتحليل جميع العينات التي ارتفعت. وترد أمثلة على تشروماتوجرامس HS-الآلية التي تم إنشاؤها ل 4 بو الببتيدات عبر جميع التركيزات التي حققت في الشكل 7. أربعة منحنيات المعايرة من الحصول على كل يلي الببتيد يتم عرض دمج على قمم HS-الآلية التي سلط عليها الضوء في الشكل 7 في الشكل 8. وباﻹضافة إلى ذلك، يلخص ذروة المجال النسبي الانحراف المعياري، المحسوبة على أساس حقن نسخ متماثل 4، 4 الجداول المبينة في الجدول 3.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>الببتيد</td>
			<td colspan="2">الببتيد</td>
			<td>الاحتفاظ بحق</td>
			<td colspan="4">اتهام الدول</td>
		</tr>
<tr>
<td>معرف</td>
			<td colspan="2">التسلسل</td>
			<td>الوقت (دقيقة)</td>
			<td>+ 1</td>
			<td>+ 2</td>
			<td>+ 3</td>
			<td>+ 4</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="2"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 1</td>
			<td colspan="2">فليبندنفيك</td>
			<td>19.4 بالمئة</td>
			<td>1442.6951</td>
			<td>721.8512</td>
			<td>481.5699</td>
			<td>361.4292</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 2</td>
			<td colspan="2">تكايتنهتفلبيلير</td>
			<td>16.0</td>
			<td>1874.9065</td>
			<td>937.9569</td>
			<td>625.6404</td>
			<td>469.4821</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 3</td>
			<td colspan="2">إيجيييسدلدقلرك</td>
			<td>18.9</td>
			<td>1678.8646</td>
			<td>839.9360</td>
			<td>560.2931</td>
			<td>420.4716</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 4</td>
			<td colspan="2">لسيفديفير</td>
			<td>21.1</td>
			<td>1440.7369</td>
			<td>720.8721</td>
			<td>480.9172</td>
			<td>360.9397</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 5</td>
			<td colspan="2">ليتايجدففنهدبففجدر</td>
			<td>19.7</td>
			<td>1890.0080</td>
			<td>945.5076</td>
			<td>630.6742</td>
			<td>473.2574</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 6</td>
			<td colspan="2">ففاديييفك</td>
			<td>17.7</td>
			<td>1262.5939</td>
			<td>631.8006</td>
			<td>421.5362</td>
			<td>316.4039</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1. بو الببتيد المعايير الواردة في "الكتلة الإعدادية" خليط ارتفعت في الخلاصة infliximab. يتم عرض الأوقات الاحتفاظ الببتيد وسلائفها الأكثر وفرة (الضوء بخط غامق) في تنسيق جدولي.
<table fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>الببتيد</td>
			<td colspan="2">الببتيد</td>
			<td>الاحتفاظ بحق</td>
			<td colspan="2">السلائف الببتيد</td>
			<td colspan="3">الجزء الأكثر وفرة الأيونات وشحن</td>
			<td>الأمثل</td>
		</tr>
<tr>
<td>معرف</td>
			<td colspan="2">التسلسل</td>
			<td>الوقت (دقيقة)</td>
			<td>m/z & المسؤول</td>
			<td>الوقت الانجراف (مللي ثانية)</td>
			<td>أنا</td>
			<td>ثانيا</td>
			<td>ثالثا</td>
			<td>CE (V)</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 2</td>
			<td colspan="2">تكايتنهتفلبيلير</td>
			<td>16.0</td>
			<td>625.6404 (+ 3)</td>
			<td>6.2</td>
			<td>714.3781 (+ 1)</td>
			<td>807.4177 (+ 2)</td>
			<td>827.4621 (+ 1)</td>
			<td>24</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 4</td>
			<td colspan="2">لسيفديفير</td>
			<td>21.1</td>
			<td>720.8721 (+ 2)</td>
			<td>7.5</td>
			<td>865.4050 (+ 1)</td>
			<td>964.4734 (+ 1)</td>
			<td>1214.5688 (+ 1)</td>
			<td>22</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 5</td>
			<td colspan="2">ليتايجدففنهدبففجدر</td>
			<td>19.7</td>
			<td>630.6742 (+ 3)</td>
			<td>6.3</td>
			<td>642.3570 (+ 1)</td>
			<td>689.8391 (+ 2)</td>
			<td>832.4236 (+ 2)</td>
			<td>20</td>
		</tr>
<tr>
<td>بيب 6</td>
			<td colspan="2">ففاديييفك</td>
			<td>17.7</td>
			<td>631.8006 (+ 2)</td>
			<td>7.0</td>
			<td>830.3931 (+ 1)</td>
			<td>945.4200 (+ 2)</td>
			<td>1016.4571 (+ 1)</td>
			<td>24</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 2. نتائج تجربة الأمثل Tof-الآلية: يتم الإشارة إلى ثلاثة أجزاء الأكثر وفرة من كل الببتيد بو كمياً في هذه الدراسة، جنبا إلى جنب مع الطاقة الاصطدام الأمثل المقابلة.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>الزيركونيم</td>
			<td>المبلغ</td>
			<td colspan="6">مناطق ذروة بيب 2 (الجدول 3 أ)</td>
		</tr>
<tr>
<td>(نيو مكسيكو)</td>
			<td>في عمود (فموليس)</td>
			<td>Rep01</td>
			<td>Rep02</td>
			<td>Rep03</td>
			<td>Rep04</td>
			<td>يعني</td>
			<td>تحديد وضع اللاجئ (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1</td>
			<td>1</td>
			<td>490</td>
			<td>439</td>
			<td>462</td>
			<td>431</td>
			<td>456</td>
			<td>5.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>10</td>
			<td>5121</td>
			<td>4842</td>
			<td>5198</td>
			<td>4842</td>
			<td>5001</td>
			<td>3.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>100</td>
			<td>63853</td>
			<td>64279</td>
			<td>66111</td>
			<td>62509</td>
			<td>64188</td>
			<td>2.3</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>1000</td>
			<td>612392</td>
			<td>605553</td>
			<td>613229</td>
			<td>611004</td>
			<td>610545</td>
			<td>0.6</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>الزيركونيم</td>
			<td>المبلغ</td>
			<td colspan="6">بيب 4 مناطق الذروة (الجدول 3)</td>
		</tr>
<tr>
<td>(نيو مكسيكو)</td>
			<td>في عمود (فموليس)</td>
			<td>Rep01</td>
			<td>Rep02</td>
			<td>Rep03</td>
			<td>Rep04</td>
			<td>يعني</td>
			<td>تحديد وضع اللاجئ (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1</td>
			<td>1</td>
			<td>275</td>
			<td>359</td>
			<td>325</td>
			<td>288</td>
			<td>312</td>
			<td>12.2</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>10</td>
			<td>3559</td>
			<td>3694</td>
			<td>3287</td>
			<td>3754</td>
			<td>3574</td>
			<td>5.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>100</td>
			<td>45259</td>
			<td>45775</td>
			<td>42976</td>
			<td>45548</td>
			<td>44890</td>
			<td>2.9</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>1000</td>
			<td>459374</td>
			<td>467927</td>
			<td>436272</td>
			<td>458994</td>
			<td>455642</td>
			<td>3.0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>الزيركونيم</td>
			<td>المبلغ</td>
			<td colspan="6">بيب 5 مناطق الذروة (الجدول 3)</td>
		</tr>
<tr>
<td>(نيو مكسيكو)</td>
			<td>في عمود (فموليس)</td>
			<td>Rep01</td>
			<td>Rep02</td>
			<td>Rep03</td>
			<td>Rep04</td>
			<td>يعني</td>
			<td>تحديد وضع اللاجئ (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1</td>
			<td>1</td>
			<td>3194</td>
			<td>3243</td>
			<td>3202</td>
			<td>3257</td>
			<td>3224</td>
			<td>1.0</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>10</td>
			<td>31464</td>
			<td>31150</td>
			<td>31464</td>
			<td>31433</td>
			<td>31378</td>
			<td>0.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>100</td>
			<td>313638</td>
			<td>320712</td>
			<td>311943</td>
			<td>311943</td>
			<td>314559</td>
			<td>1.3</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>1000</td>
			<td>2845736</td>
			<td>2840031</td>
			<td>2882006</td>
			<td>2864052</td>
			<td>2857956</td>
			<td>0.7</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>الزيركونيم</td>
			<td>المبلغ</td>
			<td colspan="6">ذروة بيب 6 مناطق (3D الجدول)</td>
		</tr>
<tr>
<td>(نيو مكسيكو)</td>
			<td>في عمود (فموليس)</td>
			<td>Rep01</td>
			<td>Rep02</td>
			<td>Rep03</td>
			<td>Rep04</td>
			<td>يعني</td>
			<td>تحديد وضع اللاجئ (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1</td>
			<td>1</td>
			<td>490</td>
			<td>583</td>
			<td>440</td>
			<td>440</td>
			<td>488</td>
			<td>13.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>10</td>
			<td>6429</td>
			<td>6429</td>
			<td>6848</td>
			<td>6623</td>
			<td>6582</td>
			<td>3.0</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>100</td>
			<td>71295</td>
			<td>70400</td>
			<td>71563</td>
			<td>70400</td>
			<td>70915</td>
			<td>0.9</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>1000</td>
			<td>707640</td>
			<td>707640</td>
			<td>694461</td>
			<td>729490</td>
			<td>709808</td>
			<td>2.0</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 3. الجدول الذي يحتوي على مجالات ذروة تشروماتوجرامس HS-الآلية سجلت 4 بو الببتيدات (بيب 2، 4، 5 و 6) لكل حقن LC/MS (16 LC/MS يدير وتركيزات 4 اختبار). الانحراف المعياري النسبي كان أفضل من 15% لجميع الببتيدات على نطاق التركيز الكامل على التحقيق.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig1.jpg"> رقم 1. رسم تخطيطي لسير العمل يلخص الخطوات الثلاثة اللازمة لإعداد أسلوب اكتساب HS-الآلية- <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig2.jpg"> الرقم 2. على سبيل المثال البيانات هدمسي: (أ) الطاقة المنخفضة الطيف عرض أيون السلائف بيب 6. (ب) طيف تجزئة الطاقة العالية من الببتيد نفسه، عرض أعلى 3 الأكثر وفرة يفتت الأيونات (دائري) المحددة لتحسين الطاقة الاصطدام Tof-الآلية. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig3.jpg"> الشكل 3. المعلمات المستخدمة لإعداد أمثلية Tof-الآلية التجربة. لكل مرحلة انتقالية، تم اختبار الطاقات الاصطدام الإحدى عشرة (في النطاق من 16 إلى 36 الخامس). <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig4.jpg"> الشكل 4. مثال لطريقة HS-الآلية النهائية. معلمات متعددة مطلوبة من أجل كل "الانتقال" بما في ذلك السلائف الببتيد m/z، وحالته التهمة وأيون التنقل الانجراف الوقت، m/z أيون الجزء الأكثر وفرة والطاقة الاصطدام المثلى والوقت اكتساب مرض التصلب العصبي المتعدد. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig4large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig5.jpg"> الشكل 5. الإعدادات المستخدمة من قبل طريقة المعالجة لتحليل بيانات النظام المنسق-الآلية. كل الببتيد ترصدها واحدة "الانتقالية" المذكورة من هضميد السلائف m/z واتهام الدولة ويتوقع الاحتفاظ بالوقت، جنبا إلى جنب مع m/z الجزء الأكثر وفرة وحالته التهمة. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig5large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig6.jpg"> الشكل 6. الرسم التخطيطي للتنقل أيون والمطياف الشامل. في وضع اقتناء HS-الآلية، يتم فصل سلائف الببتيد الذي هو يجري تحديده كمياً من السلائف الأخرى الببتيد التينج المشترك (التدخل) في الخلية التنقل أيون، معزول بواسطة الرباعي، ومجزأة وطاقة اصطدام ثابت في خلية الاصطدام. الإشارات التي تنتجها الأيونات يفتت الببتيد تتعزز عن طريق ضبط وتيرة دافع، والتقدير الكمي الببتيد تتم باستخدام العالية--مرض التصلب العصبي المتعدد-القرار (> 30,000) الإشارات التي تنتجها أيون الجزء الأكثر كثافة من كل الببتيد. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig6large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig7v2.jpg"> الشكل 7. تشروماتوجرامس HS-الآلية المسجلة الببتيدات بو 4 4 تركيزات مختلفة تمتد 3 أوامر من حجم (0، 1، 1 و 10 و 100 nM). (A) تشروماتوجرامس بيب 2، 4 (ب) بيب تشروماتوجرامس، تشروماتوجرامس (ج) بيب 5، وتشروماتوجرامس 6 (د) بيب. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig7v2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig8v2.jpg"> الرقم 8. منحنيات المعايرة الببتيدات بو 4 عبر 4 تركيزات مختلفة (0.1، 1 و 10 و 100 nM). عرض الجداول تحت كل منحنى الذروة فرادى المناطق (قيم Y) المسجلة لكل الحقن، بينما يظهر العمود الثاني من الجدول كل انحراف النسبة المئوية من الرد الخطي المتوقعة. (A) المعايرة بيب 2، 4 (ب) بيب المعايرة والمعايرة (ج) بيب 5 والمعايرة 6 (د) بيب. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig8v2large.jpg" target="_blank">الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-</a>

Watch this Scientific Journal Video about An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry at JoV

An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry

وهنا يصف لنا تحليل الكروماتوغرافي مقترنة بفصل الحراك أيون السلائف الببتيد تليها عالية الدقة (~ 30,000) مرض التصلب العصبي المتعدد-الكشف عن شظايا الببتيد للتحديد الكمي لمعايير الببتيد ارتفعت في جسم [مونوكلونل] خلاصة.

مقايسة HS-الآلية للتحديد الكمي لبروتينات الخلية المضيفة في صيدلية البروتين اللوني السائل أيون التنقل قطوف الطيف الكتلي

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (UPLC-MS)

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry UPLC-MS

نطاق واسع غير المستهدفة التنميط Metabolomic من المصل بواسطة الترا الطيف الأداء اللوني الكتلة السائل (UPLC-MS)

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to ...

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

الايض غير مستهدفة من مصادر بيولوجية عن طريق Ultraperformance اللوني السائل عالية الدقة الطيف الكتلي (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Profiling the Triacylglyceride Contents in Bat Integumentary Lipids by Preparative Thin Layer Chromatography and MALDI-TOF Mass Spectrometry

التنميط محتويات Triacylglyceride في بات غلافي الدهون بواسطة التحليل اللوني طبقة رقيقة محضرة وMALDI-TOF الطيف الكتلي

The mammalian integument includes sebaceous glands that secrete an oily material onto the skin surface. Sebum production is part of the innate immune ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Radiolabeling والكمي لمستويات الخلايا من Phosphoinositides التي كتبها التلألؤ تدفق عالية الأداء اللوني السائل الديناميكي

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Analyzing the Photo-oxidation of 2-propanol at Indoor Air Level Concentrations Using Field Asymmetric Ion Mobility Spectrometry

تحليل الصور-أكسدة 2-بروبانول بتركيزات مستوى الهواء في الأماكن المغلقة باستخدام حقل أيون غير المتناظر التنقل قياس الطيف الكتلي

We demonstrate a versatile protocol to be used for determining the effectiveness of photocatalysts in degrading indoor air concentration (ppb) volatile ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

تحليل البروتين أبنية ومجمعات البروتين-يجند بالتكامل الهيكلي الكتلي

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Ion Mobility-Mass Spectrometry Techniques for Determining the Structure and Mechanisms of Metal Ion Recognition and Redox Activity of Metal Binding Oligopeptides

تقنيات قياس الطيف الكتلي للتنقل من أيون لتحديد بنية وآليات التعرف على الأيون المعدني ونشاط الأكسدة من Oligopeptides التجليد المعدني

Electrospray ionization (ESI) can transfer an aqueous-phase peptide or peptide complex to the gas-phase while conserving its mass, overall charge, ...

Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry Approaches for Characterization of the Protein and Metabolite Corona Acquired by Nanomaterials

نهج قياس الطيف الكتلي للكهربائية الشعرية لتوصيف البروتين والايض كورونا المكتسبة من المواد النانوية

The adsorption of biomolecules from surrounding biological matrices to the surface of nanomaterials (NMs) to form the corona has been of interest for the ...

Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry

وضع العلامات التساهمية مع ديثيلبيروبونات لدراسة بنية البروتين الأعلى ترتيبا حسب قياس الطيف الكتلي

Characterizing a protein&#39;s higher-order structure is essential for understanding its function. Mass spectrometry (MS) has emerged as a powerful tool ...