Name: implementation of interference reflection microscopy for label-free, high-speed imaging of microtubules
Uploaded: 2019-08-08T11:30:00
Duration: 9 min 45 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Implementation of Interference Reflection Microscopy for Label-free, High-speed Imaging of Microtubules at JoVE.com

लेखक अन्ना Luchniak और यिन-वी कुओ महत्वपूर्ण पढ़ने और प्रोटोकॉल पर टिप्पणी के लिए धन्यवाद.

<ol>
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लेखकों के हित का कोई संघर्ष नहीं है खुलासा करने के लिए.

इस प्रोटोकॉल इमेजिंग और microtubule गतिशीलता की माप के लिए IRM के सफल उपयोग का प्रदर्शन किया. ध्यान सही ढंग से रोशनी संख्यात्मक एपर्चर सेट के रूप में यह छवि विपरीत पर सबसे मजबूत प्रभाव पड़ता है दिया जाना चाहिए. इसके अलावा, उच्च संख्यात्मक एपर्चर (एनए) उद्देश्यों का उपयोग कर उच्च संकल्प / उच्च विपरीत छवियों को प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है, के रूप में उच्च एनए उद्देश्य कम एनए उद्देश्यों की तुलना में उच्च प्रकाश संग्रह शक्ति है. क्लीनर सतह और समाधान कम शोर का इस्तेमाल किया के रूप में गंदगी समाप्त होता है सतह के लिए संलग्न और जोड़ने (प्रयोग के दौरान) छवियों के लिए शोर की तरह धब्बे. एक पृष्ठभूमि छवि का अधिग्रहण महत्वपूर्ण है और साथ ही यह रोशनी inhomogeneities, स्थिर शोर और सतह अनियमितताओं को हटा.
एक सिफारिश संशोधन रोशनी पथ में एक लंबे पास फिल्टर (gt; 600 एनएम) शुरू करने के लिए है। सफेद प्रकाश स्रोतों के स्पेक्ट्रम आम तौर पर यूवी जो microtubules नुकसान कर सकते हैं में तरंगदैर्ध्य शामिल हैं. इसके अलावा, IRM के लिए लंबी लहर लंबाई का उपयोग कर काम में आता है जब फ्लोरोसेंट के साथ IRM संयोजन (उदाहरण के लिए, जब microtubule गतिशीलता पर microtubule जुड़े प्रोटीन (MAPs) के प्रभाव का अध्ययन). ध्यान रखें कि जब समय की व्यय अवधि के लिए इमेजिंग, नमूना बहाव (विशेष रूप से ऑप्टिकल अक्ष के साथ) पृष्ठभूमि विमान से छवि विमान के विचलन के कारण छवि इसके विपरीत कम हो जाती है. आधुनिक माइक्रोस्कोप अक्सर स्थिरीकरण तंत्र (उदाहरण के लिए, सही ध्यान (Nikon), निश्चित फोकस.2 (ज़िस), IX3-जेडडीसी 2 (ओलम्पस) के साथ सुसज्जित हैं। एक वैकल्पिक समाधान है कि सेटअप को निष्क्रिय रूप से या सक्रिय रूप से18 को स्थिर किया जाए या बहाव19,20,21के लिए सही किया जाए . अंत में, microtubule इसके विपरीत क्षेत्र डायाफ्राम के आकार को कम करने से बढ़ाया जा सकता है (एक 70% खोलने अच्छा विकल्प है के रूप में यह बढ़ती इसके विपरीत और देखने के आकार के क्षेत्र के बीच एक संतुलन है)15.
जबकि IRM इमेजिंग microtubules के लिए उपयुक्त है यह पर्याप्त संवेदनशील नहीं है एकल प्रोटीन का पता लगाने के लिए. इस तरह के आवेदन के लिए, iSCAT एक अधिक उपयुक्त तकनीक है. इसी तरह, फ्लोरोसेंट और iSCAT बेहतर अनुकूल हैं अगर कम से कम 10 एनएम की सटीक ट्रैकिंग की जरूरत है. IRM के लिए, मापित लंबाई ट्रैकिंग परिशुद्धता $20 दउ है जैसा कि चित्र 7में दर्शाया गया है।
सतह पराख में IRM का उपयोग microtubules से परे जा सकते हैं; उदाहरण के लिए, आणविक मोटर्स सोने नैनोकणों के साथ लेबल और ट्रैक के रूप में वे microtubules के साथ बातचीत कर सकते हैं. इसके अलावा चिंतनशील हस्तक्षेप विपरीत माइक्रोस्कोपी (आरआईसीएम)22 के रूप में जाना जाता IRM का एक और अधिक उन्नत रूप, सिद्धांत रूप में, आगे microtubules इसके विपरीत बढ़ाने के लिए और उच्च ट्रैकिंग परिशुद्धता प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।

माइक्रोट्युबकेस के लेबल-मुक्त इमेजिंग ब्याज की है क्योंकि यह छवियों में इसके विपरीत उत्पन्न करने के लिए ट्यूबुलिन के फ्लोरोसेंट लेबलिंग की आवश्यकता को दरकिनार करता है। फ्लोरोसेंट लेबलिंग में कई कमियां हैं: यह संभव नहीं है अगर प्रोटीन एकाग्रता कमहै 1 और photobleaching और photodamage अवलोकन समय सीमा। कई तकनीकों का इस्तेमाल लेबल-मुक्त माइक्रोट्यूब्यूल्स की छवि बनाने के लिए किया गया है, जिसमें वीडियो-एन्हांस्ड डिफरेंट इंटरप्रेसी डवरमाइक्रोस्कोपी (डीआईसी) और डार्कफील्ड माइक्रोस्कोपी 2,3,4,5शामिल हैं। हाल ही में, इंटरफेरोमेट्रिक प्रकीर्णन माइक्रोस्कोपी (iSCAT)6,घूर्णन-समन्वय माइक्रोस्कोपी (ROCS)7 और स्थानिक प्रकाश हस्तक्षेप माइक्रोस्कोपी (एसईपी)8का भी उपयोग किया गया है। इन सभी तकनीकों microtubules इमेजिंग करने में सक्षम हैं और microtubule गतिशीलता का अध्ययन करने के लिए मूल्यवान साबित कर दिया है. हालांकि, प्रत्येक की अपनी सीमाएं हैं। DIC में इसके विपरीत microtubule और Nomarski प्रिज्म अक्ष के बीच कोण पर निर्भर करता है.  डार्कफील्ड में, माइक्रोट्युबल संकेत अशुद्धियों या सतहों दोषों से बिखरे हुए प्रकाश द्वारा निम्नीकृत होता है। हालांकि iSCAT असाधारण संवेदनशीलता दर्शाती है (एक प्रोटीन के नीचे) और ROCS नमूना में गहरी microtubules छवि कर सकते हैं, दोनों तरीकों तकनीकी रूप से मांग कर रहे हैं, लेजर स्कैनर की आवश्यकता होती है.
इस प्रोटोकॉल दर्शाता है कि कैसे हस्तक्षेप प्रतिबिंब माइक्रोस्कोपी (IRM)9,10 microtubules के लेबल मुक्त इमेजिंग के लिए एक वैकल्पिक तकनीक के रूप में स्थापित किया जा सकता है. IRM को लागू करने के रूप में यह केवल एक मानक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के लिए एक सस्ती 50/ जब यहाँ वर्णित सॉफ्टवेयर के साथ संयोजन के रूप में इस्तेमाल किया, IRM उच्च विपरीत microtubule छवियों का उत्पादन, उच्च गति पर देखने के बड़े क्षेत्रों छवि कर सकते हैं, एक onetime संरेखण की आवश्यकता है, और आसानी से इस तरह के फ्लोरोसेंट इमेजिंग के रूप में अन्य तकनीकों के साथ जोड़ा जा सकता है.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Microscope</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>Ti-Eclipse</td>
			<td>An inverted microscope used for perfoming the expriments</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>50/50 beam splitter</td>
			<td>Chroma</td>
			<td>21000</td>
			<td>When buying make sure to choose the splitter dimensions that fit the cube used in the microscope</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>NIKON PLAN FLUOR 100X/0.5-1.3 Iris objective</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>MRH02902</td>
			<td>Imaging objective. This objective has a NA adjusting iris that was opened to NA 1.3</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mucasol universal detergent</td>
			<td>Sigma-aAldrich</td>
			<td>Z637181-2L</td>
			<td>Used for cleaning coverslips and slides</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>plastic paraffin film (commerical name Parafilm M)</td>
			<td>Sigma-aAldrich</td>
			<td>P7793</td>
			<td>Used for constructing flow channels</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-TAMRA antibody</td>
			<td>Invitrogen</td>
			<td>A-6397</td>
			<td>Used to bind TAMRA labeled molecules (e.g. microtubules) to the sample surface. RRID (AB_2536196)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Poloxamer 407 (commercial name Pluronic F-127)</td>
			<td>Sigma-aAldrich</td>
			<td></td>
			<td>Used for blocking the channel surface to prevent nonspecific binding</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>40 nm gold nanoparticles</td>
			<td>Sigma-aAldrich</td>
			<td>753637</td>
			<td>Used as a control sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>20 nm gold nanoparticles</td>
			<td>Sigma-aAldrich</td>
			<td>753610</td>
			<td>Used as a control sample</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zyla 4.2 Camera</td>
			<td>Andor</td>
			<td>Zyla 4.2</td>
			<td>2048x2048 pixles (6.5&#181;m pixel size) with quantum efficiency of 72% and 16bit dynamic range</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Feista tracking software</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>https://www.bcube-dresden.de/fiesta/wiki/FIESTA</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stabilized microtubles</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>prepared in house (see references in text)</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

implementation of interference reflection microscopy for label-free, high-speed imaging of microtubules

सतहों के निकट शुद्ध जैव अणुओं को विज़ुअलाइज़ करने के लिए कई तरीके हैं। कुल-आंतरिक प्रतिबिंब फ्लोरोसेंट (TIRF) माइक्रोस्कोपी एक सामान्य रूप से इस्तेमाल किया विधि है, लेकिन दोष है कि यह फ्लोरोसेंट लेबलिंग की आवश्यकता है, जो अणुओं की गतिविधि के साथ हस्तक्षेप कर सकते हैं. इसके अलावा, photobleaching और photodamage चिंता कर रहे हैं. माइक्रोट्युबल्स के मामले में, हमने पाया है कि टीआईआरएफ के समान गुणवत्ता की छवियों को हस्तक्षेप परावर्तन माइक्रोस्कोपी (आईआरएम) का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है। यह पता चलता है कि IRM इन विट्रो में बड़े जैव अणुओं और oligomers की गतिशीलता visualizing के लिए एक सामान्य तकनीक हो सकती है. इस पत्र में, हम बताते हैं कि कैसे एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप बस IRM छवियों को प्राप्त करने के लिए संशोधित किया जा सकता है. IRM आसान है और काफी सस्ता है इस तरह के अंतर हस्तक्षेप विपरीत माइक्रोकॉपी या interferometric प्रकीर्णन माइक्रोस्कोपी के रूप में अन्य विपरीत तकनीकों की तुलना में लागू करने के लिए. यह डार्कफील्ड माइक्रोस्कोपी की तुलना में सतह दोष और समाधान दोष के लिए भी कम संवेदनशील है। IRM का उपयोग करना, इस पेपर में वर्णित छवि विश्लेषण सॉफ़्टवेयर के साथ, दृश्य का क्षेत्र और फ़्रेम दर केवल कैमरे द्वारा सीमित है; एक sCMOS कैमरा और व्यापक क्षेत्र रोशनी microtubule लंबाई के साथ अप करने के लिए परिशुद्धता के साथ मापा जा सकता है 20 एनएम की एक बैंडविड्थ के साथ 10 हर्ट्ज.

जैसा कि ऊपर उल्लेख किया गया है, एक अच्छी तरह से संरेखित सूक्ष्मदर्शी के साथ, माइक्रोट्यूल पृष्ठभूमि घटाव के बिना दिखाई देना चाहिए (चित्र 4क)। पृष्ठभूमि को घटाना (चित्र 4ख) सूक्ष्म नलिका के विपरीत को बढ़ाता है (चित्र 4ब्) इसके विपरीत को और अधिक बढ़ाने के लिए, औसत या फूरिये फ़िल्टरिंग या दोनों का संयोजन उपयोग किया जा सकता है (चित्र 4D,F,E)। चित्रा 4जी में लाइन स्कैन छवि गुणवत्ता के वृद्धिशील सुधार को दर्शाता है। प्रत्येक प्रसंस्करण कदम के साथ पृष्ठभूमि शोर की कमी पर ध्यान दें.
समय-चूक फिल्मों से उत्पन्न माइक्रोट्युब गतिशीलता के किमोग्राफ ों के उदाहरण चित्र 5में दिखाए गए हैं। वीडियो दो फ्रेम दरों पर अधिग्रहण किया गया: 0.2 एफपीएस (धीमी) और 100 एफपीएस (तेजी से). पूर्व विकास दर को मापने के लिए उपयुक्त है, जबकि बाद संकुचन दर है कि विकास दर की तुलना में तेजी से परिमाण का एक आदेश है को मापने के लिए अधिक उपयुक्त है.
उस मामले के लिए जहाँ सूक्ष्मदर्शी स्थापित करने के लिए सोने के नैनोकणों का उपयोग किया जाता है, एक उदाहरण प्रतिबिंब चित्र 6में दर्शाया गया है। सोने के नैनोकणों निष्क्रिय सतह से जुड़े थे। जबकि 40 एनएम कणों की सिफारिश कर रहे हैं, यह भी 20 एनएम कणों छवि के लिए संभव है, अभी तक एक कम विपरीत पर.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59520/59520fig1.jpg"> चित्र 1. IRM के योजनाबद्ध प्रतिनिधित्व| (क) प्रकाश स्रोत से एपि-प्रदीपन 50/50 दर्पण तक पहुंचने से पहले एपर्चर डायाफ्राम से गुजरता है। एपर्चर डायाफ्राम बीम चौड़ाई इस प्रकार रोशनी एनए सेट करता है। 50/50 दर्पण आंशिक रूप से नमूना रोशन करने के उद्देश्य के लिए प्रकाश को दर्शाता है. प्रकाश नमूना से परिलक्षित एकत्र की है और फिर कैमरा चिप पर पेश (ट्यूब लेंस द्वारा) जहां यह छवि उत्पन्न करने के लिए हस्तक्षेप. छवि कंट्रास्ट कांच/जल अंतराफलक (I1) से परावर्तित प्रकाश के बीच हस्तक्षेप का परिणाम है और जल/माइक्रोट्युबल इंटरफ़ेस (I2) से परावर्तित प्रकाश है। microtubule/सतह दूरी (ज) पर निर्भर करता है, I1 और I2 के बीच ऑप्टिकल पथ अंतर एक रचनात्मक (ब्राइट संकेत) या विनाशकारी (अंधेरे संकेत) या बीच में कुछ भी में परिणाम होगा. उदाहरण के लिए, यदि 600 एनएम की तरंगदैर्ध्य वाले प्रकाश का उपयोग इमेजिंग के लिए किया जाता है, तो इसके विपरीत अंधेरे और उज्ज्वल के बीच स्विच हो जाएगा जब माइक्रोट्युबल ऊंचाई लगभग 100 एनएम से बदलती है। तारांकन संयुग्मी विमानों को इंगित करता है(15से संशोधित )। (बी) 50/50 दर्पण स्थापना का उदाहरण. एक उपयुक्त फिल्टर घन खोला गया था और दर्पण डाला गया था, जहां एक dichroic दर्पण आमतौर पर बैठता है. निर्माता के निर्देशों के अनुसार दर्पण उन्मुख था। फिर घन फिल्टर पहिया जो माइक्रोस्कोप को वापस डाला गया था में डाला गया था (नहीं दिखाया). स्थापना के दौरान, दस्ताने इस्तेमाल किया गया, और दर्पण केवल किनारों द्वारा आयोजित किया गया था. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/59520fig1large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59520/59520fig2.jpg"> चित्र 2. इष्टतम एपर्चर डायाफ्राम सेटिंग. (क) देखने का एक ही क्षेत्र पृष्ठभूमि घटाव के बिना अलग एपर्चर डायाफ्राम उद्घाटन पर छवि थी. नेत्रहीन, इसके विपरीत वृद्धि हुई के रूप में एपर्चर डायाफ्राम के आकार में वृद्धि हुई जब तक यह एक पठार तक पहुँच गया और बाद में नीचा शुरू कर दिया. यह (बी) SBR माप पृष्ठभूमि घटाया छवियों द्वारा पुष्टि की गई थी. त्रुटि पट्टियाँ मानक विचलन हैं.  स्केल बार 500 डिग्री (एडी) और 3 डिग्री (माइक्रोट्युबल्स) हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/59520fig2large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59520/59520fig3.jpg"> चित्र 3. सिग्नल-टू-बैकग्राउंड शोर अनुपात को मापने। माइक्रोट्यूल ब्याज के क्षेत्रों में अलग-अलग थे। ब्याज के प्रत्येक क्षेत्र पृष्ठभूमि से microtubule अलग करने के लिए सीमा निर्धारित किया गया था. माइक्रोट्युबल के पार एक लाइन स्कैन से औसत माइक्रोट्युबल संकेत प्राप्त किया गया था। स्कैन लाइन चौड़ाई microtubule लंबाई के बराबर करने के लिए सेट किया गया था। इस तरह, स्कैन पर हर बिंदु microtubule अक्ष है कि उस बिंदु के समानांतर हैं साथ सभी पिक्सल के संकेतों का एक औसत है. पृष्ठभूमि शोर सीमा से नीचे सभी पिक्सल के मानक विचलन काट रहा है.  <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/59520fig3large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59520/59520fig4.jpg"> चित्र 4. छवि प्रसंस्करण. कच्चे चित्र प्राप्त करने के बाद (A), पृष्ठभूमि (B) को माइक्रोट्युबल कंट्रास्ट को बढ़ाने के लिए घटाया गया था (C) इसके विपरीत को और बेहतर बनाने के लिए छवियों को या तो औसत (डी) या फूरिये फ़िल्टर किए गए (ई) या दोनों (एफ)थे। लाइन स्कैन (G), जिसका स्थान डैश्ड लाल रेखा द्वारा इंगित किया गया है (A) रंग में विभिन्न छवियों से मिलान कर रहे हैं (A) करने के लिए (F). निचले कोने पर संख्या औसत SBRs देखने के पूरे क्षेत्र के लिए मापा जाता है. स्केल बार 5 डिग्री (15से संशोधित ) है . <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/59520fig4large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59520/59520fig5.jpg"> चित्र 5. kymographs के उदाहरण. (क) 0.2 एफपीएस पर अधिग्रहीत समय-चूक फिल्मों से उत्पन्न माइक्रोट्युबल गतिशीलता के किमोग्राफ उदाहरण। (ख) किमोग्राफ में 100 एफपीएस पर प्राप्त फिल्म से उत्पन्न संकुचन घटना का एक उदाहरण दर्शाया गया है। डैश्ड रेखाएँ बीजों को चिह्नित करती हैं। <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/59520fig5large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59520/59520fig6.jpg"> चित्र 6. IRM के साथ छवि सोने नैनोकणों का उदाहरण। आकार 20 और 40 एनएम के सोने के नैनोकणों निष्क्रिय सतह से जुड़े थे। 10 छवियों का अधिग्रहण किया गया. पृष्ठभूमि घटाव के बाद, छवियों के विपरीत बढ़ाने के लिए औसत थे. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/59520fig6large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59520/59520fig7.jpg"> चित्र 7. IRM छवियों में Microtubule लंबाई ट्रैकिंग परिशुद्धता. स्थिर microtubules (यानी, निश्चित लंबाई) 100 एफपीएस पर 200x छवि थी तो इसके विपरीत बढ़ाने के लिए 10 एफपीएस के लिए औसत. इसके बाद, माइक्रोट्युब्यूल्स की लंबाई को फिएस्टा17 ट्रैकिंग सॉफ्टवेयर का उपयोग करके मापा गया। प्रत्येक माइक्रोट्युबल के लिए माध्य लंबाई और मानक विचलन की गणना की गई थी जैसा कि चित्र में दर्शाया गया है (डैश्ड रेखा माध्य का प्रतिनिधित्व करती है और ठोस लाल रेखाएँ मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करती हैं, लंबाई ] 3971 ] 20 दउ। समग्र ट्रैकिंग परिशुद्धता सभी ट्रैक किए गए microtubules के मानक विचलन का औसत था (द ] 6 microtubules x 20 डेटा अंक ] 120 डेटा अंक). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/59520fig7large.jpg" target="_blank">कृपया इस चित्र का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहाँ क्लिक करें.</a>
अनुपूरक फाइल 1. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/Multi_Kymo.ijm" target="_blank">इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहाँ क्लिक करें.</a> 
अनुपूरक फाइल 2. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59520/Kymo_Analysis.ijm" target="_blank">इस फ़ाइल को डाउनलोड करने के लिए कृपया यहाँ क्लिक करें.</a>

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Implementation of Interference Reflection Microscopy for Label-free, High-speed Imaging of Microtubules

इस प्रोटोकॉल लेबल मुक्त, उच्च विपरीत, microtubules के उच्च गति इमेजिंग इन विट्रो सतहों पर परख का उपयोग करने के लिए एक मानक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप पर हस्तक्षेप प्रतिबिंब माइक्रोस्कोपको लागू करने के लिए एक गाइड है.

लेबल-मुक्त, माइक्रोट्यूब्यूल्स की उच्च गति इमेजिंग के लिए हस्तक्षेप परावर्तन माइक्रोस्कोपी का कार्यान्वयन

There are several methods for visualizing purified biomolecules near surfaces. Total-internal reflection fluorescence (TIRF) microscopy is a commonly used ...

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The Cytoskeleton II: Microtubules and Intermediate Filaments

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Non-contact, Label-free Monitoring of Cells and Extracellular Matrix using Raman Spectroscopy

गैर संपर्क, सेल और बाह्य मैट्रिक्स का उपयोग करते हुए रमन स्पेक्ट्रोस्कोपी का लेबल मुक्त निगरानी

Non-destructive, non-contact and label-free technologies to monitor cell and tissue cultures are needed in the field of biomedical research.1-5 However, ...

Visualization of Cortex Organization and Dynamics in Microorganisms, using Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

प्रांतस्था संगठन और गतिशीलता के सूक्ष्मजीवों में दृश्य, कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी का उपयोग

TIRF microscopy has emerged as  a powerful imaging technology to study spatio-temporal dynamics of fluorescent molecules  in vitro and in living cells1. ...

A Microfluidic-based Electrochemical Biochip for Label-free DNA Hybridization Analysis

लेबल मुक्त डीएनए संकरण विश्लेषण के लिए एक microfluidic आधारित विद्युत Biochip

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A Label-free Technique for the Spatio-temporal Imaging of Single Cell Secretions

सिंगल सेल स्राव के spatio- लौकिक इमेजिंग के लिए एक लेबल मुक्त तकनीक

Inter-cellular communication is an integral part of a complex system that helps in maintaining basic cellular activities. As a result, the malfunctioning ...

Label-free Single Molecule Detection Using Microtoroid Optical Resonators

Microtoroid ऑप्टिकल Resonators का उपयोग लेबल मुक्त एकल अणु का पता लगाने

Detecting small concentrations of molecules down to the single molecule limit has impact on areas such as early detection of disease, and fundamental ...

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Brillouin छितराया विश्लेषण के लिए हाई स्पीड उप-गीगा स्पेक्ट्रोमीटर

The goal of this protocol is to build a parallel high-extinction and high-resolution optical Brillouin spectrometer. Brillouin spectroscopy is a ...

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कई रंगों के साथ उच्च गति से संरचित रोशनी TIRF माइक्रोस्कोपी के लिए एक गाइड

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PIP-on-a-chip: A Label-free Study of Protein-phosphoinositide Interactions

पीआईपी-ऑन-ए-चिप: प्रोटीन-फॉस्फोइनॉसाइटिड इंटरैक्शन के लेबल-मुक्त अध्ययन

Numerous cellular proteins interact with membrane surfaces to affect essential cellular processes. These interactions can be directed towards a specific ...

Assessing Collagen and Elastin Pressure-dependent Microarchitectures in Live, Human Resistance Arteries by Label-free Fluorescence Microscopy

का आकलन कोलेजन और Elastin दबाव पर निर्भर Microarchitectures रहते हैं, मानव प्रतिरोध धमनियों में लेबल से मुक्त प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी

The pathogenic contribution of resistance artery remodeling is documented in essential hypertension, diabetes and the metabolic syndrome. Investigations ...

Visualizing Adhesion Formation in Cells by Means of Advanced Spinning Disk-Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy

उन्नत कताई डिस्क के माध्यम से कोशिकाओं में आसंजन गठन visualizing-कुल आंतरिक प्रतिबिंब प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी

In living cells, processes such as adhesion formation involve extensive structural changes in the plasma membrane and the cell interior. In order to ...