Name: an hs-mrm assay for the quantification of host-cell proteins in protein biopharmaceuticals by liquid chromatography ion mobility qtof mass spectrometry
Uploaded: 2018-04-17T12:30:00
Duration: 11 min 9 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry at JoV

Авторы хотели бы поблагодарить Лесли Malouin и Тони Catlin от вод корпорации за подготовку рисунок 6 рукописи.

<ol>
	<li>Doneanu, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+host-cell+proteins+in+biotherapeutic+proteins+by+comprehensive+online+two-dimensional+liquid+chromatography/mass+spectrometry.">Analysis of host-cell proteins in biotherapeutic proteins by comprehensive online two-dimensional liquid chromatography/mass spectrometry.</a> MAbs. 4, 24-44 (2012).</li><li>Schenauer, M. R., Flynn, G. C., Goetze, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+host-cell+protein+impurities+in+biotherapeutics+using+mass+spectrometry.">Identification of host-cell protein impurities in biotherapeutics using mass spectrometry.</a> Anal Biochem. 428, 150-157 (2012).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comprehensive+tracking+of+host-cell+proteins+during+monoclonal+antibody+purifications+using+mass+spectrometry.">Comprehensive tracking of host-cell proteins during monoclonal antibody purifications using mass spectrometry.</a> MAbs. 6, 659-670 (2014).</li><li>Farrell, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+host-cell+protein+analysis+using+two-dimensional+data+independent+LC-MS(E).">Quantitative host-cell protein analysis using two-dimensional data independent LC-MS(E).</a> Anal Chem. 87, 9186-9193 (2015).</li><li>Doneanu, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enhanced+detection+of+low-abundance+host+cell+protein+impurities+in+high-purity+monoclonal+antibodies+down+to+1+ppm+using+ion+mobility+mass+spectrometry+coupled+with+multidimensional+liquid+chromatography.">Enhanced detection of low-abundance host cell protein impurities in high-purity monoclonal antibodies down to 1 ppm using ion mobility mass spectrometry coupled with multidimensional liquid chromatography.</a> Anal Chem. 87, 10283-10291 (2015).</li><li>Doneanu, C. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improved+identification+and+quantification+of+host+cell+proteins+(HCPs)+in+biotherapeutics+using+liquid+chromatography+mass+spectrometry.">Improved identification and quantification of host cell proteins (HCPs) in biotherapeutics using liquid chromatography mass spectrometry.</a> Technologies for therapeutic monoclonal antibody characterization, vol. 3: Defining the next generation of analytical and biophysical techniques. , 357-393 (2015).</li><li>Zhang, Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+the+co-elution+of+host-cell+proteins+with+monoclonal+antibodies+during+protein+A+purification.">Characterization of the co-elution of host-cell proteins with monoclonal antibodies during protein A purification.</a> Biotechnol Prog. 32, 708-717 (2016).</li><li>Reisinger, V., Toll, H., Mayer, R. E., Visser, J., Wolschin, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mass+spectrometry+based+approach+to+host+cell+protein+identification+and+its+application+in+a+comparatibility+exercise.">A mass spectrometry based approach to host cell protein identification and its application in a comparatibility exercise.</a> Anal Biochem. , 1-6 (2014).</li><li>Madsen, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toward+the+complete+characterization+of+host-cell+proteins+in+biotherapeutics+via+affinity+depletions,+LC/MS/MS+and+multivariate+analysis.">Toward the complete characterization of host-cell proteins in biotherapeutics via affinity depletions, LC/MS/MS and multivariate analysis.</a> MAbs. 7, 1128-1137 (2015).</li><li>Giles, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Applications+of+a+trevelling+wave-based+radio-frequency-only+stacked+ring+ion+guide.">Applications of a trevelling wave-based radio-frequency-only stacked ring ion guide.</a> Rapid Commun Mass Spectrom. 18, 2401-2414 (2004).</li><li>Anderson, V., Hunter, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+mass+spectrometric+multiple+reaction+monitoring+assays+for+major+plasma+proteins.">Quantitative mass spectrometric multiple reaction monitoring assays for major plasma proteins.</a> Mol Cell Proteomics. 5, 573-588 (2006).</li><li>Lange, V., Picotti, P., Domon, B., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selected+reaction+monitoring+for+quantitative+proteomics:+a+tutorial.">Selected reaction monitoring for quantitative proteomics: a tutorial.</a> Mol Syst Biol. 4, 1-14 (2008).</li><li>Picotti, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+generation+of+selected+reaction-monitoring+assays+for+proteins+and+proteomes.">High-throughput generation of selected reaction-monitoring assays for proteins and proteomes.</a> Nat Methods. 7, 43-46 (2010).</li><li>Zhao, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+proteins+using+peptide+immunoaffinity+enrichment+coupled+with+mass+spectrometry.">Quantification of proteins using peptide immunoaffinity enrichment coupled with mass spectrometry.</a> J Vis Exp. (53), (2011).</li><li>Liebler, D. C., Zimmerman, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Targeted+quantitation+of+proteins+by+mass+spectrometry.">Targeted quantitation of proteins by mass spectrometry.</a> Biochemistry. 52, 3797-3806 (2013).</li><li>Manes, N. P., Mann, J. M., Nita-Lazar, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Selected+reaction+monitoring+mass+spectrometry+for+absolute+protein+quantification.">Selected reaction monitoring mass spectrometry for absolute protein quantification.</a> J Vis Exp. (102), (2015).</li><li>Ebhardt, H. A., Sabido, E., Huttenhain, R., Collins, B., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Range+of+protein+detection+by+selected/multiple+reaction+monitoring+mass+spectrometry+in+an+unfractioned+human+cell+culture+lysate.">Range of protein detection by selected/multiple reaction monitoring mass spectrometry in an unfractioned human cell culture lysate.</a> Proteomics. 12, 1185-1193 (2012).</li><li>Picotti, P., Bodenmiller, B., Mueller, L. N., Domon, B., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Full+dynamic+range+proteome+analysis+of+S.+cerevisiae+by+targetted+proteomics.">Full dynamic range proteome analysis of S. cerevisiae by targetted proteomics.</a> Cell. 138, 795-806 (2009).</li><li>Sherman, J., McKay, M. J., Ashman, K., Molloy, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=How+specific+is+my+SRM:+the+issue+of+precursor+and+product+ion+reductancy.">How specific is my SRM: the issue of precursor and product ion reductancy.</a> Proteomics. 9, 1120-1123 (2009).</li><li>Abbatiello, S. E., Mani, D. R., Keshishian, H., Carr, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Automated+detection+of+innacurate+and+imprecise+transitions+in+peptide+quantification+by+multiple+reaction+monitoring+mass+spectrometry.">Automated detection of innacurate and imprecise transitions in peptide quantification by multiple reaction monitoring mass spectrometry.</a> Clin Chem. 56, 291-305 (2010).</li><li>Rost, H., Malmstrom, L., Aebersold, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+computational+tool+to+detect+and+avoid+redundancy+in+selected+reaction+monitoring.">A computational tool to detect and avoid redundancy in selected reaction monitoring.</a> Mol Cell Proteomics. 11, 540-549 (2012).</li><li>Bao, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Detection+and+correction+of+interference+in+SRM+analysis.">Detection and correction of interference in SRM analysis.</a> Methods. 61, 299-303 (2013).</li><li>Maclean, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effect+of+collision+energy+optimization+on+the+measurement+of+peptides+by+selected+reaction+monitoring+(SRM)+mass+spectrometry.">Effect of collision energy optimization on the measurement of peptides by selected reaction monitoring (SRM) mass spectrometry.</a> Anal Chem. 82, 10116-10124 (2010).</li><li>Mbasu, R. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Advances+in+quadrupole+and+time-of-flight+mass+spectrometry+for+peptide+MRM+based+translational+reserch+analysis.">Advances in quadrupole and time-of-flight mass spectrometry for peptide MRM based translational reserch analysis.</a> Proteomics. 16, 2206-2220 (2016).</li></ol>

Все авторы являются сотрудниками корпорации воды, которая является производителем ряда реагентов и инструменты, используемые в этой статье.

С высоким разрешением (Rs > 20000) масс-спектрометрия регулярно используется для структурных характеристик терапевтических белков на различных платформах инструмента. В отличие от количественной оценки на основе MS белка производится обычно SRM/Записями на низком (~ 1 000 рупий) тандем квадрупольного масс-спектрометров с помощью подписи пептиды, порожденных ферментативного расщепления белков11,12 , 13 , 14 , 15 , 16 , 17 , 18 , 19 , 20 , 21 , 22 , 23. как одномерные хроматографического цветоделение не удается разрешить полностью комплекс пептидных смеси производится путем ферментативного пищеварения, пептид совместное Элюирующий является обычным явлением, даже в случае одного белка дайджест. Для очень сложных белков дайджесты (например, для количественной оценки 1-100 ПМП ВДС присутствии пептид богатый фон, производимые терапевтических белков), чувствительность, точность или линейности SRM MRM пробирного могут быть затронуты помех.
SRM/MRM анализов у одномерного избирательности, полагаясь только на «уникальный» сочетание прекурсоров/фрагмент масс. По этой причине, эти анализы не в ситуациях, когда неожиданно изменяется фон пептида (например, для биофармацевтической образцов, полученных из различных очистительных процедур). Чтобы преодолеть эти ограничения, мы предлагаем здесь высокоизбирательные пробирного (HS) MRM, реализованы на Ион мобильности с поддержкой высокого разрешения квадрупольного время полета (QTOF) гибридный масс-спектрометр (для документа схемы, см. рисунок 6).
Инструмент отделяет прекурсоров пептид интерес от других совместно eluting (помехи) пептида прекурсоров в мобильности литиевого, изолирует полный изотопный конверт прекурсоров в квадрупольного и фрагменты его с фиксированной CE в ячейка столкновения. Сигнал от его наиболее распространенным Пептидный фрагмент усиливается, регулируя частоту толкателя (цель расширения), которые выборочно толкает массового регионы интереса в рейс трубки, а не всех ионов, как с полного сканирования. Пептид количественная оценка осуществляется с использованием сигналов высокой MS-резолюции (Rs ~ 30000), производимые этот фрагмент Ион. По сравнению с SRM/MRM анализов, HS-мно assay предлагает две дополнительные уровни избирательность: один обеспечивается Ион прекурсоров уровень мобильности разделения, в то время как второй обеспечивается увеличение массы резолюции TOF анализатора. Результаты принес эти избирательности улучшения видны в HS-мно хроматограммы отображены на рисунке 7, которые свободны от помех через трех порядков.
В отличие от SRM/MRM анализов, есть несколько параметров, которые могут корректироваться для оптимизации анализов HS-мно: RT окна вокруг предвестником пептида (обычно устанавливается в 0,2 мин), квадрупольного изоляции окна (4 Да), окна во время дрейфа вокруг прекурсоров (± Полувысоте пика прекурсоров из соответствующего Ион mobilogram) и резолюции МС фрагмент Иона (20 000-40 000). HS-мно анализов очень чувствительны: низкая обнаруженных для каждого Пхо пептиды составляет 1 femtomole на столбец (или 0,1 нм с точки зрения концентрация пептидный). При рассмотрении пептид МВт (см. таблицу 1 для точной MWs), сумма обнаружено на столбец порядка 1-2 стр., в то время как столбец загружается с значительно большее количество фон пептидов в дайджесте МАБ (2 мкг).
Рассматривая молекулярный вес полнометражного Пхо белка (97,2 кДа), из которого были получены шипами пептиды, assay может обнаружить 50 ppm белковых примесей в присутствии ионов высокой изобилие фон. Ниже пределов обнаружения (5-10 ppm) достижимы для ниже, молекулярным весом ВДС (10-20 кДа). Assay охватывает три порядков (как показано в калибровочных кривых на рисунке 8), что означает, что он может измерять ВДС в диапазоне 1-1000 ppm. Кроме того воспроизводимость анализов HS-МНО, показано в таблице 3, очень хорошо соответствует воспроизводимость анализов мелкомолекулярных SRM/MRM, с площади пика RSDs лучше, чем на 15%.
Мы изучили возможности Роман assay для количественного определения стандартов шипами пептида в дайджест моноклональных антител (МАБ) и продемонстрировал его чувствительность и утилита для обычно охватывают широкий динамический диапазон (по крайней мере трех порядков) При анализе HCP. Все шесть пептид стандартов были обнаружены в концентрациях, как низко как 0.1 Нм (1 femtomole загружены на Хроматографическое столбец ID 2.1-мм) в присутствии высоких изобилие пептид фон (2 мкг МАБ дайджест загружен на-столбца). Путем включения целевых HRMS и ионной подвижности прекурсоров разделения, HS-мно assay имеет большой потенциал для стать быстрый, высок объём пробирного контроля для нескольких ВДС через несколько серий биофармацевтики.

Количественная оценка крупных биомолекул (белков) в промышленных условиях в настоящее время основывается на immunoassays (например, ELISAs), главным образом из-за ряда преимуществ: чувствительность, высокой пропускной способности, простота использования и низкая стоимость на сэмпл. При применении для анализа низкой обилие белковых примесей (1-100 ppm-клетки хозяина белков (ВДС)) в терапии белка, эти биологические анализы обычно предоставляют общую концентрацию HCP (обычно выражается в ppm или нг HCP/мг МАБ), но они не удается определить и оценить отдельные загрязнители HCP. Недавно были подготовлены несколько анализов на основе MS для дополнения ELISAs или предоставлять информацию, что ELISAs не предлагать1,2,3,4,5,6 , 7 , 8 , 9. Ввиду сложности образца и требование для обнаружения HCP пептиды через широкий динамический диапазон концентрации (по крайней мере 3 порядков), имеют многомерные Хроматографические методы торгов обширной выборки фракционирования традиционно использовались для выявления низкого обилие ВДС1,2,3,4,5,6,7.
Естественный шаг после HCP идентификации и проверки является HCP отслеживание (мониторинг) через несколько серий биофармацевтики. В этой ситуации были предложены методы одномерного LC/МС для улучшения образца пропускной способности8,9. Однако точность и динамический диапазон HCP измерений могут быть затронуты в assay LC/МС 1D подавляющее присутствие биофармацевтической пептиды. По сравнению с многомерной разделения, потенциал для сигнала помехи19,20,,2122 увеличивается в одномерных хроматографического разделения потому что вероятность больше пептид прекурсоров будет совместно eluting увеличивается. Включение ортогональных средств для разделения пептид прекурсоров без продления хроматографического разделения времени явно бы выгодным. Путешествия волны ионной подвижности (TWIM)10 имеет возможность разрешения перегруженных МС спектры в миллисекундах. Около 500 цветоделение мобильности может быть выполнена во время элюции одного пептид, предполагая полную хроматографического пика шириной 10 s и учитывая, что среда выполнения им разделения на инструменте подвижности ионов 20 мс.
Масс-спектрометрических анализов для количественного определения белка были успешно разработаны в последние десятилетия с использованием общепринятых выбран (несколько) реакции, мониторинг подход (SRM/MRM метод) реализован на тандеме масс-спектрометров11, 12,13,14,,1516,,1718,19,20,21 ,,22-23. Одним из ограничений этот разрешением масс-спектрометрических assay является вмешательство явление19,20,21,22 наблюдается при пептид интерес имеет «же» прекурсоров и фрагмент массы других совместно eluting пептиды представляют в образце (в окне 1-Da). Существует два способа для улучшения точности методов SRM/Записями: один вариант предусматривает дополнительное разделение шаг на уровне прекурсоров для удаления мешающих ионов прекурсоров, в то время как другой вариант заключается в том, чтобы увеличить разрешение MS прекурсоров/фрагмент обнаружения для Избегайте перекрывающихся MS сигналов. Высокоизбирательные Записями (HS) приобретение режим описано здесь использует оба этих подхода, связывая разделение мобильность ионов пептид прекурсоров с высоким разрешением (Rs ~ 30000) MS обнаружения фрагментов пептидов. Assay описано здесь охватывает, по меньшей мере трех порядков, которые это динамический диапазон обычно наблюдается в SRM/MRM протеомики эксперименты17,18,24.
Утилита assay HS-Записями для квантификации HCP свидетельствует мониторинг линейность сигнала, производимые шесть стандартов пептид, шипами в различных концентрациях (диапазоне 0.1 - 100 Нм) в дайджест моноклональных антител.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Vion IMS Qtof mass spectrometer</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186009214</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquity H-Class Quaternary solvent manager (QSM)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186015041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquity H-Class FTN Sample Manager (SM)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186015040</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acquity H-Class Column Manager (CM)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186015043</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetonitrile (ACN)</td>
			<td>Fisher Chemical</td>
			<td>A996-4</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium bicarbonate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>40867-50G-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>2.1 x 150 mm CSH C18 UPLC column, 1.8 &#181;m particles</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186005298</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dithiothreitol (DTT)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>D5545-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid, eluent additive for LC/MS</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>56302-10X1ML-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hi3 rabbit phosphorylase (PHO) MassPREP standard</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186006011</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Iodoacetamide (IAM)</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>I-1149-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LC vials (12x32 mm glass vials, screw neck)</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186000327c</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leucine Enkephalin acetate salt hydrate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>L9133-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Protein LoBind 2.0 mL tubes (2x50)</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>22431102</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RapiGest SF</td>
			<td>Waters</td>
			<td>186001861</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/Lys-C enzyme mix, mass spec grade (5 x 20 &#181;g)</td>
			<td>Promega</td>
			<td>V5073</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water, LC/MS grade</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>39253-1L-R</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

an hs-mrm assay for the quantification of host-cell proteins in protein biopharmaceuticals by liquid chromatography ion mobility qtof mass spectrometry

Анализ низкого уровня (1-100 ppm) белковых примесей (например, хост клетки белки (ВДС)) применения инновационных технологий биотерапевтических белка является сложной пробирного, требующих высокой чувствительности и широким динамическим диапазоном. Масса на основе спектрометрии количественная оценка анализов для белков, как правило, включают переваривания белка следуют реакции мониторинг/несколько селективная реакция, мониторинг (SRM/MRM) количественная оценка пептидов, используя разрешением тандем (Rs ~ 1000) квадрупольный масс-спектрометр. Один из недостатков этого подхода явление интерференции наблюдается, когда пептид интерес имеет «же» прекурсоров и фрагмент массы (с точки зрения значения m/z) как другие совместно eluting пептидов в образце (в окне 1-Da). Чтобы избежать этого явления, мы предлагаем альтернативный масс-спектрометрических подход, высокая избирательность (HS) MRM assay, который сочетает в себе разделение мобильность ионов пептид прекурсоров с высоким разрешением (Rs ~ 30000) MS обнаружения фрагментов пептидов. Мы изучили возможности такого подхода для количественного определения низкого изобилие пептид стандартов шипами в дайджест моноклональных антител (МАБ) и продемонстрировал, что он имеет чувствительность и динамический диапазон (по крайней мере 3 порядков) обычно достигнутого в ГПУ анализ. Все шесть пептид стандартов были обнаружены в концентрациях, как низко как 0.1 Нм (1 femtomole загружены на Хроматографическое столбец ID 2.1-мм) в присутствии высоких изобилие пептид фон (2 мкг МАБ дайджест загружен на-столбца). При рассмотрении МВт кролик фосфорилаза (97,2 кДа), от которого были получены шипами пептиды, LOQ этот assay меньше чем 50 ppm. Относительной стандартных отклонений (RSD) пик областей (n = 4 реплицирует) были меньше, чем 15% в диапазоне всего концентрация расследование (0,1-100 Нм или 1-1000 ppm) в этом исследовании.

Отдельные последовательности шести фосфорилаза b пептид стандартов, содержащихся в Пхо пептид смеси приведены в таблице 1, наряду с их удержания раз и их наиболее распространенных прекурсоров, наблюдаемые в HDMSE эксперимент. Первым шагом в развитии пробирного управления записями сообщений (HS) высокоизбирательные является приобретение набора данных HDMSE учредить элюции раз каждой Пхо пептида, наряду с его соответствующего наиболее обильные прекурсоров и три наиболее распространенных фрагментов. Рисунок 2 показывает HDMSE спектры, приобрел для одной из Пхо пептидов (ОПТОСОЗ 6) шипами в инфликсимаб дайджест. После установления 3 лучших «переходы» (комбинации прекурсоров и фрагмент масс) для каждого пептид, Tof-мно эксперимент выполняется найти оптимальный столкновения энергию максимизировать сигналов для каждого пептид. В таблице 2 резюмируются результаты эксперимента оптимизации CE. Окончательный анализ HS-мно (см. рисунок 4) сохраняет только лучших «переход» для каждого пептида и используется для анализа всех загрязненной образцами. Примеры хроматограммы HS-МНО, созданные для 4 Пхо пептиды во всех исследованы концентрации представлены на рисунке 7. Четыре калибровочных кривых полученные за каждый следующий пептид, интеграции HS-мно пиков, подчеркнул на рисунке 7, отображаются на рисунке 8. Кроме того пик области относительной стандартное отклонение, рассчитанные на основе 4 реплицировать инъекции, резюмируется в 4 таблицы, показанные в таблице 3.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Пептид</td>
			<td colspan="2">Пептид</td>
			<td>Сохранение</td>
			<td colspan="4">Обязанности государств</td>
		</tr>
<tr>
<td>ID</td>
			<td colspan="2">Последовательность</td>
			<td>время (мин)</td>
			<td>+ 1</td>
			<td>+ 2</td>
			<td>+ 3</td>
			<td>+ 4</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td colspan="2"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 1</td>
			<td colspan="2">VLYPNDNFFEGK</td>
			<td>19.4</td>
			<td>1442.6951</td>
			<td>721.8512</td>
			<td>481.5699</td>
			<td>361.4292</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 2</td>
			<td colspan="2">TCAYTNHTVLPEALER</td>
			<td>16,0</td>
			<td>1874.9065</td>
			<td>937.9569</td>
			<td>625.6404</td>
			<td>469.4821</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 3</td>
			<td colspan="2">IGEEYISDLDQLRK</td>
			<td>18,9</td>
			<td>1678.8646</td>
			<td>839.9360</td>
			<td>560.2931</td>
			<td>420.4716</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 4</td>
			<td colspan="2">LLSYVDDEAFIR</td>
			<td>21.1</td>
			<td>1440.7369</td>
			<td>720.8721</td>
			<td>480.9172</td>
			<td>360.9397</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 5</td>
			<td colspan="2">LITAIGDVVNHDPVVGDR</td>
			<td>19,7</td>
			<td>1890.0080</td>
			<td>945.5076</td>
			<td>630.6742</td>
			<td>473.2574</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 6</td>
			<td colspan="2">VFADYEEYVK</td>
			<td>17.7</td>
			<td>1262.5939</td>
			<td>631.8006</td>
			<td>421.5362</td>
			<td>316.4039</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблицы 1. Пхо пептид стандарты, содержащиеся в микс массы PREP, шипами в инфликсимаб дайджест. Пептид удержания раз и их наиболее распространенных прекурсоров (выделено жирным шрифтом) отображаются в табличном формате.
<table fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Пептид</td>
			<td colspan="2">Пептид</td>
			<td>Сохранение</td>
			<td colspan="2">Пептид прекурсоров</td>
			<td colspan="3">Наиболее распространенным фрагмент ионов/зарядки</td>
			<td>Оптимальный</td>
		</tr>
<tr>
<td>ID</td>
			<td colspan="2">Последовательность</td>
			<td>время (мин)</td>
			<td>m/z и заряд</td>
			<td>Дрейф время (МС)</td>
			<td>Я</td>
			<td>II</td>
			<td>III</td>
			<td>CE (V)</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 2</td>
			<td colspan="2">TCAYTNHTVLPEALER</td>
			<td>16,0</td>
			<td>625.6404 (+ 3)</td>
			<td>6.2</td>
			<td>714.3781 (+ 1)</td>
			<td>807.4177 (+ 2)</td>
			<td>827.4621 (+ 1)</td>
			<td>24</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 4</td>
			<td colspan="2">LLSYVDDEAFIR</td>
			<td>21.1</td>
			<td>720.8721 (+ 2)</td>
			<td>7.5</td>
			<td>865.4050 (+ 1)</td>
			<td>964.4734 (+ 1)</td>
			<td>1214.5688 (+ 1)</td>
			<td>22</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 5</td>
			<td colspan="2">LITAIGDVVNHDPVVGDR</td>
			<td>19,7</td>
			<td>630.6742 (+ 3)</td>
			<td>6.3</td>
			<td>642.3570 (+ 1)</td>
			<td>689.8391 (+ 2)</td>
			<td>832.4236 (+ 2)</td>
			<td>20</td>
		</tr>
<tr>
<td>ОПТОСОЗ 6</td>
			<td colspan="2">VFADYEEYVK</td>
			<td>17.7</td>
			<td>631.8006 (+ 2)</td>
			<td>7.0</td>
			<td>830.3931 (+ 1)</td>
			<td>945.4200 (+ 2)</td>
			<td>1016.4571 (+ 1)</td>
			<td>24</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 2. Результаты эксперимента оптимизации Tof-мно: три самых распространенных фрагменты каждого Пхо пептид, количественно в этом исследовании указывается, вместе с соответствующей энергии оптимизированный столкновения.
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>Конц</td>
			<td>Сумма</td>
			<td colspan="6">Пик областей ОПТОСОЗ 2 (таблица 3A)</td>
		</tr>
<tr>
<td>(Нм)</td>
			<td>колонка (fmoles)</td>
			<td>Rep01</td>
			<td>Rep02</td>
			<td>Rep03</td>
			<td>Rep04</td>
			<td>Среднее</td>
			<td>RSD (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1</td>
			<td>1</td>
			<td>490</td>
			<td>439</td>
			<td>462</td>
			<td>431</td>
			<td>456</td>
			<td>5.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>10</td>
			<td>5121</td>
			<td>4842</td>
			<td>5198</td>
			<td>4842</td>
			<td>5001</td>
			<td>3.7</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>100</td>
			<td>63853</td>
			<td>64279</td>
			<td>66111</td>
			<td>62509</td>
			<td>64188</td>
			<td>2.3</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>1000</td>
			<td>612392</td>
			<td>605553</td>
			<td>613229</td>
			<td>611004</td>
			<td>610545</td>
			<td>0.6</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Конц</td>
			<td>Сумма</td>
			<td colspan="6">Областей ОПТОСОЗ 4 пик (таблица 3B)</td>
		</tr>
<tr>
<td>(Нм)</td>
			<td>колонка (fmoles)</td>
			<td>Rep01</td>
			<td>Rep02</td>
			<td>Rep03</td>
			<td>Rep04</td>
			<td>Среднее</td>
			<td>RSD (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1</td>
			<td>1</td>
			<td>275</td>
			<td>359</td>
			<td>325</td>
			<td>288</td>
			<td>312</td>
			<td>12.2</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>10</td>
			<td>3559</td>
			<td>3694</td>
			<td>3287</td>
			<td>3754</td>
			<td>3574</td>
			<td>5.8</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>100</td>
			<td>45259</td>
			<td>45775</td>
			<td>42976</td>
			<td>45548</td>
			<td>44890</td>
			<td>2.9</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>1000</td>
			<td>459374</td>
			<td>467927</td>
			<td>436272</td>
			<td>458994</td>
			<td>455642</td>
			<td>3.0</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Конц</td>
			<td>Сумма</td>
			<td colspan="6">Пик областей ОПТОСОЗ 5 (таблица 3 c)</td>
		</tr>
<tr>
<td>(Нм)</td>
			<td>колонка (fmoles)</td>
			<td>Rep01</td>
			<td>Rep02</td>
			<td>Rep03</td>
			<td>Rep04</td>
			<td>Среднее</td>
			<td>RSD (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1</td>
			<td>1</td>
			<td>3194</td>
			<td>3243</td>
			<td>3202</td>
			<td>3257</td>
			<td>3224</td>
			<td>1.0</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>10</td>
			<td>31464</td>
			<td>31150</td>
			<td>31464</td>
			<td>31433</td>
			<td>31378</td>
			<td>0.5</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>100</td>
			<td>313638</td>
			<td>320712</td>
			<td>311943</td>
			<td>311943</td>
			<td>314559</td>
			<td>1.3</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>1000</td>
			<td>2845736</td>
			<td>2840031</td>
			<td>2882006</td>
			<td>2864052</td>
			<td>2857956</td>
			<td>0,7</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>Конц</td>
			<td>Сумма</td>
			<td colspan="6">Областей ОПТОСОЗ 6 пик (таблица 3D)</td>
		</tr>
<tr>
<td>(Нм)</td>
			<td>колонка (fmoles)</td>
			<td>Rep01</td>
			<td>Rep02</td>
			<td>Rep03</td>
			<td>Rep04</td>
			<td>Среднее</td>
			<td>RSD (%)</td>
		</tr>
<tr>
<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>0.1</td>
			<td>1</td>
			<td>490</td>
			<td>583</td>
			<td>440</td>
			<td>440</td>
			<td>488</td>
			<td>13,8</td>
		</tr>
<tr>
<td>1</td>
			<td>10</td>
			<td>6429</td>
			<td>6429</td>
			<td>6848</td>
			<td>6623</td>
			<td>6582</td>
			<td>3.0</td>
		</tr>
<tr>
<td>10</td>
			<td>100</td>
			<td>71295</td>
			<td>70400</td>
			<td>71563</td>
			<td>70400</td>
			<td>70915</td>
			<td>0.9</td>
		</tr>
<tr>
<td>100</td>
			<td>1000</td>
			<td>707640</td>
			<td>707640</td>
			<td>694461</td>
			<td>729490</td>
			<td>709808</td>
			<td>2,0</td>
		</tr>
</tbody></table>Таблица 3. Таблица, содержащая пик области HS-мно хроматограммы записаны для 4 Пхо пептидов (ОПТОСОЗ 2, 4, 5 и 6) для каждой инъекции LC/MS (16 LC/MS бежит и 4 концентрации испытания). Относительное отклонение был лучше, чем 15% для всех пептидов в диапазоне всего концентрация расследование.
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig1.jpg"> Рисунок 1. Диаграмма рабочего процесса, подведение итогов трех шагов, необходимых для создания метода приобретения HS-мно. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig1large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig2.jpg"> Рисунок 2. Пример HDMSE данных: (A) низким энергетического спектра показаны Ион прекурсоров 6 ОПТОСОЗ. (B) высоких энергий фрагментации спектр же пептид, отображение Топ-3 самых распространенных фрагмент ионов (кружил) для оптимизации энергии столкновения Tof-мно. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig3.jpg"> На рисунке 3. Параметры, используемые для настройки оптимизации Tof-Записями эксперимент. Для каждого перехода были протестированы одиннадцать столкновения энергий (в диапазоне от 16 до 36 V). <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig3large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig4.jpg"> Рисунок 4. Пример использования метода окончательного HS-Записями. Некоторые параметры являются обязательными для каждого «перехода» включая пептид прекурсоров m/z, его состояние заряда и ионной подвижности дрейф время, m/z наиболее распространенных фрагмент Ион, оптимальной столкновения энергии и время приобретения МС. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig4large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig5.jpg"> Рисунок 5. Параметры, используемые методом обработки для анализа набора данных HS-Записями. Каждый пептид контролируется сингл «переходный период» описан пептид прекурсоров m/z, зарядки состояние и ожидаемое время удерживания, наряду с m/z наиболее распространенных фрагмента и его состояние заряда. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig5large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig6.jpg"> Рисунок 6. Диаграмма в ионной подвижности масс-спектрометр. В режиме приобретения HS-МНО, прекурсоров пептид, который будучи количественно отделены от других совместно eluting (помехи) пептида прекурсоров в мобильности литиевого, изолированные четырехполюсника и фрагментарный характер с фиксированной столкновения энергии в ячейка столкновения. Сигнал от ионов Пептидный фрагмент повышается, регулируя частоту толкача, и пептида количественная оценка осуществляется с использованием высокой MS-резолюции (> 30000) сигналов, производимые наиболее интенсивные Ион фрагмент каждого пептида. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig6large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig7v2.jpg"> Рисунок 7. HS-мно хроматограммы записаны для 4 Пхо пептидов в 4 различных концентрациях, охватывающих 3 порядков (0.1, 1, 10 и 100 Нм). (A) ОПТОСОЗ 2 хроматограм, 4 (B) ОПТОСОЗ хроматограм, хроматограммы (C) ОПТОСОЗ 5 и 6 (D) ОПТОСОЗ хроматограммы. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig7v2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>
<img alt="Figure 1" src="/files/ftp_upload/55325/55325fig8v2.jpg"> Рисунок 8. Калибровочные кривые для 4 Пхо пептиды через 4 разные концентрации (0.1, 1, 10 и 100 Нм). Таблицы в каждой кривой отображения отдельных пик областей (Y-значения) записаны для каждой инъекции, в то время как второй столбец из каждой таблицы показывает процент отклонения от ожидаемый линейный отклик. (A) ОПТОСОЗ 2 калибровки, 4 (B) ОПТОСОЗ калибровки, калибровка (C) ОПТОСОЗ 5 и 6 (D) ОПТОСОЗ калибровки. <a href="http://cloudflare.jove.com/files/ftp_upload/55325/55325fig8v2large.jpg" target="_blank">Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.</a>

Watch this Scientific Journal Video about An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry at JoV

An HS-MRM Assay for the Quantification of Host-cell Proteins in Protein Biopharmaceuticals by Liquid Chromatography Ion Mobility QTOF Mass Spectrometry

Здесь мы описываем хроматографического пробирного, в сочетании с разделением мобильность ионов пептид прекурсоров, следуют с высоким разрешением (~ 30,000) MS-обнаружение терпеноидные фрагменты для количественной оценки стандартов шипами пептида в моноклональных антител Дайджест.

HS-мно Assay для количественного определения белков клетки хозяина в области биофармацевтики белка по жидкостной хроматографии ионной подвижности QTOF масс-спектрометрии

The analysis of low-level (1-100 ppm) protein impurities (e.g., host-cell proteins (HCPs)) in protein biotherapeutics is a challenging assay requiring ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry (UPLC-MS)

Large Scale Non-targeted Metabolomic Profiling of Serum by Ultra Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry UPLC-MS

Крупномасштабная Нецелевые Metabolomic профилирование сыворотки Ultra Performance жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (UPLC-MS)

Non-targeted metabolite profiling by ultra performance liquid chromatography coupled with mass spectrometry (UPLC-MS) is a powerful technique to ...

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Нецелевые Метаболомики из биологических источников Использование UltraPerformance жидкостной хроматографии высокого разрешения масс-спектрометрии (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Profiling the Triacylglyceride Contents in Bat Integumentary Lipids by Preparative Thin Layer Chromatography and MALDI-TOF Mass Spectrometry

Профилирования содержимого триацилглицерида в Бат-покровных липидов с помощью препаративной тонкослойной хроматографии и MALDI-TOF масс-спектрометрии

The mammalian integument includes sebaceous glands that secrete an oily material onto the skin surface. Sebum production is part of the innate immune ...

Radiolabeling and Quantification of Cellular Levels of Phosphoinositides by High Performance Liquid Chromatography-coupled Flow Scintillation

Радиоактивной и Количественная клеточном уровнях фосфоинозитидов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в сочетании-Flow мерцаний

Phosphoinositides (PtdInsPs) are essential signaling lipids responsible for recruiting specific effectors and conferring organelles with molecular ...

Analyzing the Photo-oxidation of 2-propanol at Indoor Air Level Concentrations Using Field Asymmetric Ion Mobility Spectrometry

Анализируя фотоокисления 2-пропанол уровня концентраций воздуха с помощью поля асимметричной ионной подвижности спектрометрии

We demonstrate a versatile protocol to be used for determining the effectiveness of photocatalysts in degrading indoor air concentration (ppb) volatile ...

Analyzing Protein Architectures and Protein-Ligand Complexes by Integrative Structural Mass Spectrometry

Анализ архитектуры белка и белка Ligand комплексов по интегративной структурных масс-спектрометрии

Proteins are an important class of biological macromolecules that play many key roles in cellular functions including gene expression, catalyzing ...

Ion Mobility-Mass Spectrometry Techniques for Determining the Structure and Mechanisms of Metal Ion Recognition and Redox Activity of Metal Binding Oligopeptides

Ионная мобильность-массовая спектрометрия Методы для определения структуры и механизмов распознавания ионов металла и Redox деятельности металлических связывая олигопептиды

Electrospray ionization (ESI) can transfer an aqueous-phase peptide or peptide complex to the gas-phase while conserving its mass, overall charge, ...

Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry Approaches for Characterization of the Protein and Metabolite Corona Acquired by Nanomaterials

Подходы масс-спектрометрии капиллярного электрофореза для характеристики белковой и метаболитовой короны, приобретенной наноматериалами

The adsorption of biomolecules from surrounding biological matrices to the surface of nanomaterials (NMs) to form the corona has been of interest for the ...

Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry

Ковалентная маркировка диэтилпирокарбонатом для изучения структуры белка высшего порядка с помощью масс-спектрометрии

Characterizing a protein&#39;s higher-order structure is essential for understanding its function. Mass spectrometry (MS) has emerged as a powerful tool ...