Name: tumor engraftment in a xenograft mouse model of human mantle cell lymphoma
Uploaded: 2018-03-30T12:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma at JoVE.com

Detta arbete stöds av det Ligue Genevoise contre le Cancer, Fondation Dr Dubois Ferriere Dinu-Lipatti, Oncosuisse KPS-OCS, OCS-02260-08-2008 och 2914-02-2012, och Swiss National Science Foundation Grant 31003A_156760 och 310030-153456.

Humant blodproverna användes enligt förfaranden som godkänts av den lokala etiska och mänskliga experiment kommittéer av Universitetssjukhuset i Genève.
Djur förfaranden utfördes i enlighet med den institutionella etiska kommittén av Animal Care i Genève, Schweiz och de kantonala veterinärfrågor (tillståndsnummer: GE/26/15).
1. beredning av primära perifera mononukleära blodceller (PBMC) av täthet lutning Separation
Obs: 3-5...

<ol>
	<li>Baggiolini, M., Dewald, B., Moser, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+chemokines:+an+update.">Human chemokines: an update.</a> Annu Rev Immunol. 15, 675-705 (1997).</li><li>Baggiolini, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chemokines+and+leukocyte+traffic.">Chemokines and leukocyte traffic.</a> Nature. 392, 565-568 (1998).</li><li>Janeway, C. A., Travers, P., Walport, M., Shlomchik, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Immunobiology: The Immune System in Health and Disease. , (2001).</li><li>De Silva, N. S., Klein, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dynamics+of+B+cells+in+germinal+centres.">Dynamics of B cells in germinal centres.</a> Nat Rev Immunol. 15 (3), 137-148 (2015).</li><li>Cohen, P. L., Kurtin, P. J., Donovan, K. A., Hanson, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bone+marrow+and+peripheral+blood+involvement+in+mantle+cell+lymphoma.">Bone marrow and peripheral blood involvement in mantle cell lymphoma.</a> Br. J. Haematol. 101, 302-310 (1998).</li><li>Meusers, P., Hense, J., Brittinger, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mantle+cell+lymphoma:+diagnostic+criteria,+clinical+aspects+and+therapeutic+problems.">Mantle cell lymphoma: diagnostic criteria, clinical aspects and therapeutic problems.</a> Leukemia (Baltimore). 11 (Suppl 2), S60-S64 (1997).</li><li>Herrmann, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Improvement+of+overall+survival+in+advanced+stage+mantle+cell+lymphoma.">Improvement of overall survival in advanced stage mantle cell lymphoma.</a> J Clin Oncol. 27 (4), 511-518 (2008).</li><li>Martin, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intensive+treatment+strategies+may+not+provide+superior+outcomes+in+mantle+cell+lymphoma:+overall+survival+exceeding+7+years+with+standard+therapies.">Intensive treatment strategies may not provide superior outcomes in mantle cell lymphoma: overall survival exceeding 7 years with standard therapies.</a> Ann Oncol. 19 (7), 1327-1330 (2008).</li><li>Iyengar, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Characteristics+of+human+primary+mantle+cell+lymphoma+engraftment+in+NSG+mice.">Characteristics of human primary mantle cell lymphoma engraftment in NSG mice.</a> Br J Haematol. 173 (1), 165-169 (2016).</li><li>Klco, J. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Functional+heterogeneity+of+genetically+defined+subclones+in+acute+myeloid+leukemia.">Functional heterogeneity of genetically defined subclones in acute myeloid leukemia.</a> Cancer cell. 25 (3), 379-392 (2014).</li><li>Kerbel, R. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+tumor+xenografts+as+predictive+preclinical+models+for+anticancer+drug+activity+in+humans:+better+than+commonly+perceived-but+they+can+be+improved.">Human tumor xenografts as predictive preclinical models for anticancer drug activity in humans: better than commonly perceived-but they can be improved.</a> Cancer Biol Ther. 2 (4 Suppl 1), S134-S139 (2003).</li><li>Johnson, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Relationships+between+drug+activity+in+NCI+preclinical+in+vitro+and+in+vivo+models+and+early+clinical+trials.">Relationships between drug activity in NCI preclinical in vitro and in vivo models and early clinical trials.</a> Br. J. Cancer. 84, 1424-1431 (2001).</li><li>Scholz, C. C., Berger, D. P., Winterhalter, B. R., Henss, H., Fiebig, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+drug+response+in+patients+and+in+the+clonogenic+assay+with+solid+human+tumour+xenografts.">Correlation of drug response in patients and in the clonogenic assay with solid human tumour xenografts.</a> Eur. J. Cancer. 26, 901-905 (1990).</li><li>Do&#241;ate, C., Vijaya Kumar, A., Imhof, B. A., Matthes, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Frontline+Science:+Anti-JAM-C+therapy+eliminates+tumor+engraftment+in+a+xenograft+model+of+mantle+cell+lymphoma.">Frontline Science: Anti-JAM-C therapy eliminates tumor engraftment in a xenograft model of mantle cell lymphoma.</a> J Leukoc Biol. 100 (5), 843-853 (2016).</li></ol>

Kliniska prövningar är möjligt för droger som finns i ett långt framskridet utvecklingsstadium men kan inte användas för läkemedelsutveckling. Ansträngningar att utveckla djur mottagare för mänsklig cell xenotransplantation för att testa tidigt skede läkemedel har länge bedrivits. Här presenterar vi en djurmodell som undviker mänskliga transplantatavstötning och kan upprätta en modell för mänskliga sjukdomar, såsom MCL. Detta är i dagsläget en toppmodern xenograft modell för att studera mekanismer...

Lymfocyter av naturen spelar en viktig roll i immun övervakning och lymfocyter människohandel är ett kritiskt steg i montering antigen specifik immunitet1,2. Processen omfattar migrering av naiva T-lymfocyter brässen till blodet och därifrån till sekundära lymfoida organ, inklusive lymfkörtlar, Peyers plack eller mjälte, där de möter cognate antigener. B-lymfocyter skilja i benmärgen och migrera som naiva celler i folliklar av sekundära lymfoida organ3. Några av dessa B-celler binder antigen med sin receptor och aktiveras av specifika T-celler. Proliferation och differentiering av dessa B-celler skjuter de icke-aktiverade, naiva B-cellerna i zonen mantel av follikeln. Aktiverade celler kan sedan differentieras till minne B celler, som patrullerar kroppen eller mogna till immunglobulin utsöndrar plasma celler som migrerar till benmärgen4.
MCL uppstår när naiva B-lymfocyter i zonen manteln förvandlas till en tumör. Dessa lymfomceller bosatt i närmiljön lymfoida organ och föröka oberoende av specifika T-lymfocyter kontroll. Dock i ett visst skede av täthet de fly från denna nisch och återcirkulera i blodomloppet i sökandet efter nischer i andra organ. Med tanke på komplexiteten av adhesionsmolekyler och promiskuitet chemokiner och deras receptorer, mekanismen av denna cellulära människohandel i vivo är dåligt känd och därför hindrar terapi. Nya metoder behövs för att effektivt blockera denna migreringsprocessen för att förhindra lymfom B cellerna från att nå nya mikromiljö.
MCL är en av de svåraste att behandla B cell maligniteter. Utvecklingen av en neoplastisk fenotyp för MCL är resultatet av en utgångsämnet cascade, kännetecknas av förvärvet av unika biologiska egenskaper. Vid tidpunkten för diagnos finns de flesta patienter (70%) redan med en disseminerad sjukdom, med en majoritet av fallen uppvisar extranodal inblandning i mjälte, benmärg eller mag-tarmkanalen5,6. Hos behandlade patienter är återfall av resistenta tumörer inom några år vanligt, även om konventionell kemoterapi framkallar hög remission priser på kort sikt7,8. Här presenterar vi en ny sjukdom modell som kan hjälpa till att förstå MCL spridning och dess underliggande biologi: vi etablerade en mänsklig MCL xenograft musmodell som härstammar från primär tumörceller av patienter. Vi hoppas att denna modell hjälper utveckla terapeutiska strategier mot MCL spridning, och möjligen ge nya kliniska perspektiv för optimal diagnostik och behandling av recidiverande patienter.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Ficoll-paque media</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-1440-02</td>
			<td>for separation of mononuclear cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI Medium 1640</td>
			<td>Gibco-Life technologies</td>
			<td>61870-010</td>
			<td>for dilution of blood sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8537</td>
			<td>washing of cells</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8412</td>
			<td>for preparation of PBS with 1% BSA used in washing cells during isolation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD19-APC700</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B49212</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD20-APC</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>A21693</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD20-ECD</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>IM3607</td>
			<td>human pan-B cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD5-PC 5.5</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>PN A70203</td>
			<td>human T cell marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD23-PE</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>555711</td>
			<td>Cell surface protein typically absent in MCL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD45 KO</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>B36294</td>
			<td>Pan-leucocyte marker</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CD200-PE</td>
			<td>Pharmingen</td>
			<td>552475</td>
			<td>Cell surface protein typically absent in MCL</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NOD scid gamma (NSG) mice</td>
			<td>Charles River Laboratories</td>
			<td>5557</td>
			<td>used to develop MCL xenografts in this study</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Easy sep Human B cell enrichment kit</td>
			<td>Stem cell technologies</td>
			<td>19054</td>
			<td>used to enrich B cells to obtain pure cells for injecting into mice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FACS</td>
			<td>Beckman Coulter</td>
			<td>Navios</td>
			<td>used to characterize MCL sample and to study the organs for MCL engraftment</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1X ammonium chloride potassium buffer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>red blood lysis buffer (NH4Cl 8,024 mg/l; KHCO3 1,001 mg/l; EDTA.Na2&#183;2H2O 3.722 mg/l )</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

tumor engraftment in a xenograft mouse model of human mantle cell lymphoma

B-lymfocyter är nyckelaktörer i immunceller omlopp och de främst hem till och uppehålla sig i lymfoida organ. Medan normala B-celler föröka endast när stimuleras av T-lymfocyter, onkogena B-celler överleva och expandera självständigt i odefinierad orgel nischer. Mantelcellslymfom (MCL) är en sådan B cell störning, där median överlevnaden av patienter är 4-5 år. Detta kräver behovet av effektiva mekanismer genom vilka den homing och engraftment av dessa celler är blockerade för att öka överlevnaden och livslängden hos patienter. Arbetet med att utveckla en xenograft musmodell för att studera effekten av MCL therapeutics genom att blockera den målsökande mekanism i vivo är därför av yttersta vikt. Utvecklingen av djur mottagare för mänsklig cell xenotransplantation att testa tidigt skede läkemedel har länge bedrivits, som relevanta prekliniska musmodeller är avgörande för skärmen nya terapeutiska medel. Denna djurmodell är utvecklat att undvika mänskliga transplantatavstötning och att upprätta en modell för mänskliga sjukdomar och det kan vara ett mycket användbart verktyg att studera sjukdomsutveckling av olika lymfom typer och att utföra prekliniska tester av läkemedelskandidater för hematologiska maligniteter, som MCL. Vi etablerade en xenograft musmodell som ska fungera som en utmärkt resurs för att studera och utveckla nya behandlingsmetoder för MCL.

Manuskriptet beskriver en optimerad protokollet för en framgångsrik utveckling av en xenograft musmodell för engraftment av MCL celler. Utarbetandet av en ren cell befolkningen (i detta fall MCL celler), är mycket kritisk till utveckla framgångsrika MCL xenograft. Figur 1 representerar de förberedande steg för mononukleära cell isolering från MCL patientens blod genom täthet lutning separation. Mononukleära celler bearbetas ytterligare för att få...

Watch this Scientific Journal Video about Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma at JoVE.com

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma (Video) | JoVE

Mantelcellslymfom (MCL) är en svårbehandlad B cell sjukdom och det är lika svårt att upprätta en xenograft musmodell av primära MCL att studera och utveckla therapeutics. Här beskriver vi en framgångsrik etablering av MCL xenograft hos möss för att förstå dess underliggande biologi.

Tumör Engraftment i en Xenograft musmodell av mänskliga mantelcellslymfom

B lymphocytes are key players in immune cell circulation and they mainly home to and reside in lymphoid organs. While normal B cells only proliferate when ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

Tumor Engraftment in a Xenograft Mouse Model of Human Mantle Cell Lymphoma

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies

Development and Maintenance of a Preclinical Patient Derived Tumor Xenograft Model for the Investigation of Novel Anti-Cancer Therapies (Video) | JoVE

Utveckling och underhåll av en preklinisk patient Derived Tumör xenograft modell för undersökning av nya anti-cancerterapier

Patient derived tumor xenograft (PDTX) models provide a necessary platform in facilitating anti-cancer drug development prior to human trials. Human tumor ...

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer

Isolation of Circulating Tumor Cells in an Orthotopic Mouse Model of Colorectal Cancer (Video) | JoVE

Isolering av cirkulerande tumörceller i en ortotopisk musmodell av kolorektal cancer

Despite the advantages of easy applicability and cost-effectiveness, subcutaneous mouse models have severe limitations and do not accurately simulate ...

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells

A Syngeneic Mouse B-Cell Lymphoma Model for Pre-Clinical Evaluation of CD19 CAR T Cells (Video) | JoVE

Syngena mus B-cells lymfom modell för preklinisk utvärdering av CD19 CAR T-celler

The astonishing clinical success of CD19 chimeric antigen receptor (CAR) T-cell therapy has led to the approval of two second generation chimeric antigen ...

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis

Patient-derived Orthotopic Xenograft Models for Human Urothelial Cell Carcinoma and Colorectal Cancer Tumor Growth and Spontaneous Metastasis (Video) | JoVE

Patient-härledda ortotopiska xenograft-modeller för Human Urotelial cellkarcinom och kolorektal cancer tumörtillväxt och spontan metastaser

Cancer patients have poor prognoses when lymph node (LN) involvement is present in both high-grade urothelial cell carcinoma (HG-UCC) of the bladder and ...

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model

A Melanoma Patient-Derived Xenograft Model (Video) | JoVE

En melanom patient-derived xenograft modell

Accumulating evidence suggests that molecular and biological properties differ in melanoma cells grown in traditional two-dimensional tissue culture ...

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell (PBMC) Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology (I-O) Research

A Human Peripheral Blood Mononuclear Cell PBMC Engrafted Humanized Xenograft Model for Translational Immuno-oncology I-O Research (Video) | JoVE

En human perifert blod mononukleär cell (PBMC) inympad humaniserad xenograft modell för translationell Immuno-onkologi (I-O) forskning

The discovery and development of immuno-oncology (I-O) therapy in recent years represents a milestone in the treatment of cancer. However, treatment ...

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines

Establishment of Gastric Cancer Patient-derived Xenograft Models and Primary Cell Lines (Video) | JoVE

Inrättande av patienter med Ventrikelhärledd xenograft-modell och primära cellinjer

The use of preclinical models to advance our understanding of tumor biology and investigate the efficacy of therapeutic agents is key to cancer research. ...

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice

Generation of a Liver Orthotopic Human Uveal Melanoma Xenograft Platform in Immunodeficient Mice (Video) | JoVE

Generering av en lever Ortoämne humant uvealt melanom xenograft plattform i Immunobristfällig möss

In recent decades, subcutaneously implanted patient-derived xenograft tumors or cultured human cell lines have been increasingly recognized as more ...

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth

A Mouse Model to Investigate the Role of Cancer-Associated Fibroblasts in Tumor Growth (Video) | JoVE

En musmodell för att undersöka rollen av cancerassocierade fibroblaster i tumörtillväxt

Cancer-associated fibroblasts (CAFs) can play an important role in tumor growth by creating a tumor-promoting microenvironment. Models to study the role ...

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease

A Murine Ommaya Xenograft Model to Study Direct-Targeted Therapy of Leptomeningeal Disease (Video) | JoVE

En Murine Ommaya Xenograft-modell för att studera direktriktad terapi av leptomeningeal sjukdom

Leptomeningeal disease (LMD) is an uncommon type of central nervous system (CNS) metastasis to the cerebral spinal fluid (CSF). The most common cancers ...