Name: genotyping of sea anemone during early development
Uploaded: 2019-05-13T14:30:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Genotyping of Sea Anemone during Early Development at JoVE.com

Vi tackar anonyma granskare för kommentarer om den tidigare versionen av manuskriptet, vilket förbättrade manuskriptet. Detta arbete stöddes av medel från University of Arkansas.

1. induktion av lek, provrörsbefruktning och de-jellying 
<ol><li>Upprätthålla Nematostella vectensis i havsvatten med en salthalt av 12 promille (ppt) i mörker vid 16 ° c, utfodring Artemia dagligen.</li>
	<li>På dagen före lek induktion, placera djuren i en temperatur-och ljus-kontrollerad inkubator. Program mera inkubatorn så att djuren utsätts för 8 h ljus vid 25 ° c. Tillval: mata en liten bit (< 1 mm3) ostron till enskilda djur innan du placerar dem i inkubatorn f?...

<ol>
	<li>Medina, M., Collins, A. G., Silberman, J. D., Sogin, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evaluating+hypotheses+of+basal+animal+phylogeny+using+complete+sequences+of+large+and+small+subunit+rRNA.">Evaluating hypotheses of basal animal phylogeny using complete sequences of large and small subunit rRNA.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 98 (17), 9707-9712 (2001).</li><li>Erwin, D. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Cambrian+Conundrum:+Early+Divergence+and+Later+Ecological+Success+in+the+Early+History+of+Animals.">The Cambrian Conundrum: Early Divergence and Later Ecological Success in the Early History of Animals.</a> Science. 334 (6059), 1091-1097 (2011).</li><li>Putnam, N. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Sea+anemone+genome+reveals+ancestral+eumetazoan+gene+repertoire+and+genomic+organization.">Sea anemone genome reveals ancestral eumetazoan gene repertoire and genomic organization.</a> Science. 317 (5834), 86-94 (2007).</li><li>Magie, C. R., Daly, M., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Gastrulation+in+the+cnidarian+Nematostella+vectensis+occurs+via+invagination+not+ingression.">Gastrulation in the cnidarian Nematostella vectensis occurs via invagination not ingression.</a> Developmental Biology. 305 (2), 483-497 (2007).</li><li>Nakanishi, N., Martindale, M. Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR+knockouts+reveal+an+endogenous+role+for+ancient+neuropeptides+in+regulating+developmental+timing+in+a+sea+anemone.">CRISPR knockouts reveal an endogenous role for ancient neuropeptides in regulating developmental timing in a sea anemone.</a> eLife. 7, e39742 (2018).</li><li>He, S. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+axial+Hox+code+controls+tissue+segmentation+and+body+patterning+in+Nematostella+vectensis.">An axial Hox code controls tissue segmentation and body patterning in Nematostella vectensis.</a> Science. 361 (6409), 1377 (2018).</li><li>Ikmi, A., McKinney, S. A., Delventhal, K. M., Gibson, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=TALEN+and+CRISPR/Cas9-mediated+genome+editing+in+the+early-branching+metazoan+Nematostella+vectensis.">TALEN and CRISPR/Cas9-mediated genome editing in the early-branching metazoan Nematostella vectensis.</a> Nature Communications. 5, 5486 (2014).</li><li>Servetnick, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cas9-mediated+excision+of+Nematostella+brachyury+disrupts+endoderm+development,+pharynx+formation+and+oral-aboral+patterning.">Cas9-mediated excision of Nematostella brachyury disrupts endoderm development, pharynx formation and oral-aboral patterning.</a> Development. 144 (16), 2951-2960 (2017).</li><li>Kraus, Y., Aman, A., Technau, U., Genikhovich, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pre-bilaterian+origin+of+the+blastoporal+axial+organizer.">Pre-bilaterian origin of the blastoporal axial organizer.</a> Nature Communications. 7, 11694 (2016).</li><li>Fritzenwanker, J. H., Genikhovich, G., Kraus, Y., Technau, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Early+development+and+axis+specification+in+the+sea+anemone+Nematostella+vectensis.">Early development and axis specification in the sea anemone Nematostella vectensis.</a> Developmental Biology. 310 (2), 264-279 (2007).</li><li>Lee, P. N., Kumburegama, S., Marlow, H. Q., Martindale, M. Q., Wikramanayake, A. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Asymmetric+developmental+potential+along+the+animal-vegetal+axis+in+the+anthozoan+cnidarian,+Nematostella+vectensis,+is+mediated+by+Dishevelled.">Asymmetric developmental potential along the animal-vegetal axis in the anthozoan cnidarian, Nematostella vectensis, is mediated by Dishevelled.</a> Developmental Biology. 310 (1), 169-186 (2007).</li><li>Shinzato, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+the+Acropora+digitifera+genome+to+understand+coral+responses+to+environmental+change.">Using the Acropora digitifera genome to understand coral responses to environmental change.</a> Nature (London). 476 (7360), 320-323 (2011).</li><li>Gold, D. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+genome+of+the+jellyfish+Aurelia+and+the+evolution+of+animal+complexity.">The genome of the jellyfish Aurelia and the evolution of animal complexity.</a> Nature Ecology &#38; Evolution. 3 (1), 96-104 (2019).</li><li>Clevesa, P. A., Strader, M. E., Bay, L. K., Pringle, J. R., Matz, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=CRISPR/Cas9-mediated+genome+editing+in+a+reef-building+coral.">CRISPR/Cas9-mediated genome editing in a reef-building coral.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 115 (20), 5235-5240 (2018).</li><li>Momose, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=High+doses+of+CRISPR/Cas9+ribonucleoprotein+efficiently+induce+gene+knockout+with+low+mosaicism+in+the+hydrozoan+Clytia+hemisphaerica+through+microhomology-mediated+deletion.">High doses of CRISPR/Cas9 ribonucleoprotein efficiently induce gene knockout with low mosaicism in the hydrozoan Clytia hemisphaerica through microhomology-mediated deletion.</a> Scientific Reports. 8, 11734 (2018).</li><li>Artigas, G. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+gonad-expressed+opsin+mediates+light-induced+spawning+in+the+jellyfish+Clytia.">A gonad-expressed opsin mediates light-induced spawning in the jellyfish Clytia.</a> eLife. 7, e29555 (2018).</li></ol>

Beskrivs här ett PCR-baserat protokoll till genotyp ett enda hav Anemon embryo utan att offra djuret. Efter lek och de-jellying, de befruktade äggen får utvecklas till gastrulae. Aboral regionen av varje gastrulastadium embryo avlägsnas kirurgiskt, och den isolerade aboral vävnad används för efterföljande genomisk DNA-extraktion, medan de återstående efter operationen embryon läka och fortsätta utvecklingen. GDNA-extrakt används sedan för en PCR-analys för att bestämma genotypen för varje embryo. Denna m...

Cnidarians representerar en mångsidig grupp av djur som inkluderar maneter, koraller och havsöroner. De är diploblaster, består av ektoderm och endoderm som separeras av en extracellulär matris (mesoglea). Cnidaria är en syster grupp till speciose Bilateria, som traditionella djur modellerar liksom Drosophila och mus hör hemma till1. Dessutom är Cnidaria-Bilateria divergensen tros ha inträffat i pre-kambriska perioden2. Som sådan, jämförande studier av koraller och bilaterians är viktiga för att få insikter i biologi deras senaste gemensamma förfader. Nyligen har komparativ genomik visat att koraller och bilaterians dela många utvecklingsverktyg gener såsom notch och bhlh, vilket innebär att deras gemensamma förfader redan hade dessa gener3. Men den roll som dessa utvecklingsverktyg gener i den sista gemensamma förfader Cnidaria och Bilateria är jämförbart mindre väl förstått. För att lösa detta problem är det viktigt att studera hur dessa djupt bevarade gener fungerar i cnidarians.
En av de framväxande artikel om genetiska modellerna är Robotskapade stubbar om Nematostella vectensis. Dess genom har sekvenserat3, och en mängd olika genetiska verktyg, inklusive morpholino-medierad Gene knockdown, meganuclease-medierad transgenes, och CRISPR-Cas9-medierade genknockins och Knockouts, finns nu tillgängliga för användning i detta djur. Dessutom är Nematostella utveckling relativt väl förstått. Under embryogenes, gastrulation sker genom invagination4, och embryot utvecklas till en fri-simning planula larv. Planula förvandlas därefter till ett oskaftade polyp med en mun och cirkumoral tentakler. Den polyp växer sedan och når sexuell mognad.
CRISPR-Cas9-medierad riktad mutagenes används nu rutinmässigt för att studera genfunktion i Nematostella vectensis5,6,7,8,9. För att generera knockout mutanter i Nematostella, en cocktail som innehåller Locus-specifika Single-guide rnas och Endonuklease Cas9 protein injiceras först i obefruktad eller befruktade ägg för att producera F0 grundare djur som typiskt visar mosaicism. F0 djur höjs därefter till sexuell mognad och korsas med varandra för att producera en F1-population, varav en delmängd kan vara knockout mutanter6. Alternativt kan sexuellt mogna F0 djur korsas med vildtyp djur för att generera F1 heterozygot djur, och F1 heterozygoter som bär en knockout allel i Locus av intresse kan sedan korsas med varandra för att producera F2 avkomma, en fjärdedel som förväntas bli knockout mutanter5. Båda metoderna kräver en metod för att identifiera knockout mutanter från en genetiskt heterogen population. Polyp tentakler kan användas för att extrahera genomiskt DNA för genotypning6,7. Men i de fall där utvecklings funktionen av genen av intresse utreds och mutanta embryon inte når polyp Stadium (dvs. på grund av larv dödlighet i samband med mutationen), knockout mutanter måste identifieras tidigt i Ontogeni. Beskrivs här är ett PCR-baserat protokoll till genotyp enskilda djur på gastrulastadium scenen utan att offra djuret, vilket möjliggör identifiering av knockout mutanter från en genetiskt heterogena population av embryon. Varaktigheten av hela genotypning processen beror på antalet embryon som skall screenas, men det minimalt kräver 4-5 h.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Drosophila Peltier Refrigerated Incubator</td>
			<td>Shellab</td>
			<td>SRI6PF</td>
			<td>Used for spawning induction</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Instant ocean sea salt</td>
			<td>Instant ocean</td>
			<td>138510</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Brine shrimp cysts</td>
			<td>Aquatic Eco-Systems, Inc.</td>
			<td>BS90</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>L-Cysteine Hydrochloride</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>C7352</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Standard Orbital Shaker, Model 3500</td>
			<td>VWR</td>
			<td>89032-092</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIS-HCl, 1M, pH8.0</td>
			<td>QUALITY BIOLOGICAL</td>
			<td>351-007-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Potassium chloride</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH9258</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA, 0.5M pH8</td>
			<td>VWR</td>
			<td>BDH7830-1</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tween 20</td>
			<td>Sigma Aldrich</td>
			<td>P9416</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Nonidet-P40 Substitute</td>
			<td>US Biological</td>
			<td>N3500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Proteinase K solution (20 mg/mL), RNA grade</td>
			<td>ThermoFisher</td>
			<td>25530049</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agarose</td>
			<td>VWR</td>
			<td>710</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Micro Dissecting needle holder</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6060</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tungsten dissecting needle</td>
			<td>Roboz</td>
			<td>RS-6063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PCR Eppendorf Mastercycler Thermal Cyclers</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>E6336000024</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phusion High-Fidelity DNA polymerase</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>M0530L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>dNTP mix</td>
			<td>New England BioLabs</td>
			<td>N0447L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>GLWamide universal forward primer</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;- CATGCGGAGACCAAGCGCAAGGC-3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse primer specific to glw-a</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;-CCAGATGCCTGGTGATAC-3&#8217;</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Reverse primer specific to glw-c </td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>5&#8217;- CGGCCGGCGCATATATAG-3&#8217;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

genotyping of sea anemone during early development

Beskrivs här är ett PCR-baserat protokoll till genotyp den gastrulastadium skede embryot av Robotskapade stubbar om artikel om Nematostella vectensis utan att offra livet av djuret. Efter in vitro -fertilisering och de-jellying, zygoter får utvecklas för 24 h vid rumstemperatur för att nå början till mitten av gastrula skede. De gastrulastadium embryona placeras sedan på en aguppstod gel säng i en petriskål som innehåller havsvatten. Under dissekera Mikroskop, en Volfram nål används för att kirurgiskt separera ett aboral vävnad fragment från varje embryo. Efter operationen embryon får sedan läka och fortsätta utvecklingen. Genomiskt DNA extraheras från det isolerade vävnads fragmentet och används som mall för Locus-specifik PCR. Genotypen kan bestämmas utifrån storleken på PCR-produkter eller förekomst/frånvaro av allelespecifika PCR-produkter. Efter operationen embryon sorteras sedan efter genotyp. Varaktigheten av hela genotypningen beror på antalet embryon som ska screenas, men det kräver minimalt 4 – 5 timmar. Denna metod kan användas för att identifiera knockout-mutanter från en genetiskt heterogen population av embryon och möjliggör analyser av fenotyper under utvecklingen.

Den Nematostella arvsmassan har en enda Locus som kodar ett prekursor protein för neuropeptid Glwamid. Tre knockout Mutant alleler på denna Locus (GLW-a, GLW-b, och GLW-c) har tidigare rapporterats5. Fyra heterozygot män som bär en vildtyp allel (+) och knockout allel GLW-cvid glwamide Locus (genotyp: +/GLW-c) korsades med en heterozygot hona bär en vild-typ all...

Watch this Scientific Journal Video about Genotyping of Sea Anemone during Early Development at JoVE.com

Genotyping of Sea Anemone during Early Development

Genotypning av Havanemon under tidig utveckling

Målet med detta protokoll är att genotyp havanemon Nematostella vectensis under gastrulation utan att offra embryot.

Described here is a PCR-based protocol to genotype the gastrula stage embryo of the anthozoan cnidarian Nematostella vectensis without sacrificing the ...

Detta protokoll gör det möjligt för en forskare att identifiera mutanta havsanemoner under tidig embryogenesis så att post-embryonal utvecklingsmotyp kan analyseras. Den största fördelen med denna teknik är att den kan användas för att genotyp enskilda havsanemoner tidigt in ontogeny utan att offra livet av djuret. Demonstrera detta förfarande kommer att Miguel Silva, en doktorand från mitt laboratorium.Dagen före lekinduktion, placera anemon nematostella vectensis i en temperatur-och ljus-kontrollerade inkubator, programmering inkubatorn så att djuren utsätts för åtta timmars ljus vid 25 grader Celsius. På följande dag, ta bort djuren från inkubatorn och lämna dem på en bänk i rumstemperatur med ljuset på för att möjliggöra lek, som kommer att ske inom de följande en och en halv till två timmar. Använd en överföringspipett som är spets skärs för att förstora öppningen för att placera äggpaket från den kvinnliga behållaren i en spermieinnehållande hanbehållare och lämna dem i hanbehållaren i minst 15 minuter för att möjliggöra befruktning.Efter befruktning, att dejelly ägget paket, placera dem i havsvatten som innehåller 3%cystein på ett glas Petri skålen och försiktigt agitera på en shaker i 12 minuter. Sedan bryta upp klumpar med en plastpipett och fortsätta att agitera i ytterligare två till tre minuter tills helt dejellied. Håll de befruktade äggen på samma maträtt vid 16 grader Celsius eller vid rumstemperatur.Nästa dag, förbereda DNA extraktion buffert som beskrivs i manuskriptet, blanda väl genom att vortexa, och aliquot det i PCR-rör genom att lägga till 20 mikroliter till varje rör. Lös 1%agaros i havsvatten, häll den i en petriskål för att täcka botten, och svalna på en bänk för att göra en gel säng. Täck gel bädden med färskt havsvatten.Överför 24-timmars efterbefruktning embryon med hjälp av en pipett i agaros gel sänginnehållande Petriskål. Sätt in en tungsten nål i ett behov hållare och sterilisera genom att doppa sin spets i alkohol och placera den i lågor för att bränna bort alkoholen. Under en dissekera mikroskop, gör en depression på agaros genom att använda volfram nålen för att ta bort en bit yta uppstod om storleken på ett embryo som ska manipuleras.Sedan, med hjälp av volfram nål, placera embryot i depression med sin laterala sida nedåt för att begränsa förflyttning av embryot för mikrokirurgi. För att kunna utföra en lyckad operation är det viktigt att begränsa embryots rörelse. Med volfram nålen, kirurgiskt ta bort en bit av aboral vävnad längs den muntliga aboral axeln, som ligger mittemot den muntliga blastoporal öppning.Med en P20-pipett överför du den isolerade aboralvävnaden till ett PCR-rör som innehåller 20 mikroliter av DNA-extraktionsbuffert. Överför embryot efter operationen till en brunn av en 24-brunnsplatta som innehåller minst 500 mikroliter av färskt havsvatten. Och placera plattan som innehåller post-kirurgi embryon i en inkubator på 16 grader Celsius tills genotypning är klar.För att extrahera genomiskt DNA från enstaka embryon, först kort spinn ner PCR rören som innehåller DNA extraktion buffert och isolerade embryonala vävnader med hjälp av en mini centrifug. Sedan inkubera rören på 55 grader Celsius i tre timmar medan virvelning i 30 sekunder var 30 minuter för att säkerställa upplösning av cellklump och förbättra celllys. Efter inaktivera proteinas K vid 95 grader Celsius i fyra minuter, inrätta en PCR-reaktion med extraherade genomiska DNA som en mall för att förstärka locus av intresse.Design önskade grund- och urstämda som beskrivs i manuskriptet. Sätt upp en 20 microliter PCR reaktion. Efter avslutad PCR, kör agarosgelelektrofores för att bestämma storlek och närvaro eller frånvaro av PCR-produkter, se till att justera tillståndet för agarosgelelektrofores beroende på den förväntade storleken på PCR-produkter.Använd PCR-resultat avseende storlek och närvaro eller frånvaro eller PCR-produkter för att tilldela varje postkirurgisk embryo genotyp och sortera sedan embryon efter deras genotyp. Nematostellagenomet har en enda locus som kodar ett prekursorprotein för neuropeptiden, GLWamide. Tre knockout mutant alleler på locus har tidigare rapporterats.PCR resultat från slumpmässigt provsmakade embryon bland avkomman av en F1 korsning mellan en heterozygous hona som bär en A knockout allel och heteroz heterygous hanar bär en C knockout allel visar olika genotyper. Embryon ett och två visar ett enda PCR-band som motsvarar den förväntade storleken på A knockout allel. Embryon tre och sex visar två PCR-band med de förväntade storlekarna för knockout allelerna A och C.Embryons fyra, sju och åtta visar ett enda PCR-band som motsvarar den förväntade storleken på C knockout allel.Embryo 5 visar inga band, vilket tyder på bristen på primer bindning. För att utesluta möjligheten av genomisk DNA extraktion misslyckande, en annan PCR var köras med hjälp av en omvänd primer som kan binda till vilda typ sekvens. Där en PCR-produkt av förväntad storlek upptäcktes, lyckades genomisk DNA-extraktion.Ingen produkt föreslog ett fel i extraktionen. Även om detta protokoll är utformat för embryon från havsanemoner, är det säkert möjligt att tillämpa denna metod på andra cnidarianer, såsom koraller och maneter, där genomisk information och embryon är tillgängliga. Efter detta förfarande, de identifierade mutanter används för att bedöma utvecklingsmässiga fenotyp.Till exempel kan histologiska tekniker såsom immunfärgning användas för att bedöma defekter i morfologi, medan in situ-hybridisering, realtime kvantitativa RT-PCR och RNA-seq kan användas för att bedöma defekter i genuttryck. Även, live imaging kan användas för att bedöma defekter i beteende under post-embryonal utveckling, såsom i larver eller i tidiga polyper.

Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Protocols for Obtaining Zygotic and Somatic Embryos for Studying the Regulation of Early Embryo Development in the Model Legume Medicago truncatula

Protocols for Obtaining Zygotic and Somatic Embryos for Studying the Regulation of Early Embryo Development in the Model Legume Medicago truncatula

Protokoll för att erhålla Zygotic och somatiska embryon för att studera reglering av tidig embryoutveckling i Model baljväxter<em&gt; Medicago truncatula</em

Early embryogenesis starting from a single cell zygote goes through rapid cell division and morphogenesis, and is morphologically characterized by ...

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transcriptome Profiling of In-Vivo Produced Bovine Pre-implantation Embryos Using Two-color Microarray Platform

Transkriptom Profilering av<em&gt; In-Vivo</em&gt; Producerad Bovina Preimplantatorisk embryon med hjälp av två-färg microarray plattform

Early embryonic loss is a large contributor to infertility in cattle. Moreover, bovine becomes an interesting model to study human preimplantation embryo ...

Studying Wnt Signaling During Patterning of Conducting Airways

Studera Wnt Signaling Under Mönstring av ledande Airways

Wnt signaling pathways play critical roles during development of the respiratory tract. Defining precise mechanisms of differentiation and morphogenesis ...

Inducing Complete Polyp Regeneration from the Aboral Physa of the Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis

Inducing Complete Polyp Regeneration from the Aboral Physa of the Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis

Inducerande Komplett Polyp Regenerering från Aboral physa av Nematostella vectensis<em&gt; Nematostella vectensis</em

Cnidarians, and specifically Hydra, were the first animals shown to regenerate damaged or severed structures, and indeed such studies arguably launched ...

The Power of Simplicity: Sea Urchin Embryos as in Vivo Developmental Models for Studying Complex Cell-to-cell Signaling Network Interactions

The Power of Simplicity: Sea Urchin Embryos as in Vivo Developmental Models for Studying Complex Cell-to-cell Signaling Network Interactions

The Power of Enkelhet: Sea Urchin embryon som<em&gt; In vivo</em&gt; Utvecklings modeller för att studera komplexa cell till cellsignalering Network Interactions

Remarkably few cell-to-cell signal transduction pathways are necessary during embryonic development to generate the large variety of cell types and ...

Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Light-mediated Reversible Modulation of the Mitogen-activated Protein Kinase Pathway during Cell Differentiation and Xenopus Embryonic Development

Ljusmedierad reversibel modulering av den mitogenaktiverade proteinkinasvägen under celldifferentiering och<em&gt; Xenopus</em&gt; Embryonisk utveckling

Kinase activity is crucial for a plethora of cellular functions, including cell proliferation, differentiation, migration, and apoptosis. During early ...

Visualization of Cellular Electrical Activity in Zebrafish Early Embryos and Tumors

Visualisering av cellulära elektrisk aktivitet i zebrafiskar tidiga embryon och tumörer

Bioelectricity, endogenous electrical signaling mediated by ion channels and pumps located on the cell membrane, plays important roles in signaling ...

Analysis of Cardiac Chamber Development During Mouse Embryogenesis Using Whole Mount Epifluorescence

Analys av hjärtats kammare utveckling under musen embryogenes använder hela Mount Epifluorescence

The goal of this protocol is to describe a method for the dissection of mouse embryos and visualization of embryonic mouse ventricular chambers during ...

Genotyping and Quantification of In Situ Hybridization Staining in Zebrafish

Genotypning och kvantifiering av In Situ Hybridisering Färgning i Zebrafish

In situ hybridization (ISH) is an important technique that enables researchers to study mRNA distribution in situ and has been a critical technique in ...

Preparation of Small RNA Libraries for Sequencing from Early Mouse Embryos

Beredning av små RNA-bibliotek för sekvensering från tidiga musembryon

MicroRNAs (miRNAs) are important for the complex regulation of cell fate decisions and developmental timing. In vivo studies of the contribution of miRNAs ...