1. Precipitação de CaCO₃

1. Prepare 5 mL de 1 M CaCl₂.
2. Prepare 5 mL 1 M Na₂CO₃.
3. Em um pequeno tubo de centrífuga (1,5 mL), adicione 750 μL de CaCl₂ e 750 μL de Na₂CO₃.
4. Espere 2 minutos para que a reação ocorra. A solução deve ficar nublada.
5. Centrifugar a mistura a 10.000 × g por 5 min.
6. Decantar o supernatante.
7. Adicione 1 mL de água fria à pelota.
8. Resuspend a pelota misturando em um misturador de vórtice para 10 s.
9. Centrifugar a mistura a 10.000 × g por 5 min.
10. Decantar o supernatante.

2. Precipitação de Proteínas do Leite

1. Despeje o leite em um béquer e adicione uma barra de mexida.
2. Leite morno suavemente até 40 °C em um prato quente. Não aqueça acima de 40 °C.
3. Prepare 15% (v/v) de ácido acético misturando 7,5 mL de ácido acético e diluindo em água suficiente para atingir 50 mL.
4. Mergulhe o eletrodo de um medidor de pH no leite morno e monitore o pH.
5. Adicione o ácido acético em termos de gota ao leite até que um pH de 4.6 seja atingido.
6. Filtragem do Leite
   1. Flauta um pedaço de papel filtro e coloque-o em um funil.
   2. Coloque o funil em um frasco e despeje a solução de leite acidificado no funil.
   3. À medida que a solução é derramada, o papel filtro pode ficar entupido. Usando uma haste de agitação, agitar a solução e filtrar o papel ocasionalmente para desentupir. Se não melhorar a passagem da solução, altere o papel filtro.
   4. Coloque um novo papel filtro na parte superior do banco e transfira o máximo do sólido molhado para o novo papel filtro. Isso deve absorver mais água do sólido.
   5. Se o novo papel filtro ficar muito molhado, continue a alterá-lo até que haja uma quantidade mínima de umidade no papel do filtro. Pressione-o levemente para absorver mais água, se necessário.
   6. Pegue o sólido seco e suspenda em cerca de 70% de etanol. Filtre o sólido novamente seguindo as etapas 2.6.1 para 2.6.5.
7. Centrifugação do Leite (como alternativa à filtragem)
   1. Transfira 50 mL de porções da mistura para tubos de centrífugas de 50 mL.
   2. Centrifugar a 4.500 × g por 10 min, depois decantar o supernante.
   3. Adicione 50 mL 70% de etanol à pelota.
   4. Usando uma haste de agitação, resuspenque a pelota no etanol.
   5. Centrifugar esta suspensão após a etapa 2.7.2.
8. Resuspenda a pelota no buffer para análises posteriores, como SDS-PAGE, caso contrário, armazene-a a 4°C.

3. Recristalização do KCl

1. Pesar 50 g de KCl em um frasco de Erlenmeyer, e adicionar 100 mL de água
2. Aqueça a mistura até ferver a água. Certifique-se de que todo o pó KCL está dissolvido. Algumas impurezas podem não se dissolver na água.
3. Aqueça outro frasco (vazio) Erlenmeyer junto com a mistura e mantenha-o muito quente.
4. Coloque um funil com papel filtro no frasco quente e vazio.
5. Despeje a solução através do papel do filtro para remover impurezas não resolvidas. O frasco receptor é mantido aquecido para garantir que não ocorram alterações de temperatura durante a filtragem, caso contrário um precipitado bruto se formará. Se isso acontecer, reeque a mistura até que todos os precipitadores se dissolvam.
6. Remova o frasco com a solução do calor.
7. Mantenha-o em um lugar fresco no quarto e deixe esfriar lentamente por cerca de 30 minutos, ou até que não esteja mais quente para tocar.
8. Uma vez resfriado até a temperatura ambiente, coloque o frasco em um banho de gelo para baixar ainda mais a temperatura. Alternativamente, pode-se deixar o frasco dentro da geladeira ou uma sala controlada pela temperatura a 4 °C.
9. Os cristais podem ser colhidos filtrando como nas etapas 3.4-3.5 (use um frasco e funil à temperatura ambiente).