Name: metabolic analysis of drosophila melanogaster larval and adult brains
Uploaded: 2018-08-07T14:00:00
Duration: 7 min 6 s
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इस अध्ययन में ब्लूमिंगटन Drosophila स्टॉक सेंटर (NIH P40OD018637) से प्राप्त स्टॉक्स का इस्तेमाल किया गया । इस प्रकाशन में दी गई रिसर्च को संस्थागत विकास पुरस्कार (आइडिया) नेटवर्क द्वारा नेशनल इंस्टीट्यूट ऑफ जनरल मेडिकल साइंसेज के राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थानों के अनुदान संख्या के तहत चिकित्सा अनुसंधान उत्कृष्टता के लिए समर्थित किया गया था P20GM103430, और रोड आइलैंड फाउंडेशन द्वारा । लेखक जे जल और पी Snodgrass-बेल्ट इस प्रोटोकॉल के विकास में उनके समर्थन के लिए धंयवाद ।

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एम tipping सूक्ष्म ऊतक इस प्रोटोकॉल17में वर्णित संयम के लिए एक अनंतिम पेटेंट रखती है ।

यहां, melanogaster लार्वा और वयस्क दिमाग के चयापचय विश्लेषण के लिए एक उपंयास विधि पूर्व vivo बताया गया है । बेसल शर्तों के तहत, ऑक्सीजन की खपत और extracellular अंलीकरण दरों से संकेत मिलता है कि कैसे चयापचय सक्रिय मस्तिष्क है और निर्धारित कर सकते हैं कि क्या एक ऊतक mitochondrial बनाम glycolytic श्वसन पर अधिक निर्भर हो गया है, क्रमशः11.
अवरोधकों या चिकित्सीय दवाओं के साथ दिमाग का इलाज ऊतक के चयापचय की स्थिति के बारे में अधिक जानकारी प्रदान कर सकते हैं । चयापचय सब्सट्रेट भी विशिष्ट चयापचयों पर निर्भरता का निर्धारण करने के लिए जोड़ा जा सकता, ऐसे ग्लूकोज Warburg प्रभाव के लिए परीक्षण करने के लिए22 या glutamine glutaminolysis23की जांच करने के लिए-चयापचय reprogramminging में दोनों आम. लंबी अवधि के अध्ययन के लिए, लार्वा या मक्खियों भी इंजेक्शन बंदरगाहों का उपयोग कर के बजाय दवाओं खिलाया जा सकता है, और दिमाग के अंतराल पर या अंत में परख हो सकता है, प्रयोगात्मक डिजाइन के आधार पर । इस विधि कई अनुप्रयोगों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है ।
इस विधि दिमाग के लिए अनुकूलित किया गया है, लेकिन अंय लार्वा18 और वयस्क ऊतकों का विश्लेषण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । इसके अतिरिक्त, अंय छोटे मॉडल प्रणालियों इस विधि का उपयोग करने के लिए पूरे जीवों18 या ऊतकों को मापने कर सकते हैं । अंय प्रणालियों के लिए इस विधि के अनुकूलन के लिए केवल सीमा अंग, ऊतक, या जीव का आकार है । सूक्ष्म ऊतक संयम के द्वारा बनाई गई कक्ष परख चलाने के लिए आकार बाधा है । चयापचय उत्पादन मस्तिष्क या ऊतक परीक्षण किया जा रहा है के लिए बहुत कम है, और नमूना आकार एक बाधा नहीं है, तो नमूने पूलिंग परख माप और संवेदनशीलता को बढ़ाने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । अंय अनुप्रयोगों के लिए इस प्रोटोकॉल को संशोधित केवल मामूली अनुकूलन की आवश्यकता होती है, 1 सहित) उचित उपाय और मिश्रण चक्र संख्या और समय का चयन, और 2) ऊतक के लिए प्रभावी उपचार सांद्रता का निर्धारण । माप और मिश्रण बार प्रत्येक चक्र के दौरान चयापचय विश्लेषक द्वारा मापा निगरानी ऑक्सीजन एकाग्रता द्वारा निर्धारित किया गया था. यह रन पूरा होने के बाद सिंहावलोकन विंडो में Y2 अक्ष बटन में ओ2 का चयन करके देखा जा सकता है. प्रत्येक चक्र के दौरान, वहाँ एक बूंद ऑक्सीजन एकाग्रता में मापा समय के दौरान ऊतक ऑक्सीजन की खपत को दर्शाती होना चाहिए, मिश्रण चक्र के दौरान प्रारंभिक ऑक्सीजन एकाग्रता के लिए एक वापसी के बाद. इस पैटर्न मनाया जाता है जब तक उपाय और मिश्रण बार परीक्षण किया जाना चाहिए. इस विधि के प्रयोग से अन्य कीट दिमागों का अध्ययन किया गया है । इन दिमाग मक्खी दिमाग यहां इस्तेमाल किया, लेकिन अभी भी ऊतक संयम द्वारा उत्पंन चैंबर के भीतर फिट से बड़ा थे । इन दिमाग से ओसीआर रीडिंग ४०० pmol के रूप में उच्च के रूप में थे/ इन अध्ययनों से परिणाम है, साथ ही ओसीआर दरों कि अंय पूरे मापने के अध्ययन के साथ संरेखित करें ऑक्सीजन की खपत18,24, सुझाव है कि melanogaster दिमाग ऑक्सीजन सीमित नहीं थे । D. melanogaster दिमाग और अन्य जीवों से ऊतकों के लिए, इस विधि को लागू करने के लिए चार महत्वपूर्ण चरणों पर विशेष ध्यान देने की आवश्यकता है ।
सफलतापूर्वक reproducible और जैविक रूप से प्रासंगिक माप को प्राप्त करने के लिए, प्रोटोकॉल का पालन किया जाना चाहिए के महत्वपूर्ण कदम हैं । सबसे पहले, एक सूक्ष्म ऊतक संयम का उपयोग इस विधि के लिए आवश्यक है । इन विनिर्माण विनिर्देशों और सूचीबद्ध सामग्री का उपयोग कर संयम जरूरी है । सामग्री उनके निष्क्रिय रासायनिक संरचना के कारण चयन किया गया, और उनके लिए हवा के बुलबुले के निर्माण के बिना मिश्रण कदम के दौरान उचित मीडिया विनिमय की अनुमति देने की क्षमता । दूसरा, एक समय पर विच्छेदन और थाली तैयारी ऊतक के चयापचय उत्पादन को अधिकतम करने के लिए आवश्यक है । कम विच्छेदन बार काफी मस्तिष्क ख़राब नहीं करना चाहिए । अंय अध्ययनों से पता चला है कि मक्खी दिमाग घंटे के लिए दिन के लिए जिंदा रखा जा सकता है अगर ठीक से एक छिड़काव चैंबर25में संग्रहित । हालांकि, के रूप में चित्र 3 बी और 3dमें देखा है, अगर दिमाग परख मीडिया में समय की लंबी अवधि के लिए बैठे छोड़ रहे है परख से पहले, ऑक्सीजन की खपत दरों में कमी कर रहे हैं । परख के दौरान, नमूने हर चक्र के दौरान एक मिश्रण कदम से गुजरना । यह मिश्रण न केवल रासायनिक यौगिकों के इंजेक्शन के साथ एड्स, लेकिन यह भी मीडिया को फिर से प्रसारित और ऑक्सीजन प्रदान करने के लिए काम करता है । दिमाग इन उपाय के दौरान लंबे समय तक चयापचय सक्रिय रहने के लिए सक्षम हैं-मिश्रण चक्र से वे बेंच शीर्ष पर मीडिया में गर्मी होगी । इसलिए, लार्वा दिमाग का विच्छेदन इस परख स्थापित करने के लिए शुरू करने से पहले महारत हासिल होना चाहिए । जब इस परख की स्थापना, एक समय में पादी की एक छोटी संख्या का विश्लेषण, दिमाग की जरूरत है और कुओं का उपयोग की संख्या को कम करने के लिए । इससे विदारक और परख माप के बीच होने वाली देरी को रोका जा सकेगा । तीसरा, एक स्थिर तापमान को बनाए रखने के लिए शारीरिक रूप से प्रासंगिक स्थितियों में चयापचय दर का विश्लेषण करने की आवश्यकता है । वृद्धि की परख तापमान ऊतक मौत का कारण बन सकता है, कम ऑक्सीजन खपत दर (आंकड़ा 3सी) द्वारा मनाया । यदि मक्खियों प्रयोगात्मक प्रयोजनों के लिए एक अलग तापमान पर पालन कर रहे हैं, माप भी इस तापमान पर किया जाना चाहिए । जबकि विच्छेदन सबसे अधिक संभावना कमरे के तापमान पर प्रदर्शन किया जाएगा, अगर परख एक अलग तापमान पर आयोजित किया जाएगा, चढ़ाया और रोका दिमाग 15 मिनट के लिए आवश्यक तापमान पर गर्मी की परख चलाने से पहले किया जाना चाहिए । अंत में, कुओं के बाद देख परख अगर ऊतक स्थिति माप प्रभावित निर्धारित करने के लिए महत्वपूर्ण है । कभी-कभार, वहां एक ग़ैर अच्छी तरह से होगा कि, विदारक खुर्दबीन के नीचे थाली देख के बाद, डेटा विश्लेषण से समाप्त किया जा सकता है या तो ऊतक या स्थिति के नुकसान के कारण, जहां मस्तिष्क के केंद्र से बाहर फिसल गया है अच्छी तरह से और फंस गया है के तहत संयम की बहुलक अंगूठी । ऊतक खो दिया जा सकता है अगर संयम ठीक से सुरक्षित नहीं था और मिश्रण चक्र के दौरान परेशान था । हालांकि इन घटनाओं का न तो अक्सर होता है, अगर वे विश्लेषण से बाहर नहीं हैं, वे दर मूल्यों को काफी कम होगा ।
ऑक्सीजन की खपत और extracellular अंलीकरण निगरानी द्वारा पूरे ऊतक चयापचय फ्लक्स की माप कैसे चयापचय आनुवंशिक परिदृश्य या अन्य प्रयोगात्मक स्थितियों द्वारा बदल दिया है समझने के लिए एक जैविक रूप से प्रासंगिक विधि प्रदान करता है । यह विधि एक एकल melanogaster मस्तिष्क में चयापचय परिवर्तन का पता लगाने के लिए काफी संवेदनशील है, जो रोक प्रवाह respirometry या अप्रत्यक्ष calorimetry का उपयोग संभव नहीं है । यह भी कम तकनीकी रूप से एक क्लार्क इलेक्ट्रोड का उपयोग करने ऑक्सीजन की खपत को मापने से चुनौतीपूर्ण है । इस प्रोटोकॉल का एक अतिरिक्त लाभ के प्रति अच्छी तरह से एक पूरे मस्तिष्क का विश्लेषण करने की क्षमता है । ९६-अच्छी तरह से प्रारूप और अधिक संवेदनशील रीडिंग के लिए अनुमति देता है, और इस प्रकार, एक से अधिक जीनोटाइप परख प्रति आवश्यक नमूनों की छोटी संख्या के कारण एक समय में परख की जा सकती है । जबकि ऊतक में चयापचय को मापने अभी भी चुनौतीपूर्ण है और सावधानी से और सिंक्रनाइज़ पशुओं की आवश्यकता है, इस प्रोटोकॉल का वर्णन एक तेजी से, अपेक्षाकृत सरलीकृत विधि, और डी में कई चयापचय संवेदनशीलता का विश्लेषण करने की क्षमता है । melanogaster लार्वा और वयस्क दिमाग ।

चयापचय reprogramminging ग्लियोब्लास्टोमा मल्टीफार्मी (जीबीएम), Huntington रोग, और प्रमुख अवसादग्रस्तता विकार (MDD)1,2,3सहित कई स्नायविक रोगों, में की पहचान की गई है । के रूप में चयापचय चिकित्सकीय रणनीतियों का ध्यान केंद्रित हो जाता है, बुनियादी चयापचय अनुसंधान के लिए उपकरण उंनत है । हालांकि, इन पद्धतियों के अधिकांश सेल लाइनों और प्राथमिक कोशिकाओं का अध्ययन करने के लिए या बड़े ऊतकों के बाद निर्धारण या-ठंड का विश्लेषण करने के लिए डिजाइन किए गए थे । कुछ दृष्टिकोण किट पर भरोसा करने के लिए सरलीकृत विशिष्ट चयापचयों उपाय है, जबकि अंय अधिक महंगा और जटिल विश्लेषण एक ही लक्ष्य के लिए जन स्पेक्ट्रोमेट्री4 के साथ संयोजन में क्रोमैटोग्राफी का उपयोग का उपयोग किया है । बड़ा चयापचय परिदृश्य को समझने के लिए, चयापचय profiling5,6 और चयापचय फ्लक्स विश्लेषण (एमएफए)7 बड़े पैमाने पर proteomic और जीनोमिक अध्ययन पूरक करने के लिए उभरा. profiling समय में एक बिंदु पर एक कोशिका या ऊतक में चयापचयों का एक मात्रात्मक प्रतिनिधित्व प्रदान करता है, जबकि एमएफए समय पर लेबल चयापचयों की ट्रैकिंग की अनुमति देकर इस पर फैलता है । उत्तरार्द्ध कैसे ऊर्जा स्रोतों अलग एक कोशिका या ऊतक में उपयोग किया जाता है खुलासा करने में उपयोगी है जब एक रोग8राज्य में । हालांकि, इन पद्धतियों समग्र चयापचय दर का माप शामिल नहीं है ।
छोटे मॉडल प्रणालियों, क्लार्क इलेक्ट्रोड9 और अप्रत्यक्ष calorimetry10के रूप में पारंपरिक तरीकों, के समग्र चयापचय राज्य पूछताछ करने के लिए ऑक्सीजन की खपत को मापने या बंद प्रवाह respirometry के लिए विन्यस्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है, ऑक्सीजन और कार्बन डाइऑक्साइड एकाग्रता, क्रमशः उपाय । इन तकनीकों, जबकि सही जीव स्तर पर चयापचय reprogramminging के readout में अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं, सीमाएं हैं । क्लार्क इलेक्ट्रोड का उपयोग तकनीकी रूप से चुनौतीपूर्ण हो सकता है और उच्च प्रवाह अध्ययन के लिए तैयार नहीं है. रोक प्रवाह आत्मशोधन परख कोशिकाओं या ऊतकों के लिए आवश्यक संवेदनशीलता के साथ काम नहीं कर सकता । कई साल पहले, नई तकनीक इन छोटे अनुप्रयोगों के लिए विशेष रूप से विकसित किया गया था11। इन उपकरणों शुरू में एक 24 या ९६-अच्छी तरह से प्रारूप में ऑक्सीजन की खपत और सेल लाइनों और प्राथमिक कोशिकाओं के extracellular अंलीकरण उपाय करने के लिए डिजाइन किए गए थे । सेट अप और डेटा उत्पादन की सादगी पारंपरिक दृष्टिकोण के लिए एक विकल्प के रूप में इस विधि की स्थापना की । इस पद्धति कोशिकाओं के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है, और हाल ही में प्रगति ऊतक घूंसे की माप के लिए अनुमति दी है12,13,14. हालांकि, इन तरीकों को परख में उपयोग छोटे मॉडल प्रणालियों से पूरे अंगों की माप के लिए अनुमति नहीं है ।
रोग मॉडल के चयापचय विश्लेषण अक्सर विशिष्ट एक ही ऊतक के भीतर रहने वाले समारोह की कोशिकाओं के बीच बातचीत शामिल है । उदाहरण के लिए, glial कोशिकाओं न्यूरॉन्स द्वारा उपयोग चयापचयों का उत्पादन. ये चयापचय बातचीत के लिए आवश्यक है न्यूरॉन्स अस्तित्व15. छोटे मॉडल प्रणालियों ऐसे इन के रूप में सवालों की जांच के लिए लाभप्रद हैं । एक पूरे अंग के चयापचय को मापने के लिए अध्ययन, कोशिका प्रकार की एक किस्म युक्त, vivo मेंऊर्जा उपयोग की समझ के लिए जोड़ देगा. हाल ही में, बेकर एट अल । पूरे मक्खी16सिर में ऑक्सीजन की खपत को मापने की एक विधि की सूचना दी । सिर की एक संख्या एक साथ एक 24-अच्छी तरह से सेल प्लेट की एक अच्छी तरह से पूलिंग, ऑक्सीजन की खपत रीडिंग एक चयापचय विश्लेषक का उपयोग कर प्राप्त किया गया । जबकि यह सिर के लिए अच्छी तरह से काम करता है, जो आसानी से शरीर से अलग कर रहे हैं, यह लार्वा दिमाग जैसे अंगों के लिए उपयोग करने के लिए और अधिक कठिन है, क्योंकि एक बड़ी मात्रा इस विधि के लिए विदारक होने की जरूरत है । इसलिए, एक ९६-अच्छी तरह से सेल प्लेट का उपयोग विधि, जो ऑक्सीजन की खपत और extracellular अंलीकरण रीडिंग की संवेदनशीलता बढ़ जाती है, एक ही पूरे लार्वा मस्तिष्क परख करने के लिए विकसित किया गया था ।
इस अध्ययन में प्रयुक्त चयापचय विश्लेषक नमूना एक ९६-well सेल प्लेट के कुआं के तल पर रहने के लिए मापा जा रहा है की आवश्यकता है । कोशिकाओं और अपेक्षाकृत सपाट ऊतकों के लिए, यह एक चुनौती नहीं है; हालांकि, D. melanogaster लार्वा और वयस्क दिमाग के लिए, यह पारंपरिक थाली कोटिंग प्रोटोकॉल का उपयोग संभव नहीं है । गोलाकार तीन-मस्तिष्क के आयामी आकार मज़बूती से प्लेट की सतह का पालन नहीं होगा, और उन है कि अक्सर उन्हें ठीक से अच्छी तरह से जगह के लिए प्रयास करते समय क्षतिग्रस्त हो रहे हैं. इस नए प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण हिस्सा डिजाइन और सूक्ष्म ऊतक संयम17 के विकास है कि मस्तिष्क के लिए एक छोटे से कक्ष प्रदान करने के लिए चयापचय माप के साथ हस्तक्षेप के बिना में रहते हैं । उत्पंन चैंबर में लगभग ०.०१६ ऊंचाई में है और पर्याप्त स्थान प्रदान करता है आसानी से कई घ. melanogaster दिमाग पकड़ । संयमी नायलॉन एक निष्क्रिय बहुलक अंगूठी से जुड़ी जाल से मिलकर बनता है और प्रतिनिधि परिणामोंमें आगे चर्चा की जाएगी । इन संयम का प्रयोग चयापचय माप के लिए विच्छेदित दिमाग तैयार करने के लिए आवश्यक समय को कम करता है । मापने की प्रक्रिया को अनुकूलित स्थिर, reproducible ऑक्सीजन की खपत और extracellular अंलीकरण दरों छह माप चक्र के बाद (25 मिनट) उत्पंन करता है । मस्तिष्क चयापचय विश्लेषक कारतूस दवा वितरण बंदरगाहों के माध्यम से चिकित्सकीय, अवरोधकों, या अन्य उपचार के इंजेक्शन में सक्षम बनाता है जो 2 एच की एक न्यूनतम के लिए इन शर्तों के तहत मेटाबोलिक सक्रिय रहते हैं. इस प्रोटोकॉल को भी आसानी से अंय ऊतकों और छोटे मॉडल प्रणालियों18के लिए अनुकूलित किया जा सकता है ।
नीचे विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन कैसे परख करने के लिए एक पूरी Drosophila लार्वा मस्तिष्क में ऑक्सीजन की खपत जब mitochondrial तनाव के साथ चुनौती दी । मस्तिष्क को तनाव, oligomycin को बाधित करने के लिए जोड़ा गया है एटीपी सिंथेस19. बेसल रीडिंग से ऑक्सीजन की खपत में कमी एटीपी की मात्रा का एक माप-मस्तिष्क में श्वसन के आधार पर पता चलता है । इसके अलावा रोटेनोन के साथ उपचार के बाद ऑक्सीजन की खपत में कमी आती है20 और antimycin एक21, इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला परिसरों मैं और III के अवरोधकों क्रमशः, गैर mitochondrial ऑक्सीजन खपत की मात्रा में संकेत मिलता है मस्तिष्क. यह परख कैसे एक मक्खी मस्तिष्क में mitochondrial श्वसन की तुलना में हो सकता है की एक उदाहरण है और कैसे इस प्रोटोकॉल को बदलती पादी में चयापचय की तुलना करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है । हालांकि, इस प्रोटोकॉल को मापने के लिए अनुकूलित किया जा सकता है बस बेसल ऑक्सीजन की खपत और extracellular अंलीकरण दरों, के रूप में अच्छी तरह के रूप में डिजाइन करने के लिए और अधिक विस्तृत अध्ययन विशिष्ट ऊर्जा उपयोग या सब्सट्रेट उपयोग परिकल्पनाओं की जांच ।

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Assay medium</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>102365-100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Calibrant solution</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>100840-000</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Corning Cell-Tak Cell Tissue Adhesive</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>DLW354240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>delrin</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>2XMK6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Drosophila Schneider Media</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td>21720-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dumont High Precision Tweezers (style 5)</td>
			<td>Ted Pella</td>
			<td>5622</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Loctite 409</td>
			<td>Amazon</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mitostress kit&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>103015-100</td>
			<td>oligomycin, rotenone, and antimycin A included</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Netwell inserts (6-well)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>29442-136</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>nylon mesh</td>
			<td>Component Supply</td>
			<td>U-CMN-64</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Parafilm M wrapping film</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>S37440</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PYREX spot plate</td>
			<td>Fisher Scientific</td>
			<td>13-748B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Seahorse XFe96 Analyzer</td>
			<td>Agilent</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wave v2.4 XFe96 analyzer software</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>https://www.agilent.com/en/products/cell-analysis/software-download-for-wave-desktop</td>
			<td>free download to mac or windows</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>XFe96 catridge and cell plates</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>102416-100</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

metabolic analysis of drosophila melanogaster larval and adult brains

इस प्रोटोकॉल Drosophila melanogaster लार्वा और वयस्क दिमाग में चयापचय को मापने के लिए एक विधि का वर्णन । पूरे अंगों में चयापचय को बढ़ाता है एक ऊतक ऊर्जा उपयोग के स्तर की समझ है कि जब प्राथमिक कोशिकाओं और सेल लाइनों का विश्लेषण पर कब्जा नहीं किया जा सकता प्रदान करता है । हालांकि यह विश्लेषण पूर्व vivoहै, यह विशेष कोशिकाओं के एक नंबर से माप के लिए एक साथ काम कर एक ऊतक में एक समारोह और अधिक बारीकी से मॉडल vivo अंग में प्रदर्शन करने के लिए अनुमति देता है. चयापचय reprogramminging कई स्नायविक रोगों में मनाया गया है, neoplasia सहित, और neurodegenerative रोगों । इस प्रोटोकॉल के लिए एक व्यावसायिक रूप से उपलब्ध चयापचय विश्लेषक का उपयोग स्नायविक रोग मॉडल में चयापचय के melanogaster समुदाय की जांच की सहायता के लिए विकसित किया गया था । चयापचय विश्लेषक में पूरे दिमाग के चयापचय को मापने मस्तिष्क की ज्यामिति के कारण चुनौतीपूर्ण है । यह विश्लेषक एक ९६-well प्लेट के तल पर रहने के लिए नमूनों की आवश्यकता है । सेल नमूने और ऊतक घूंसे सेल प्लेट की सतह का पालन करें या अंडाकार आकृति प्लेटों का उपयोग कर सकते हैं, क्रमशः । हालांकि, melanogaster दिमाग की गोलाकार, तीन आयामी आकृति ऊतक को प्लेट में पालन करने से रोकती है । इस प्रोटोकॉल एक विशेष रूप से डिजाइन और निर्मित सूक्ष्म ऊतक संयम है कि मस्तिष्क के किसी भी आंदोलन को रोकने जबकि अभी भी विश्लेषक के दो ठोस राज्य संवेदक जांच से चयापचय माप की अनुमति से इस समस्या को दरकिनार की आवश्यकता है । ऑक्सीजन की खपत और extracellular अंलीकरण दर reproducible और चयापचय अवरोधकों के साथ एक इलाज के प्रति संवेदनशील हैं । एक छोटे से अनुकूलन के साथ, इस प्रोटोकॉल किसी भी पूरे ऊतक और/या मॉडल प्रणाली के साथ प्रयोग के लिए अनुकूलित किया जा सकता है, बशर्ते कि नमूना आकार संयम द्वारा उत्पंन चैंबर से अधिक नहीं है । जबकि बेसल चयापचय माप और mitochondrial अवरोधकों के साथ एक इलाज के बाद एक विश्लेषण इस प्रोटोकॉल के भीतर वर्णित हैं, ऐसे ऊर्जा स्रोत वरीयता और पालन वातावरण के रूप में अनगिनत प्रयोगात्मक शर्तों, पूछताछ की जा सकती है ।

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Metabolic Analysis of Drosophila melanogaster Larval and Adult Brains

हम Drosophila melanogaster लार्वा और वयस्क दिमाग में ऑक्सीजन की खपत और extracellular अंलीकरण को मापने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं । एक चयापचय विश्लेषक एक अनुकूलित और अनुकूलित प्रोटोकॉल के साथ उपयोग किया जाता है । सूक्ष्म ऊतक संयम इस प्रोटोकॉल का एक महत्वपूर्ण घटक है और डिजाइन किए गए थे और इस विश्लेषण में उनके उपयोग के लिए विशेष रूप से बनाया ।

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