Name: evaluating virulence and pathogenesis of aeromonas infection in a caenorhabditis elegans model
Uploaded: 2018-12-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model at JoVE.com

Wir sind dankbar für die Unterstützung von C. Elegans zentrale Einrichtung in Taiwan und der diagnostischen Mikrobiologie und antimikrobielle Resistenz Labor der National Cheng Kung University Hospital für die Bereitstellung der Aeromonas isoliert. Wir anerkennen auch die Caenorhabditis Genetik Center (CGC) und die WormBase. Wir danken auch Savana Moore für das Manuskript zu bearbeiten.
Diese Studie wurde teilweise unterstützt durch Zuschüsse aus dem Ministerium für Wissenschaft und Technologie von Taiwan (meist 105-2628-B-006-017-MY3) und der National Cheng Kung University Hospital (NCKUH-10705001), p.l. Chen.

1. Vorbereitung des Kulturmediums
Hinweis: Siehe Tabelle 1 für die Vorbereitung der Lösung.
<ol><li>Um M9 Medium12vorzubereiten, lösen Sie 1,5 g KH2PO4, 5,66 g Na2HPO4und 2,5 g NaCl in 500 mL entionisiertem Wasser auf. Autoklaven bei 121 ° C für 20 min. warten, bis auf Raumtemperatur abgekühlt und dann hinzufügen 0,5 mL 1 M MgSO4 vor dem ersten Gebrauch.</li>
	<li>Lösen sich um Nematoden Wachstum Medium (N...

<ol>
	<li>Parker, J. L., Shaw, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aeromonas+spp.+clinical+microbiology+and+disease.">Aeromonas spp. clinical microbiology and disease.</a> Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+and+soft-tissue+infections+caused+by+Aeromonas+species.">Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 32 (4), 543-547 (2013).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+tract+infections+caused+by+Aeromonas+species.">Biliary tract infections caused by Aeromonas species.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 32 (2), 245-251 (2013).</li><li>Chuang, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+clinical+characteristics+among+Aeromonas+hydrophila,+Aeromonas+veronii+biovar+sobria+and+Aeromonas+caviae+monomicrobial+bacteremia.">Different clinical characteristics among Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria and Aeromonas caviae monomicrobial bacteremia.</a> Journal of Korean Medical Science. 26 (11), 1415-1420 (2011).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Gau, S. J., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+and+soft+tissue+infection+caused+by+Aeromonas+species+in+cancer+patients.">Skin and soft tissue infection caused by Aeromonas species in cancer patients.</a> Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 46 (2), 144-146 (2013).</li><li>Chen, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Disease+Model+of+Muscle+necrosis+caused+by+Aeromonas+dhakensis+infection+in+Caenorhabditis+elegans.">A Disease Model of Muscle necrosis caused by Aeromonas dhakensis infection in Caenorhabditis elegans.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 2058 (2016).</li><li>Chen, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+diversity+among+bacteremic+Aeromonas+isolates:+ex+vivo,+animal,+and+clinical+evidences.">Virulence diversity among bacteremic Aeromonas isolates: ex vivo, animal, and clinical evidences.</a> PLoS One. 9 (11), 111213 (2014).</li><li>Saraceni, P. R., Romero, A., Figueras, A., Novoa, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+infection+models+in+zebrafish+larvae+(Danio+rerio)+to+study+the+pathogenesis+of+Aeromonas+hydrophila.">Establishment of infection models in zebrafish larvae (Danio rerio) to study the pathogenesis of Aeromonas hydrophila.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1219 (2016).</li><li>Chen, Y. W., Ko, W. C., Chen, C. S., Chen, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RIOK-1+Is+a+Suppressor+of+the+p38+MAPK+Innate+Immune+Pathway+in+Caenorhabditis+elegans.">RIOK-1 Is a Suppressor of the p38 MAPK Innate Immune Pathway in Caenorhabditis elegans.</a> Frontiers in Immunology. 9, 774 (2018).</li><li>Powell, J. R., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+Caenorhabditis+elegans+infection+by+bacterial+and+fungal+pathogens.">Models of Caenorhabditis elegans infection by bacterial and fungal pathogens.</a> Methods in Molecular Biology. 415, 403-427 (2008).</li><li>Chou, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enterohaemorrhagic+Escherichia+coli+O157:H7+Shiga-like+toxin+1+is+required+for+full+pathogenicity+and+activation+of+the+p38+mitogen-activated+protein+kinase+pathway+in+Caenorhabditis+elegans.">Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans.</a> Cellular Microbiology. 15 (1), 82-97 (2013).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Engelmann, I., Pujol, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+in+C.+elegans.">Innate immunity in C. elegans.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 708, 105-121 (2010).</li><li>Feinbaum, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+identification+of+Pseudomonas+aeruginosa+virulence-related+genes+using+a+Caenorhabditis+elegans+infection+model.">Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model.</a> PLoS Pathogens. 8 (7), 1002813 (2012).</li></ol>

C. Elegans ist das natürlich eine Bacterivorous Nematode Zufuhr Bakterien als Nahrung und hat eine komplizierte angeborene Immunität gegen Bakterien während seiner evolutionären Prozess entwickelt. Zwei der wichtigsten Organe Erhaltung und Unterstützung der Immunität sind die Epidermis und Darm9,13. Die Epidermis und Bands des Muskels von C. Elegans ähneln die Weichgewebe Strukturen in Säugetieren und beim Menschen6</su...

Der menschliche Krankheitserreger Aeromonas, nachweislich klinisch Gastroenteritis, Wundinfektionen, Sepsis und Harnwege Infektionen1,2verursachen. Die meisten menschlichen Erkrankungen gemeldet wurden, vier bakteriellen Spezies zugeordnet werden: Aeromonas Dhakensis, Aeromonas Hydrophila, Aeromonas Veroniiund Aeromonas Caviae 2,3 , 4 , 5. unter den Infektionskrankheiten Aeromonas , Weichgewebe Infektionen können schwerer Morbidität und Mortalität beim Menschen auslösen. Muskel Nekrose ist hervorzuheben die schwerste Form von Weichgewebe-Infektion-6. Beobachtung des Überlebens und Muskel Nekrose von Caenorhabditis Elegans nach der Infektion ist eine bequeme Methode, um die Toxizität von Aeromonasspekulieren.
Wissenschaftler haben bereits zahlreiche Modellorganismen um bakterielle Infektionen zu studieren entwickelt. In früheren Studien wurden Mäuse, Zebrafishes und Nematoden Tiermodelle zur Untersuchung der Pathogenese und Virulenz von Aeromonas6,7,8. Jedes Tier-Modell hat seine "Vorteile und Anwendungsmöglichkeiten. Der Modellorganismus Caenorhabditis Elegansist eine Bacterivorous-Nematode welche Aufnahme-Bakterien als Foodnaturally. C. Eleganshat eine komplizierte angeborene Immunsystem gegen bakterielle Infektion im Laufe seiner Evolution entwickelt. Unter dem Druck der bakteriellen Infektion hat C. Elegans erwiesen eine ausgezeichnete Infektionsmodell, die bakterielle Pathogenese von Aeromonas6,7,9 und anderen Krankheitserregern zu studieren wie Pilz10 und enterohämorrhagische Escherichia coli O157: H711. Allerdings gibt es noch keine Publikation, die auf die Methodik im Umgang mit C. Elegans als Modell für das Studium der Virulenz der Aeromonaskonzentriert.
Hier stellen wir drei verschiedene Experimente zur Untersuchung der Aeromonas Infektion mit C. Elegans als Tiermodell: Assays für überleben, flüssige Toxizität und Muskel Nekrose. Diese Methoden sind eine bequeme Möglichkeit, die Toxizität unter und innerhalb der Arten Aeromonas bewerten und verbessern das Verständnis der Pathogenese der Aeromonas.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:660px;" width="661">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaker incubator</td>
			<td style="width:119px;">YIH DER</td>
			<td style="width:119px;">LM-570R</td>
			<td style="width:207px;">Bacteria incubation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">K2HPO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td>MP021519455</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td style="width:119px;">3246-05</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td style="width:119px;">MP021914405</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">31434</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MgSO4</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">M7506</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">agar</td>
			<td style="width:119px;">Difco</td>
			<td style="width:119px;">214530</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CaCl2</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C1016</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">cholesterol</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C8503</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ethanol</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">32205</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KOH</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">P5958</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">6 cm petri plate</td>
			<td style="width:119px;">ALPHA PLUS</td>
			<td style="width:119px;">46</td>
			<td>agar plate preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">96-well plate</td>
			<td style="width:119px;">FALCON</td>
			<td style="width:119px;">353072</td>
			<td>liquid assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bacterial peptone</td>
			<td style="width:119px;">Affymetrix/USB</td>
			<td style="width:119px;">AAJ20048P2</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">yeast extract</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">92144</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">citric acid&#8226;H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C1909</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tri-potassium citrate&#8226;H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">104956</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FudR&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">1271008</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">disodium EDTA</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">E1644</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FeSO4&#8226;7 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">215422</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MnCl2&#8226;4 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">221279</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ZnSO4&#8226;7 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">204986</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CuSO4&#8226;5 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C8027</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tryptone</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">16922</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microscope system</td>
			<td style="width:119px;">Nikon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Eclipase Ti inverted&#160;</td>
			<td>microscope imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scientific CCD Camera</td>
			<td style="width:119px;">QImaging&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Retiga-2000R Fast 1394&#160;</td>
			<td>microscope imaging</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluating virulence and pathogenesis of aeromonas infection in a caenorhabditis elegans model

Der menschliche Krankheitserreger Aeromonas nachweislich klinisch Gastroenteritis, Wundinfektionen, Sepsis und Infektionen der Harnwege verursachen. Die meisten menschliche Krankheiten gemeldet wurden, vier Arten von Bakterien zugeordnet werden: Aeromonas Dhakensis, Aeromonas Hydrophila, Aeromonas Veroniiund Aeromonas Caviae. Der Modellorganismus Caenorhabditis Elegans ist eine Bacterivore, die eine ausgezeichnete Infektionsmodell durch, um die bakterielle Pathogenese der Aeromonaslernen bietet. Hier stellen wir drei verschiedene Experimente zur Aeromonas Infektion mit C. Elegans -Modell, einschließlich überleben, flüssige Toxizität und Muskel Nekrose Assays zu studieren. Die Ergebnisse der drei Methoden, die Bestimmung der Virulenz der Aeromonas entsprachen. A. Dhakensis zeigte sich der giftigsten unter den 4 wichtigsten Aeromonas Arten klinische Infektionen verursachen werden. Diese Methoden erweisen sich als eine bequeme Möglichkeit zum Bewerten der Toxizität unter und innerhalb der Arten Aeromonas und dazu beitragen, unser Verständnis der Pathogenese der Aeromonas Infektion.

Folgen Sie den oben beschriebenen Protokolle, ist es leicht zu unterscheiden, die Toxizitäten von den vier Aeromonas Strapazen. Die überleben-Assay von C. Elegans ist in Abbildung 1dargestellt. Die Überlebensraten von C. Elegans mit Aeromonas Arten, im Auftrag von hoch zu niedrig angezeigt infiziert waren: A. Caviae, A. Veronii, A. Hydrophila und A. Dhakensis. Zwar gibt es Vielfalt in Bezug auf Toxizit?...

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Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

Hier stellen wir drei verschiedene Experimente zur Aeromonas Infektion in C. Eleganszu studieren. Mit diesen praktischen Methoden, ist es leicht, die Toxizität unter und innerhalb der Aeromonas Arten zu bewerten.

Bewertung von Virulenz und Pathogenese der Aeromonas Infektion in einem Caenorhabditis Elegans -Modell

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...

Diese Methode kann helfen, wichtige Fragen im Wirts-Pathogen-Interaktionsfeld wie die Pathogenität und Virulenz einer bakteriellen Infektion zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass wir die Toxizität zwischen und innerhalb von Aeromonas Arten bewerten und zu unserem Verständnis der Pathogenese der Aeromonas-Infektion beitragen können. Um zu beginnen, etwa 2.000 gravid erwachsene Würmer mit sterilem entionisiertem Wasser zu waschen.Wiederholen Sie die Wäsche dreimal, um die Würmer an der Unterseite des Rohres zu halten. Nach dem Zentrieren entfernen die Würmer den Überstand und halten die Würmer in 3,5 Milliliter entionisiertem Wasser. Fügen Sie einen Milliliter Natriumhypochlorit und 0,5 Milliliter Kaliumhydroxid in die Röhre.Dann schütteln Sie das Rohr für sechs Minuten, um die Wurmkörper zu lysieren. Nachdem die Eier freigegeben wurden, fügen Sie 10 Milliliter entionisiertes Wasser hinzu, um die Lyse zu stoppen. Dann zentrifugieren Sie das Rohr, um die Eier nach unten zu ziehen und so viel vom Überstand wie möglich zu entfernen.Waschen Sie die Eier mit 15 Milliliter M9 Medium mindestens dreimal. Die Eier auf ein 3,5-Zentimeter-Gericht übertragen und bei 20 Grad Celsius für eine Nacht bebrüten. Danach entfernen Sie 10 Mikroliter L1-Würmer und M9-Medium von der Platte.Zählen Sie die Würmer und erhalten Sie die Konzentration von L1-Würmern im M9-Medium. Mit einer Pipette nehmen Sie 0,5 Milliliter E.coli OP50 LB Brühe und verteilen Sie sie auf einer ENGM-Platte. Dann inkubieren Sie die Platte bei 37 Grad Celsius für 16 bis 18 Stunden.Kühlen Sie die ENGM auf Raumtemperatur. Dann Samen inkubierte L1-Würmer auf einer ENGM-Platte mit E.coli OP50. Die Würmer bei 20 Grad Celsius bebrüten, bis sie die L4-Stufe erreichen.Wählen Sie zunächst eine einzelne Kolonie jeder der vier Aeromonas-Stämme aus und bemalen sie entsprechend dem Textprotokoll. Messen Sie dann die OD 600 Absorption der bakteriellen Brühe und passen Sie sie an, bis die Absorption gleich 2,0 ist. Nächster Punkt und 30 Mikroliter bakterielle Brühe von jedem Stamm in NGM-Platten verteilen.Wählen Sie zufällig die zuvor vorbereiteten L4-Würmer aus und übertragen Sie sie mit den Aeromonas-Stämmen auf die NGM-Platten. Dann inkubieren Sie die Platten bei 20 Grad Celsius, bis der Test abgeschlossen ist. Übertragen Sie jeden Tag alle lebenden Würmer auf eine neue NGM-Platte mit Bakterien.Zähle die Anzahl der lebenden, toten und Sensorwürmer jeden Tag, bis der letzte Wurm tot ist. Nach der Kultivierung der Aeromonas-Stämme und der Messung ihrer Absorptionsfähigkeit, wie zuvor beschrieben, zentrieren Sie die bakterielle Brühe bei 3, 500 g für 15 Minuten. Stellen Sie die bakterielle Brühe mit S Medium ein.Und fügen Sie 195 Mikroliter bakterielle Brühe in die S-Mittel bis acht Brunnen einer 96-Well-Platte. Die Würmer von der ENGM-Platte mit m9 medium abwaschen. Passen Sie dann die Konzentration der Wurmlösung auf fünf Würmer pro Mikroliter an.Fügen Sie fünf Mikroliter der Wurmlösung zu jedem der Brunnen der 96-Well-Platte hinzu. Inkubieren Sie die Platte auf einem Shaker, und zählen Sie die Anzahl der lebenden Würmer bei 24, 48 und 72 Stunden. Nach der Kultivierung von Aeromonas-Stämmen und der Anpassung der Absorption gemäß dem Textprotokollspot und der Ausbreitung der Bakterienbrühe auf NGM-Platten.Danach 50 L4-Würmer auf jede NGM-Platte übertragen. Alle 24 Stunden die Würmer auf frische NGM-Platten übertragen. Wählen Sie zufällig 10 Würmer aus und übertragen Sie sie auf ein 2%Agarose-Gel in M9-Medium auf einer Folie.Positionieren Sie schließlich einen Coverslip auf dem Gel und erfassen Sie Muskelbilder mit einem grünen fluoreszierenden Proteinfilter auf einem fluoreszierenden Mikroskop, das mit einer Kamera ausgestattet ist. In diesem Protokoll wurden die Toxizitäten von vier Aeromonas-Stämmen bewertet. Die Überlebensrate von C.elegans, die mit Aeromonas-Arten infiziert waren, war am höchsten in Assays mit A.caviae und am niedrigsten bei Assays mit A.dhakensis.In einem flüssigen Toxizitätstest verringerte sich das Überleben von C.elegans signifikant, wenn es mit A.dhakensis oder A.hydrophilia infiziert wurde. In der Muskelnekrose Assay Grade der Muskelschäden variierten zwischen den Aeromonas Arten. A.caviae verursachte die wenigsten Muskelschäden, während A.dhakensis die meisten Muskelschäden produzierte.Die in diesem Video beschriebenen Methoden bieten eine bequeme Möglichkeit, die Virulenzvielfalt zwischen und innerhalb der Aeromonas-Arten zu unterscheiden. Darüber hinaus ist es auch ein zuverlässiges Modell, um die Wechselwirkung zwischen einem Erreger und wirt zu studieren.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

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In-vitro-Bildung von Biofilmen in einem 8-well Chamber Slide

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Forschung

Immunologie und Infektion

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Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Generierung von In-Frame-Gen-Deletion Mutanten in Pseudomonas aeruginosa und Tests auf VirulenzDämpfung in einem einfachen Mausmodell der Infektion

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...