Name: generation of high-throughput three-dimensional tumor spheroids for drug screening
Uploaded: 2018-09-05T15:30:00
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Die Autoren möchten Marc Ferrer am National Center für translationale Wissenschaften voran, National Institutes of Health für seine Unterstützung und Führung auf die Erstentwicklung von diesen Tests zu bestätigen. Darüber hinaus möchten wir Alyson Freeman, Mariela Jaskelioff Michael Acker, Jacob Haling und Vesselina Cooke für ihre wissenschaftliche Beiträge und Diskussion als Teammitglieder Projekt danken.

(1) Kultivierung von 1536-Well 3D Tumor Sphäroide
<ol><li>Bereiten Sie einen frischen 3D Tumor Sphäroid mittlerer Stiel (Zelle Medium + ko-Serum Ersatz + Insulin-Transferrin-Selen) indem Sie die folgenden Reagenzien zu 500 mL Dulbeccos geändert Eagles Medium (DMEM/F12): 1 X Penicillin/Streptomycin, 10 ng/mL des menschlichen grundlegende Fibroblasten-Wachstumsfaktor (bFGF), 20 ng/mL des menschlichen epidermalen Wachstumsfaktor (EGF), 0,4 % Rinderserumalbumin (BSA) (Teil V), 1 x Insulin-Transferrin-Selen und 1 % Knock...

<ol>
	<li>Lee, M., Vasioukhin, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+polarity+and+cancer--cell+and+tissue+polarity+as+a+non-canonical+tumor+suppressor.">Cell polarity and cancer--cell and tissue polarity as a non-canonical tumor suppressor.</a> Journal of Cell Science. 121 (Pt 8), 1141-1150 (2008).</li><li>Nath, S., Devi, G. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+culture+systems+in+cancer+research:+Focus+on+tumor+spheroid+model.">Three-dimensional culture systems in cancer research: Focus on tumor spheroid model.</a> Pharmacology &amp; Therapeutics. 163, 94-108 (2016).</li><li>Weigelt, B., Ghajar, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+need+for+complex+3D+culture+models+to+unravel+novel+pathways+and+identify+accurate+biomarkers+in+breast+cancer.">The need for complex 3D culture models to unravel novel pathways and identify accurate biomarkers in breast cancer.</a> Advanced Drug Delivery Reviews. 69, 42-51 (2014).</li><li>Li, Q., Chow, A. B., Mattingly, R. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+overlay+culture+models+of+human+breast+cancer+reveal+a+critical+sensitivity+to+mitogen-activated+protein+kinase+kinase+inhibitors.">Three-dimensional overlay culture models of human breast cancer reveal a critical sensitivity to mitogen-activated protein kinase kinase inhibitors.</a> The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 332 (3), 821-828 (2010).</li><li>Li, L., Lu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Optimizing+a+3D+Culture+System+to+Study+the+Interaction+between+Epithelial+Breast+Cancer+and+Its+Surrounding+Fibroblasts.">Optimizing a 3D Culture System to Study the Interaction between Epithelial Breast Cancer and Its Surrounding Fibroblasts.</a> Journal of Cancer. 2, 458-466 (2011).</li><li>Pickl, M., Ries, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+3D+and+2D+tumor+models+reveals+enhanced+HER2+activation+in+3D+associated+with+an+increased+response+to+trastuzumab.">Comparison of 3D and 2D tumor models reveals enhanced HER2 activation in 3D associated with an increased response to trastuzumab.</a> Oncogene. 28 (3), 461-468 (2009).</li><li>Nyga, A., Cheema, U., Loizidou, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=3D+tumour+models:+novel+in+vitro+approaches+to+cancer+studies.">3D tumour models: novel in vitro approaches to cancer studies.</a> Journal of Cell Communication and Signaling. 5 (3), 239-248 (2011).</li><li>Kimlin, L. C., Casagrande, G., Virador, V. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=In+vitro+three-dimensional+(3D)+models+in+cancer+research:+an+update.">In vitro three-dimensional (3D) models in cancer research: an update.</a> Molecular Carcinogenesis. 52 (3), 167-182 (2013).</li><li>Mathews Griner, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+pharmacological+profiling+of+3D+tumor+models+of+cancer+cells.">Large-scale pharmacological profiling of 3D tumor models of cancer cells.</a> Cell Death &amp; Disease. 7 (12), e2492 (2016).</li><li>Polo, M. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Responsiveness+to+PI3K+and+MEK+inhibitors+in+breast+cancer.+Use+of+a+3D+culture+system+to+study+pathways+related+to+hormone+independence+in+mice.">Responsiveness to PI3K and MEK inhibitors in breast cancer. Use of a 3D culture system to study pathways related to hormone independence in mice.</a> PLoS One. 5 (5), e10786 (2010).</li><li>Hatzivassiliou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RAF+inhibitors+prime+wild-type+RAF+to+activate+the+MAPK+pathway+and+enhance+growth.">RAF inhibitors prime wild-type RAF to activate the MAPK pathway and enhance growth.</a> Nature. 464 (7287), 431-435 (2010).</li><li>Bhargava, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Registered+report:+RAF+inhibitors+prime+wild-type+RAF+to+activate+the+MAPK+pathway+and+enhance+growth.">Registered report: RAF inhibitors prime wild-type RAF to activate the MAPK pathway and enhance growth.</a> Elife. 5, e09976 (2016).</li><li>Mathews, L. A., Hurt, E. M., Zhang, X., Farrar, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+regulation+of+CpG+promoter+methylation+in+invasive+prostate+cancer+cells.">Epigenetic regulation of CpG promoter methylation in invasive prostate cancer cells.</a> Molecular Cancer. 9, 267 (2010).</li><li>Mathews, L. A., Crea, F., Farrar, W. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+gene+regulation+in+stem+cells+and+correlation+to+cancer.">Epigenetic gene regulation in stem cells and correlation to cancer.</a> Differentiation. 78 (1), 1-17 (2009).</li><li>Mathews, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Increased+expression+of+DNA+repair+genes+in+invasive+human+pancreatic+cancer+cells.">Increased expression of DNA repair genes in invasive human pancreatic cancer cells.</a> Pancreas. 40 (5), 730-739 (2011).</li><li>Mathews, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+1536-well+quantitative+high-throughput+screen+to+identify+compounds+targeting+cancer+stem+cells.">A 1536-well quantitative high-throughput screen to identify compounds targeting cancer stem cells.</a> Journal of Biomolecular Screening. 17 (9), 1231-1242 (2012).</li><li>Horii, T., Nagao, Y., Tokunaga, T., Imai, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Serum-free+culture+of+murine+primordial+germ+cells+and+embryonic+germ+cells.">Serum-free culture of murine primordial germ cells and embryonic germ cells.</a> Theriogenology. 59 (5-6), 1257-1264 (2003).</li><li>Sun, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epigenetic+regulation+of+SOX9+by+the+NF-kappaB+signaling+pathway+in+pancreatic+cancer+stem+cells.">Epigenetic regulation of SOX9 by the NF-kappaB signaling pathway in pancreatic cancer stem cells.</a> Stem Cells. 31 (8), 1454-1466 (2013).</li><li>Mathews, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+1536-well+quantitative+high-throughput+screen+to+identify+compounds+targeting+cancer+stem+cells.">A 1536-well quantitative high-throughput screen to identify compounds targeting cancer stem cells.</a> Journal of Biomolecular Screening. 17 (9), 1231-1242 (2012).</li><li>Mathews Griner, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High-throughput+combinatorial+screening+identifies+drugs+that+cooperate+with+ibrutinib+to+kill+activated+B-cell-like+diffuse+large+B-cell+lymphoma+cells.">High-throughput combinatorial screening identifies drugs that cooperate with ibrutinib to kill activated B-cell-like diffuse large B-cell lymphoma cells.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 111 (6), 2349-2354 (2014).</li><li>Herter, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+novel+three-dimensional+heterotypic+spheroid+model+for+the+assessment+of+the+activity+of+cancer+immunotherapy+agents.">A novel three-dimensional heterotypic spheroid model for the assessment of the activity of cancer immunotherapy agents.</a> Cancer Immunology, Immunotherapy. 66 (1), 129-140 (2017).</li></ol>

Die hier vorgestellten Methoden zeigen ein detailliertes Protokoll wie Tumor Sphäroide in 1536-Well-Platten für groß angelegte Verbindung Vorführungen zu produzieren. Diese Methoden wurden zunächst von der Arbeit am National Cancer Institute wo Tumor Sphäroide in niedrigen Durchsatz Assays in 6-Well und 96-Well Platten Fragen zu genetischen Abhängigkeiten und zusammengesetzte Empfindlichkeit13, angebaut wurden angepasst 14 , 15...

In den letzten zehn Jahren haben immer mehr Studien die Verwendung von 3D zellmodelle Kultur, Konzepte zu verstehen, die nicht vollständig zusammengefaßt sind, durch den Anbau von Zellen in 2D auf Kunststoff umgesetzt. Beispiele für diese Konzepte sind der Wechsel in normalen Epithelzelle Polarität1 wo die räumliche Orientierung der apikale und basale Schichten von Zellen sind verloren, als auch die Rolle der extrazellulären Matrix bei der Regulierung der Überlebens- und Zelle Schicksal. Onkologie-Forschung hat insbesondere 3D-Modelle verwendet, um die grundlegende Biologie von Krebszellen und die Unterschiede zwischen 2D und 3D Zelle Kultur Systeme3,4zu verstehen. Die Entwicklung der anspruchsvollere Zelle Kulturtechniken und ihre weitere Anpassung an Multi-gut Formate hat die Suche nach neuen Medikamenten in 3D Einstellungen ermöglicht. Im Gegensatz zu Zellen 2D Bedingungen, 3D-Modelle von Tumoren Palette in ihrer Komplexität von zellulären Schichtsysteme5 Single-Cell-Typ Kugeln in verschiedenen Größen, angebaut auf komplexe multi-Zell-Typ Kugeln6,7, 8. die Entdeckung von neuartigen Verbindungen oder Biologics, die potent Zelltod in diesen Systemen 3D-Modell induzieren ist daher von großem Interesse in Drogen-Entwicklung-Kampagnen. Endpunkte dieser Assays sind oft identisch mit denen in 2D Kulturen, Änderungen in der Zellproliferation beurteilen durchgeführt, sondern in einer mehr physiologisch relevanten Umgebung durchgeführt, können sie das wahre Niveau der Abhängigkeit des Zielgens oder Weg zu offenbaren verhört.
Da oben eingeführt, wurde eine Vielzahl von Modellsystemen entwickelt, um die Droge Reaktionen in 3D Culture Systeme zu studieren, aber die meisten verwenden entweder 96 oder 384-Well Mikrotiterplatten und sind nicht leicht anpassbar an häufig verwendeten im Hochdurchsatz-screening (HTS) Formate Drogen-Entdeckung-Screening-Kampagnen. Solche Systeme umfassen die Verwendung von hängenden Tropfen Technologien, Sphäroid Kulturen, pulsierende Zellen mit magnetischen Partikeln induzieren Levitation und Kulturen unter Einbeziehung natürlicher oder synthetischer Gele wie Kollagen, Matrigel oder Polyethylenglykol (PEG)2 . Hier präsentieren wir Ihnen die detaillierte Methoden einer zuvor entwickelten Technik, 3D Sphäroid Kulturen von etablierten Zelllinien in einem Format von 1536-Well-Platte zu produzieren. In diesem Protokoll wird ein hoch definierte Medium die verhindert, die Befestigung der normalerweise adhärente Zellen Linien9 dassverwendet. Dieses System hat Grenzen (d. h., es kann nicht vollständig rekapitulieren, ein komplexes Modellsystem von Krebs), aber dennoch, diese Tests ermöglichen eine Hochdurchsatz-Screening von großen Sammlungen von kleinen Molekülen und quer Vergleiche der Medikamente zwischen 2D und 3D Kulturen gegen eine Vielzahl von Zell-Linien und Verbindungen.
Die Zell-Linien ausgewählt, um den Methoden in diesem Artikel zeigen alle Hafen Mutationen in Genen, die im Zusammenhang mit der MAPK Signalweg, einen Pfad hoch Dysregulated bei Krebs ist und für welche viele Therapeutika stehen zur Verfügung. Viele der Linien verfügen über Aktivierung von Onkogenen Mutationen in der Kirsten Ratte Sarkom-Virus auch genannt KRAS, Neuroblastom RAS oder NRB Harvey Ratte Sarkom Virus Onkogen oder HRAS und der damit verbundenen Kinasen rasant beschleunigt Fibrosarcomas, auch bekannt als RAFs. Neuere Literatur legt nahe, dass die Inhibitoren der verschiedenen Knoten dieses Pfades eindeutig wirksamer in eine Teilmenge der Zell-Linien beim Anbau unter 3D Bedingungen9,10 sind. Eine Studie hat herausgefunden, dass wenn Krebszellen mit aktiven RAS in 3D gezüchtet wurden, sie eine erhöhte Empfindlichkeit gegenüber MAPK-Inhibitoren zeigten, und ferner, dass dieser Ansatz konnte Wege identifizieren und gezielt Inhibitoren, die in der traditionellen 2D verpasst Einstellung. Das Ziel dieser Studie ist es, die Methoden verwendet, um diese Zelllinien Kultur zu präsentieren, und weiter, um das Differential zu demonstrieren Reaktionen auf diese Inhibitoren, die Sie beachten können, nur bei Verwendung von 3D zellsystemen Kultur.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Reagents</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Dulbecco`s Modified Eagle Media (DMEM)/F12</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>30-2006</td>
			<td>Purchased as a prepared solution. This reciepe was found to be preferred compared to other vendors.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM Dulbecco`s Modified Eagle Media (DMEM)/F12</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>12-604F</td>
			<td>Purchased as a prepared solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI)</td>
			<td>Lonza</td>
			<td>12-115Q</td>
			<td>Purchased as a prepared solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum (FBS)</td>
			<td>Seradigm</td>
			<td>1500-500</td>
			<td>Purchased as a prepared solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x 0.25% Trypsin with Ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA)</td>
			<td>Hyclone</td>
			<td>SH30042.01</td>
			<td>Purchased as a prepared solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>15140</td>
			<td>Purchased as a prepared solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>10 ng/mL Human basic Fibrobast Growth Factor (bFGF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>F0291</td>
			<td>Resuspend in sterile water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 ng/mL Human Epidermal Growth Factor (EGF)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>E9644</td>
			<td>Resuspend in sterile water.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>0.4% Bovine Serum Albumin (BSA)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>A9418</td>
			<td>Resuspend in sterile PBS and filter.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1x Insulin Transferrin Selenium (ITS)</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>51500056</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1% KnockOut (KO) Serum Replacement</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>10828-028</td>
			<td>Add fresh right before use.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>100% Dimethyl sulfoxide (DMSO)</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>276855-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTiter-Glo</td>
			<td>Promega</td>
			<td>G7573</td>
			<td>Purchased as a prepared solution.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Consumables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Combi Cassette</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>24073295</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small Multiflow Cassette</td>
			<td>BioTek</td>
			<td>294085</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1536-well sterile TC plates (white)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3727</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1536-well sterile TC plates (black)</td>
			<td>Corning</td>
			<td>3893</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scivax Plates</td>
			<td>MBL International</td>
			<td>NCP-LH384-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Equipment</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Adhesives seals</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>AB0718</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Spinning Incubator</td>
			<td>LiCONiC</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless Steel Lids</td>
			<td>The Genomics Institute of Novartis Research Foundation (GNF)</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ATS Acoustic Dispensor</td>
			<td>EDS Biosystems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Echo Acoustic Dispensor</td>
			<td>Labcyte</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Luminometer</td>
			<td>Envision-Perkin Elmer</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Peristaltic Pump- Multidrop Combi</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Liquid Handler-Multiflow FX</td>
			<td>BioTek</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

generation of high-throughput three-dimensional tumor spheroids for drug screening

Krebszellen haben routinemäßig zweidimensional (2D) auf einer Kunststoffoberfläche kultiviert worden. Diese Technik, allerdings fehlt die echte Umgebung eines Tumors Masse in Vivoausgesetzt ist. Solide Tumoren wachsen nicht wie ein Blatt aus Kunststoff befestigt, sondern vielmehr als eine Sammlung von klonalen Zellen in eine dreidimensionale (3D) Platz Interaktion mit ihren Nachbarn und mit verschiedenen räumlichen Eigenschaften, wie z. B. die Unterbrechung des normalen zellulären Polarität. Diese Wechselwirkungen verursachen 3D-kultivierte Zellen, morphologische und zelluläre Eigenschaften zu erwerben, die für in Vivo Tumoren relevant ist. Darüber hinaus ein Tumor Masse steht in direktem Kontakt mit anderen Zelltypen wie Stromazellen und immun-Zellen sowie die extrazelluläre Matrix aus anderen Zelltypen. Die Matrix hinterlegt besteht aus Makromolekülen wie Kollagen und Fibronektin.
In einem Versuch, die Übersetzung von Forschungsergebnissen in der Onkologie von Bank zu Bett zu erhöhen haben viele Gruppen begonnen, die Verwendung von 3D Modellsysteme in ihre Droge Entwicklungsstrategien zu untersuchen. Diese Systeme werden gedacht, um mehr physiologisch relevant sein, weil sie versuchen, die komplexe und heterogene Umgebung eines Tumors zu rekapitulieren. Diese Systeme können jedoch sehr komplex sein, und zwar offen für Wachstum in 96-Well-Formate, und einige jetzt auch in 384, sie bieten nur wenige Möglichkeiten für groß angelegte Wachstum und Screening. Dies beobachtete Lücke führte zu die Entwicklung von Methoden, die hier im Detail zu Kultur Tumor Sphäroide in einer Hochdurchsatz-Kapazität im Jahre 1536-Well Platten beschrieben. Diese Methoden stellen einen Kompromiss um die hochkomplexen Matrix-basierte Systeme, die schwer zu Bildschirm und herkömmlichen 2D Assays sind. Eine Vielzahl von Krebszelllinien beherbergen verschiedene genetische Mutationen werden erfolgreich gezeigt, zusammengesetzte Wirksamkeit von kuratierten Bibliotheksbenützung Verbindungen gezielt die Mitogen-Activated Protein Kinase oder MAPK Weg zu untersuchen. Sphäroid Kultur Antworten sind dann im Vergleich zu der Reaktion der Zellen gezüchtet in 2D, und unterschiedliche Aktivitäten berichtet. Diese Methoden bieten ein einzigartiges Protokoll für zusammengesetzte Aktivität in einer Hochdurchsatz-3D-Umgebung testen.

Eine Vielzahl von etablierten Krebszelle, die Linien bekannt, auch unter 2D Kulturbedingungen wachsen mit den beschriebenen Methoden hier getestet wurden. Repräsentative Bilder aus einer Vielzahl von MAPK mutierten Krebs Zell-Linien (Calu-6:KRAS, NCI-H1299:NRAS, SK-MEL-30:NRAS und KNS-62:HRAS) sind in Abbildung 1zu sehen. Diese Bilder zeigen, dass zwar die Zelllinien verschiedenen Morphologien, jeweils 3D-Strukturen in den Assay 1536-Well-Platten gebildet. <...

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Generation of High-Throughput Three-Dimensional Tumor Spheroids for Drug Screening

Über eine Vielzahl von Anzeichen der Krankheit werden mehr physiologisch relevanten Modelle entwickelt und implementiert in Drug Discovery-Programme. Das neue Modellsystem hier beschriebenen zeigt wie dreidimensionale Tumor Sphäroide kultiviert und in ein Hochdurchsatz-1536-Well-Platte-basiertes System zur Suche neuer Krebsmedikamente abgeschirmt werden können.

Generation von Hochdurchsatz-dreidimensionale Tumor Sphäroide für Drogen-Screening

Cancer cells have routinely been cultured in two dimensions (2D) on a plastic surface. This technique, however, lacks the true environment a tumor mass is ...

Research

JoVE Journal

Cancer Research

An Integrated Platform for Genome-wide Mapping of Chromatin States Using High-throughput ChIP-sequencing in Tumor Tissues

Eine integrierte Plattform für genomweite Kartierung von Chromatin Staaten mit hohem Durchsatz ChIP-Sequenzierung im Tumorgewebe

Histone modifications constitute a major component of the epigenome and play important regulatory roles in determining the transcriptional status of ...

Forschung

Krebsforschung

A Three-dimensional Thymic Culture System to Generate Murine Induced Pluripotent Stem Cell-derived Tumor Antigen-specific Thymic Emigrants

Ein dreidimensionales thymisches Kultursystem zur Generierung von murine induzierten pluripotenten Stammzell-abgeleiteten Tumor-Antigen-spezifischen thymischen Auswanderern

The inheritance of pre-rearranged T cell receptors (TCRs) and their epigenetic rejuvenation make induced pluripotent stem cell (iPSC)-derived T cells a ...

Longitudinal Morphological and Physiological Monitoring of Three-dimensional Tumor Spheroids Using Optical Coherence Tomography

Longitudinal morphologischen und physiologischen Überwachung der dreidimensionalen Tumor Sphäroide mit optischen Kohärenztomographie

Tumor spheroids have been developed as a three-dimensional (3D) cell culture model in cancer research and anti-cancer drug discovery. However, currently, ...

Three-Dimensional Bone Extracellular Matrix Model for Osteosarcoma

Dreidimensionale extrazelluläre Matrix Knochenmodell für Osteosarkom

Osteosarcoma (OS) is the most common and a highly aggressive primary bone tumor. It is characterized with anatomic and histologic variations along with ...

Fully Human Tumor-based Matrix in Three-dimensional Spheroid Invasion Assay

Voll menschliche Tumor-basierte Matrix im dreidimensionalen Spheroid-Invasions-Assay

Two-dimensional cell culture-based assays are commonly used in in vitro cancer research. However, they lack several basic elements that form the tumor ...

Physiologic Patient Derived 3D Spheroids for Anti-neoplastic Drug Screening to Target Cancer Stem Cells

Physiologische Rand-3D-Sphäroide für antineoplastisches Arzneimittel-Screening, um Krebs-Stammzellen gezielt anzusprechen

In this protocol, we outline the procedure for generation of tumor spheroids within 384-well hanging droplets to allow for high-throughput screening of ...

Establishment and Characterization of Small Bowel Neuroendocrine Tumor Spheroids

Etablierung und Charakterisierung von kleinen Darm Neuroendokrinen Tumor Sphäriden

Small bowel neuroendocrine tumors (SBNETs) are rare cancers originating from enterochromaffin cells of the gut. Research in this field has been limited ...

Drug Screening of Primary Patient Derived Tumor Xenografts in Zebrafish

Arzneimittel-Screening von Primärpatienten abgeleitetTumor Xenografts in Zebrafischen

Patient derived xenograft models are critical in defining how different cancers respond to drug treatment in an in vivo system. Mouse models are the ...

A Three-dimensional Model of Spheroids to Study Colon Cancer Stem Cells

Ein dreidimensionales Modell von Sphäroiden zur Untersuchung von Darmkrebs-Stammzellen

Colorectal cancers are characterized by heterogeneity and a hierarchical organization comprising a population of cancer stem cells (CSCs) responsible for ...

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

High-Throughput In Vitro Assay using Patient-Derived Tumor Organoids

Hochdurchsatz-In-vitro-Assay mit patientenabgeleiteten Tumororganoiden

Patient-derived tumor organoids (PDOs) are expected to be a preclinical cancer model with better reproducibility of disease than traditional cell culture ...