Name: production of extracellular matrix fibers via sacrificial hollow fiber membrane cell culture
Uploaded: 2019-02-02T13:00:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Production of Extracellular Matrix Fibers via Sacrificial Hollow Fiber Membrane Cell Culture at JoVE.com

Исследования в этой публикации была поддержана национального института артрита и Musculoskeletal и кожных заболеваний национального института здравоохранения под номером премии R15AR064481, Национальный научный фонд (CMMI-1404716), а также Институт бионауки Арканзас.

1. производство внеклеточного матрикса, используя жертвенных полые волокна мембраны
Предупреждение: N-метил-2-пирролидона является раздражающим растворителя и репродуктивную функцию. Воздействие NMP может вызвать раздражение кожи, глаз, носа и горла. Растворитель устойчив...

<ol>
	<li>Cobb, W. S., Kercher, K. W., Heniford, B. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+argument+for+lightweight+polypropylene+mesh+in+hernia+repair.">The argument for lightweight polypropylene mesh in hernia repair.</a> Surgical Innovation. 12 (1), 63-69 (2005).</li><li>Morais, J. M., Papadimitrakopoulos, F., Burgess, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biomaterials/Tissue+Interactions:+Possible+Solutions+to+Overcome+Foreign+Body+Response.">Biomaterials/Tissue Interactions: Possible Solutions to Overcome Foreign Body Response.</a> The AAPS Journal. 12 (2), 188-196 (2010).</li><li>Simon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+failure+of+the+tissue+engineered+porcine+heart+valve+SYNERGRAFT&#174;+in+pediatric+patients.">Early failure of the tissue engineered porcine heart valve SYNERGRAFT&#174; in pediatric patients.</a> European Journal of Cardio-Thoracic Surgery. 23 (6), 1002-1006 (2003).</li><li>. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> FDA strengthens requirements for surgical mesh for the transvaginal repair of pelvic organ prolapse to address safety risks. , (2016).</li><li>Kartus, J., Movin, T., Karlsson, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Donor-site+morbidity+and+anterior+knee+problems+after+anterior+cruciate+ligament+reconstruction+using+autografts.">Donor-site morbidity and anterior knee problems after anterior cruciate ligament reconstruction using autografts.</a> Arthroscopy: The Journal of Arthroscopic &amp; Related Surgery. 17 (9), 971-980 (2001).</li><li>Lu, H., Hoshiba, T., Kawazoe, N., Chen, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autologous+extracellular+matrix+scaffolds+for+tissue+engineering.">Autologous extracellular matrix scaffolds for tissue engineering.</a> Biomaterials. 32 (10), 2489-2499 (2011).</li><li>Wolchok, J. C., Tresco, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+isolation+of+cell+derived+extracellular+matrix+constructs+using+sacrificial+open-cell+foams.">The isolation of cell derived extracellular matrix constructs using sacrificial open-cell foams.</a> Biomaterials. 31 (36), 9595-9603 (2010).</li><li>Roberts, K., Schluns, J., Walker, A., Jones, J. D., Quinn, K. P., Hestekin, J., Wolchok, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+derived+extracellular+matrix+fibers+synthesized+using+sacrificial+hollow+fiber+membranes.">Cell derived extracellular matrix fibers synthesized using sacrificial hollow fiber membranes.</a> Biomedical Materials. 13 (1), (2017).</li><li>Hurd, S. A., Bhatti, N. M., Walker, A. M., Kasukonis, B. M., Wolchok, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+a+biological+scaffold+engineered+using+the+extracellular+matrix+secreted+by+skeletal+muscle+cells.">Development of a biological scaffold engineered using the extracellular matrix secreted by skeletal muscle cells.</a> Biomaterials. 49, 9-17 (2015).</li><li>Kasukonis, B. M., Kim, J. T., Washington, T. A., Wolchok, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+infusion+bioreactor+for+the+accelerated+preparation+of+decellularized+skeletal+muscle+scaffolds.">Development of an infusion bioreactor for the accelerated preparation of decellularized skeletal muscle scaffolds.</a> Biotechnology Progress. 32 (3), 745-755 (2016).</li><li>Murad, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Regulation+of+collagen+synthesis+by+ascorbic+acid.">Regulation of collagen synthesis by ascorbic acid.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 78 (5), 2879-2882 (1981).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tissue-specific+extracellular+matrix+coatings+for+the+promotion+of+cell+proliferation+and+maintenance+of+cell+phenotype.">Tissue-specific extracellular matrix coatings for the promotion of cell proliferation and maintenance of cell phenotype.</a> Biomaterials. 30 (23-24), 4021-4028 (2009).</li><li>Feng, C. Y., Khulbe, K. C., Matsuura, T., Ismail, A. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+progresses+in+polymeric+hollow+fiber+membrane+preparation,+characterization+and+applications.">Recent progresses in polymeric hollow fiber membrane preparation, characterization and applications.</a> Separation and Purification Technology. 111, 43-71 (2013).</li><li>Domb, A. J., Kost, J., Wiseman, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Handbook of Biodegradable Polymers. , (1998).</li></ol>

Описаны процессы позволяют производства массовых ECM биоматериалов в пробирке с помощью полых волокон оболочек поданных система сухой Джет мокрого прядения позволяет для производства недорогих массовых мембраны, а также стандартная ячейка культуры оборудования. Хотя мембраны из...

Имплантируемые хирургические подмостей являются арматуре ремонта раны, с более чем одного миллиона синтетических полимерных сеток имплантированы во всем мире каждый год для брюшной стенки ремонт только1. Однако после имплантации Полимеры синтетические материалы традиционно используемые в производстве этих лесов стремятся спровоцировать ответ инородного тела, что приводит к воспаление пагубные функции имплантата и рубцов ткани2 . Кроме того, как преобладающим синтетические сетки материалов (то есть, полипропилен) не являются в значительной степени перестроенный органом, они обычно применимы к ткани, где рубцы могут быть терпимы, ограничивая их клинической полезности к лечения ткани с функции высокого порядка, таких как мышцы. Хотя есть много Хирургическая сетка продуктов, которые были применены с клинический успех, последние производитель вспоминает Хирургические синтетические сетки и осложнений в результате межвидовой ткани имплантатов подчеркнуть важность максимального использования имплантата биосовместимость, вызвав FDA ужесточить правила на хирургические сетка производителей3,4. Имплантация подмостей, полученных от пациентов собственных тканей уменьшает этот иммунный ответ, но может привести к значительным доноров сайт заболеваемости5. Внеклеточная матрица (ECM) подмостей производится в vitro . Возможная альтернатива, как decellularized ECM подмостей экспонат отличная биосовместимость, особенно в случае аутологичной ECM имплантатов6
Из-за ограниченной доступности пациента ткани урожай аутологичной имплантации и риск противодействия функция на сайте доноров, способность производить ECM лесов в vitro от культуры линий клеток человека или, если возможно, пациента собственные клетки является привлекательной альтернативой. Основные проблемы в производстве значительное количество ECM в пробирке является поглощение этих трудных для захвата молекул. В предыдущей работе, мы продемонстрировали, что ЕСМ могут быть произведены путем культивирования ECM-секретирующих фибробластов в жертвенных полимерные пены, которые растворяются после периода культуры ECM доходность, которая может быть decellularized для имплантации7, 8,9,10. ECM производится в пены склонны принять внутреннюю архитектуру пены, полые волокна мембраны (HFMs) были изучены как жертвенное леска для изготовления нитей ECM. Описанные здесь методы задают для лаборатории масштабирования, изготовление полых волокон мембран клеток культуры качества и извлечения сыпучих внеклеточная матрица волокон из того же после периода культуры фибробластов. Этот статический культуры подход легко Даримые лабораториями, содержащий стандартные mammalian клетки культуры оборудования. ECM, производимые этот подход может быть применен к различных клинических приложений.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>1/32 inch thick silicone rubber</td>
			<td>Grainger</td>
			<td>B01LXJULOM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 mL Scintillation Vials, Borosilicate glass, Disposable - VWR</td>
			<td>VWR</td>
			<td>66022-004</td>
			<td>With attached white urea cap and cork foil liner</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>3 inch by 1 inch microscopy slides</td>
			<td>VWR</td>
			<td>75799-268</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4C refrigerator</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>FRGG2304D</td>
			<td>Any commercial 4C refrigerator will suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50 mL tubes</td>
			<td>VWR</td>
			<td>21008-178</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>6-well cell culture plates</td>
			<td>VWR</td>
			<td>10062-892</td>
			<td>Alternative brands may be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Acetone</td>
			<td>VWR</td>
			<td>E646</td>
			<td>Alternative brands may be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bore vessel</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>89785K867</td>
			<td>6 ft 316 steel tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Plasma Fibronectin</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>33010018</td>
			<td>Comes as 1 mg of lyophilized protein</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CaCl2</td>
			<td>VWR/Amresco</td>
			<td>97062-590</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Cell Culture Incubator w/ CO2</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Any appropriate CO2-supplied mammalian cell incubator will suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable Serological Pipets, Glass - Kimble Chase</td>
			<td>VWR</td>
			<td>14673-208</td>
			<td>Alternative brands may be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM/F-12, HEPES</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>11330032</td>
			<td>Warm in water bath at 37&#176;C for 30 minutes prior to use</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>DN25-10MG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dope vessel</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>89785K867</td>
			<td>6 ft 316 steel tubing</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ethanol</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1160</td>
			<td>Dilute to 70% for sterilization</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fetal Bovine Serum, qualified, US origin - Gibco</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>26140079</td>
			<td>Mix with growth media at 10% concentration (50mL in 500mL media)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Four 1/4-inch to 1&#34; reducing unions</td>
			<td>Swagelok</td>
			<td>SS-1610-6-4</td>
			<td>One reducing union for each inlet and outlet of each vessel</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freeze-dryer/lyophilizer</td>
			<td>Labconco</td>
			<td>117 (A65312906)</td>
			<td>Any lyophilizer will suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hexagonal Antistatic Polystyrene Weighing Dishes - VWR</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89106-752</td>
			<td>Any weigh boat will suffice</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hollow fiber membrane immersion bath</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>34L polypropylene tubs may be used or large bath containers can be fabricated from welded steel sheets</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hollow Fiber Membrane Spinneret</td>
			<td>AEI</td>
			<td>http://www.aei-spinnerets.com/specifications.html</td>
			<td>Made to order. Inner diameter = 0.8 mm, outer diameter = 1.6 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hot plate/stirrer</td>
			<td>VWR</td>
			<td>97042-634</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Human TGF-&#946;1</td>
			<td>PeproTech</td>
			<td>100-21</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A4544-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Ascorbic acid 2-phosphate</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>A8960-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-glutamine (200 mM) - Gibco</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>25030081</td>
			<td>Mix with growth media at 1% concentration (5mL in 500mL media)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MgCl2</td>
			<td>VWR/Alfa Aesar</td>
			<td>AA12315-A1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Minus 80 Freezer</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>UXF40086A</td>
			<td>Any commercial -80C freezer will suffice.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N2 gas cylinders (two)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIH/3T3 cells</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CRL-1658</td>
			<td>Alternative fibrogenic cell lines may be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>N-methyl-2-pyrrolidone</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH1141</td>
			<td>Alternative brands may be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin Solution - Gibco</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>15140122</td>
			<td>Mix with growth media at 0.1% concentration (0.5 mL in 500mL media)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Polysulfone</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>428302</td>
			<td>Any polysulfone with an average Mw of 35,000 daltons may be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Portable Pipet-Aid Pipetting Device - Drummond</td>
			<td>VWR</td>
			<td>53498-103</td>
			<td>Alternative brands may be used</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PTFE tubing (1/4-inch inner diameter)</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>52315K24</td>
			<td>Alternative brands may be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rat skeletal muscle fibroblasts</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Independently isolated from rat skeletal muscle. Alternative fibrogenic cell lines may be used.</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RNase A</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>R4642</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Silicone sheet</td>
			<td>McMaster-Carr</td>
			<td>1460N28</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Take-up motor</td>
			<td>Greartisan</td>
			<td>B071GTTSV3</td>
			<td>200 RPM DC Motor</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tris HCl</td>
			<td>VWR/Amresco</td>
			<td>97063-756</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Two needle valves</td>
			<td>Swagelok</td>
			<td>SS-1RS4</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

production of extracellular matrix fibers via sacrificial hollow fiber membrane cell culture

Инженерии подмостей, производный от внеклеточного матрикса (ECM) имеют управляемый значительный интерес в медицине для их потенциал в деле ускорения закрытия и исцеления. Извлечение внеклеточного матрикса из Фиброгенные клеток культур в vitro имеет потенциал для поколения ECM от человека - и потенциально пациент конкретных клеточных линий, сведение к минимуму присутствие культивированная epitopes, которая препятствовала клинических успех некоторых существующих продуктов ECM. Серьезной проблемой в vitro производства ЭВМ для имплантации является производство ECM на культуры клеток обычно относительно низкой доходности. В этой работе описываются протоколы для производства ECM клетки культивировали в жертвенных полые волокна мембраны строительные леса. Полые волокна мембраны культивируемых с линии клетки фибробластов в среде обычных ячеек и распущен после культуры клеток для получения непрерывной нити ECM. Результате ECM волокон, производимых этим методом может быть decellularized и лиофилизованный, делает его подходящим для хранения и имплантации.

Успешное производство внеклеточного матрикса из жертвенного подмостей зависит от соответствующих эшафот изготовление, культуры клеток и растворителей промойте процедур. Изготовление полых волокон мембран осуществляется с помощью системы сухой Джет мокрого пряден...

Watch this Scientific Journal Video about Production of Extracellular Matrix Fibers via Sacrificial Hollow Fiber Membrane Cell Culture at JoVE.com

Production of Extracellular Matrix Fibers via Sacrificial Hollow Fiber Membrane Cell Culture

Целью настоящего Протокола является производство всего внеклеточная матрица волокон, предназначенных для ремонта раны, которые подходят для доклинических оценки как часть имплантата регенеративной эшафот. Эти волокна производятся культуры фибробластов на полые волокна мембраны и извлекается путем растворения мембран.

Производство волокон внеклеточного матрикса через жертвенную полые волокна мембраны клеточной культуры

Engineered scaffolds derived from extracellular matrix (ECM) have driven significant interest in medicine for their potential in expediting wound closure ...

Данный протокол позволяет изготовлять нити объемной внеклеточной матрицы из культурных клеточных линий, что позволяет проводить исследования в области клеточных матричных взаимодействий, а также исследовать потенциал этого биоматериала для восстановления ран. Эти синтетические волокна могут избежать реакции ино иностранного тела, направленной против синтетических материалов, в то же время опираясь на богатый репертуар текстильных методов изготовления для создания широкого спектра тканых имплантируемых. Демонстрацией процедуры будет Кассандра Рид, аспирант из моей лаборатории.Перед посевом клеток, автоклав полых мембран волокна при 121 градусов по Цельсию в течение 30 минут, а затем лечение 50 миллилитров фибронектина плазмы крупного рогатого скота в PBS при 37 градусов по Цельсию в 5%углекислого газа в течение одного часа. В конце инкубации используйте стерильные микро ножницы, чтобы сократить волокна до шести сантиметров или меньше, и использовать один миллилитр шприц оснащен 21 калибровочных игл для семян один раз от 10 до пятого фибробластов клетки непосредственно в lumina полых мембран волокна. Поместите шесть семенных волокон в шестидюймовый диаметр чашки Петри, и кратко инкубировать семенами волокон при 37 градусов по Цельсию в 5%углекислого газа.Через пять минут перенесите волокна из инкубатора в новую шестимиметровую чашку Петри, содержащую фибробластовую культурную среду, дополненную L-аскорбиновой кислотой, L-аскорбиновой кислотой 2 фосфата, и трансформирует фактор роста бета 1 на срок до трех недель в инкубаторе клеточной культуры. В конце инкубации, использовать типсы o передачи культурных волокон в отдельные сцинтилляционные флаконы, и наклонить каждый флакон, чтобы добавление до пяти миллилитров N-Метил-2-пирролидон вниз стороне флаконов. Затем используйте серологическую пипетку, чтобы медленно аспирировать N-метил-2-пирролидон из каждого волокна, и передать волокна в новые флаконы сцинтилляции для второго погружения в свежий N-метил-2-пирролидон.После третьего погружения, промыть в результате внеклеточной матрицы нити три раза в деионизированной воде аналогичным образом, и место три дюйма длиной, один дюйм в ширину 1/23-дюймовый толщиной кусок силиконовой резины с центральной восемь на четыре миллиметра прямоугольной формы на стандартные три на один дюймовый стеклянный микроскоп слайд. После автоклавирования, положите каждое внеклеточное матричное волокно бок о бок в восьми на четыре миллиметра силиконовой формы, пока нет видимого открытого пространства. Поместите плесень в 50 миллилитров конической трубки, и заморозить волокна при отрицательном 80 градусов по Цельсию, пока полностью заморожены.Для децеллюляризации инкубировать плесень в 1% додекилового сульфата натрия в течение 24 часов при комнатной температуре на рокере с нежным возбуждением. На следующий день, промыть извлеченные внеклеточной матрицы с тремя моет в три миллилитров PBS за стирку, и заполнить плесень со свежеприготовленными ДНК / РНК реактора пищеварения в течение шести часов инкубации при четырех градусах по Цельсию. В конце пищеварения, аспирировать раствор пищеварения и промыть плесень три раза в стерильных PBS, как попродемонстрировано.После третьей стирки, инкубировать леса в 10%Пенициллин-Стрептомицин в PBS при четырех градусах по Цельсию ночь перед замораживанием в 50 миллилитров конической трубки при отрицательном 80 градусов по Цельсию в течение примерно одного часа. Когда сетка полностью заморожена, лиофилизируют децеллюляризованную внеклеточную сетку на ночь или до полного высыхания и передают лиофилизированные леса в стерильный контейнер в пределах био-защитного капота и хранят при четырех градусах Цельсия до их использования. Здесь показан поперечное сечение полисульфонной полой оптоволоконной мембраны, изготовленной с помощью этого протокола, с помощью внешних и внутренних слоев пальцев, как поры, характерные для асимметричной мембраны.После фибробластового посева клеток и культуры, N-Метил-2-пирролидон полоскания, как попродемонстрировано, полупрозрачные нити внеклеточной матрицы производятся. Внеклеточная матрица, производящая клетки, остается жизнеспособной внутри полых волоконных мембран в течение всего периода культуры в течение всей трех недель. Извлеченная матрица имеет полупрозрачный вид при гидратации, экспонирование небелого цвета и волокнистого внешнего вида с грубым продольным выравниванием при сборке сетки и лиофилии.Наиболее важным шагом является процесс растворения культурных полых волоконных мембран в растворителя N-Метил-2-пирролидон для извлечения внеклеточной матрицы. Материал, производимый этим методом, может быть использован для изготовления тканевых имплантатов для исследования восстановления тканей в доклинических исследованиях. N-Метил-2-пирролидон, используемый в этом протоколе, является раздражающим фактором кожи и глаз, и поэтому рекомендуется обращаться с химическим веществом с помощью нитриловых перчаток, очков, лабораторного пальто и обрабатывать его в дымовом капюшоне.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Non-contact, Label-free Monitoring of Cells and Extracellular Matrix using Raman Spectroscopy

Бесконтактная, этикетки без мониторинга клеток и внеклеточного матрикса использованием спектроскопии комбинационного

Non-destructive, non-contact and label-free technologies to monitor cell and tissue cultures are needed in the field of biomedical research.1-5 However, ...

Epithelial Cell Repopulation and Preparation of Rodent Extracellular Matrix Scaffolds for Renal Tissue Development

Эпителиальные Репопуляции сотовый и подготовка грызунов внеклеточный матрикс строительные леса для почечной ткани развития

This protocol details the generation of acellular, yet biofunctional, renal extracellular matrix (ECM) scaffolds that are useful as small-scale model ...

Hollow Fiber Bioreactors for In Vivo-like Mammalian Tissue Culture

Hollow Fiber Bioreactors for In Vivo-like Mammalian Tissue Culture

Полое волокно биореакторов для<em&gt; В Vivo</em&gt; -как Млекопитающим культуры ткани

Tissue culture has been used for over 100 years to study cells and responses ex vivo. The convention of this technique is the growth of anchorage ...

Engineering Three-dimensional Epithelial Tissues Embedded within Extracellular Matrix

Инженерная Трехмерные эпителиальной ткани Встроенные в внеклеточной матрицы

The architecture of branched organs such as the lungs, kidneys, and mammary glands arises through the developmental process of branching morphogenesis, ...

Preparation of Extracellular Matrix Protein Fibers for Brillouin Spectroscopy

Приготовление внеклеточного матрикса белковых волокон для Бриллюэна спектроскопии

Brillouin spectroscopy is an emerging technique in the biomedical field. It probes the mechanical properties of a sample through the interaction of ...

Tunable Hydrogels from Pulmonary Extracellular Matrix for 3D Cell Culture

Настраиваемый гидрогели от легочного внеклеточной матрицы для 3D клеточных культур

Here we present a method for establishing multiple component cell culture hydrogels for in vitro lung cell culture. Beginning with healthy en bloc lung ...

Fabrication of Extracellular Matrix-derived Foams and Microcarriers as Tissue-specific Cell Culture and Delivery Platforms

Изготовление внеклеточного матрикса, производных Пены и микроносителями как Тканеспецифическая культуре клеток и платформ доставки

Cell function is mediated by interactions with the extracellular matrix (ECM), which has complex tissue-specific composition and architecture. The focus ...

Fabricating a Kidney Cortex Extracellular Matrix-Derived Hydrogel

Изготовления внеклеточная матрица производные гидрогеля почек коры

Extracellular matrix (ECM) provides important biophysical and biochemical cues to maintain tissue homeostasis. Current synthetic hydrogels offer robust ...

Pancreatic Tissue-Derived Extracellular Matrix Bioink for Printing 3D Cell-Laden Pancreatic Tissue Constructs

Поджелудочная ткань-производные внеклеточной матрицы Bioink для печати 3D-клетки-Ладена поджелудочной железы Конструкции Конструкции

The transplantation of pancreatic islets is a promising treatment for patients who suffer from type 1 diabetes accompanied by hypoglycemia and secondary ...

A Human 3D Extracellular Matrix-Adipocyte Culture Model for Studying Matrix-Cell Metabolic Crosstalk

Человек 3D Экстраклеточная матрица-Адипоцит Культура Модель для изучения Матрица-Клеточная метаболический перекрестный разговор

The extracellular matrix (ECM) plays a central role in regulating tissue homeostasis, engaging in crosstalk with cells and regulating multiple aspects of ...