Name: tumor engraftment in a xenograft mouse model of human mantle cell lymphoma
Uploaded: 2018-03-30T12:30:00
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Este trabalho foi apoiado pela Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr. Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 e 2914-02-2012 e o suíço nacional Science Foundation Grant 31003A_156760 e o 310030-153456.

As amostras de sangue humano foram utilizadas de acordo com procedimentos aprovados pelo local de ética e comissões de experimentação humana do Hospital da Universidade de Genebra.
Animais procedimentos foram realizados em conformidade com o institucional ética Comissão de cuidado Animal em Genebra, na Suíça e o veterinário cantonais (número de autorização: GE/26/15).
1. preparação de células mononucleares do sangue periférico primário (PBMC) pela sep...

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	<li>Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+chemokines:+an+update.">Human chemokines: an update.</a> Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).</li><li>Baggiolini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+and+leukocyte+traffic.">Chemokines and leukocyte traffic.</a> Nature. 392, 565-568 (1998).</li><li>Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , (2001).</li><li>De Silva, N. 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Ensaios clínicos são possíveis para drogas que estão em um estágio avançado de desenvolvimento, mas não podem ser usadas para a descoberta de medicamentos. Os esforços para desenvolver animais destinatários para xenotransplante de células humanas para testar drogas cedo do palco há muito tem sido exercidos. Aqui nós apresentamos um modelo animal que evita a rejeição do enxerto humano e pode estabelecer um modelo para doenças humanas, tais como MCL. Este é actualmente um modelo de transplante do estado da ...

Linfócitos por natureza desempenham um papel importante na vigilância imune, e tráfico de linfócitos é um passo fundamental na montagem do antígeno imunidade específica1,2. Este processo inclui a migração de ingênuo T linfócitos do timo para o fluxo de sangue e de lá para os órgãos linfoides secundários, incluindo os gânglios linfáticos, de Peyer ou baço, onde se encontram os antígenos cognatos. Os linfócitos B diferenciam na medula óssea e migram como ingênuo células em folículos de órgãos linfoides secundários3. Algumas dessas células B vincular o antígeno com o receptor e são ativadas por células T específicas. Proliferação e diferenciação dessas células B empurra as células ingênua B não está ativado, para a zona do manto do folículo. Células ativadas podem diferenciar na memória B células, que patrulham o corpo, ou maduro em imunoglobulinas secretoras células plasmáticas que migram para a medula óssea4.
MCL ocorre quando linfócitos ingênua B na zona de manto transformam em um tumor. Estas células do linfoma residem no microambiente dos órgãos linfoides e proliferaram independentemente do controle específico dos linfócitos T. No entanto, em uma determinada fase de densidade escapar deste nicho e recircular na corrente sanguínea em busca de nichos em outros órgãos. Considerando a complexidade das moléculas de adesão e a promiscuidade de quimiocinas e seus receptores, o mecanismo desse celular de tráfico na vivo é mal compreendido e, portanto, dificulta a terapia. Novos métodos são necessários para efetivamente bloquear este processo de migração para impedir que as células do linfoma B atingindo novos microambiente.
MCL é uma das mais difíceis de tratar tumores malignos de células B. O desenvolvimento de um fenótipo neoplásico de MCL é o resultado de uma cascata de várias etapas, caracterizada pela aquisição de propriedades biológicas únicas. No momento do diagnóstico, a maioria dos pacientes (70%) já está presente com uma doença disseminada, com a maioria dos casos, exibindo o envolvimento extranodal no baço, medula óssea e/ou o trato gastrointestinal5,6. Em pacientes tratados, recaída por tumores resistentes dentro de alguns anos é comum, mesmo que a quimioterapia convencional induz a taxas de remissão de alta no curto prazo7,8. Aqui nós apresentamos um novo modelo de doença que pode ajudar a entender a divulgação MCL e sua biologia subjacente: estabelecemos um humano MCL xenoenxertos rato modelo que originou as células do tumor primário dos pacientes. Esperamos que este modelo vai ajudar a desenvolver estratégias terapêuticas contra divulgação de MCL e possivelmente proporcionar novas perspectivas clínicas para melhor diagnóstico e tratamento dos pacientes recaíram.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ficoll-paque media</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1440-02</td>
			<td>for separation of mononuclear cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640</td>
			<td>Gibco-Life technologies</td>
			<td>61870-010</td>
			<td>for dilution of blood sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td>washing of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8412</td>
			<td>for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD19-APC700</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B49212</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD20-APC</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A21693</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD20-ECD</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>IM3607</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD5-PC 5.5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>PN A70203</td>
			<td>human T cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD23-PE</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>555711</td>
			<td>Cell surface protein typically absent in MCL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 KO</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B36294</td>
			<td>Pan-leucocyte marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD200-PE</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>552475</td>
			<td>Cell surface protein typically absent in MCL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD scid gamma (NSG) mice</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>5557</td>
			<td>used to develop MCL xenografts in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy sep Human B cell enrichment kit</td>
			<td>Stem cell technologies</td>
			<td>19054</td>
			<td>used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Navios</td>
			<td>used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X ammonium chloride potassium buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2&#183;2H2O 3.722 mg/l )</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tumor engraftment in a xenograft mouse model of human mantle cell lymphoma

Linfócitos B são jogadores-chave na circulação de células imunes e eles principalmente para casa e residam em órgãos linfoides. Enquanto as células B normais só proliferam quando estimulados por linfócitos T, oncogênicas células B sobrevivem e expandir-se autonomamente em nichos de órgão indefinido. Linfoma de células do manto (MCL) é uma tal distúrbio de células B, onde a taxa de sobrevida mediana dos pacientes é de 4-5 anos. Isso exige a necessidade de mecanismos eficazes, pelos quais o homing e enxertia dessas células são bloqueados a fim de aumentar a sobrevivência e longevidade dos pacientes. Portanto, o esforço para desenvolver um modelo do rato de enxerto para estudar a eficácia da terapêutica MCL, bloqueando o localizador mecanismo na vivo é de extrema importância. Desenvolvimento de animais destinatários para xenotransplante de células humanas para testar drogas cedo do palco há muito ter sido exercida, como modelos de rato pré-clínicos relevantes são cruciais para novos agentes terapêuticos de tela. Este modelo animal é desenvolvido para evitar a rejeição do enxerto humano e estabelecer um modelo para doenças humanas, e pode ser uma ferramenta extremamente útil para estudar a progressão da doença de tipos diferentes de linfoma e executar testes pré-clínicos de drogas de candidato para malignidades hematológicas, como MCL. Estabelecemos um modelo do rato de enxerto heterólogo que irá servir como um excelente recurso para estudar e desenvolver novas abordagens terapêuticas para MCL.

O manuscrito descreve um protocolo otimizado para o desenvolvimento bem sucedido de um modelo de mouse de enxerto para enxertia das células MCL. Preparação de uma população celular puro (en este caso MCL células), é muito crítico para desenvolver bem sucedidas xenografts MCL. A Figura 1 representa as etapas preparativa para isolamento de células mononucleares do sangue do paciente MCL pela separação de gradiente de densidade. As células mononuclea...

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Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Linfoma de células do manto (MCL) é um difícil de tratar a doença associada a células B e é igualmente difícil estabelecer um modelo de rato de enxerto heterólogo do MCL primário para estudar e desenvolver a terapêutica. Aqui, descrevemos a criação bem sucedida de xenografts MCL em camundongos para ajudar a compreender a sua biologia subjacente.

Enxertia de tumor em um modelo do rato de enxerto heterólogo de linfoma de células do manto humano

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Desenvolvimento e manutenção de um tumor do paciente pré-clínica Derivado Xenoenxerto Modelo de Investigação de Novel Anti-Cancer Therapies

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Pesquisa do câncer

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolamento de células tumorais circulantes em um modelo de rato ortotópico de câncer colorretal

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

Um modelo de linfoma de célula B Syngeneic Mouse para avaliação pré-clínica de pilhas de T de carro CD19

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Modelos de xenoenxertos Ortotópicos derivados do paciente para Carcinoma de células urotelial humana e crescimento do tumor do câncer colorretal e metástase espontânea

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

Um modelo de Xenoenxerto derivado do paciente com melanoma

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research

Uma célula mononuclear do sangue periférico humano (PBMC) engrafted o modelo humanizado do xenograft para a pesquisa translational do immuno-Oncology (I-O)

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Estabelecimento de modelos de xenoenxertos derivados de câncer gástrico e linhas celulares primárias

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Geração de uma plataforma de xenoenxerto de melanoma uveal humano ortotópico do fígado em camundongos imunodeficientes

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

Um Modelo de Camundongo para Investigar o Papel de Fibroblastos Associados ao Câncer no Crescimento Tumoral

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

Um modelo de xenoenxerto Murine Ommaya para estudar terapia direta da doença leptomeningeal

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...