Name: constructing thioether/vinyl sulfide-tethered helical peptides via photo-induced thiol-ene/yne hydrothiolation
Uploaded: 2018-08-01T13:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Constructing Thioether/Vinyl Sulfide-tethered Helical Peptides Via Photo-induced Thiol-ene/yne Hydrothiolation at JoVE.com

الكتاب الاعتراف بدعم مالي من "مؤسسة العلوم الطبيعية لمنح الصين" (رقم 21372023، 21778009 و 81701818)؛ وزارة العلوم والتكنولوجيا في الجمهورية الشعبية للصين (رقم 2015DFA31590)؛ شنتشن لجنة العلم والتكنولوجيا الابتكار (رقم JCYJ20170412150719814، JCYJ20170412150609690، JCYJ20150403101146313، JCYJ20160301111338144، JCYJ20160331115853521، JSGG20160301095829250، و GJHS20170310093122365)؛ ومؤسسة الصين لعلوم ما بعد الدكتوراه (رقم 2017 م 610704).

1-معدات التحضير
<ol><li>للجهاز اليدوي الببتيد-التوليف، مكان مشعب فراغ (جدول المواد) في غطاء دخان تتسم بكفاءة. بعد ذلك، ضع ستوبكوكس الثلاثية على فراغ المتشعبة وقم بتوصيلها بخط غاز النيتروجين أو الأرجون. كاب جميع المداخل غير المستخدمة باستخدام المطاط سيتا.</li>
	<li>قم بتوصيل أعمدة مملوءة...

في سيكليزاتيون على راتنج إينتراموليكولار الايثير-شرق المبينة في الشكل 3، تم العثور على إزالة مجموعة تريتيل من بقايا السيستين أن تكون خطوة حاسمة بالنسبة فوتوريكتيون اللاحقة. وباﻹضافة إلى ذلك، الوزن الجزيئي الببتيد قبل وبعد تم العثور على رد فعل تكون متطابقة كما صورت في <stron...

تطوير يغاندس تعدل تفاعلات البروتين البروتين (القياسية) يوفر نهج جذابة لاكتشاف الأدوية الحديثة. وهكذا، قد استثمر قدرا كبيرا من الجهد في دراسة الطرائق الكيميائية الرواية التي يمكن أن تعدل كفاءة القياسية1،،من23. القياسية تتألف عموما من السطوح المتفاعلة ضحلة كبيرة و/أو توقف، والجزيئات الصغيرة تعتبر عادة أن يغاندس غير مناسب لتحوير القياسية4،5. مع منطقة مكشوفة متفاعلة سطحية مناسبة، تمثل الببتيدات القصيرة التي تحاكي السمات الهيكلية لواجهات البروتين المرشحين المثالي لمعالجة هذه المشكلة6،7. بيد أن الببتيدات قصيرة عادة غير منظم في محلول مائي. وهذا يرجع إلى أن جزيئات الماء التي تتنافس مع شبكة الربط إينتراموليكولار الهيدروجين الببتيد العمود الفقري والمعالم والتشكلات غير مواتية انتروبيكالي في الماء8. وباﻹضافة إلى ذلك، الببتيدات المنخفضة أصلاً الاستقرار وخصائص نفاذية الخلية إلى حد كبير الحد من استخدامها في التطبيقات البيولوجية9،10. ووفقا لتحليل البيانات المصرفية (PDB) البروتين، > 50% القياسية تشمل قصيرة α-الحلزون التفاعلات11. وهكذا، تم وضع الطرق الكيميائية المختلفة فيما يتعلق باستقرار اللولب. هذه تشمل ثنائي كبريتيد/ثيوثير بوند تشكيل12،،من1314، إغلاق الطوق الناتج15، وتشكيل عصابة لاكتام16، "انقر فوق" الكيمياء17، إضافة بيرفلوروارينيس18،19، وكبريتيد ثنائي الفينيل تشكيل20.
استقرت الببتيدات حلزونية وتستخدم على نطاق واسع لمختلف الأهداف داخل الخلايا، بما في ذلك p53، الإستروجين مستقبلات، رأس، BCL-2 الأسرة البروتينات، والبعض الآخر21،22،،من2324. الرن-6924، جميع هيدروكربونية تدبيس الببتيد المانع المزدوج MDM2 ومدمكس، ويستخدم حاليا للتحقيق السريرية25. في السنوات القليلة الماضية، ركزت مجموعتنا على تطوير أساليب تحقيق الاستقرار الببتيد رواية استخدام ثيول-شرق وين ثيول ردود الفعل26،،من2728. وبصفة عامة، لقد أظهرنا أن ردود الفعل هذه الصورة بدأت كفاءة تحت ظروف معتدلة عندما يستخدم بطبيعة الحال سيستين وفيرة. وباﻹضافة إلى ذلك، وقد أظهرنا أن ردود الفعل هذه قد التسامح مجموعة وظيفية ممتازة، متعامد الحيوية، وقد ثبت أن تكون قابلة للتطبيق ل التعديلات الببتيد والبروتين29. ثيوثير/الفينيل كبريتيد المربوطة الببتيدات الناتجة إلى حد كبير تحسين الفضاء الكيميائية من الببتيدات القيد وتوفير مركز مجا على حبل تعديل، وثبت لتكون قابلة للتطبيق للاستخدام في التطبيقات البيولوجية العديدة30 ،،من3132. حتى الآن، وقد وصف التقارير محدودة فقط بخصوص سيكليزيشن الببتيد ثيول-شرق/ثيول-ين. في دراسة نشرتها أنسيته et al. في عام 2009، كان رد فعل على راتنج إينتراموليكولار ثيول-شرق الببتيد سيكليزاتيون بين الالكينات المنشط مع سيستين أظهرت33. في عام 2015، تشو وآخرون. ووصف رد فعل اثنين-عنصر جذري بدأ ثيول-شرق الببتيد التدبيس34 و رد اقتران ثيول-ين/شرق اللاحقة، متسلسلة35. في الآونة الأخيرة، وصفت لنا سلسلة من العمل القائم على ثيويثير/الفينيل كبريتيد المربوطة الببتيدات20،،من2627. ويصف هذا البروتوكول توليفة مفصلة من الببتيدات المذكورة أعلاه ثيويثير/الفينيل كبريتيد المربوطة بالأمل في أنه سيكون من المفيد للمجتمع البحث الأوسع نطاقا.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="644">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Rink Amide MBHA resin(0.53 mmol/g)</td>
			<td style="width:143px;">HECHENG</td>
			<td style="width:119px;">GRM50407</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Standard Fmoc-protected amino acids</td>
			<td style="width:143px;">GL Biochem (Shanghai) Ltd.</td>
			<td style="width:119px;"></td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">N-Methyl-2-pyrrolidinone</td>
			<td style="width:143px;">Shenzhen endi Biotechnology Co.Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">3230</td>
			<td style="width:167px;">skin harmful</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N,N-Dimethyl formamide</td>
			<td style="width:143px;">Energy</td>
			<td style="width:119px;">B020051</td>
			<td style="width:167px;">skin harmful</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Dichloromethane</td>
			<td style="width:143px;">Energy</td>
			<td style="width:119px;">W330229</td>
			<td style="width:167px;">skin harmful</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">N,N-Diisoproylethylamine</td>
			<td style="width:143px;">Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">9578</td>
			<td style="width:167px;">irritant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Trifluoroacetic acid</td>
			<td style="width:143px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:119px;">101398</td>
			<td style="width:167px;">corrosive</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Triisopropylsilane</td>
			<td style="width:143px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:119px;">973821</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1,2-Ethanedithiol</td>
			<td style="width:143px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:119px;">248897</td>
			<td style="width:167px;">Stench</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">2-(6-Chloro-1H-benzotriazole-1-yl)-1,1,3,3-tetramethylaminium hexafluorophosphate&#160;</td>
			<td style="width:143px;">GL Biochem (Shanghai) Ltd.</td>
			<td style="width:119px;">851012</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Morpholine</td>
			<td style="width:143px;">Aldrich</td>
			<td>M109062</td>
			<td style="width:167px;">irritant</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Diethyl ether</td>
			<td style="width:143px;">Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">673811</td>
			<td style="width:167px;">flammable</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Acetonitrile</td>
			<td style="width:143px;">Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">9758</td>
			<td style="width:167px;">toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Methanol</td>
			<td style="width:143px;">Aldrich</td>
			<td style="width:119px;">9758</td>
			<td style="width:167px;">toxicity</td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone</td>
			<td style="width:143px;">Energy</td>
			<td style="width:119px;">A050035</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4-methoxyacetophenone</td>
			<td style="width:143px;">Energy</td>
			<td style="width:119px;">A050098</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">2,2-dimethoxy-2-phenylacetophenone</td>
			<td style="width:143px;">Energy</td>
			<td style="width:119px;">D070132</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">5,5&#39;-Dithiobis-(2-nitrobenzoic acid)</td>
			<td style="width:143px;">J&#38;K</td>
			<td style="width:119px;">281281</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="63">
			<td height="63" style="height:63px;width:216px;">Benzotriazole-1-yl-oxytripyrrolidinophosphonium hexafluorophosphate</td>
			<td style="width:143px;">Energy</td>
			<td style="width:119px;">E020172</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">1-Hydroxybenzotriazole</td>
			<td style="width:143px;">Energy</td>
			<td style="width:119px;">D050256</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">4-Methylmorpholine</td>
			<td style="width:143px;">Energy</td>
			<td style="width:119px;">W320038</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">High Performance Liquid Chromatography</td>
			<td style="width:143px;">SHIMADZU</td>
			<td style="width:119px;">LC-30AD</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Electrospray Ionization Mass</td>
			<td style="width:143px;">SHIMADZU</td>
			<td style="width:119px;">LCMS-8030</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Lyophilizer</td>
			<td style="width:143px;">Labconco</td>
			<td style="width:119px;">FreeZone</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">SpeedVac concentration system</td>
			<td style="width:143px;">Thermo</td>
			<td style="width:119px;">Savant</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">vacuum manifold</td>
			<td style="width:143px;">promega</td>
			<td style="width:119px;">A7231</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">three-way stopcocks</td>
			<td style="width:143px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">7328107</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">poly-prep chromatography columns&#160;</td>
			<td style="width:143px;">Bio-Rad</td>
			<td style="width:119px;">7311550</td>
			<td style="width:167px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

constructing thioether/vinyl sulfide-tethered helical peptides via photo-induced thiol-ene/yne hydrothiolation

هنا، يمكننا وصف بروتوكول مفصلة لإعداد الببتيدات المربوطة ثيويثير باستخدام هيدروثيولاتيون على راتنج إينتراموليكولار/الجزيئات ثيول-شرق. وبالإضافة إلى ذلك، يصف هذا البروتوكول إعداد الببتيدات الفينيل-كبريتيد المربوطة باستخدام هيدروثيولاتيون في حل إينتراموليكولار ثيول-ين بين amino acids التي تمتلك سلاسل الجانب الكين/ألكاين وبقايا السيستين في الأول، وأنا + 4 وظائف. تم توليفها الببتيدات الخطي باستخدام توليفة ببتيد المرحلة الصلبة قياسية المستندة إلى معتدلاً (الكائنة). ويضطلع ثيول-شرق هيدروثيولاتيون استخدام فعل شرق الايثير إينتراموليكولار أو فعل شرق الايثير الجزيئات، اعتماداً على طول الببتيد. في هذا البحث، يتم فعل شرق الايثير إينتراموليكولار في حالة الببتيدات أقصر باستخدام deprotection على راتنج المجموعات ترتيل سيستين المخلفات بعد إكمال تركيب الببتيد الخطي. ثم يتم تعيين الراتنج لإشعاع الأشعة فوق البنفسجية باستخدام فوتوينيتياتور 4-ميثوكسياسيتوفينوني (خريطة) و 2-hydroxy-1-[4-(2-hydroxyethoxy)-phenyl]-2-methyl-1-propanone (MMP). يجري تفاعل الجزيئات ثيول-شرق بتذويب معتدلاً-Cys-OH في مذيب-dimethylformamide (DMF) ن، ن. هذا هو رد فعل ثم مع الببتيد باستخدام بقايا الكين الحاملة على راتنج. بعد ذلك، ماكرولاكتاميزيشن يجري استخدام سداسي فلوروفوسفات بينزوتريازولي-1-يل-أوكسيتريبيروليدينوفوسفونيوم (بيبوب) و 1-هيدروكسيبينزوتريازولي (هوبت) 4-ميثيلمورفوليني (نم) الكواشف التنشيط في الراتنج. بعد ماكرولاكتاميزيشن، هو استمرار التوليف الببتيد استخدام الكائنة القياسية. في حالة هيدروثيوليشن ين الايثير، المشقوق من الراتنج الببتيد الخطي، والمجففة، وحلت في وقت لاحق في يطرد DMF. وهذا هو المشع ثم استخدام ضوء الأشعة فوق البنفسجية مع فوتوينيتياتور 2، 2-ديميثوكسي-2-فينيلاسيتوفينوني (DMPA). وفي أعقاب رد الفعل، يتبخر DMF وبقايا النفط الخام هو عجل وتنقيته باستخدام كروماتوغرافيا سائلة عالية الأداء ([هبلك]). يمكن أن تعمل هذه الأساليب تبسيط جيل الببتيدات دوري المربوطة ثيوثير بسبب استخدام الكيمياء انقر الايثير-شرق/ين أنه يمتلك مجموعة وظيفية متفوقة التسامح ومحصول جيد. إدخال سندات ثيوثير في الببتيدات يستفيد من طبيعة تفاعلات من بقايا السيستين وهو الأكسدة خاملة بالنسبة للسندات ثنائي كبريتيد.

[هبلك] ومرض التصلب العصبي المتعدد الأطياف الببتيد التيار المتردد-يمس5آآك--NH2 ومنتجاتها ﺣﻭﻟﻳ Ac-Y-(سيكلو-1.5)-[mS5AAAC]--NH2 التي تم إنشاؤها باستخدام فوتوريكشن على راتنج إينتراموليكولار ثيول-شرق يصور في الشكل 6B-تبين أن وزن الجزيئي متطابقة ب?...

Watch this Scientific Journal Video about Constructing Thioether/Vinyl Sulfide-tethered Helical Peptides Via Photo-induced Thiol-ene/yne Hydrothiolation at JoVE.com

Constructing Thioether/Vinyl Sulfide-tethered Helical Peptides Via Photo-induced Thiol-ene/yne Hydrothiolation

بناء المستحثة "الببتيدات حلزونية عبر صور" ثيول-شرق/ين هيدروثيوليشن ثيوثير/"كبريتيد ثنائي الفينيل"-المربوطة

نقدم على بروتوكول لبناء ثيويثير/الفينيل الببتيدات حلزونية المربوطة كبريتيد استخدام المستحثة بصور هيدروثيولاتيون ثيول-شرق/ثيول-ين.

Here, we describe a detailed protocol for the preparation of thioether-tethered peptides using on-resin intramolecular/intermolecular thiol-ene ...

Research

JoVE Journal

Chemistry

Microwave-assisted Functionalization of Poly(ethylene glycol) and On-resin Peptides for Use in Chain Polymerizations and Hydrogel Formation

Microwave-assisted Functionalization of Polyethylene glycol and On-resin Peptides for Use in Chain Polymerizations and Hydrogel Formation

Functionalization بمساعدة الميكروويف بولي (جلايكول الإثيلين) وعلى الراتنج الببتيدات للاستخدام في سلسلة Polymerizations وتشكيل هيدروجيل

One of the main benefits to using poly(ethylene glycol) (PEG) macromers in hydrogel formation is synthetic versatility. The ability to draw from a large ...

Formation of Ordered Biomolecular Structures by the Self-assembly of Short Peptides

تشكيل الهياكل الجزيئية البيولوجية أمرت قبل التجميع الذاتي من الببتيدات قصير

In nature, complex functional structures are formed by the self-assembly of biomolecules under mild conditions. Understanding the forces that control ...

Preparing Silica Aerogel Monoliths via a Rapid Supercritical Extraction Method

إعداد السيليكا Aerogel كتل عن طريق استخراج الطريقة السريعة فوق الحرجة

A procedure for the fabrication of monolithic silica aerogels in eight hours or less via a rapid supercritical extraction process is described. The ...

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

Synthesis of Protein Bioconjugates via Cysteine-maleimide Chemistry

تخليق البروتين Bioconjugates<em&gt; عبر</em&gt; سيستين-maleimide الكيمياء

The chemical linking or bioconjugation of proteins to fluorescent dyes, drugs, polymers and other proteins has a broad range of applications, such as the ...

Epitaxial Growth of Perovskite Strontium Titanate on Germanium via Atomic Layer Deposition

الفوقي نمو Perovskite سترونتيوم تيتانات على الجرمانيوم عن طريق ترسب طبقة الذري

Atomic layer deposition (ALD) is a commercially utilized deposition method for electronic materials. ALD growth of thin films offers thickness control and ...

Insights into the Interactions of Amino Acids and Peptides with Inorganic Materials Using Single-Molecule Force Spectroscopy

نظرة ثاقبة لتفاعلات الأحماض الأمينية والببتيدات مع المواد غير العضوية عن طريق جزيء واحدة قوة التحليل الطيفي

The interactions between proteins or peptides and inorganic materials lead to several interesting processes. For example, combining proteins with minerals ...

Self-assembling Morphologies Obtained from Helical Polycarbodiimide Copolymers and Their Triazole Derivatives

الأشكال التضاريسية الذاتي تجميع تم الحصول عليها من حلزوني Polycarbodiimide البوليمر ومشتقاتها التريازول

A facile method for the preparation of polycarbodiimide-based secondary structures (e.g., nano-rings, &#34;craters,&#34; fibers, looped fibers, fibrous ...

Synthesizing Sodium Tungstate and Sodium Molybdate Microcapsules via Bacterial Mineral Excretion

توليف تنغستات الصوديوم والصوديوم موليبدات كبسولات رقيقة جداً عن طريق إفراز المعدنية البكتيرية

We present a method, the bacterial mineral excretion (BME), for synthesizing two kinds of microcapsules, sodium tungstate and sodium molybdate, and the ...

Fabrication and Testing of Catalytic Aerogels Prepared Via Rapid Supercritical Extraction

تصنيع واختبار أيروجيلس الحفاز أعدت عن طريق استخراج فوق الحرجة السريع

Protocols for preparing and testing catalytic aerogels by incorporating metal species into silica and alumina aerogel platforms are presented. Three ...