Name: toxicity study of zinc oxide nanoparticles in cell culture and in drosophila melanogaster
Uploaded: 2019-09-19T13:30:00
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अध्ययन अनुदान संख्या R706-000-043-490 द्वारा समर्थित किया गया था. यह अध्ययन अनुदान प्रायोजक के दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व नहीं करता है।

1. फ्लोरोसेंट सक्रिय सेल छंटनी (FACS) लाइव पर विश्लेषण /
<ol><li>15 मिनट के लिए निलंबन में Sonicate nO एन पी एस.</li>
	<li>सुसंस्कृत कोशिकाओं के उपचार के लिए 1 मिलीग्राम/एमएल जेडएनओ एनपी स्टॉक समाधान का उपयोग करते हुए विभिन्न सा...

<ol>
	<li>Kim, Y. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicity+of+100+nm+zinc+oxide+nanoparticles:+a+report+of+90-day+repeated+oral+administration+in+Sprague+Dawley+rats.">Toxicity of 100 nm zinc oxide nanoparticles: a report of 90-day repeated oral administration in Sprague Dawley rats.</a> International Journal of Nanomedicine. 9 Suppl 2, 109-126 (2014).</li><li>Xie, Y., He, Y., Irwin, P. L., Jin, T., Shi, X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Antibacterial+activity+and+mechanism+of+action+of+zinc+oxide+nanoparticles+against+Campylobacter+jejuni.">Antibacterial activity and mechanism of action of zinc oxide nanoparticles against Campylobacter jejuni.</a> Applied and Environmental Microbiology. 77, 2325-2331 (2011).</li><li>Colvin, V. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+potential+environmental+impact+of+engineered+nanomaterials.">The potential environmental impact of engineered nanomaterials.</a> Nature Biotechnology. 21, 1166-1170 (2003).</li><li>De Angelis, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+study+of+ZnO+and+TiO(2)+nanoparticles:+physicochemical+characterisation+and+toxicological+effects+on+human+colon+carcinoma+cells.">Comparative study of ZnO and TiO(2) nanoparticles: physicochemical characterisation and toxicological effects on human colon carcinoma cells.</a> Nanotoxicology. 7, 1361-1372 (2013).</li><li>Johnson, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+exposure+to+ZnO+nanoparticles+induces+autophagic+immune+cell+death.">Acute exposure to ZnO nanoparticles induces autophagic immune cell death.</a> Nanotoxicology. 9, 737-748 (2015).</li><li>Singh, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=NanoGenotoxicology:+the+DNA+damaging+potential+of+engineered+nanomaterials.">NanoGenotoxicology: the DNA damaging potential of engineered nanomaterials.</a> Biomaterials. 30, 3891-3914 (2009).</li><li>Song, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+the+dissolved+zinc+ion+and+reactive+oxygen+species+in+cytotoxicity+of+ZnO+nanoparticles.">Role of the dissolved zinc ion and reactive oxygen species in cytotoxicity of ZnO nanoparticles.</a> Toxicology Letters. 199, 389-397 (2010).</li><li>Wahab, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=ZnO+nanoparticles+induced+oxidative+stress+and+apoptosis+in+HepG2+and+MCF-7+cancer+cells+and+their+antibacterial+activity.">ZnO nanoparticles induced oxidative stress and apoptosis in HepG2 and MCF-7 cancer cells and their antibacterial activity.</a> Colloids and Surfaces B: Biointerfaces. 117, 267-276 (2014).</li><li>Namvar, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cytotoxic+effects+of+biosynthesized+zinc+oxide+nanoparticles+on+murine+cell+lines.">Cytotoxic effects of biosynthesized zinc oxide nanoparticles on murine cell lines.</a> Evidence-Based Complementary and Alternative. 2015, (2015).</li><li>Wong, S. W., Leung, P. T., Djurisic, A. B., Leung, K. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Toxicities+of+nano+zinc+oxide+to+five+marine+organisms:+influences+of+aggregate+size+and+ion+solubility.">Toxicities of nano zinc oxide to five marine organisms: influences of aggregate size and ion solubility.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 396, 609-618 (2010).</li><li>Hua, J., Vijver, M. G., Richardson, M. K., Ahmad, F., Peijnenburg, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Particle-specific+toxic+effects+of+differently+shaped+zinc+oxide+nanoparticles+to+zebrafish+embryos+(Danio+rerio).">Particle-specific toxic effects of differently shaped zinc oxide nanoparticles to zebrafish embryos (Danio rerio).</a> Environmental Toxicology and Chemistry. 33, 2859-2868 (2014).</li><li>Zhao, X., Wang, S., Wu, Y., You, H., Lv, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Acute+ZnO+nanoparticles+exposure+induces+developmental+toxicity,+oxidative+stress+and+DNA+damage+in+embryo-larval+zebrafish.">Acute ZnO nanoparticles exposure induces developmental toxicity, oxidative stress and DNA damage in embryo-larval zebrafish.</a> Aquatic Toxicology. 136-137, 49-59 (2013).</li><li>Alaraby, M., Annangi, B., Hernandez, A., Creus, A., Marcos, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+comprehensive+study+of+the+harmful+effects+of+ZnO+nanoparticles+using+Drosophila+melanogaster+as+an+in+vivo+model.">A comprehensive study of the harmful effects of ZnO nanoparticles using Drosophila melanogaster as an in vivo model.</a> Journal of Hazardous Materials. 296, 166-174 (2015).</li><li>Rand, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophotoxicology:+the+growing+potential+for+Drosophila+in+neurotoxicology.">Drosophotoxicology: the growing potential for Drosophila in neurotoxicology.</a> Neurotoxicology and Teratology. 32, 74-83 (2010).</li><li>Ong, C., Yung, L. Y., Cai, Y., Bay, B. H., Baeg, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+melanogaster+as+a+model+organism+to+study+nanotoxicity.">Drosophila melanogaster as a model organism to study nanotoxicity.</a> Nanotoxicology. 9, 396-403 (2015).</li><li>Hoffmann, J. A., Reichhart, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+innate+immunity:+an+evolutionary+perspective.">Drosophila innate immunity: an evolutionary perspective.</a> Nature Immunology. 3, 121-126 (2002).</li><li>Hughes, T. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+as+a+genetic+model+for+studying+pathogenic+human+viruses.">Drosophila as a genetic model for studying pathogenic human viruses.</a> Virology. 423, 1-5 (2012).</li><li>Jennings, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Drosophila+-+a+versatile+model+in+biology+&amp;+medicine.">Drosophila - a versatile model in biology &amp; medicine.</a> Materials Today. 14, 190-195 (2011).</li><li>Adams, M. D., Sekelsky, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=From+sequence+to+phenotype:+reverse+genetics+in+Drosophila+melanogaster.">From sequence to phenotype: reverse genetics in Drosophila melanogaster.</a> Nature Reviews Genetics. 3, 189-198 (2002).</li><li>Adams, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genome+sequence+of+Drosophila+melanogaster.">The genome sequence of Drosophila melanogaster.</a> Science. 287, 2185-2195 (2000).</li><li>Ong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Silver+nanoparticles+disrupt+germline+stem+cell+maintenance+in+the+Drosophila+testis.">Silver nanoparticles disrupt germline stem cell maintenance in the Drosophila testis.</a> Scientific Reports. 6, (2016).</li><li>Alaraby, M., Demir, E., Hernandez, A., Marcos, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Assessing+potential+harmful+effects+of+CdSe+quantum+dots+by+using+Drosophila+melanogaster+as+in+vivo+model.">Assessing potential harmful effects of CdSe quantum dots by using Drosophila melanogaster as in vivo model.</a> Science of the Total Environment. 530-531, 66-75 (2015).</li><li>Barik, B. K., Mishra, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Nanoparticles+as+a+potential+teratogen:+a+lesson+learnt+from+fruit+fly.">Nanoparticles as a potential teratogen: a lesson learnt from fruit fly.</a> Nanotoxicology. , 1-27 (2018).</li><li>Jovanovic, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+effects+of+a+human+food+additive,+titanium+dioxide+nanoparticles+E171,+on+Drosophila+melanogaster+-+a+20+generation+dietary+exposure+experiment.">The effects of a human food additive, titanium dioxide nanoparticles E171, on Drosophila melanogaster - a 20 generation dietary exposure experiment.</a> Scientific Reports. 8, (2018).</li><li>Cao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Toxicity+of+Nanoparticles+to+Human+Endothelial+Cells.">The Toxicity of Nanoparticles to Human Endothelial Cells.</a> Advances in Experimental Medicine and Biology. 1048, 59-69 (2018).</li><li>Akhtar, M. J., Ahamed, M., Alhadlaq, H. A., Alshamsan, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanism+of+ROS+scavenging+and+antioxidant+signalling+by+redox+metallic+and+fullerene+nanomaterials:+Potential+implications+in+ROS+associated+degenerative+disorders.">Mechanism of ROS scavenging and antioxidant signalling by redox metallic and fullerene nanomaterials: Potential implications in ROS associated degenerative disorders.</a> Biochimica Et Biophysica Acta-General Subjects. 1861, 802-813 (2017).</li><li>Akter, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+systematic+review+on+silver+nanoparticles-induced+cytotoxicity:+Physicochemical+properties+and+perspectives.">A systematic review on silver nanoparticles-induced cytotoxicity: Physicochemical properties and perspectives.</a> Journal of Advanced Research. 9, 1-16 (2018).</li><li>Vecchio, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+fruit+fly+in+the+nanoworld:+once+again+Drosophila+contributes+to+environment+and+human+health.">A fruit fly in the nanoworld: once again Drosophila contributes to environment and human health.</a> Nanotoxicology. 9, 135-137 (2015).</li><li>Marino, G., Kroemer, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mechanisms+of+apoptotic+phosphatidylserine+exposure.">Mechanisms of apoptotic phosphatidylserine exposure.</a> Cell Research. 23, 1247-1248 (2013).</li><li>Stoddart, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+Viability+Assays:+Introduction.">Cell Viability Assays: Introduction.</a> Mammalian Cell Viability: Methods and Protocols. , (2011).</li><li>Yazdani, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Concerns+in+the+application+of+fluorescent+probes+DCDHF-DA,+DHR+123+and+DHE+to+measure+reactive+oxygen+species+in+vitro.">Concerns in the application of fluorescent probes DCDHF-DA, DHR 123 and DHE to measure reactive oxygen species in vitro.</a> Toxicology in Vitro. 30, 578-582 (2015).</li><li>Chen, J., Rogers, S. C., Kavdia, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Analysis+of+kinetics+of+dihydroethidium+fluorescence+with+superoxide+using+xanthine+oxidase+and+hypoxanthine+assay.">Analysis of kinetics of dihydroethidium fluorescence with superoxide using xanthine oxidase and hypoxanthine assay.</a> Annals of Biomedical Engineering. 41, 327-337 (2013).</li><li>Hartig, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Basic+image+analysis+and+manipulation+in+ImageJ.">Basic image analysis and manipulation in ImageJ.</a> Current Protocols in Molecular Biology. , (2013).</li></ol>

आदेश में अगर nO एनपी MRC5 फाइब्रोब्लास्ट्स में apoptosis प्रेरित कर सकते हैं का आकलन करने के लिए, हम प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग करने के लिए नेक्रोटिक या apoptotic सेल मौत से कोशिकाओं को अलग. सामान्य जीवित कोशिकाओं में...

नैनो प्रौद्योगिकी नैनोसाइज़्ड सामग्री के अनुप्रयोग को संदर्भित करता है जो सभी वैज्ञानिक क्षेत्रों में उपयोग किया जाता है, जिसमें चिकित्सा, सामग्री विज्ञान, और जैव रसायन शामिल हैं। उदाहरण के लिए, एन ओ एन पी जो उनकी पराबैंगनी प्रकीर्णन, रासायनिक संवेदन, और एंटी-माइक्रोबायल गुणों, साथ ही उच्च विद्युत चालकता के लिए जाना जाता है, खाद्य पैकेजिंग, सौंदर्य प्रसाधन जैसे विभिन्न उपभोक्ता उत्पादों के उत्पादन में उपयोग किया जाता है, वस्त्र, रबर, बैटरी, ऑटोमोबाइल पूंछ गैस उपचार के लिए उत्प्रेरक, और जैव चिकित्सा से संबंधित अनुप्रयोगों1,2,3.
तथापि, एन ओ एनपी आधारित उत्पादों के बढ़ते अनुप्रयोगों, जिससे एन ओ एनपी के मानव जोखिम में वृद्धि हुई है, ने मानव स्वास्थ्य पर उनके संभावित प्रतिकूल प्रभावों पर चिंता व्यक्त की है। इन विट्रो सेलुलर अध्ययनों की एक संख्या का प्रदर्शन किया है कि nO एन पी ऑक्सीडेटिव तनाव, autophagy से संबंधित साइटोटॉक्सिसिटी, सूजन, और जीनोटॉक्सिसिटी4,5,6,7,8 प्रेरित कर सकते हैं . विशेष रूप से, nO NPs की विषाक्तता को $n के विघटन के कारण माना जाता है n 2+ आयनों को मुक्त करने के लिए, साथ ही nO की सतह प्रतिक्रिया, सेलुलर आयनिक और चयापचय असंतुलन है कि बिगड़ा आयनिक homeostasis और एक के साथ जुड़े हुए हैं में जिसके परिणामस्वरूप आयनपरिवहन4 ,7,9,10का निषेध . महत्वपूर्ण बात, अध्ययनों से पता चला है कि प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों की पीढ़ी (आरओएस) प्राथमिक तंत्र में से एक है जो कि एन ओ एन पी एस-संबद्ध विषाक्तता के अंतर्निहित है। ROS अपमान के बाद अपर्याप्त एंटी ऑक्सीडेटिव गतिविधि साइटोटॉक्सिसिटी और डीएनए क्षति9प्राप्त करने के लिए जिम्मेदार होना दिखाया गया है। एन ओ एन पी के जहरीले प्रभाव भी पशु मॉडलों में सूचित किए गए हैं , जिनमें कृंतक1, जेब्राफिश11,12, साथ ही अकशेरुकी ड्रोसोफिला13भी शामिल हैं .
Drosophila रासायनिक संस्थाओं और नैनो सामग्री (एनएम)14,15की विषाक्तता स्क्रीनिंग के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित वैकल्पिक पशु मॉडल के रूप में कार्य करता है। महत्वपूर्ण बात यह है कि मानव और Drosophila के बीच आनुवंशिक और शारीरिक समानता के उच्च स्तर है कि इस तरह के एनएम के रूप में पर्यावरण contaminants के लिए जैविक प्रतिक्रियाओं का मूल्यांकन करने के लिए एक में विवो मॉडल के रूप में Drosophila के उपयोग को सही ठहराते हैं 16. इसके अलावा, इसके छोटे आकार, लघु आयु, आनुवंशिक अमेठी, और आसान और लागत प्रभावी रखरखाव के कारण ड्रोसोफिला का उपयोग करने के कई फायदे हैं। इसके अलावा, Drosophila व्यापक रूप से आनुवंशिकी, आणविक और विकासात्मक जीव विज्ञान के अध्ययन के लिए अपनाया गया है, कभी के बाद से अपनी पूरी जीनोम पूरी तरह से साल पहले 2000 में अनुक्रम था, इसलिए यह उच्च throughput स्क्रीनिंग की एक किस्म के लिए उपयुक्त बनाने और अनसुलझे जैविक प्रश्नों से निपटने के लिए17,18,19,20,21. हाल के वर्षों में द्रौपदी में विभिन्न प्रकार के एनपी का उपयोग करके इम्यूनोटॉक्सिसिटी से संबंधित अनेक अध्ययनों की सूचना15,22,23,24में प्राप्त की गई है . Drosophila का उपयोग कर अध्ययन से प्राप्त इस मौलिक नए ज्ञान नैनोटॉक्सिलोजी की हमारी समझ में और अधिक अंतर्दृष्टि प्रदान करने में मदद मिली है।
ROS साइटोटॉक्सिसिटी और जेनोटॉक्सिसिटी के लिए एक प्रसिद्ध अपराधी है जो एन पी एस, विशेष रूप से धातु आधारित एन पी एस25के कारण होता है। ROS आणविक ऑक्सीजन की तुलना में उच्च प्रतिक्रियाशील गुणों के साथ ऑक्सीजन युक्त रासायनिक प्रजातियों रहे हैं। मुक्त कण जैसे सुपरऑक्साइड आमूल-चूल (व्2-)तथा यहां तक कि हाइड्रोजन पेरोक्साइड (ह2व्2) जैसे गैर-मूली अणु भी रॉस के रूप में कार्य कर सकते हैं। सामान्य शारीरिक स्थिति के तहत, वे सेलुलर homeostasis बनाए रखने के लिए आवश्यक हैं26, हालांकि, अत्यधिक ROS अत्यधिक उत्पादन या एंटीऑक्सीडेंट रक्षा प्रणाली के dyregation के कारण ऑक्सीडेटिव तनाव पैदा कर सकता है, प्रोटीन को नुकसान करने के लिए अग्रणी, लिपिड और deoxyribonucleic एसिड (डीएनए)27| उदाहरण के लिए, के रूप में ROS स्तर में वृद्धि और glutathione (GSH) स्तर सहवर्ती रूप से कम हो जाती है, एडेनोसाइन ट्राइफॉस्फेट (एटीपी) संश्लेषण के विघटन जगह लेता है और लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज (LDH) स्तर मध्यम में बढ़ जाती है, सेल मौत27में समापन .
यहाँ, हम nO एन पी एस के संभावित प्रतिकूल प्रभाव निर्धारित करने के लिए सुसंस्कृत स्तनधारी कोशिकाओं और Drosophila का उपयोग कर सेलुलर और आनुवंशिक विश्लेषण प्रदर्शन के लिए प्रोटोकॉल प्रदान करते हैं. nO NPs के विषाक्तता अध्ययन के लिए प्रयुक्त विधि का अवलोकन चित्र 1 में दर्शायागया है।

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>15% Methyl 4-Hydroxybenzoate</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>4% Paraformaldehyde</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P6148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bacto Agar</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cncCK6/TM3, Sb</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>a gift from Dr. Kerppola T</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>cornmeal, glucose, yeast brewer</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CyAn ADP with Summit Software</td>
			<td>DAKO</td>
			<td></td>
			<td>https://flow.usc.edu/files/2014/07/BC-Cyan-ADP-User-Guide-2016.pdf</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dihydroethidium (Hydroethidine)</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>D11347</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC Annexin V Apoptosis Detection Kit I</td>
			<td>BD biosciences</td>
			<td>556547</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescent microscope</td>
			<td>Olympus</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glucolin</td>
			<td>Supermarket</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J software</td>
			<td>NIH</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MRC5 human lung fibroblast</td>
			<td>ATCC</td>
			<td>CCL-171</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Schneider&#8217;s Drosophila medium</td>
			<td>Thermo Fisher Scientific</td>
			<td>21720-024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>vectashield antifade mounting medium with DAPI</td>
			<td>Vector Laboratories</td>
			<td>H-1200</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>wild- type Canton-S; Sod2N308/CyO</td>
			<td>NIG-FLY</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zinc Oxide Nanoparticles</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>721077</td>
			<td>Refer Sheet 2</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

toxicity study of zinc oxide nanoparticles in cell culture and in drosophila melanogaster

जिंक ऑक्साइड नैनोकणों (nO NPs) अनुप्रयोगों की एक विस्तृत श्रृंखला है, लेकिन nO एनपी संबद्ध विषाक्तता पर रिपोर्टों की संख्या हाल के वर्षों में तेजी से वृद्धि हुई है. हालांकि, अध्ययन है कि nO एनपी प्रेरित विषाक्तता के लिए अंतर्निहित तंत्र स्पष्ट अल्प कर रहे हैं. हमने इन विट्रो और विवो प्रयोगात्मक मॉडलदोनों का उपयोग करके nO NPs की विषाक्तता प्रोफाइल निर्धारित किया है। सेल व्यवहार्यता में एक महत्वपूर्ण कमी देखी गई थी $nO एनपी उजागर MRC5 फेफड़ों फाइब्रोब्लास्ट्स, दिखा रहा है कि nO एन पी एस साइटोटॉक्सिक प्रभाव डालती है। इसी प्रकार, दिलचस्प बात यह है कि एन ओ एन पी के संपर्क में आने वाले आंत ने फल मक्खी ड्रोसोफिलामें प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के स्तर (आरओएस) में नाटकीय वृद्धि का प्रदर्शन किया। उपभोक्ताओं द्वारा एन ओ एन पी के बढ़ते उपयोग के लिए जोखिम मूल्यांकन स्थापित करने के लिए और अधिक गहन अध्ययन किए जाने की आवश्यकता है।

एनपी उजागर कोशिकाओं सेल धुंधला अभिकर्मक किट के साथ संसाधित किया गया, प्रवाह साइटोमेट्री का उपयोग कर सेल छँटाई के बाद. [nO एनपी इलाज कोशिकाओं (नीचे, दाएँ पैनल) जल्दी के एक उच्च प्रतिशत प्रदर्श?...

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Toxicity Study of Zinc Oxide Nanoparticles in Cell Culture and in Drosophila melanogaster

हम विशेष रूप से जस्ता ऑक्साइड नैनोकणों (nO NPs) के विषाक्त प्रोफाइल का मूल्यांकन करने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं, मानव एमआरसी 5 फेफड़ों के फाइब्रोब्लास्ट्स में सेल मौत के प्रकार और फल मक्खी Drosophilaमें ROS गठन .

सेल संस्कृति में और Drosophila मेलेनोगैस्टर में जस्ता ऑक्साइड नैनोकणों का विषाक्तता अध्ययन

Zinc oxide nanoparticles (ZnO NPs) have a wide range of applications, but the number of reports on ZnO NP-associated toxicity has grown rapidly in recent ...

हमारे तरीके नैनोटॉक्सिसिटी का अध्ययन करने के लिए एक सरल और दोहराने का तरीका रेखांकित करते हैं, जैसे सेल मृत्यु के प्रकारों की जांच करना और प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों के उत्पादन की जांच करना। फ्लोरेसेंस सक्रिय सेल छंटाई एक सख्त प्रारूप है जो हमें कोशिकाओं की उपआबादी और बढ़ती विभिन्न प्रकार की कोशिका मृत्यु का अध्ययन करने की अनुमति देता है। डीएचई जांच अध्ययन विधि हमें प्रतिक्रियाशील ऑक्सीजन प्रजातियों का पता लगाने और मात्रा निर्धारित करने की अनुमति देती है जिसके बाद प्रवाह साइटोमेट्री, सूक्ष्म उच्च सामग्री इमेजिंग, और दोहे आधारित फ्लोरेसेंस विश्लेषण द्वारा।शुरू करने के लिए, जिंक ऑक्साइड नैनोपार्टिकल स्टॉक समाधान में जिंक ऑक्साइड नैनोकणों वाली एक एपेंडोर्फ ट्यूब को 15 मिनट के लिए एक सोनिकेटर में रखें। एक मिलीग्राम-प्रति-मिलीलीटर जिंक जिंक ऑक्साइड नैनोपार्टिकल स्टॉक का उपयोग करके विभिन्न सांद्रता पर जिंक ऑक्साइड नैनोकण तैयार करें। फिर, एक जैवसेफ्टी कैबिनेट में, बीज MRC5 मानव फेफड़े फाइब्रोब्लास्ट एक बार 10 की एकाग्रता पर 10 के लिए पांचवें कोशिकाओं को अच्छी तरह से ।कोशिकाओं को 37 डिग्री सेल्सियस पर इनक्यूबेट करें। एक दिन के बाद, कोशिकाओं को आठ घंटे, 16 घंटे या 24 घंटे के लिए जिंक ऑक्साइड नैनोकणों के दो मिलीलीटर के साथ इलाज करें। हर समय बिंदु पर, कोशिकाओं को 15 मिलीलीटर सेंट्रलाइज ट्यूब में इकट्ठा करें, और पांच मिनट के लिए 300 बार जी पर अपकेंद्रित्र करें।फॉस्फेट-बफर नमकीन के साथ दो बार सेल छर्रों को धोएं, और फिर 1X बाध्यकारी बफर के साथ कोशिकाओं को फिर से खर्च करें। इसके बाद, प्रोपिडियम आयोडाइड डीएनए दाग के पांच माइक्रोलीटर में फिटसी एनेक्सटिन वी दाग के पांच माइक्रोलीटर जोड़ें। अंधेरे में कमरे के तापमान पर 15 मिनट के लिए दाग कोशिकाओं को इनक्यूबेट करें।प्रवाह साइटोमेट्री द्वारा कोशिकाओं को छांटने से पहले, 1X बाध्यकारी बफर के अतिरिक्त 400 माइक्रोलीटर के साथ नमूनों को ऊपर करें। प्राप्त औसत तीव्रता का उपयोग कर बार चार्ट सारणीबद्ध करें। अब शीशियों में विभिन्न सांद्रता पर नैनोकणों के एक मिलीलीटर को जोड़ने के लिए एक पिपेट का उपयोग करें, इसके बाद नौ मिलीलीटर फ्लाई फूड प्रति मिलीलीटर, 0.25 मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर, या 0.5 मिलीग्राम प्रति मिलीलीटर जिंक ऑक्साइड नैनोकणों की अंतिम एकाग्रता बनाने के लिए।अच्छी तरह से मिश्रण करने के लिए ऊपर और नीचे पिपेट करें। जिंक ऑक्साइड नैनोकणों युक्त फ्लाई फूड को उपयोग से पहले कम से कम दो से तीन घंटे तक ठंडा करने की अनुमति दें। फिर वयस्क पुरुष और मादा कार्बन डाइऑक्साइड के साथ एक शीशी में मक्खियों को एनेस्थेटाइज करें, और पांच दिनों के लिए प्रत्येक शीशी में पांच नर मक्खियों और पांच मादा मक्खियों को पेश करें।उन्हें भोजन की सतह पर अंडे देने और अंडे डालने की अनुमति दें। एनेस्थेटाइजेशन के बाद, माता-पिता की मक्खियों को हटा दें और अंडे को कमरे के तापमान पर आगे विकास से गुजरने की अनुमति दें, जिसमें चार अलग-अलग विकास चरण होते हैं। भ्रूण, लार्वा, पुपल, और वयस्क चरण।72 से 120 घंटे के बाद, हौसले से रखे अंडे देर से तीसरे इंस्टार लार्वा में विकसित होते हैं। संदंश का उपयोग करके, विश्लेषण के लिए शीशियों की दीवार से लार्वा एकत्र करें। विच्छेदन माध्यम या पीबीएस के साथ विच्छेदन पकवान के एक कुएं में, लार्वा को समाधान में रखें।स्टीरियोमाइक्रोस्कोप के तहत, एक छोटे से छेद बनाने के लिए संदंश की नोक का उपयोग करें, और लार्वा की क्यूटिकल परत को खोलें। ध्यान से पेट बाहर खींचो। आंत को श्नाइडर के ड्रोसोफिला माध्यम से युक्त 1.5 मिलीलीटर माइक्रोसेंट्रफ्यूज ट्यूब में रखें।DHE जांच के एक माइक्रोलीटर जोड़ें, और 10 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर अंधेरे में इनक्यूबेट । हर पांच मिनट में श्नाइडर के माध्यम का उपयोग करके तीन बार आंत धोएं। कांच की स्लाइडों पर आंत माउंट करें, और DAPI युक्त एंटीफैड बढ़ते माध्यम के 10 माइक्रोलीटर के साथ आपूर्ति करें।एक कॉन्फोकल माइक्रोस्कोप के नीचे छवियों को कैप्चर करें। फ्लोरेसेंस को मापने के लिए, इमेजजे सॉफ्टवेयर में फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी या कॉन्फोकल लेजर स्कैनिंग माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके अधिग्रहीत फ्लोरेसेंस छवियों को आयात करें। विश्लेषण मेनू पर क्लिक करें, और सेट माप का चयन करें।आउटपुट उपाय का चयन करें, जैसे कि क्षेत्र एकीकृत तीव्रता और मतलब ग्रे मूल्य। पृष्ठभूमि सेट करने के लिए फ्लोरेसेंस के बिना एक क्षेत्र का चयन करें। उपाय पर क्लिक करें।डेटा को स्प्रेडशीट में निर्यात करें, और सही कुल सेल फ्लोरेसेंस निर्धारित करें। एक बार चार्ट का निर्माण, और सांख्यिकीय विश्लेषण करते हैं। इस अध्ययन में, जिंक ऑक्साइड नैनोपार्टिकल-उपचारित कोशिकाएं नियंत्रण कोशिकाओं R5 की तुलना में जल्दी R3 या देर से एपोप्टोटिक R6 कोशिकाओं का एक उच्च प्रतिशत प्रदर्शित करती हैं। नेक्रोटिक सेल डेथ को R4 द्वारा चिह्नित किया गया था। ड्रोसोफिला लार्वा से निकाले गए आंत को विभिन्न विकासात्मक मूल के तीन असतत डोमेन में विभाजित किया गया था।अर्थात्, फोर्गुट, मिडगट और हिंडगट। DHE स्टॉक बल्कि जल्दी से समाप्त हो जाता है, इसलिए आपके द्वारा उपयोग किए जा रहे स्टॉक समाधान से सावधान रहें। वैकल्पिक रूप से, आप अन्य जांच की कोशिश कर सकते हैं, उदाहरण के लिए सेल रोशे, जिसे हरे संकेतों में इंट्रासेलुलर आरओएस का पता लगाने के लिए डिज़ाइन किया गया है, और यह डीएचई की तुलना में अधिक फोटोस्टेबल है।हमारा प्रोटोकॉल इंट्रासेलुलर आरओएस उत्पादन का अध्ययन करने और नैनोटॉक्सिसिटी अध्ययन के लिए आरओएस स्तर की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक सामान्य रूपरेखा प्रदान करता है। डीएमएसओ को पीबीएस की तुलना में डीएचई के लिए बेहतर सॉल्वेंट माना जाता है। हालांकि, डीएमएसओ विषाक्त है।इसलिए, मैं उपयोगकर्ता को सलाह देना चाहूंगा कि वह अध्ययन के लिए पूरी प्रक्रिया को अधिकतम 30 मिनट तक सीमित करे । इसका कारण यह है कि आप एक झूठे सकारात्मक परिणाम का पालन कर सकते हैं क्योंकि डीएमएसओ सेल मृत्यु का कारण बन सकता है।

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Toxicity Study of Zinc Oxide Nanoparticles in Cell Culture and in Drosophila melanogaster

Retroviral Transduction of T-cell Receptors in Mouse T-cells

माउस टी कोशिकाओं में टी सेल रिसेप्टर्स की रेट्रोवायरल transduction

T-cell receptors (TCRs) play a central role in the immune system. TCRs on T-cell surfaces can specifically recognize peptide antigens presented by antigen ...

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

Novel Whole-tissue Quantitative Assay of Nitric Oxide Levels in Drosophila Neuroinflammatory Response

Neuroinflammation is a complex innate immune response vital to the healthy function of the central nervous system (CNS). Under normal conditions, an ...

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

Systemic Bacterial Infection and Immune Defense Phenotypes in Drosophila Melanogaster

प्रणालीगत जीवाणु संक्रमण और प्रतिरक्षा रक्षा phenotypes में<em&gt; ड्रोसोफिला मेलानोगास्टर</em

The fruit fly Drosophila melanogaster is one of the premier model organisms for studying the function and evolution of immune defense. Many aspects of ...

Kupffer Cell Isolation for Nanoparticle Toxicity Testing

Nanoparticle विषाक्तता परीक्षण के लिए Kupffer सेल अलगाव

The large majority of in vitro nanotoxicological studies have used immortalized cell lines for their practicality. However, results from nanoparticle ...

Neutrophil Isolation and Analysis to Determine their Role in Lymphoma Cell Sensitivity to Therapeutic Agents

न्युट्रोफिल अलगाव और विश्लेषण करने के लिए चिकित्सीय एजेंट लिंफोमा सेल संवेदनशीलता में उनकी भूमिका का निर्धारण करने के लिए

Neutrophils are the most abundant (40% to 75%) type of white blood cells and among the first inflammatory cells to migrate towards the site of ...

Evaluation of the Efficacy And Toxicity of RNAs Targeting HIV-1 Production for Use in Gene or Drug Therapy

जीन या ड्रग थेरेपी में उपयोग के लिए लक्ष्य निर्धारण एचआईवी -1 उत्पादन प्रभावकारिता और आरएनए की विषाक्तता का मूल्यांकन

Small RNA therapies targeting post-integration steps in the HIV-1 replication cycle are among the top candidates for gene therapy and have the potential ...

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

Extraction of Hemocytes from Drosophila melanogaster Larvae for Microbial Infection and Analysis

माइक्रोबियल संक्रमण और विश्लेषण के लिए Drosophila melanogaster लार्वा से Hemocytes का निष्कर्षण

During the pathogenic infection of Drosophila melanogaster, hemocytes play an important role in the immune response throughout the infection. Thus, the ...

Characterization of Thymus-dependent and Thymus-independent Immunoglobulin Isotype Responses in Mice Using Enzyme-linked Immunosorbent Assay

थाइमस-निर्भर और थाइमस-स्वतंत्र Immunoglobulin Isotype प्रतिक्रियाओं का प्रयोग चूहों में एंजाइम से जुड़े Immunosorbent परख का लक्षण वर्णन

Antibodies, also termed as immunoglobulins (Ig), secreted by differentiated B lymphocytes, plasmablasts/plasma cells, in humoral immunity provide a ...

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

Establishment of Viral Infection and Analysis of Host-Virus Interaction in Drosophila Melanogaster

drosophila melanogaster में वायरल संक्रमण और मेजबान वायरस बातचीत के विश्लेषण की स्थापना

Virus spreading is a major cause of epidemic diseases. Thus, understanding the interaction between the virus and the host is very important to extend our ...

Human Colonoid Monolayers to Study Interactions Between Pathogens, Commensals, and Host Intestinal Epithelium

मानव कोलोनॉइड Monolayers रोगजनकों के बीच बातचीत का अध्ययन करने के लिए, Commensals, और मेजबान आंत्र उपकला

Human 3-dimensional (3D) enteroid or colonoid cultures derived from crypt base stem cells are currently the most advanced ex vivo model of the intestinal ...