Name: imaging fitc-dextran as a reporter for regulated exocytosis
Uploaded: 2018-06-20T15:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Imaging FITC-dextran as a Reporter for Regulated Exocytosis at JoVE.com

אנו מודים Ashery U. ד ר על מתנה נדיבה של cDNA. אנו מודים ד"ר ג מסה, ל' וקולאז'ים, מ' שהרבני ו Y.Zilberstein ממלון הסלולר סקלר & מרכז הדמיה מולקולרית על שלהם בפז סיוע עם מיקרוסקופ. העבודה הזאת נתמכה על ידי ארצות הברית-לאומית הקרן הלאומית למדע (גרנט 2013263 ר שגיא-אייזנברג, אני Hammel של S.J.Galli), מענק 933/15 של הקרן הלאומית למדע, שנוסדה על ידי ישראל האקדמיה למדעים (כדי R.Sagi-אייזנברג ) ומענקים NIH U19 AI 104209 ו- AR067145 R01 (כדי סניף Galli).

1. תכשירים
<ol><li>הכנת RBL תרבות המדיה<ol>
<li>מיקס 500 מ של סוכרים נמוכה Dulbecco של ששינה בינוני הנשר (DMEM) עם 56 מ של סרום שור עוברית (FBS), 5.5 mL של פניצילין-סטרפטומיצין-ניסטטין פתרון, מ 5.5 לגלוטמין 200 מ מ פתרון. התוצאה גלוקוז נמוך DMEM בתוספת 10% FBS, סטרפטומיצין µg 100/mL, 100 יחידות/mL פניצילין, 12 יחידות/mL ניסטטין ו- 2 מ ?...

כאן נתאר איך איתור זריחה של FITC-לתוספי נטען לתוך SGs ניתן ללכוד במיוחד אקסוציטוזה מתחם אירועים. זה הושג על ידי הגדרת המיקרוסקופ לרכוש תמונה כל 15 שניות, ובכך להבטיח כי רק לטווח ארוך אירועים יתועדו לאורך זמן ולכן למעט אירועים קצרה שיתאימו באופן מלא אקסוציטוזה או נשיקה-וברח אקסוציטוזה. כדי ליצו?...

אקסוציטוזה מוסדר הוא המנגנון העיקרי שבאמצעותו מטענים בקלות עשה הוא שוחרר מן תא הפרשה בתגובה גורם ספציפי. המטען מראש נוצר, מבודדות לתוך שלפוחית הפרשה, שבו הוא מאוחסן עד טריגר ממסרים האות לשחרור של התוכן של SGs. סוגים שונים של אותות עלולה לגרום מצבים שונים של אקסוציטוזה מוסדר, או מצבים שונים של אקסוציטוזה מוסדר עלולה להתרחש בו זמנית. שלושה מצבים עיקריים של אקסוציטוזה מוסדר ידועים: אקסוציטוזה מלאה, הכוללת פיוז'ן מלא של גרגר הפרשה יחיד עם קרום פלזמה; נשיקה-וברח אקסוציטוזה, שכרוך ארעי הפיוז'ן גרגר הפרשה עם קרום פלזמה ואחריו שלה מיחזור; ו אקסוציטוזה מורכבות, אשר מאופיין על ידי homotypic פיוז'ן של מספר לפני SGs (קרי, אקסוציטוזה multigranular) או רציף (קרי, אקסוציטוזה רציפים) כדי פיוז'ן עם קרום פלזמה1. אקסוציטוזה מתחם נחשב מצב הנרחב ביותר של מטען מהדורה2, כמו זה מאפשר הפרשה מהירה של מטענים, כולל זה של SGs הממוקמים דיסטלי של קרום פלזמה. אקסוציטוזה מתחם תועד בשני תאים האנדוקרינית אקסוקרינית3,4,5,6,7,8,9, וכן תאים חיסוניים. תאים חיסוניים, כגון אאוזינופילים10,11,12 ו נויטרופילים13, מתחם אקסוציטוזה מאפשר שחרור מהיר וחזק של המגשרים הדרושים כדי להרוג פתוגנים פולשים כגון חיידקים או טפילים. תאי פיטום (MCs) לפרוס אקסוציטוזה המורכבת לשחרור יעיל של מתווכים דלקתיים מראש מאוחסנות במהלך תגובות מערכת החיסון המולדת, אנפילקסיס ו אחרים14,15,של תגובות אלרגיות16 , 17. מאז מצבים שונים של אקסוציטוזה עלולה להתרחש בו זמנית18,19, זה הפך להיות אתגר כדי להבחין בין אותם בזמן אמת או כדי לזהות שלהם machineries פיוז'ן בהתאמה, ומכאן שחקרתי מנגנונים הבסיסית שלהם.
כאן אנו מציגים שיטה, המבוסס על תאים חיים הדמיה של התא טעון FITC-לתוספי, המאפשר מעקב בזמן אמת של אירועים exocytic, הבחנה בין מצבים שונים שלהם. בפרט, השיטה שלנו מאפשר ניטור בלעדית של תרכובת אקסוציטוזה.
FITC-לתוספי הוא המספר המשלים של fluorophore pH רגיש FITC עם לתוספי רב-סוכר גלוקן. Dextrans fluorescently שכותרתו הוכחו הזן את התא על-ידי micropinocytosis20,21 ו- macropinocytosis22,23. כמו תאים endocytic בוגר לתוך lysosomes, הוכח כי FITC-לתוספי שמצטבר ליזוזום עם אין השפלה נראית לעין. עם זאת, כיוון FITC הוא מאוד רגיש pH fluorophore בגודל24, ליזוזום לומן הוא חומצי, זריחה FITC-לתוספי המרווה בהגיעם ליזוזום24. לכן, הקמת dextrans כמו ליזוזום ממוקד מטענים, ויחד עם הרגישות pH של FITC, הניחו את היסודות עבור השימוש FITC-לתוספי במחקרים ליזוזום אקסוציטוזה25,26,27 , 28 , 29.
מספר סוגי תאים, כולל MCs, נויטרופילים, אאוזינופילים, T ציטוטוקסיים, melanosomes ואחרים, SGs להציג תכונות lysosomal, מסווגים הקשורים ליזוזום organelles (LROs) או הפרשה lysosomes30,31 . מכיוון LROs יש על pH חומצי luminal, FITC-לתוספי ניתן להמחיש אקסוציטוזה שלהם, כתוצאה pH גבוה יותר המשויכים את כיציאה מתוך הגוף של LROs. אכן, נעשה שימוש FITC-לתוספי לפקח אקסוציטוזה ב MCs-18,-32,-33. בשיטה זו, FITC-לתוספי נוספו התרבות תאים, שימולא על ידי התאים פינוציטוזה, מתמיינים של SGs. כמו בגן lysosomes, זריחה FITC הוא מתרצה ב SGs כאשר הם בתוך התא. עם זאת, על ס ג פיוז'ן עם קרום פלזמה, חשיפה הסוגר חצרו החיצונית, FITC-לתוספי חוזר שלה פלורסצנטיות כמו עלייתו של ה-pH של ס ג, ומאפשר את מעקב פשוט של exocytic אירועים על ידי מיקרוסקופ תא חי. כאן, אנחנו מותאם בשיטה זו כדי לאפשר מעקב ייחודי של תרכובת אקסוציטוזה.
שתי שיטות נוספות שימשו בעבר כדי לעקוב אחר אקסוציטוזה מורכבים. מיקרוסקופ אלקטרונים הייתה השיטה הראשונה כדי לאפיין מבני exocytic כי הציע את המופע של מצבים שונים של אקסוציטוזה. בפרט, תצפיות המנהרות"הפרשה" בתאי הלבלב acinar34 , MCs35,36,37 הולידה ההשערה של תרכובת אקסוציטוזה. עם זאת, בעוד הרזולוציה הגבוהה של מיקרוסקופ אלקטרונים יש את הכוח כדי לחשוף את שלפוחית מאוחה, זה לא יכולים לאתר את הדינמיקה של פיוז'ן שלהם, ולכן אינו יכול להגדיר אם הם תואמים SG פיוז'ן במהלך אקסוציטוזה תרכובת או פיוז'ן של גרגרי כבש מחדש בעקבות אנדוציטוזה שלהם. זה מכשול בשיטות אחרות שיכול למדוד אקסוציטוזה בתאים חיים, כגון תיקון המידות קלאמפ של קרום פלזמה קיבוליות11,13,38,39 או amperometry 40 של המדיה. עם זאת, תיקון מחבר חובק למעקה דורש מלכודת מיוחדת, לא יכול להיות מתאים לכל סוגי תאים. מדידות Amperometry מסוגלים לעקוב אחר אקסוציטוזה רק אם המטען הוא שוחרר במרחק מאוד קרוב אל האלקטרודה. לכן, באמצעות הדמיה תא חי מציע יתרון על פני שיטות אלה, זה לא רק מאפשר מעקב בזמן אמת אחר אקסוציטוזה, אבל זה גם מאפשר רכישה מהירה ופשוטה של נתונים כל התא.
המעקב של FITC-לתוספי על ידי מיקרוסקופ תא חי מציע גם כמה יתרונות אחרים תא חי שיטות דימות מבוססות. לדוגמה, השיטה הנפוצה היא גמורה פלורסצנטיות מיקרוסקופ (TIRFM) של תאים נטען עם מכשיר בדיקה SG פלורסנט או ביטוי של פלורסנט מתויג חלבון SG מטען או קרום חלבון26,41, 42 , 43. כוחו של שיטה זו נעוץ יכולתה לפקח באופן בלעדי האירועים המתרחשים בקרבת קרום פלזמה (המכונה בזאת טביעת רגל), ומכאן exocytic אירועים. עם זאת, זהו גם החיסרון של שיטה זו כי רק השבר תאים סמוכים coverglass, קרוב המיקרוסקופ יכול להיות עם תמונה44. אם טביעות הרגל כזה אכן מייצגים על פני קרום התא כולו נמצא עדיין שנוי במחלוקת45,46,47. בהקשר זה, באמצעות צבע רגיש pH כמו FITC-לתוספי, מיקרוסקופ קרינה פלואורסצנטית רגילה או מיקרוסקופ קונפוקלי עם חריר פתוח מאפשר הדמיה של התא כולו, וכך לתפוס את האירועים exocytic הכולל המתרחשים בתא.
כתבים pH רגישים נוספים המשמשים ללמוד אקסוציטוזה מוסדר על ידי הדמיה התא כולו או TIRFM כוללות SG מטען או חלבון ממברנלי SG דבוקה phlourin, pH רגיש GFP משתנה. דוגמאות כוללות NPY - phlourin-, β-hexoseaminidase-phlourin synapto-phluorin48,49,50,51,52. בעוד הביטוי של הגששים אלה עשוי לייצג באופן הדוק יותר ההרכב אנדוגני של SGs, זה כרוך תרביות תאים של תאי, וייתכן ולכן פחות מתאים תאים שקשה transfect. לכן, כאשר הלומדים תאים זה קשים transfect או בתנאים ניסיוני הדורשים מספר מניפולציות גנומית, השימוש של מתחם זה ניתן להשלים פשוט לתוך התרבות התא האמצעי, כגון FITC-לתוספי, יש יתרון . FITC-לתוספי מציע גם יתרון על פני acridine כתום (AO), צבע pH רגיש אחר שבו נעשה שימוש עבור המעקב של אקסוציטוזה מאת חיים התא מיקרוסקופ53,54,55,56 , 57 , 58. אאו הוכח לגרום פוטוליזה של שלפוחית שבו התוצאה הבזקים כוזבים, אשר מתאימה ההפרשה בפועל מעבדת27. לעומת זאת, FITC-לתוספי משקף אירועים הפרשת יותר, כנראה בגלל הייצור הנוצרות על-ידי צילום נמוכה של חמצן תגובתי27.
ראוי לציין, גישה חלופית ללמוד אקסוציטוזה זה לאתר זרם של צבע, של המדיום חיצוניים לתוך ס ג דרך הנקבובית פיוז'ן שנפתח במהלך תהליך זה. במקרה זה, לצבוע מתווסף המדיום חיצוני לצד ההדק הפרשה. לאחר מכן, עם פתיחת הנקבובית פיוז'ן, לצבוע מפזרת לתוך ה59,ג60. יתרון ברור של שיטה זו הוא כי הוא מציע גם את היכולת לאמוד את גודל הנקבוביות פיוז'ן, על ידי שימוש צבעים בגודל משתנה. לדוגמה, ניתן להשתמש dextrans של משקל מולקולרי שונה (MW), מצומדת כדי fluorophores שונים, כמו צבעי חוץ-תאית, לפיה הגודל המרבי של לתוספי שיכולים לחדור את ס ג להתאים לגודל של פיוז'ן נקבובית59, 61 , 62 , 63 , 64. בנוסף, גישה זו אינה דורשת שימוש בדיקה pH-רגיש. עם זאת, חיסרון משמעותי הוא האות לרעש יחס הוא נמוך מאוד, שכן כמות גדולה של צבע קיים בתקשורת במהלך רכישת תמונות, וכתוצאה מכך רקע.
בסך הכל, השימוש של FITC-לתוספי סמן אקסוציטוזה מתגבר על מספר חסרונות בשיטות שדווחה בעבר, כגון אות לרעש יחס, רעילות, מעקב דינמי ומורכבות.
כאן נתאר את השימוש FITC-לתוספי לפקח אקסוציטוזה מתחם בקו 3 תא פיטום RBL - 2H (בזאת המכונה RBL, בעיקר שקבע אקלסטון. et al. 65 ו לשכפל עוד יותר על-ידי. Barsumian et al. 66), בתגובה אימונוגלובולין E (IgE) / הפעלה אנטיגן (Ag).

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>DMEM low glucose</td>
			<td>Biological Inductries</td>
			<td>01-050-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal bovine serum</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12657</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pen-strep-nystatin solution</td>
			<td>Biological Inductries</td>
			<td>03-032-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Glutamine 200 mM solution&#160;</td>
			<td>Biological Inductries</td>
			<td>03-020-1A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC dextran 150K</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>46946-500MG-F</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trypsin/EDTA Solution B</td>
			<td>Biological Inductries</td>
			<td>03-052-1A</td>
			<td>Warm in 37 &#176;C water bath before use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Top-vacuum filter of 0.22 &#181;m pore size&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430769-1EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cellulose acetate syringe filter unit, 0.22 &#181;m pore size</td>
			<td>Sartorius</td>
			<td>16534K</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Chambered coverglass&#160;</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>155411</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning tissue-culture treated culture dishes</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>CLS430167</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine serum albumin</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4503</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-DNP monoclonal IgE</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>D8406</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNP-HSA (Ag)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A6661&#160;</td>
			<td>Avoid direct light exposure</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hepes buffer 1M, pH 7.4</td>
			<td>Biological Inductries</td>
			<td>03-025-1B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>MERK</td>
			<td>102382</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucose</td>
			<td>BDH Laboratories</td>
			<td>284515V</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonium chloride</td>
			<td>MERK</td>
			<td>1145</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PIPES dipotassium salt</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>108321-27-3</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calcium acetate hydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>114460-21-8</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Magnesium acetate tetrahydrate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>M5661</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium glutamate (L-Glutamic acid potassium salt monohydrate)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>G1501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaH2PO4</td>
			<td>MERK</td>
			<td>6346</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NaCl</td>
			<td>MERK</td>
			<td>106404</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>MERK</td>
			<td>105833</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>KCl</td>
			<td>MERK</td>
			<td>104936</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electroporator&#160;</td>
			<td>BTX</td>
			<td>ECM830</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope, Zeiss</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 5 Pascal, Axiovert 200M</td>
			<td>Used in Figure 3. Equipped with an electronic temperature-controlled 
			airstream incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope, Zeiss</td>
			<td>Zeiss</td>
			<td>LSM 800, Axio Observer.Z1 /7</td>
			<td>Used in Figure 2. Equipped with a GaAsP detector an electronic temperature-controlled 
			airstream incubator</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Confocal microscope, Leica</td>
			<td>Leica</td>
			<td>SP5</td>
			<td>Used in Figure 1. Equipped with a leica HyD detector and an top-stage incubator (okolab)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RBL-2H3 cells</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>RBL-2H3 cells were cloned in the lab of Reuben P. Siraganian. See reference 67</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

imaging fitc-dextran as a reporter for regulated exocytosis

אקסוציטוזה מוסדר הוא תהליך שבאמצעותו מטענים, אשר מאוחסן בגרגרים הפרשה (SGs), משוחרר בתגובה גורם הפרשה. אקסוציטוזה מוסדר הוא היסוד לתקשורת המערכת והוא מפתח מנגנון הפרשת נוירוטרנסמיטרים, הורמונים, מתווכים דלקתיים, תרכובות אחרות, על ידי מגוון רחב של תאים. לפחות שלושה מנגנונים נפרדים ידועים אקסוציטוזה מוסדר: אקסוציטוזה מלא, איפה SG יחיד מלא ולספות עם קרום פלזמה, נשיקה-וברח אקסוציטוזה, איפה SG יחיד פתילים transiently עם קרום פלזמה, ומתחם אקסוציטוזה, איפה SGs מספר נתיך אחד עם השני, לפני או אחרי ס ג פיוז'ן עם קרום פלזמה. סוג מוסדר אקסוציטוזה שנערך על ידי תא מוכתב לעתים קרובות על ידי הסוג של גירוי הפרשה. עם זאת, תאים רבים, בגורם מפעיל הפרשה יחיד ניתן להפעיל מספר מצבי של אקסוציטוזה מוסדרים בו זמנית. למרות שפע שלהם ואת חשיבות על פני התא סוגים ומינים, המנגנונים הקובעות את מצבים שונים של הפרשת הן במידה רבה בלתי פתורות. אחד האתגרים העיקריים בחקירת על מצבים שונים של אקסוציטוזה מוסדר, הוא הקושי הבחנה ביניהם, כמו גם לחקור אותם בנפרד. כאן נתאר את השימוש fluorescein isothiocyanate (FITC)-לתוספי אקסוציטוזה הכתב, וכן תא חי הדמיה, כדי להבדיל בין המסלולים השונים של אקסוציטוזה מוסדר, התמקדות אקסוציטוזה מורכבים, בהתבסס על החוסן, משך הזמן של אירועים exocytic.

איור 1a מייצג סכמטי איך FITC-לתוספי עשוי לפעול בתור עיתונאי מוסדר אקסוציטוזה וזה מסכם את הדברים על מצבים שונים של אירועים exocytic. ראשית, תאים מודגרת עם FITC-לתוספי, אשר על ידי פינוציטוזה, ממוין to SGs. מאז SGs של MCs הם LROs, pH נמוך שלהם dampens על ידי קרינה פלואורסצנטית של FITC, ...

Watch this Scientific Journal Video about Imaging FITC-dextran as a Reporter for Regulated Exocytosis at JoVE.com

Imaging FITC-dextran as a Reporter for Regulated Exocytosis

הדמיה FITC-לתוספי כעיתונאית אקסוציטוזה מוסדר

כאן אנחנו פירוט שיטת הדמיה תא בשידור חי של אקסוציטוזה מוסדר. שיטה זו משתמשת FITC-לתוספי, אשר צוברת ב הקשורות ליזוזום organelles, בתור כתב. שיטה פשוטה זו מאפשרת גם הבחנה בין מצבים שונים של אקסוציטוזה מווסתת בתאים קשה לתמרן גנטית.

Regulated exocytosis is a process by which cargo, which is stored in secretory granules (SGs), is released in response to a secretory trigger. Regulated ...

Research

Education

JoVE Journal

JoVE Core

Cell Biology

Biology

Unit 1

Endocytosis and Exocytosis

SCIENTISTS IN ACTION

Measuring Exocytosis in Neurons Using FM Labeling

מדידת Exocytosis בנוירונים באמצעות תיוג FM

The ability to measure the kinetics of vesicle release can help provide insight into some of the basics of neurotransmission.  Here we used real-time ...

Use of Rotorod as a Method for the Qualitative Analysis of Walking in Rat

השימוש Rotorod כשיטה לניתוח איכותי של הליכה עכברוש

High speed videoanalysis of the details of movement can provide a source of information about qualitative aspects of walking movements. When walking on a ...

Imaging Exocytosis in Retinal Bipolar Cells with TIRF Microscopy

הדמיה Exocytosis בתאים עם הפרעה דו רשתית מיקרוסקופית TIRF

Total internal reflectance fluorescence (TIRF) microscopy is a technique that allows the study of events happening at the cell membrane, by selective ...

A Simple Method for Imaging Arabidopsis Leaves Using Perfluorodecalin as an Infiltrative Imaging Medium

A Simple Method for Imaging Arabidopsis Leaves Using Perfluorodecalin as an Infiltrative Imaging Medium

שיטה פשוטה הדמיה ארבידופסיס מותיר שימוש Perfluorodecalin כנושאת הדמיה Infiltrative

The problem of acquiring high-resolution images deep into biological samples is widely acknowledged1. In air-filled tissue such as the spongy mesophyll of ...

A Chemical Screening Procedure for Glucocorticoid Signaling with a Zebrafish Larva Luciferase Reporter System

הליך מיון כימי לGlucocorticoid איתות עם מערכת כתב דג הזברה הזחל בלוציפראז

Glucocorticoid stress hormones and their artificial derivatives are widely used drugs to treat inflammation, but long-term treatment with glucocorticoids ...

Dithranol as a Matrix for Matrix Assisted Laser Desorption/Ionization Imaging on a Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectrometer

Dithranol כמו מטריקס לליזר Desorption / יינון ההדמיה מטריקס Assisted על Fourier Transform יון הציקלוטרון התהודה ספקטרומטר מסות

Mass spectrometry imaging (MSI) determines the spatial localization and distribution patterns of compounds on the surface of a tissue section, mainly ...

RNA Catalyst as a Reporter for Screening Drugs against RNA Editing in Trypanosomes

RNA Catalyst ככתב להקרנת סמים נגד RNA עריכה בtrypanosomes

Substantial progress has been made in determining the mechanism of mitochondrial RNA editing in trypanosomes. Similarly, considerable progress has been ...

High-throughput Screening for Chemical Modulators of Post-transcriptionally Regulated Genes

הקרנת תפוקה גבוהה עבור כימית מאפננים של גני Post-תעתיק מוסדר

Both transcriptional and post-transcriptional regulation have a profound impact on genes expression. However, commonly adopted cell-based screening assays ...

Transfecting RAW264.7 Cells with a Luciferase Reporter Gene

Transfecting תאי RAW264.7 עם לוציפראז כתב ג&#39;ין

Transfection of desired genetic materials into cells is an inevitable procedure in biomedical research studies. While numerous methods have been ...

FRET Imaging in Three-dimensional Hydrogels

סריג הדמיה ב הידרוג תלת ממדי

Imaging of F&#246;rster resonance energy transfer (FRET)&#160;is a powerful tool for examining cell biology in real-time. Studies utilizing FRET commonly ...