Name: tumor engraftment in a xenograft mouse model of human mantle cell lymphoma
Uploaded: 2018-03-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma at JoVE.com

Questo lavoro è stato supportato dalla Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 e 2914-02-2012 e Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 e 310030-153456.

I campioni di sangue umano sono stati utilizzati secondo procedure approvate dalle commissioni di sperimentazione umana dell'ospedale dell'Università di Ginevra ed etica locali.
Procedure degli animali sono state effettuate in conformità con l'istituzionale etico Comitato di cura degli animali in Ginevra, Svizzera e l'ufficio del veterinario cantonale (numero di autorizzazione: 15/26/GE).
1. preparazione delle cellule mononucleari di anima periferica primaria (PBMCs...

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	<li>Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+chemokines:+an+update.">Human chemokines: an update.</a> Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).</li><li>Baggiolini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+and+leukocyte+traffic.">Chemokines and leukocyte traffic.</a> Nature. 392, 565-568 (1998).</li><li>Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , (2001).</li><li>De Silva, N. 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A., Matthes, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frontline+Science:+Anti-JAM-C+therapy+eliminates+tumor+engraftment+in+a+xenograft+model+of+mantle+cell+lymphoma.">Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma.</a> J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).</li></ol>

Studi clinici sono possibili per i farmaci che sono in fase avanzata di sviluppo, ma non possono essere utilizzati per la scoperta di nuovi farmaci. Gli sforzi per sviluppare degli animali destinatari per lo xenotrapianto umano delle cellule al fine di testare farmaci fase precoce lungo sono stati perseguiti. Qui vi presentiamo un modello animale che evita il rigetto del trapianto umano e può stabilire un modello per le malattie umane, quali MCL. Questo è attualmente un modello di xenotrapianto d'avanguardia per studia...

I linfociti di natura svolgono un ruolo importante nella sorveglianza immunitaria, e traffico dei linfociti è un passo fondamentale nel montaggio dell'antigene specifico immunità1,2. Questo processo include la migrazione dei linfociti T naive al timo nel flusso sanguigno e da lì a organi linfoidi secondari, inclusi i linfonodi, placche di Peyer o milza, dove si incontrano gli antigeni cognati. I linfociti B differenziano nel midollo osseo e la migrazione di cellule naive nei follicoli di organi linfoidi secondari3. Alcune di queste cellule di B legano l'antigene con loro recettore e vengono attivati da specifiche cellule T. Proliferazione e la differenziazione di queste cellule B spinge le cellule di B ingenui non attivato, nella zona del manto del follicolo. Le cellule attivate quindi possono differenziarsi in memoria B cellule, che pattugliano il corpo, o maturano in immunoglobulina che secernono le cellule di plasma che migrano al midollo osseo4.
MCL si verifica quando i linfociti di B ingenui nella zona del mantello si trasformano in un tumore. Queste cellule di linfoma risiedono nel microambiente degli organi linfoidi e proliferano indipendentemente dal controllo specifico dei linfociti T. Tuttavia, in una determinata fase della densità di fuggire da questa nicchia e ricircolare nella circolazione sanguigna in cerca di nicchie in altri organi. Considerando la complessità delle molecole di adesione e la promiscuità di chemochine e loro recettori, il meccanismo di questo cellulare traffico in vivo è capito male e quindi ostacola la terapia. Nuovi metodi sono necessari per bloccare efficacemente questo processo di migrazione per impedire che le cellule di linfoma B raggiungendo nuovi microambienti.
MCL è uno dei più difficili per il trattamento di malignità delle cellule di B. Lo sviluppo di un fenotipo neoplastico di MCL è il risultato di una cascata multistep, caratterizzata dall'acquisizione delle proprietà biologiche uniche. Al momento della diagnosi, maggior parte dei pazienti (70%) già presente con una malattia diffusa, con una maggioranza dei casi che esibiscono la partecipazione extranodal in milza, midollo osseo e/o del tratto gastrointestinale5,6. Nei pazienti trattati, ricaduta di tumori resistenti in pochi anni è comune, anche se la chemioterapia convenzionale induce tassi della remissione alta a breve termine7,8. Qui vi presentiamo un nuovo modello di malattia che può aiutare a comprendere la diffusione di MCL e sua biologia sottostante: abbiamo stabilito un modello di mouse dello xenotrapianto MCL umano che ha avuto origine dalle cellule del tumore primario dei pazienti. Speriamo che questo modello aiuterà a sviluppare strategie terapeutiche contro la diffusione di MCL e possibilmente fornire nuove prospettive cliniche per la diagnosi ottima ed il trattamento di pazienti recidivati.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ficoll-paque media</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1440-02</td>
			<td>for separation of mononuclear cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640</td>
			<td>Gibco-Life technologies</td>
			<td>61870-010</td>
			<td>for dilution of blood sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td>washing of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8412</td>
			<td>for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD19-APC700</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B49212</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD20-APC</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A21693</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD20-ECD</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>IM3607</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD5-PC 5.5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>PN A70203</td>
			<td>human T cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD23-PE</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>555711</td>
			<td>Cell surface protein typically absent in MCL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 KO</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B36294</td>
			<td>Pan-leucocyte marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD200-PE</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>552475</td>
			<td>Cell surface protein typically absent in MCL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD scid gamma (NSG) mice</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>5557</td>
			<td>used to develop MCL xenografts in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy sep Human B cell enrichment kit</td>
			<td>Stem cell technologies</td>
			<td>19054</td>
			<td>used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Navios</td>
			<td>used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X ammonium chloride potassium buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2&#183;2H2O 3.722 mg/l )</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tumor engraftment in a xenograft mouse model of human mantle cell lymphoma

I linfociti B sono attori chiave nella circolazione delle cellule immuni e hanno principalmente ospite e risiedono negli organi linfoidi. Mentre le cellule B normali proliferano solo quando sono stimolati da linfociti T, cellule di B oncogeniche sopravvivono ed espandono autonomamente in nicchie di organo non definito. Linfoma mantellare (MCL) è un tale disordine delle cellule B, dove il tasso di sopravvivenza mediana dei pazienti è di 4-5 anni. Ciò richiede la necessità di meccanismi efficaci per cui l'homing e l'attecchimento di queste cellule vengono bloccate al fine di aumentare la sopravvivenza e la longevità dei pazienti. Di conseguenza, lo sforzo di sviluppare un modello di xenotrapianto del topo per studiare l'efficacia di terapie MCL bloccando l'homing meccanismo in vivo è della massima importanza. Sviluppo di animali destinatari per lo xenotrapianto cellulare umana per testare farmaci fase precoce lungo sono state perseguite, come modelli di mouse preclinici rilevanti sono cruciali per nuovi agenti terapeutici dello schermo. Questo modello animale è sviluppato per evitare il rigetto dell'organo umano e per stabilire un modello per le malattie umane, e può essere uno strumento estremamente utile per studiare la progressione della malattia di tipi diversi di linfoma ed eseguire test preclinici di candidati farmaci per malignità ematologiche, come MCL. Abbiamo stabilito un modello di topo dello xenotrapianto che servirà come una risorsa eccellente per studiare e sviluppare nuovi approcci terapeutici per MCL.

Il manoscritto descrive un protocollo ottimizzato per il corretto sviluppo di un modello murino di xenotrapianto per engraftment delle cellule MCL. Preparazione di una popolazione di puro delle cellule (in questo caso cellule MCL), è molto critica per sviluppare il successo degli xenotrapianti MCL. Figura 1 rappresenta la procedura preparativa per l'isolamento di cellule mononucleate da sangue di MCL paziente tramite la separazione di gradienti di densità. ...

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Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Linfoma mantellare (MCL) è un difficile da trattare il disordine delle cellule di B ed è altrettanto difficile stabilire in un modello murino di xenotrapianto di MCL primario per studiare e sviluppare terapie. Qui, descriviamo la Costituzione ottimale degli xenotrapianti MCL in topi per aiutare a capire la sua biologia sottostante.

Attecchimento del tumore in un modello murino di xenotrapianto di umano linfoma a cellule mantellari

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Sviluppo e manutenzione di un tumore del paziente preclinici Derivato dello xenotrapianto modello per il Controllo delle Novel Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Ricerca

Ricerca sul cancro

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolamento delle cellule tumorali circolanti in un modello di topo ortotopico del tumore del colon-retto

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

Un modello di linfoma della B-cellula Syngeneic del topo per la valutazione pre-clinica delle cellule di T di CD19 auto

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Modelli di Xenotrapianto ortotopico derivati dal paziente per carcinoma a cellule uroteliali umane e crescita del tumore del tumore colorettale e metastasi spontanea

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Un modello di Xenotrapianto a parte del paziente di melanoma

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Un ormone e mezzo umano (PBMC) Un modello di Xenotrapianto umanizzato per la ricerca sull'immuno-oncologia traslazionale (I-O)

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Stabilimento di modelli Xenograft derivati dal paziente derivato dal paziente e linee cellulari primarie

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Generazione di una piattaforma di Melanoma Uvenoma Uvenoft umano del fegato in topi immunodeficienti

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

Un modello murino per studiare il ruolo dei fibroblasti associati al cancro nella crescita tumorale

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

Un modello murino di ommaya xenotrapianto per studiare la terapia mirata diretta della malattia leptomeningea

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...