Name: assay to measure nucleocytoplasmic transport in real time within motor neuron-like nsc-34 cells
Uploaded: 2017-05-16T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells at JoVE.com

Vi takker alle medlemmene av AI-laboratoriet for deres nyttige kommentarer og forslag. Vi ønsker å takke prof. Mark Hipp (Max Planck Institute for Biochemistry) for å gi oss shuttle-GFP-vektoren. Dette arbeidet ble støttet av tilskudd fra Israels vitenskapsstiftelse (ISF # 124/14), Binational Science Foundation (BSF # 2013325), FP7 Marie Curie Career Integration Grant (CIG # 333794) og Nasjonalt institutt for psykobiologi i Israel NIPI # b133-14 / 15).

1. Cell Line Preparation <ol><li> Tine ca. 1.000.000 musneuroblastom ryggmargsceller (NSC-34-celler) som ble lagret i en flytende nitrogenbeholder. Bruk en 37 ° C vanninkubator til cellene er helt tint. </li><li> Tilsett fersk, varmt medium (DMEM medium inneholdende 10% føtalt bovint serum (FBS), 1% L-glutamin og 1% pen-strep antibiotika). </li><li> Sentrifug opptining av celler (SL16R) ved 500 xg i 5 minutter, danner en cellepellet. Kast mediumet og legg til 1 ml nytt medium for cellesuspensjonen. </li><li> Plasser...

<ol>
	<li>Alberts, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Molecular biology of the cell. , (2002).</li><li>Freitas, N., Cunha, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+and+signals+for+the+nuclear+import+of+proteins.">Mechanisms and signals for the nuclear import of proteins.</a> Curr Genomics. 10, 550-557 (2009).</li><li>Kalderon, D., Roberts, B. L., Richardson, W. D., Smith, A. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+short+amino+acid+sequence+able+to+specify+nuclear+location.">A short amino acid sequence able to specify nuclear location.</a> Cell. 39, 499-509 (1984).</li><li>la Cour, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+and+prediction+of+leucine-rich+nuclear+export+signals.">Analysis and prediction of leucine-rich nuclear export signals.</a> Protein Eng Des Sel. 17, 527-536 (2004).</li><li>Boeynaems, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+screen+connects+nuclear+transport+genes+to+DPR+pathology+in+c9ALS/FTD.">Drosophila screen connects nuclear transport genes to DPR pathology in c9ALS/FTD.</a> Sci Rep. 6, 20877 (2016).</li><li>Freibaum, B. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GGGGCC+repeat+expansion+in+C9orf72+compromises+nucleocytoplasmic+transport.">GGGGCC repeat expansion in C9orf72 compromises nucleocytoplasmic transport.</a> Nature. 525, 129-133 (2015).</li><li>Jovicic, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modifiers+of+C9orf72+dipeptide+repeat+toxicity+connect+nucleocytoplasmic+transport+defects+to+FTD/ALS.">Modifiers of C9orf72 dipeptide repeat toxicity connect nucleocytoplasmic transport defects to FTD/ALS.</a> Nat Neurosci. 18, 1226-1229 (2015).</li><li>Kwon, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Poly-dipeptides+encoded+by+the+C9orf72+repeats+bind+nucleoli,+impede+RNA+biogenesis,+and+kill+cells.">Poly-dipeptides encoded by the C9orf72 repeats bind nucleoli, impede RNA biogenesis, and kill cells.</a> Science. 345, 1139-1145 (2014).</li><li>Rossi, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nuclear+accumulation+of+mRNAs+underlies+G4C2-repeat-induced+translational+repression+in+a+cellular+model+of+C9orf72+ALS.">Nuclear accumulation of mRNAs underlies G4C2-repeat-induced translational repression in a cellular model of C9orf72 ALS.</a> J Cell Sci. 128, 1787-1799 (2015).</li><li>Shi, K. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxic+PRn+poly-dipeptides+encoded+by+the+C9orf72+repeat+expansion+block+nuclear+import+and+export.">Toxic PRn poly-dipeptides encoded by the C9orf72 repeat expansion block nuclear import and export.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. , (2017).</li><li>Zhang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+C9orf72+repeat+expansion+disrupts+nucleocytoplasmic+transport.">The C9orf72 repeat expansion disrupts nucleocytoplasmic transport.</a> Nature. 525, 56-61 (2015).</li><li>Zhang, Y. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=C9ORF72+poly(GA)+aggregates+sequester+and+impair+HR23+and+nucleocytoplasmic+transport+proteins.">C9ORF72 poly(GA) aggregates sequester and impair HR23 and nucleocytoplasmic transport proteins.</a> Nat Neurosci. 19, 668-677 (2016).</li><li>Cleveland, D. W., Rothstein, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+Charcot+to+Lou+Gehrig:+deciphering+selective+motor+neuron+death+in+ALS.">From Charcot to Lou Gehrig: deciphering selective motor neuron death in ALS.</a> Nat Rev Neurosci. 2, 806-819 (2001).</li><li>DeJesus-Hernandez, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expanded+GGGGCC+hexanucleotide+repeat+in+noncoding+region+of+C9ORF72+causes+chromosome+9p-linked+FTD+and+ALS.">Expanded GGGGCC hexanucleotide repeat in noncoding region of C9ORF72 causes chromosome 9p-linked FTD and ALS.</a> Neuron. 72, 245-256 (2011).</li><li>Renton, A. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+hexanucleotide+repeat+expansion+in+C9ORF72+is+the+cause+of+chromosome+9p21-linked+ALS-FTD.">A hexanucleotide repeat expansion in C9ORF72 is the cause of chromosome 9p21-linked ALS-FTD.</a> Neuron. 72, 257-268 (2011).</li><li>Boeve, B. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characterization+of+frontotemporal+dementia+and/or+amyotrophic+lateral+sclerosis+associated+with+the+GGGGCC+repeat+expansion+in+C9ORF72.">Characterization of frontotemporal dementia and/or amyotrophic lateral sclerosis associated with the GGGGCC repeat expansion in C9ORF72.</a> Brain. 135, 765-783 (2012).</li><li>Haeusler, A. R., Donnelly, C. J., Rothstein, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+expanding+biology+of+the+C9orf72+nucleotide+repeat+expansion+in+neurodegenerative+disease.">The expanding biology of the C9orf72 nucleotide repeat expansion in neurodegenerative disease.</a> Nat Rev Neurosci. 17, 383-395 (2016).</li><li>Woerner, A. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytoplasmic+protein+aggregates+interfere+with+nucleocytoplasmic+transport+of+protein+and+RNA.">Cytoplasmic protein aggregates interfere with nucleocytoplasmic transport of protein and RNA.</a> Science. 351, 173-176 (2016).</li><li>Tao, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nucleolar+stress+and+impaired+stress+granule+formation+contribute+to+C9orf72+RAN+translation-induced+cytotoxicity.">Nucleolar stress and impaired stress granule formation contribute to C9orf72 RAN translation-induced cytotoxicity.</a> Hum Mol Genet. 24, 2426-2441 (2015).</li><li>Wen, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antisense+proline-arginine+RAN+dipeptides+linked+to+C9ORF72-ALS/FTD+form+toxic+nuclear+aggregates+that+initiate+in+vitro+and+in+vivo+neuronal+death.">Antisense proline-arginine RAN dipeptides linked to C9ORF72-ALS/FTD form toxic nuclear aggregates that initiate in vitro and in vivo neuronal death.</a> Neuron. 84, 1213-1225 (2014).</li></ol>

Denne protokollen demonstrerer en svært sensitiv og kvantitativ ny analyse for å evaluere små endringer i nukleocytoplasmisk transport. Ved bruk av dette systemet er det mulig å observere og måle nukleocytoplasmisk transport og dens dysfunksjon i sanntid, ikke bare store feil som resulterer i dramatiske endringer i proteinfordeling. Denne analysen har ikke bare en sensitivitetsfordel, men det krever også lite forberedelse, er billig, og er et veldig enkelt og lavt engasjement assay. Fo...

Nukleærporekomplekset (NPC) styrer import og eksport av store molekyler inn i og ut av cellekjernen. I motsetning til små molekyler, som kan komme inn i kjernen uten regulering 1 , styres transporten av større molekyler sterkt av NPC. Disse store molekylene, som proteiner og RNA, knytter seg til transportfaktorer, inkludert importins og exportins, som skal importeres og eksporteres fra kjernen 2 . For å bli importert må proteiner inneholde et lite peptidmotiv, vanligvis kalt et nukleært lokaliseringssignal (NLS), som er bundet av importins 2 . Disse sekvensene av aminosyrer virker som en markering og er forskjellige i sammensetning 3 , 4 . Proteiner kan eksporteres fra kjernen til cytoplasma på grunn av deres tilknytning til exportinS, som binder en signalsekvens, vanligvis kalt et nukleært eksportsignal (NES) 2 . Både importins og exportins er i stand til å transportere sin last på grunn av reguleringen av den lille Ras-relaterte kjerneprotein-GTPase (Ran) 2 . Ran har vist seg å eksistere i forskjellige konformasjonelle tilstander, avhengig av om den er bundet til GTP eller BNP. Når du er bundet til GTP, kan Ran binde seg til import eller eksport. Ved binding til RanGTP frigjør importins sin last, mens eksportinnsatser må binde RanGTP for å danne et kompleks med sin eksportfrakt. Den dominerende nukleotidbindende tilstanden til Ran avhenger av dens plassering i kjernen (RanGTP) eller cytoplasmaet (RanGDP). Nylig har en rekke studier vist en sammenheng mellom forringelser i nukleocytoplasmatisk vei og både amyotrofisk lateralsklerose (ALS) og frontotemporal demens (FTD) 5 , 6 </sup&gt; , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 . ALS er en progressiv og dødelig nevrodegenerativ sykdom som påvirker både øvre og nedre motorneuroner (MNs) 13 og resulterer i lammelser og til slutt i døden, innen 2-5 år i gjennomsnitt. De fleste tilfeller av ALS er klassifisert som sporadisk (SALS), mangler tilsynelatende genetisk binding, men 10% arves på en dominerende måte (familial ALS; FALS). Nylig ble heksanukleotid-gjentagelsesutvidelser (HRE) i kromosom 9 åpne leseramme 72 (C9orf72) gen identifisert 14 , 15 som en genetisk årsak til ALS og FTD. Disse mutantene utgjør 30-40% av FALS-sakene 16 , og forskjellige studier har uttaltAt de forårsaker toksisitet ved å påvirke nukleocytoplasmisk transport 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 . Disse studiene har for det meste vist de endelige utfall og manifestasjoner av HRE på nukleocytoplasmisk transport, men de viser ikke nukleocytoplasmisk forstyrrelse i sanntid. Som et resultat har bare alvorlig nukleocytoplasmisk transportmangel blitt evaluert 11 , 17 , 18 . Denne protokollen beskriver en ny og veRykk sensitiv analyse for å evaluere og kvantifisere nukleocytoplasmisk transportdysfunksjon i sanntid. Importraten av et NLS-NES-GFP-protein (shuttle-GFP) kan kvantifiseres i sanntid ved bruk av fluorescerende mikroskopi. Dette gjøres ved å bruke en eksportinhibitor, som beskrevet tidligere 18 , slik at shuttle-GFP bare kan komme inn i kjernen. Ved hjelp av florescensmikroskopi og en programvare som er i stand til å kvantifisere fluorescerende endringer i sanntid, er det mulig å kvantifisere gradvise endringer i fluorescensintensiteten til shuttle-GFP, som er lokalisert i kjernen. Som en følge av dette kan en Michaelis-Menten-lignende metningskurve av fluorescens-til-tid-aksen, som representerer mengden av kjernevirksomhet-GFP, til enhver tid utføres. Ved å bruke den innledende lineære frekvensen til kurvene, er det mulig å generere en skråning, som representerer inngangshastigheten i kjernen før fluorescensmetning. For å validere analysen, oversetterD C9orf72 dipeptidrepetater, poly (GR) og poly (PR), som tidligere har blitt rapportert å forstyrre nukleocytoplasmisk transport, ble brukt 5 , 7 , 8 , 10 , 12 . Ved hjelp av denne analysen ble det observert en 50% reduksjon i nukleær importrate sammenlignet med kontrollen. Ved bruk av dette systemet kan små endringer i nukleocytoplasmisk transport undersøkes. Videre kan evnen til forskjellige faktorer for å redde en nukleocytoplasmatisk transportdefekt bestemmes.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Mouse Motor Neuron-Like hybrid Cell Line (NSC-34)</td>
			<td>tebu-bio</td>
			<td>CLU140-A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM 4.5g/L L-glucose</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>01-055-1A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FBS European Grade</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>04-007-1A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>SL 16R Centrifuge</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75004030</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo Forma Series ii Water Jacketed CO2 Incubator</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>3111</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cover glass 12mm dia. thick 0.13-0.17mm</td>
			<td>Bar Naor LTD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td><a href="https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/R0531">TurboFect Transfection Reagent</a></td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td><a href="https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/R0531">R0531</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Axiovert 100 inverted microscope</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>IMAGING WORKBENCH 2&#160;</td>
			<td>Axon Instruments</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Leptomycin B</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>L2913</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS</td>
			<td>Biological Industries</td>
			<td>02-023-1A</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Homogenizer motor/control/chuck/90-degree clamp</td>
			<td>Glas-Col</td>
			<td>099C K5424CE</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MicroCL 17R Centrifuge, Refrigerated</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>75002455</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

assay to measure nucleocytoplasmic transport in real time within motor neuron-like nsc-34 cells

Nukleocytoplasmisk transport refererer til import og eksport av store molekyler fra cellekjernen. Nylig har en rekke studier vist en sammenheng mellom amyotrofisk lateralsklerose (ALS) og nedsattelse i nukleocytoplasmatisk vei. ALS er en neurodegenerativ sykdom som påvirker motorneuronene og resulterer i lammelser og til slutt i døden, innen 2-5 år i gjennomsnitt. De fleste tilfeller av ALS er sporadiske, mangler tilsynelatende genetisk binding, men 10% arves på en dominerende måte. Nylig ble heksanukleotid-gjentagelsesutvidelser (HRE) i kromosom 9 åpne leseramme 72 (C9orf72) gen identifisert som en genetisk årsak til ALS og frontotemporal demens (FTD). Det er viktig at forskjellige grupper nylig har foreslått at disse mutantene påvirker nukleocytoplasmisk transport. Disse studiene har for det meste vist det endelige utfallet og manifestasjoner forårsaket av HRE på nukleocytoplasmisk transport, men de demonstrerer ikke kjernedistribusjon dysfunksjon iSanntid. Som et resultat kan kun alvorlig nukleocytoplasmatisk transportmangel bestemmes, hovedsakelig på grunn av høy overekspresjon eller eksogen proteininnføring. Denne protokollen beskriver en ny og svært sensitiv analyse for å evaluere og kvantifisere nukleocytoplasmatisk transportdysfunksjon i sanntid. Importraten av et NLS-NES-GFP-protein (shuttle-GFP) kan kvantifiseres i sanntid ved bruk av fluorescerende mikroskopi. Dette utføres ved å bruke en eksportinhibitor, slik at shuttle GFP bare kan komme inn i kjernen. For å validere analysen ble de C9orf72 HRE-translaterte dipeptidreplater, poly (GR) og poly (PR), som tidligere har vist seg å forstyrre nukleocytoplasmisk transport, brukt. Ved hjelp av den beskrevne analysen ble det observert en 50% reduksjon i kjernekraften i forhold til kontrollen. Ved bruk av dette systemet kan små endringer i nukleocytoplasmisk transport undersøkes og evnen til forskjellige faktorer til å redde (til og med delvis) en nukleocytoplasmisk trAnsvarsfeil kan bestemmes.

Ved bruk av prosedyren presentert her, transduseres motorneuronlignende NSC-34-celler med et NLS-NES-GFP-protein (shuttle-GFP). Dette proteinet, som har NLS- og NES-signalsekvenser ( Figur 1 ), kan skifte mellom kjernen og cytoplasma. Generisk GFP kan gå inn eller ut av kjernen i fravær av en lokaliseringssignalmerk kun ved diffusjon og fordeles derfor jevnt mellom kjernen og cytoplasmaen ( figur 2A ). I motsetning til dette er shuttle-GFP-proteinet ho...

Watch this Scientific Journal Video about Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells at JoVE.com

Assay to Measure Nucleocytoplasmic Transport in Real Time within Motor Neuron-like NSC-34 Cells

Denne protokollen beskriver en metode for sensitiv måling av nukleocytoplasmatisk transportrate i motorneuronlignende NSC-34-celler ved å kvantifisere sanntidsendringen i nukleær import av et NLS-NES-GFP-protein.

Analyse for å måle nukleocytoplasmisk transport i sanntid innen Motor Neuron-lignende NSC-34-celler

Nucleocytoplasmic transport refers to the import and export of large molecules from the cell nucleus. Recently, a number of studies have shown a ...

Research

JoVE Journal

Neuroscience

Time-lapse Live Imaging of Clonally Related Neural Progenitor Cells in the Developing Zebrafish Forebrain

Precise patterns of division, migration and differentiation of neural progenitor cells are crucial for proper brain development and function1,2. To ...

Motor Nerve Transection and Time-lapse Imaging of Glial Cell Behaviors in Live Zebrafish

Motor Nerve transection og Time-lapse Imaging av Glial Cell atferd Live Sebrafisk

The  nervous system is often described as a hard-wired component of the body even  though it is a considerably fluid organ system that reacts to external ...

Using Informational Connectivity to Measure the Synchronous Emergence of fMRI Multi-voxel Information Across Time

Bruke Informativ Tilkobling til Mål Synkron Emergence of fMRI Multi-voxel informasjon på tvers av tid

It is now appreciated that condition-relevant information can be present within distributed patterns of functional magnetic resonance imaging (fMRI) brain ...

Real-time Imaging of Axonal Transport of Quantum Dot-labeled BDNF in Primary Neurons

Real-time Imaging av aksonal Transport av Quantum Dot-merket BDNF i Primær Neuroner

BDNF plays an important role in several facets of neuronal survival, differentiation, and function. Structural and functional deficits in axons are ...

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

An Ex Vivo Laser-induced Spinal Cord Injury Model to Assess Mechanisms of Axonal Degeneration in Real-time

En<em&gt; Ex Vivo</em&gt; Laser-indusert ryggmargsskade Model å vurdere Mekanismer av aksonal degenerasjon i sanntid

Injured CNS axons fail to regenerate and often retract away from the injury site. Axons spared from the initial injury may later undergo secondary axonal ...

Real-time Electrophysiology: Using Closed-loop Protocols to Probe Neuronal Dynamics and Beyond

Sanntidselektro: Bruk lukket sløyfe Protokoller å probe Nevronale Dynamics og Beyond

Experimental neuroscience is witnessing an increased interest in the development and application of novel and often complex, closed-loop protocols, where ...

A Protocol for the Administration of Real-Time fMRI Neurofeedback Training

En protokoll for administrasjon av Real-Time fMRI Neurofeedback opplæring

Neurologic disorders are characterized by abnormal cellular-, molecular-, and circuit-level functions in the brain. New methods to induce and control ...

Real-time Iontophoresis with Tetramethylammonium to Quantify Volume Fraction and Tortuosity of Brain Extracellular Space

Real-time Iontophoresis med tetrametylammonium for å kvantifisere volumfraksjon og tortuositet i hjernens ekstracellulære rom

This review describes the basic concepts and protocol to perform the real-time iontophoresis (RTI) method, the gold-standard to explore and quantify the ...

Live-cell Measurement of Odorant Receptor Activation Using a Real-time cAMP Assay

Live-celle måling av Odorant reseptor aktivisering benytter en sanntid leiren analysen

The enormous sizes of the mammalian odorant receptor (OR) families present difficulties to find their cognate ligands among numerous volatile chemicals. ...

Assay Development for High Content Quantification of Sod1 Mutant Protein Aggregate Formation in Living Cells

Analysen utvikling for høy innhold kvantifisering av Sod1 Mutant Protein samlet formasjon i levende celler

Amyotrophic lateral sclerosis (ALS) is a fatal neurodegenerative disease that can be caused by inherited mutations in the gene encoding copper-zinc ...