Name: identification and characterization of metastatic factors by gene transfer into the novel rip-tag; rip-tva murine model
Uploaded: 2017-10-16T12:30:00
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우리는 해 롤 드 Varmus, 브라이언 C. 루이스, 더글러스 Hanahan, 대 니 황, 샤론 Pang, 메 간 웡, 그리고 Manasi M. Godbole 감사합니다. Y.C.N.D.는 국방부 그랜트 W81XWH-16-1-0619와 NIH 그랜트 1R01CA204916에 의해 지원 됩니다.

윤리 성명: 실험 동물에 지침 및 규정 명시 된 동물 관리 및 사용 위원회의 Weill 코넬 의학 연구소에 의해 수행 되었다.
 1. 선택의 조류 Retroviral 벡터 (RCASBP A 기반 또는 RCANBP(A)-based) <ul style="list-style: none;"> <li>벡터 라우 스 육 종 바이러스 11에서 파생 되었다. 조류 retroviral 벡터 cDNAs를 제공할 수 있습니다 (&#8804; 2.5 kb), 짧은 헤어핀 RNAs (shRNAs), microRNAs (miRNAs), ?...

<ol>
	<li>Vogelstein, B., Kinzler, K. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multistep+nature+of+cancer.">The multistep nature of cancer.</a> Trends Genet. 9 (4), 138-141 (1993).</li><li>Walrath, J. C., Hawes, J. J., Van Dyke, T., Reilly, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genetically+engineered+mouse+models+in+cancer+research.">Genetically engineered mouse models in cancer research.</a> Adv Cancer Res. 106, 113-164 (2010).</li><li>Khanna, C., Hunter, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modeling+metastasis+in+vivo.">Modeling metastasis in vivo.</a> Carcinogenesis. 26 (3), 513-523 (2005).</li><li>Du, Y. C., Lewis, B. 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S., Varmus, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Receptor+for+hyaluronan-mediated+motility+isoform+B+promotes+liver+metastasis+in+a+mouse+model+of+multistep+tumorigenesis+and+a+tail+vein+assay+for+metastasis.">Receptor for hyaluronan-mediated motility isoform B promotes liver metastasis in a mouse model of multistep tumorigenesis and a tail vein assay for metastasis.</a> Proc Natl Acad Sci USA. 108 (40), 16753-16758 (2011).</li><li>Guernet, A., Grumolato, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9+editing+of+the+genome+for+cancer+modeling.">CRISPR/Cas9 editing of the genome for cancer modeling.</a> Methods. , (2017).</li></ol>

이 연구에서 설명 하는 강력한 마우스 모델, RIP-태그; RIP-tva, 식별 및 전이성 요인의 특성에 대 한 조류 레트로 바이러스를 통해 체세포 유전자 납품을 달성 하기 위해. 비록 RIP-태그; RIP-tva 마우스 췌 장 신경 내 분 비 종양, 전이성 요인이 마우스 모델에서 확인 된 또한 다른 암 종류의 전이 홍보 수 있습니다.
우리의 접근 시간 제어 방식으로, 따라서 더 충실 하 게...

대부분의 암은 체세포 돌연변이 1에서 발생 한다. 기존의 유전자 조작된 마우스 모델 (GEMM)는 특정 유전 변경 tumorigenesis 2에 기여에 대 한 중요 한 통찰력을 제공 합니다. 그러나, 그들은 몇 가지 제한이 있다. 이러한 모델의 주요 단점은 인간, 조직 내의 일부 셀만 유전 변경을 획득에 종양 형성의 산발적 인 특성을 복제 하지 않습니다. 유전자 변형 및 녹아웃 쥐에 있는 돌연변이 생식 개발에 영향을 미칠 가능성이 있습니다. 또한, 이러한 마우스 모델 생성 이며 비싼 시간이 걸리는.
전이 암 분야에서 중요 한 문제입니다. 전이 모델링은 GEMM에서 어렵게 되었습니다. 자연 스러운 전이 마우스에서 희소 하다. Penetrance 변수 이며 대기 시간 전이 3의 GEMM에 오래입니다. 그래서 전이성 캐스케이드의 초기 단계는 제거 실험 전이 모델 마우스의 순환으로 세포의 직접 주사를 사용 합니다.
마우스 모델에서 전이성 요인 공부에 상기 제한 중 일부를 해결 하려면 bitransgenic 마우스 모델, RIP-태그; 개발 했습니다. RIP-tva4. 전략은 하위 그룹 A 조류 leukosis 바이러스, tva 6,7에 대 한 높은 동기화 종양 진행 마우스 모델, RIP 태그 5, 그리고 수용 체의 사용을 결합에 기반. 이 RIP-태그; RIP-tva마우스 모델 유전자 somatically 단일 bitransgenic 마우스 스트레인에 소개 될 수 있습니다. Rb, p53 종양 진압 기능 억제 SV40 T 항 원을 가진 쥐 증식, 혈관 신생, adenoma, 침략 암 등 단계와 비슷한 방식으로 인간의 tumorigenesis, 췌 장 신경 내 분 비 종양을 개발 합니다. RIP-태그 모델이 암, 췌 장 신경 내 분 비 종양에 국한 되지 않음의의 우리의 이해를 위해 매우 유익 했습니다. 그것은 또한 전 임상 실험 8에서 사용 되었습니다.
선물이 RIP-태그;에 조류 레트로 바이러스 intracardiacally의 주입을 통해 체세포 유전자 전송 위한 프로토콜 RIP-tva 쥐. RCASBP 파생 조류 레트로 바이러스와 성공적인 감염 대상 셀을 적극적으로 확산이 필요합니다. 따라서, 우리 선택 RIP-태그; RIP-tva 증식 췌 장 독도의 약 50%에서 발전 하는 때 나이의 7 주에 마우스. 왼쪽된 심 실 intracardiac 주입 높은 titer 바이러스의 감염 10-20 4의 효율성을 달성 하기 위해 필요 합니다. 이 전달 방법 바이러스 췌 장 독도 도달 하기 전에 순환 내에서 바이러스 입자의 중요 한 희석을 감소 시킨다.
이 방법을 사용 하 여, 우리는 이전 Bcl xL 안티 apoptotic 함수 4,9의 독립적인 암 전이 촉진 증명 하고있다. Bcl-xL RIP-태그; tumorigenic 가깝다고 걸쳐 모든 췌 장 β 세포에서 transgene를 통해 표현 했다이 안티 apoptotic 독립적인 전이성 기능 관찰 하지 RIP-Bcl-xL 모델 10마우스. 따라서, 우리의 마우스 모델 식별 tumorigenesis의 나중 단계에서 표현 하는 때 유전자의 기능을 특성화 하는 독특한 기회를 제공 합니다. 독도의 2-4% RIP-태그; 종양으로 발전 하기 때문에 RIP-tva bitransgenic 쥐 바이러스 성 감염 및 모든 premalignant 병 변 없이 RCASBP에서 파생 된 조류 레트로 바이러스 감염만 tumorigenesis의 자연적인 과정을 통해 선택적 우위를 부여 하는 요소를 확인할 수 있습니다. 특히, 전이성 요인 가장 쉽게 인식 됩니다이 방법으로 췌 장의 림프절 이나 다른 장기에 전이 RIP-태그;에서 일반적으로 발생 하지 않습니다 때문에 RIP-tva 쥐.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="747">
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">RCASBP-Y DV plasmid</td>
			<td style="width:123px;">Addgene</td>
			<td style="width:119px;">11478</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">RCAS-RNAi plasmid</td>
			<td style="width:123px;">Addgene</td>
			<td style="width:119px;">15182</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">DMEM</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td>10-013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">fetal bovine serum</td>
			<td>Atlanta Biologicals</td>
			<td>25-005-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">L-glutamine, 100x</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td>25-005-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Penicillin-Streptomycin solution, 100x</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td>30-002-CI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">PBS-/-, 1X</td>
			<td style="width:123px;">Corning</td>
			<td>21-040-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Superfect</td>
			<td>Qiagen</td>
			<td>301305</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Polyallomer centrifuge tube</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>326823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:339px;">0.45 mm Nalgene 
			Syringe Filters with PES Membrane</td>
			<td style="width:123px;">Thermo Scientific</td>
			<td style="width:119px;">194-2545</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:339px;">Insulin Syringes&#160;</td>
			<td style="width:123px;">BD</td>
			<td>329461</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">synaptophysin</td>
			<td style="width:123px;">Vector Laboratories</td>
			<td>VP-S284</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;">VECTASTAIN Elite ABC HRP Kit (Peroxidase, Rabbit IgG)&#160;</td>
			<td style="width:123px;">Vector Laboratories</td>
			<td>PK-6101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">AmpliTaq DNA Polymerase with Buffer II</td>
			<td>Life Technologies</td>
			<td>N8080153</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">MyTaq DNA Polymerase</td>
			<td>Bioline</td>
			<td>BIO-21106</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

identification and characterization of metastatic factors by gene transfer into the novel rip-tag; rip-tva murine model

전이성 암은 단단한 종양을 가진 환자에 있는 죽음의 90%를 차지 한다. 암 전이의 드라이버를 더 잘 이해 하 고 소설 치료 목표를 식별 하는 긴급 한 필요가 있다. 조사를 진행 주 암에서 전이를 분자 이벤트, 우리 bitransgenic 마우스 모델, RIP-태그; 개발 RIP-tva. 이 마우스 모델 쥐 인슐린 발기인 (RIP) 췌 장 β 세포에 SV40 T 항 원 (태그)와 하위 조류 leukosis 바이러스 (tva)에 대 한 수용 체의 식 드라이브. 쥐 증식, 혈관 신생, adenoma, 침략 암 등 단계와 비슷한 인간의 tumorigenesis는 잘 정의 된 단계를 통해 100 %penetrance 췌 장 신경 내 분 비 종양을 개발 합니다. 때문에 RIP-태그; RIP-tva 마우스 전이성 질병을 개발 하지 않습니다, 전이 촉진 유전자 변경 쉽게 확인 될 수 있다. 체세포 유전자 tva 표현으로 전송, 췌 장 β 확산 premalignant 병 변 원하는 유전 변경 은닉 조류 레트로 바이러스의 intracardiac 주사를 통해 달성 된다. titer &#62; ml 당 1 x 108 감염 단위 vivo에서 감염에 대 한 적절 한 것으로 간주 됩니다. 또한, 조류 레트로 바이러스 RIP-태그; 종양에서 파생 된 셀 라인을 감염 시킬 수 있습니다. RIP-tva 고효율 쥐. 셀 라인 또한 전이성 요인 특성을 사용할 수 있습니다. 여기이 마우스 모델을 이용 하 여 세포 선 종양 전이에 후보 유전자의 기능을 평가 하는 방법을 보여 줍니다.

Vivo에서 그리고 생체 외에서 감염 속도 RIP-태그; RIP-tva RCASBP 기반 바이러스에 의해 종양 세포는 20~ 20%와 ~ 80% 각각. RIP 태그; RIP-tva 마우스 모델, 각 마우스에 400 췌 장 독도의 약 4% 종양 20;에 개발 자연스럽 게 따라서 바이러스에 의해 전달 되는 유전자의 잠재적인 효과의 조직학 및 phenotypic 분석에 대 한 각 마우...

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Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

선물이 RIP-태그;를 활용 하 여 소설 체세포 유전자 전달 시스템을 설명 하는 프로토콜 RIP-tva 마우스 모델 전이에서 유전자의 기능 연구. 조류 레트로 바이러스 intracardiacally 성인 쥐에서 췌 장 β 세포의 사전 악성, 비 침 투 적인 병 변으로 유전자 전송을 보장 하기 위해 전달 됩니다.

식별 및 태그-소설 RIP;으로 유전자 이동에 의해 전이성 요인의 특성 RIP-tva Murine 모델

Metastatic cancer accounts for 90% of deaths in patients with solid tumors. There is an urgent need to better understand the drivers of cancer metastasis ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Identification and Characterization of Metastatic Factors by Gene Transfer into the Novel RIP-Tag; RIP-tva Murine Model

Advanced Animal Model of Colorectal Metastasis in Liver: Imaging Techniques and Properties of Metastatic Clones

고급 동물의 간에서 대장 전이의 모델 : 이미징 기술 및 전이성 클론의 특성

Patients with a limited number of hepatic metastases and slow rates of progression can be successfully treated with local treatment approaches1,2. ...

연구

암 연구학

A Syngeneic Mouse Model of Metastatic Renal Cell Carcinoma for Quantitative and Longitudinal Assessment of Preclinical Therapies

전임상 치료의 양적 및 종 방향 평가를위한 동계 마우스 모델 전이성의 신장 세포 암

Renal cell carcinoma (RCC) affects &#62; 60,000 people in the United States annually, and ~ 30% of RCC patients have multiple metastases at the time of ...

A Mouse Model of Fatigue Induced by Peripheral Irradiation

주변 방사선 조사에 의해 유도 된 피로의 마우스 모델

Cancer-related fatigue (CRF) is a distressing and costly condition that often affects patients receiving cancer treatments, including radiation therapy. ...

Virus Delivery of CRISPR Guides to the Murine Prostate for Gene Alteration

CRISPR의 바이러스 배달 Murine 전립선 유전자 변경에 대 한 가이드

With an increasing incidence of prostate cancer, identification of new tumor drivers or modulators is crucial. Genetically engineered mouse models (GEMM) ...

Enrichment and Characterization of the Tumor Immune and Non-immune Microenvironments in Established Subcutaneous Murine Tumors

농축 및 설립된 피하 Murine 종양에서 종양 면역 및 비 면역 Microenvironments의 특성

The tumor immune microenvironment (TIME) has recently been recognized as a critical mediator of treatment response in solid tumors, especially for ...

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

다리에 대 한 3 차원 뼈 세포 외 매트릭스 모델

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Murine Model of Metastatic Liver Tumors in the Setting of Ischemia Reperfusion Injury

허혈 재관류 손상의 설정에서 전이성 간 종양의 뮤린 모델

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Analyzing Tumor Gene Expression Factors with the CorExplorer Web Portal

CorExplorer 웹 포털을 통한 종양 유전자 발현 인자 분석

Differential gene expression analysis is an important technique for understanding disease states. The machine learning algorithm CorEx has shown utility ...

Mapping the Structure-Function Relationships of Disordered Oncogenic Transcription Factors Using Transcriptomic Analysis

전사 분석을 사용하여 무질서한 온코겐 전사 요인의 구조 기능 관계 매핑

Many cancers are characterized by chromosomal translocations which result in the expression of oncogenic fusion transcription factors. Typically, these ...

Discovery of Metastatic Regulators using a Rapid and Quantitative Intravital Chick Chorioallantoic Membrane Model

신속하고 정량적인 병아리 Chorioallantoic 멤브레인 모델을 사용하여 전이성 레귤레이터의 발견

Recent advances in cancer research has illustrated the highly complex nature of cancer metastasis. Multiple genes or genes networks have been found to be ...