Name: a device for performing cell migration/wound healing in a 96-well plate
Uploaded: 2017-03-07T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate at JoVE.com

De auteurs willen graag aan de heer Tam Po Leung, de heer Wong Chi Kin en de technische staf van de FNWI Workshop, Hong Kong Baptist University, om hun technische vaardigheden en advies te bedanken bij het maken van het prototype van deze wounder.

1. Inleiding tot de onderdelen van de wounder (figuur 1) <ol><li> Bereid de penhouder door de vaststelling van het verwonden pinnen op gelijke afstanden. Houd de pipet tips en pas de hoogte tip door het bewegen van de verstelbare verwonding pinnen op en neer. </li><li> Breng de verstelbare geleiding-balk verschillende merken 96 putjes en zorgen dat de verwonding gebied zich in een vaste positie. </li><li> Bevestig de verstelbare verwonding pen vast door de zeskante schroef. Bevestig de leidende-bar in positie vast doo...

<ol>
	<li>Friedl, P., Wolf, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tumour-cell+invasion+and+migration:+diversity+and+escape+mechanisms.">Tumour-cell invasion and migration: diversity and escape mechanisms.</a> Nat Rev Cancer. 3 (5), 362-374 (2003).</li><li>Friedl, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Prespecification+and+plasticity:+shifting+mechanisms+of+cell+migration.">Prespecification and plasticity: shifting mechanisms of cell migration.</a> Curr Opin Cell Biol. 16 (1), 14-23 (2004).</li><li>Lampugnani, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+migration+into+a+wounded+area+in+vitro.">Cell migration into a wounded area in vitro.</a> Methods Mol Biol. 96, 177-182 (1999).</li><li>Sholley, M. M., Gimbrone, M. A., Cotran, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+migration+and+replication+in+endothelial+regeneration:+a+study+using+irradiated+endothelial+cultures.">Cellular migration and replication in endothelial regeneration: a study using irradiated endothelial cultures.</a> Lab Invest. 36 (1), 18-25 (1977).</li><li>Gotlieb, A. I., Spector, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Migration+into+an+in+vitro+experimental+wound:+a+comparison+of+porcine+aortic+endothelial+and+smooth+muscle+cells+and+the+effect+of+culture+irradiation.">Migration into an in vitro experimental wound: a comparison of porcine aortic endothelial and smooth muscle cells and the effect of culture irradiation.</a> Am J Pathol. 103 (2), 271-282 (1981).</li><li>Chen, Y. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+migration+chip+for+chemotaxis-based+microfluidic+selection+of+heterogeneous+cell+populations.">Single-cell migration chip for chemotaxis-based microfluidic selection of heterogeneous cell populations.</a> Sci Rep. 18 (5), 9980 (2015).</li><li>Yarrow, J. C., Periman, Z. E., Westwood, N. J., Mitchison, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-throughput+cell+migration+assay+using+scratch+wound+healing,+a+comparsion+of+image-based+readout+methods.">A high-throughput cell migration assay using scratch wound healing, a comparsion of image-based readout methods.</a> BMC Biotechnol. 4, 21 (2004).</li><li>Lauder, H., Frost, E. E., Hiley, C. R., Fan, T. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantification+of+the+repair+process+involved+in+the+repair+of+a+cell+monolayer+using+an+in+vitro+model+of+mechanical+injury.">Quantification of the repair process involved in the repair of a cell monolayer using an in vitro model of mechanical injury.</a> Angiogenesis. 2 (1), 67-80 (1998).</li><li>Yue, P. Y. K., Leung, E. P. Y., Mak, N. K., Wong, R. N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+simplified+method+for+quantifying+cell+migration/+wound+healing+in+96-well+plates.">A simplified method for quantifying cell migration/ wound healing in 96-well plates.</a> J. Biomol Screen. 15 (4), 427-433 (2010).</li><li>Yue, P. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Elucidation+of+the+mechanisms+underlying+the+angiogenic+effects+of+ginsenoside+Rg(1)+in+vivo+and+in+vitro.">Elucidation of the mechanisms underlying the angiogenic effects of ginsenoside Rg(1) in vivo and in vitro.</a> Angiogenesis. 8 (3), 205-216 (2005).</li><li>Kwok, H. H., Chan, L. S., Poon, P. Y., Yue, P. Y., Wong, R. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Ginsenoside-Rg1+induces+angiogenesis+by+the+inverse+regulation+of+MET+tyrosine+kinase+receptor+expression+through+miR-23a.">Ginsenoside-Rg1 induces angiogenesis by the inverse regulation of MET tyrosine kinase receptor expression through miR-23a.</a> Toxicol Appl Pharmacol. 287 (3), 276-283 (2015).</li></ol>

Onze cel wounder heeft een aantal unieke functies in het oplossen van de problemen van de traditionele celmigratie assays. De 8-kanaals mechanische cel wounder is gemaakt van hoogwaardig roestvrij staal (staal 304) met een lange levensduur die kan worden gesteriliseerd in een autoclaaf. Bijna alle commerciële merken van 96 putjes op de markt kan worden gebruikt met deze mechanische cel wounder vanwege de verstelbare geleidingsstaaf. Het ontwerp van de verstelbare geleiding balk zorgt er ook voor dat de scharrelruimte i...

Celmigratie speelt een belangrijke rol in de cellulaire processen zoals embryogenese, neurogenese, angiogenese, wondheling, mucosale reparatie, epitheliale-mesenchymale-overgangen in normale ontwikkeling en ziekte situatie 1. Het is een ingewikkeld proces waarbij de coördinatie van een groot aantal inter- en intra-cellulaire evenementen, waaronder signalering molecuul interacties, cel polarisatie, cytoskelet reorganisatie matrix remodeling, membraan uitsteeksel en dynamische cel-cel adhesie modulatie 2 gaat. Door het bestuderen van celmigratie, kan de ontdekking en validatie van chemicaliën of biomoleculen leidt tot cel beweging en de bijbehorende biochemische pathways worden bepaald. Deze fundamentele werkwijze kan met voordeel worden gebruikt als indicatie voor diverse toepassingen, zoals behandeling van ziekten en drug targeting. Het verwonden assay is een van de celmigratie assays 3. Hier wordt eenindividueel monster van cellen wordt deels mechanisch verwijderd worden om een ​​ontbloot waar cellen migreren naar het gebied te dekken te produceren. Het percentage herstel op een bepaald tijdstip wordt gecontroleerd. Bij het hanteren groot aantal monsters, kan kwesties zoals de experimentele kosten en kruisbesmetting binnen monsters problematisch zijn. Hoewel vele commerciële instrumenten en testen beschikbaar voor het bestuderen celmigratie 4, 5, 6, velen vereist kostbare en geavanceerde apparatuur en verbeteringen zijn nog steeds nodig. Om deze redenen is een 8-kanaals mechanische cel wounder (figuur 1) ontwikkeld. De 8-kanaals mechanische cel wounder heeft een aantal unieke kenmerken opgenomen in het oplossen van de bovengenoemde problemen. Het biedt de flexibiliteit om cel migratie uit te voeren / verwonden assays in de 96-well cultuur plaat formaat. De verstelbare guIding bar ontwerp zorgt ervoor dat de kras gebied is in de centrale positie van elk putje. Ook kan de hoogte van de geleidingsstaven worden aangepast zodat de wounder geldt voor verschillende merken van kweekplaten. Tot slot, de verstelbare verwonding pin ontwerp maakt een gelijkmatige contact van de pipetpunten met de cultuur plaat oppervlak om gelijktijdige en reproduceerbare verwonden 7, 8 te bereiken.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>96-well cell culture plate</td>
			<td>Nunc</td>
			<td>167008</td>
			<td>Other brands of 96-well cell culture plate can also be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>P10 pipette tips</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>301-03-051</td>
			<td>Short P10 pipette tip is more easy to create a clear wound</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wounder</td>
			<td>R&#38;P Technology Limited</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Medium 199</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>M2520-1L</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>26140079</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140122</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Heparin sodium salt from porcine intestinal mucosa</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>H3393</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Gelatin from bovine skin</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>G9391</td>
			<td>For cell culture of human umbilical vein endothelial cells. 
			Use appropirate culture medium and condition for other type of cells.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a device for performing cell migration/wound healing in a 96-well plate

De celmigratie / verwonden assay is een veelgebruikte werkwijze om celmigratie en andere biologische processen zoals angiogenese en tumormetastase bestuderen. In deze assay worden cellen gekweekt tot een confluente monolaag te vormen en een mechanische wond door krassen met een inrichting. Vervolgens de migratie snelheid van de cellen naar het blootgelegde gebied kan worden gevolgd door beeldvorming. De 8-kanaals mechanische wounder is ontworpen om de meeste van de problemen bij de celmigratie assay pakken. Ten eerste kunnen onze wounder gemakkelijk worden gesteriliseerd door autoclaveren of gewone ontsmettingsmiddelen. In de tweede plaats, laat de individuele verstelbare pinnen zelfs contact op met de celkweek plaat zodat scherpe en reproduceerbare wonden kunnen worden gemaakt. Ten derde, de geleidingsstaven aan beide zijden van de wounder consistente verwonding positie in elk putje. Het gebruik van wegwerp plastic pipet tips voor het verwonden kunnen verder betere hantering van de wounder en cross-contaminat minimaliserenion. Concluderend kan onze mobiele wounder onderzoekers met gebruiksvriendelijke en reproduceerbare inrichting voor het uitvoeren van de celmigratie assay met behulp van de standaard 96-well kweekplaat.

Deze 8-kanaals mechanische wounder is geconstrueerd om een ​​cel monolaag krabben om de celmigratie analyse uit te voeren. Het is een gebruiksvriendelijk apparaat dat cel krassen assays in 96-well platen in minder dan een minuut kan uitvoeren zonder speciale opleiding. Dit kan wounder wondgebieden introduceren op celmonolagen met een uniforme breedte van ongeveer 600 micrometer en met scherpe randen (figuren 5 en 6). De breedte van de wonden afhankel...

Watch this Scientific Journal Video about A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate at JoVE.com

A Device for Performing Cell Migration/Wound Healing in a 96-Well Plate

Hier presenteren we een protocol bij een semi-high throughput celmigratie analyse uit te voeren op een 96-well celcultuur plaat. Dit protocol is een snelle, eenvoudige en economische methode om consistente kras wonden op een cel monolaag te creëren.

Een inrichting voor het uitvoeren van celmigratie / wondgenezing in een 96-putjesplaat

The cell migration/wounding assay is a commonly used method to study cell migration and other biological processes, such as angiogenesis and tumor ...

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Understanding Early Organogenesis Using a Simplified In Situ Hybridization Protocol in Xenopus

Inzicht in de vroege organogenese Met behulp van een vereenvoudigd<em&gt; In Situ</em&gt; Hybridisatie Protocol in<em&gt; Xenopus</em

Organogenesis is the study of how organs are specified and then acquire their specific shape and functions during development.  The Xenopuslaevis embryo ...

Automated Quantification of Hematopoietic Cell &#8211; Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Automated Quantification of Hematopoietic Cell ÃƒÂ¢Ã¢â€šÂ¬Ã¢â‚¬Å“ Stromal Cell Interactions in Histological Images of Undecalcified Bone

Geautomatiseerde kwantificering van hematopoietische cellen - stromale cel interacties in histologische afbeeldingen van ontkalkte Bone

Confocal microscopy is the method of choice for the analysis of localization of multiple cell types within complex tissues such as the bone marrow. ...

Scalable 96-well Plate Based iPSC Culture and Production Using a Robotic Liquid Handling System

Schaalbare 96 putjes plaat Based iPSC Culture and Production Met een Robotic Liquid Handling System

Continued advancement in pluripotent stem cell culture is closing the gap between bench and bedside for using these cells in regenerative medicine, drug ...

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Establishment of a Clinically Relevant Ex Vivo Mock Cataract Surgery Model for Investigating Epithelial Wound Repair in a Native Microenvironment

Oprichting van een klinisch relevante<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Mock Cataract Surgery model voor het onderzoeken van Epithelial Wound Repair in een Inheems Microenvironment

The major impediment to understanding how an epithelial tissue executes wound repair is the limited availability of models in which it is possible to ...

Microinjection for Transgenesis and Genome Editing in Threespine Sticklebacks

Micro-injectie voor Transgenese en Genome Bewerken in Threespine Stekelbaarzen

The threespine stickleback fish has emerged as a powerful system to study the genetic basis of a wide variety of morphological, physiological, and ...

Adenoviral Gene Therapy for Diabetic Keratopathy: Effects on Wound Healing and Stem Cell Marker Expression in Human Organ-cultured Corneas and Limbal Epithelial Cells

Adenovirale Gentherapie voor Diabetische keratopathie: Effecten op wondgenezing en Stem Cell Marker Expressie in Human Organ-gekweekte Corneas en Limbale epitheelcellen

The goal of this protocol is to describe molecular alterations in human diabetic corneas and demonstrate how they can be alleviated by adenoviral gene ...

Rapid Isolation of BMPR-IB+ Adipose-Derived Stromal Cells for Use in a Calvarial Defect Healing Model

Rapid Isolatie van BMPR-IB + Adipose-afgeleide stromacellen voor gebruik in een calvarial Defect Healing Model

Invasive cancers, major injuries, and infection can cause bone defects that are too large to be reconstructed with preexisting bone from the patient's own ...

A Novel Mammary Fat Pad Transplantation Technique to Visualize the Vessel Generation of Vascular Endothelial Stem Cells

Een nieuwe Mammary Fat Pad Transplantation Technique om de Vessel Generation van Vasculaire Endotheliale Stamcellen te visualiseren

Endothelial cells (ECs) are the fundamental building blocks of the vascular architecture and mediate vascular growth and remodeling to ensure proper ...

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Generation of Scaffold-free, Three-dimensional Insulin Expressing Pancreatoids from Mouse Pancreatic Progenitors In Vitro

Steiger-vrije, driedimensionale insuline uitdrukken Pancreatoids van muis alvleesklier voorlopercellen In Vitro generatie

The pancreas is a complex organ composed of many different cell types that work together to regulate blood glucose homeostasis and digestion. These cell ...

Visualizing the Node and Notochordal Plate In Gastrulating Mouse Embryos Using Scanning Electron Microscopy and Whole Mount Immunofluorescence

Visualiseren van het knooppunt en de Notochordal plaat In Gastrulating muis embryo's met behulp van Scanning elektronen microscopie en hele Mount immunofluorescentie

The post-implantation mouse embryo undergoes major shape changes after the initiation of gastrulation and morphogenesis. A hallmark of morphogenesis is ...