Name: evaluating virulence and pathogenesis of aeromonas infection in a caenorhabditis elegans model
Uploaded: 2018-12-20T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model at JoVE.com

אנחנו אסירי תודה על הסיוע המתקן הליבה C. elegans בטייוואן, מיקרוביולוגיה אבחון ומבודד Antimicrobial ההתנגדות מעבדה של הלאומית צ'נג קונג החולים האוניברסיטאי למתן את Aeromonas . אנו להכיר גם מרכז הגנטיקה Caenorhabditis (CGC), את WormBase. אנו מודים גם Savana מור לעריכת כתב היד.
מחקר זה מומן בחלקו על ידי מענקים של משרד המדע, הטכנולוגיה של טייוואן (105-2628-B-006-017-MY3 ביותר) ומבית החולים האוניברסיטאי קונג צ'אנג (NCKUH-10705001) הלאומי חן פ. ל.

1. הכנת המדיום תרבות
הערה: ראה טבלה 1 להכנה פתרון.
<ol><li>כדי להכין M9 בינוני12, להמיס 1.5 גר'2פו ח'4, g 5.66 של Na-2-HPO-4ו- 2.5 גר' NaCl ב 500 מ"ל מים יונים. אוטוקלב ב 121 מעלות צלזיוס במשך 20 דק עד מקורר לטמפרטורת החדר ולאחר מכן להוסיף 0.5 מ של 1 מ' MgSO4 לפני השימ?...

<ol>
	<li>Parker, J. L., Shaw, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Aeromonas+spp.+clinical+microbiology+and+disease.">Aeromonas spp. clinical microbiology and disease.</a> Journal of Infection. 62 (2), 109-118 (2011).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+and+soft-tissue+infections+caused+by+Aeromonas+species.">Skin and soft-tissue infections caused by Aeromonas species.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 32 (4), 543-547 (2013).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Tang, H. J., Ko, W. C., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biliary+tract+infections+caused+by+Aeromonas+species.">Biliary tract infections caused by Aeromonas species.</a> European Journal of Clinical Microbiology &amp; Infectious Diseases. 32 (2), 245-251 (2013).</li><li>Chuang, H. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+clinical+characteristics+among+Aeromonas+hydrophila,+Aeromonas+veronii+biovar+sobria+and+Aeromonas+caviae+monomicrobial+bacteremia.">Different clinical characteristics among Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii biovar sobria and Aeromonas caviae monomicrobial bacteremia.</a> Journal of Korean Medical Science. 26 (11), 1415-1420 (2011).</li><li>Chao, C. M., Lai, C. C., Gau, S. J., Hsueh, P. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Skin+and+soft+tissue+infection+caused+by+Aeromonas+species+in+cancer+patients.">Skin and soft tissue infection caused by Aeromonas species in cancer patients.</a> Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 46 (2), 144-146 (2013).</li><li>Chen, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Disease+Model+of+Muscle+necrosis+caused+by+Aeromonas+dhakensis+infection+in+Caenorhabditis+elegans.">A Disease Model of Muscle necrosis caused by Aeromonas dhakensis infection in Caenorhabditis elegans.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 2058 (2016).</li><li>Chen, P. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Virulence+diversity+among+bacteremic+Aeromonas+isolates:+ex+vivo,+animal,+and+clinical+evidences.">Virulence diversity among bacteremic Aeromonas isolates: ex vivo, animal, and clinical evidences.</a> PLoS One. 9 (11), 111213 (2014).</li><li>Saraceni, P. R., Romero, A., Figueras, A., Novoa, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Establishment+of+infection+models+in+zebrafish+larvae+(Danio+rerio)+to+study+the+pathogenesis+of+Aeromonas+hydrophila.">Establishment of infection models in zebrafish larvae (Danio rerio) to study the pathogenesis of Aeromonas hydrophila.</a> Frontiers in Microbiology. 7, 1219 (2016).</li><li>Chen, Y. W., Ko, W. C., Chen, C. S., Chen, P. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=RIOK-1+Is+a+Suppressor+of+the+p38+MAPK+Innate+Immune+Pathway+in+Caenorhabditis+elegans.">RIOK-1 Is a Suppressor of the p38 MAPK Innate Immune Pathway in Caenorhabditis elegans.</a> Frontiers in Immunology. 9, 774 (2018).</li><li>Powell, J. R., Ausubel, F. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Models+of+Caenorhabditis+elegans+infection+by+bacterial+and+fungal+pathogens.">Models of Caenorhabditis elegans infection by bacterial and fungal pathogens.</a> Methods in Molecular Biology. 415, 403-427 (2008).</li><li>Chou, T. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Enterohaemorrhagic+Escherichia+coli+O157:H7+Shiga-like+toxin+1+is+required+for+full+pathogenicity+and+activation+of+the+p38+mitogen-activated+protein+kinase+pathway+in+Caenorhabditis+elegans.">Enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H7 Shiga-like toxin 1 is required for full pathogenicity and activation of the p38 mitogen-activated protein kinase pathway in Caenorhabditis elegans.</a> Cellular Microbiology. 15 (1), 82-97 (2013).</li><li>Stiernagle, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Maintenance+of+C.+elegans.">Maintenance of C. elegans.</a> WormBook. , 1-11 (2006).</li><li>Engelmann, I., Pujol, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Innate+immunity+in+C.+elegans.">Innate immunity in C. elegans.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 708, 105-121 (2010).</li><li>Feinbaum, R. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Genome-wide+identification+of+Pseudomonas+aeruginosa+virulence-related+genes+using+a+Caenorhabditis+elegans+infection+model.">Genome-wide identification of Pseudomonas aeruginosa virulence-related genes using a Caenorhabditis elegans infection model.</a> PLoS Pathogens. 8 (7), 1002813 (2012).</li></ol>

C. elegans הוא תולעים נימיות bacterivorous זה טבעי intakes חיידקים כמזון, פיתחה חיסון מולדת מסובך חיידקים במהלך התהליך האבולוציוני שלו. שני האיברים החיוניים לתחזוקה ותמיכה החסינות הן האפידרמיס והמעי9,13. האפידרמיס ואת להקות של שריר של C. elegans דומים המבנים ברקמות ה...

פתוגניות, Aeromonas, הוכח קלינית לגרום דלקת הקבה והמעים, הפצע, ספטיסמיה דלקות בדרכי השתן בזיהומים1,2. ביותר הקשורים מחלות האדם דווחו להיות מזוהה עם ארבעת המינים חיידקי: 2, Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii, Aeromonas caviae 3 , 4 , 5. בין מחלות זיהומיות Aeromonas , דלקות ברקמות הרכות עלולה לגרום לזיהום חמור בבני אדם. ראוי לציין, נמק שריר היא הצורה החמורה ביותר של זיהום רקמות רכות6. תצפית של הישרדות, נמק שריר של Caenorhabditis elegans לאחר ההדבקה היא שיטה נוחה שלפיו לשער הרעילות של Aeromonas.
מדענים פיתחו כבר אורגניזמים רבים דגם ללמוד זיהומים חיידקיים. במחקרים קודמים, עכברים zebrafishes, נמטודות שימשו כמודלים חיים ללמוד הפתוגנזה של התקפה אלימה של7,6, Aeromonas8. כל המודל החייתי יש שלה "יתרונות ויישומים. האורגניזם מודל, Caenorhabditis elegans, היא תולעים נימיות bacterivorous אילו חיידקים intakes כמו foodnaturally. C. elegansפיתחה מערכת חיסונית מולדת מסובך נגד זיהום חיידקי במהלך האבולוציה שלה. תחת הלחץ של זיהום חיידקי, C. elegans הוכח להיות מודל זיהום מצוינת ללמוד חיידקי בפתוגנזה של Aeromonas6,7,9 , פתוגנים אחרים כמו פטריה10 ו- enterohaemorrhagic Escherichia coli O157:H711. עם זאת, יש עדיין אין פרסום המתמקד המתודולוגיה בשימוש C. elegans כמודל ללימוד של התקפה אלימה של Aeromonas.
. כאן, אנחנו מציגים 3 ניסויים שונים כדי ללמוד Aeromonas זיהום באמצעות C. elegans כמו במודל חיה: מבחני הישרדות, רעילות נוזלי של נמק שריר. שיטות אלה הן דרך נוחה להעריך הרעילות בין מיני ותוך מיני Aeromonas , לשפר את ההבנה של הפתוגנזה של Aeromonas.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:660px;" width="661">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Shaker incubator</td>
			<td style="width:119px;">YIH DER</td>
			<td style="width:119px;">LM-570R</td>
			<td style="width:207px;">Bacteria incubation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">K2HPO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td>MP021519455</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KH2PO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td style="width:119px;">3246-05</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">Na2HPO4</td>
			<td style="width:119px;">J.T.Baker</td>
			<td style="width:119px;">MP021914405</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">NaCl</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">31434</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MgSO4</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">M7506</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">agar</td>
			<td style="width:119px;">Difco</td>
			<td style="width:119px;">214530</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CaCl2</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C1016</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">cholesterol</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C8503</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ethanol</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">32205</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">KOH</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">P5958</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">6 cm petri plate</td>
			<td style="width:119px;">ALPHA PLUS</td>
			<td style="width:119px;">46</td>
			<td>agar plate preparation</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">96-well plate</td>
			<td style="width:119px;">FALCON</td>
			<td style="width:119px;">353072</td>
			<td>liquid assay</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">bacterial peptone</td>
			<td style="width:119px;">Affymetrix/USB</td>
			<td style="width:119px;">AAJ20048P2</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">yeast extract</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">92144</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">citric acid&#8226;H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C1909</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tri-potassium citrate&#8226;H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">104956</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FudR&#160;</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">1271008</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">disodium EDTA</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">E1644</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">FeSO4&#8226;7 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">215422</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">MnCl2&#8226;4 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">221279</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">ZnSO4&#8226;7 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">204986</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">CuSO4&#8226;5 H2O</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">C8027</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:216px;">tryptone</td>
			<td style="width:119px;">SIGMA</td>
			<td style="width:119px;">16922</td>
			<td>Culture medium preparation&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Microscope system</td>
			<td style="width:119px;">Nikon&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Eclipase Ti inverted&#160;</td>
			<td>microscope imaging</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:216px;">Scientific CCD Camera</td>
			<td style="width:119px;">QImaging&#160;</td>
			<td style="width:119px;">Retiga-2000R Fast 1394&#160;</td>
			<td>microscope imaging</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

evaluating virulence and pathogenesis of aeromonas infection in a caenorhabditis elegans model

פתוגניות Aeromonas הוכח קלינית לגרום דלקת הקבה והמעים, הפצע, ספטיסמיה דלקות בדרכי השתן. רוב המחלות האנושיות דווחו להיות מזוהה עם ארבעה מינים של חיידקים: Aeromonas dhakensis, Aeromonas hydrophila, Aeromonas veronii, Aeromonas caviae. האורגניזם דגם Caenorhabditis elegans הוא bacterivore זה מספק מודל הידבקות מעולה שבו ללמוד חיידקי בפתוגנזה של Aeromonas. כאן, אנחנו מציגים 3 ניסויים שונים כדי ללמוד זיהום Aeromonas באמצעות מודל של C. elegans , כולל הישרדות, רעילות נוזלי של מבחני נמק שריר. התוצאות של שלוש שיטות לקביעת של התקפה אלימה של Aeromonas היו עקביים. Dhakensis א הוצגה רעיל ביותר בין הגדולות Aeromonas מינים גרימת זיהומים קליניים. שיטות אלה מוצגים להיות דרך נוחה כדי להעריך את הרעילות בין מיני ותוך מיני Aeromonas ולתרום להבנת בפתוגנזה של זיהום Aeromonas .

לפי הפרוטוקולים שתוארו לעיל, קל להבחין בין רעילות של זנים Aeromonas 4. וזמינותו להישרדות של C. elegans מוצג באיור1. שיעורי ההישרדות של C. elegans נגוע Aeromonas מינים, שמוצג צו מגבוה לנמוך היו: א caviae, veronii א, א hydrophila, ו dhakensis א. למרות שיש גיוון מבחינת...

Watch this Scientific Journal Video about Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model at JoVE.com

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

כאן, אנחנו מציגים 3 ניסויים שונים כדי ללמוד זיהום Aeromonas C. elegans. באמצעות שיטות אלה נוח, קל להעריך את הרעילות בין מיני ותוך מיני Aeromonas .

הערכת התקפה אלימה ו פתוגנזה של זיהום Aeromonas במודל Caenorhabditis elegans

The human pathogen Aeromonas has been clinically shown to cause gastroenteritis, wound infections, septicemia, and urinary tract infections. Most human ...

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח בתחום האינטראקציה המארח-פתוגן כגון פתוגניות וארסיות של זיהום חיידקי. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שאנחנו יכולים להעריך את הרעילות בין ובתוך מינים אירומונים ולתרום להבנתנו את הפתוגנזה של זיהום אירומונים. כדי להתחיל לשטוף כ 2,000 תולעים בוגרות gravid עם מים סטריליים deionized.חזור על לשטוף שלוש פעמים שמירה על התולעים בתחתית הצינור. לאחר צנטריפוגה התולעים להסיר את supernatant ולשמור את התולעים 3.5 מיליליטר של מים deionized. הוסף מיליליטר אחד של hypochlorite נתרן ו 0.5 מיליליטר של אשלגן הידרוקסידי לצינור.ואז לנער את הצינור במשך שש דקות כדי lyse גופות התולעת. לאחר הביצים משתחררות, מוסיפים 10 מיליליטר של מים deionized כדי לעצור את התסיסה. ואז צנטריפוגה הצינור כדי למשוך את הביצים ולהסיר כמה שיותר של supernatant ככל האפשר.לשטוף את הביצים עם 15 מיליליטר של M9 בינוני לפחות שלוש פעמים. מעבירים את הביצים לתבשיל באורך 3.5 ס"מ, ומטגנים אותן ב-20 מעלות צלזיוס ללילה אחד. לאחר מכן להסיר 10 microliters של תולעים L1 ו M9 בינוני מהצלחת.לספור את התולעים ולקבל את הריכוז של תולעי L1 במדיום M9. באמצעות פיפטה לקחת 0.5 מיליליטר של מרק E.coli OP50 LB ולהפיץ אותו על צלחת ENGM. ואז לה הדגירה את הצלחת ב 37 מעלות צלזיוס במשך 16 עד 18 שעות.מצננים את ה-ENGM לטמפרטורת החדר. ואז זרעים דגירה תולעי L1 על צלחת ENGM עם E.coli OP50. דגירה התולעים ב 20 מעלות צלזיוס עד שהם מגיעים לשלב L4.ראשית, בחר מושבה אחת של כל אחד מארבעת הזנים אירומונס ותרבות אותם על פי פרוטוקול הטקסט. לאחר מכן למדוד את ספיגת OD 600 של מרק חיידקי ולהתאים אותו עד הספיגה שווה 2.0. הנקודה הבאה ולהפיץ 30 microliters של מרק חיידקים מכל זן לתוך צלחות NGM.בחר והעבר באופן אקראי את תולעי L4 שהוכנו בעבר לצלחות NGM עם זני אירומונים. ואז לה הדגירה את הצלחות ב 20 מעלות צלזיוס עד ההתזה הושלמה. כל יום להעביר את כל התולעים החיים לצלחת NGM חדשה עם חיידקים.לספור את המספרים של תולעים חיות, מתות וחיישנים בכל יום עד שהתולעת האחרונה מתה. לאחר culturing זני אירומונים ומדידת ספיגתם כפי שתואר קודם לכן, צנטריפוגה מרק חיידקי ב 3, 500 גרם של במשך 15 דקות. התאימו את מרק החיידקים עם S Medium.ומוסיפים 195 מיקרוליטרים של מרק חיידקים במדיום S לשמונה בארות של צלחת 96 בארות. לשטוף את התולעים את צלחת ENGM איתם M9 בינוני. ואז להתאים את הריכוז של פתרון התולעת לחמש תולעים לכל microliter.הוסף חמישה מיקרוליטרים של פתרון התולעת לכל אחת מה בארות של צלחת 96 בארות. דגירה הצלחת על שייקר, ולספר את מספר התולעים חיות ב 24, 48 ו 72 שעות. לאחר culturing זני Aeromonas והתאמת הספיגה על פי נקודת פרוטוקול הטקסט ולהפיץ את המרק החיידקי על צלחות NGM.לאחר מכן, להעביר 50 תולעים L4 לכל צלחת NGM. כל 24 שעות מעבירים את התולעים לצלחות NGM טריות. בחר באופן אקראי 10 תולעים והעבר אותן לג'ל 2%agarose במדיום M9 בשקופית.לבסוף למקם כיסוי על הג'ל וללכוד תמונות שרירים עם מסנן חלבון פלואורסצנטי ירוק על מיקרוסקופ פלואורסצנטי מצויד במצלמה. בפרוטוקול זה הוערכו הרעילות של ארבעה זני אירומונים. שיעור ההישרדות של C.elegans נגועים במין אירומונים היה הגבוה ביותר ב- assays באמצעות A.caviae, והנמוך ביותר ב- assays באמצעות A.dhakensis.בהישרדות רעילות נוזלית של C.elegans ירד באופן משמעותי כאשר נגוע A.dhakensis או A.hydrophilia. בשריר נמק דרגות של נזק לשרירים השתנו בין המינים Aeromonas. A.caviae גרם לנזק השרירי לפחות, בעוד A.dhakensis הפיק את הנזק השרירי ביותר.השיטות המתוארות בסרטון זה מציעות דרך נוחה להבדיל בין מגוון ארסיות בין המינים אירומונים ובתוךם. בנוסף, זהו גם מודל אמין שבו ללמוד את האינטראקציה בין פתוגן ומארח.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Evaluating Virulence and Pathogenesis of Aeromonas Infection in a Caenorhabditis elegans Model

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

In vitro Biofilm Formation in an 8-well Chamber Slide

ב גיבוש biofilm חוץ גופית ב 8-Slide גם לשכת

The chronic nature of many diseases is attributed to the formation of bacterial biofilms which are recalcitrant to traditional antibiotic therapy. ...

Using Luciferase to Image Bacterial Infections in Mice

שימוש בלוציפראז לזיהומים חיידקיים תמונה ב עכברים

Imaging is a valuable technique that can be used to monitor biological processes.  In particular, the presence of cancer cells, stem cells, specific ...

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

The Insect Galleria mellonella as a Powerful Infection Model to Investigate Bacterial Pathogenesis

החרקים<em&gt; גלרית mellonella</em&gt; כדגם זיהום רב עצמה כדי לחקור פתוגנזה קטריאלי

The study of bacterial virulence often requires a suitable animal model. Mammalian models of infection are costly and may raise ethical issues. The use of ...

Following in Real Time the Impact of Pneumococcal Virulence Factors in an Acute Mouse Pneumonia Model Using Bioluminescent Bacteria

בעקבות בזמן אמת השפעת גורמי דלקת ריאות ארסיים בעכבר דלקת ריאות דגם אקוטי באמצעות חיידקי Bioluminescent

Pneumonia is one of the major health care problems in developing and industrialized countries and is associated with considerable morbidity and mortality. ...

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

A Protocol to Infect Caenorhabditis elegans with Salmonella typhimurium

פרוטוקול להדביק<em&gt; Elegans Caenorhabditis</em&gt; עם<em&gt; Typhimurium סלמונלה</em

In the last decade, C. elegans has emerged as an invertebrate organism to study interactions between hosts and pathogens, including the host defense ...

The Madagascar Hissing Cockroach as an Alternative Non-mammalian Animal Model to Investigate Virulence, Pathogenesis, and Drug Efficacy

מדגסקר שריקה מקק בתור מודל אלטרנטיבי של בעלי חיים שאינם מידע יונקים לחקור התקפה אלימה, פתוגנזה ואת יעילות התרופה

Many aspects of innate immunity are conserved between mammals and insects. An insect, the Madagascar hissing cockroach from the genus Gromphadorhina, can ...

Oral Intubation of Adult Zebrafish: A Model for Evaluating Intestinal Uptake of Bioactive Compounds

צנרור שבעל-פה של דג זברה למבוגרים: מודל להערכת ספיגת מעיים של תרכובות ביו

Most pathogens invade organisms through their mucosa. This is particularly true in fish as they are continuously exposed to a microbial-rich water ...

Establishment of the Dual Humanized TK-NOG Mouse Model for HIV-associated Liver Pathogenesis

הקמתה של הומניזציה Dual-TK-חעוגה מודל העכבר עבור הנגיף הקשור HIV פתוגנזה

Despite the increased life expectancy of patients infected with human immunodeficiency virus-1 (HIV-1), liver disease has emerged as a common cause of ...

Stem Cell-Derived Viral Ag-Specific T Lymphocytes Suppress HBV Replication in Mice

גזע תא נגזר ויראלי Ag-לימפוציטים T שכפול HBV לדכא בעכברים

Hepatitis B virus (HBV) infection is a global health issue. With over 350 million people affected worldwide, HBV infection remains the leading cause of ...

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

Generation of In-Frame Gene Deletion Mutants in Pseudomonas aeruginosa and Testing for Virulence Attenuation in a Simple Mouse Model of Infection

הדור של המסגרת של גן In-Frame מוטציות מחיקה ב פסאודומונס aeruginosa ובדיקת התקפה אלימה מודל עכבר פשוט של זיהום

Microorganisms are genetically versatile and diverse and have become a major source of many commercial products and biopharmaceuticals. Though some of ...