Name: labeling of blood vessels in the teleost brain and pituitary using cardiac perfusion with a dii-fixative
Uploaded: 2019-06-13T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Labeling of Blood Vessels in the Teleost Brain and Pituitary Using Cardiac Perfusion with a DiI-fixative at JoVE.com

نشكر الدكتور شينجي كاندا لإظهار التروية القلبية مع الحل المثبت في ميداكا ، السيدة لورديس كارو G تان للمساعدة في تربيه ميداكا ، والسيد أنتوني بلتيير للرسوم التوضيحية. تم تمويل هذا العمل من قبل NMBU ومجلس البحوث في النرويج ، ومنح عدد 248828 (برنامج الحياة الرقمية النرويج).

تم تنفيذ جميع التعامل مع الماشية وفقا لتوصيات لرعاية ورعاية البحوث الحيوانية في الجامعة النرويجية لعلوم الحياة ، وتحت اشراف المحققين المخولين.
1. اعداد الاداات والحلول
<ol><li>اعداد الحل الأسهم ديي تذويب 5 ملغ من الكريستال اردي في 1.5 mL أنبوب من البلاستيك مع 1 مل من 96 ٪ EtOH. دوامه ?...

<ol>
	<li>Nishida, N., Yano, H., Nishida, T., Kamura, T., Kojiro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+cancer.">Angiogenesis in cancer.</a> Vascular Health and Risk Management. 2 (3), 213-219 (2006).</li><li>Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+morphogenesis+and+the+formation+of+vascular+networks.">Vascular morphogenesis and the formation of vascular networks.</a> Developmental Cell. 6 (4), 479-482 (2004).</li><li>Magistretti, P. J., Zigmond, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Brain energy metabolism in Fundamental neuroscience. , 389-413 (1999).</li><li>Weltzien, F. A., Andersson, E., Andersen, O., Shalchian-Tabrizi, K., Norberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain-pituitary-gonad+axis+in+male+teleosts,+with+special+emphasis+on+flatfish+(Pleuronectiformes).">The brain-pituitary-gonad axis in male teleosts, with special emphasis on flatfish (Pleuronectiformes).</a> Comparative Biochemistry and Physiology - Part A: Molecular &amp; Integrative Physiology. 137 (3), 447-477 (2004).</li><li>Ooi, G. T., Tawadros, N., Escalona, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+cell+lines+and+their+endocrine+applications.">Pituitary cell lines and their endocrine applications.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 228 (1-2), 1-21 (2004).</li><li>Knigge, K. M., Scott, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+median+eminence.">Structure and function of the median eminence.</a> American Journal of Anatomy. 129 (2), 223-243 (1970).</li><li>Ball, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+control+of+the+pars+distalis+in+fishes,+amphibians,+and+reptiles.">Hypothalamic control of the pars distalis in fishes, amphibians, and reptiles.</a> General Comparative Endocrinology. 44 (2), 135-170 (1981).</li><li>Knowles, F., Vollrath, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+contacts+between+neurosecretory+fibres+and+pituicytes+in+the+pituitary+of+the+eel.">Synaptic contacts between neurosecretory fibres and pituicytes in the pituitary of the eel.</a> Nature. 206 (4989), 1168 (1965).</li><li>Knowles, F., Vollrath, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosecretory+innervation+of+the+pituitary+of+the+eels+Anguilla+and+Conger+I.+The+structure+and+ultrastructure+of+the+neuro-intermediate+lobe+under+normal+and+experimental+conditions.">Neurosecretory innervation of the pituitary of the eels Anguilla and Conger I. The structure and ultrastructure of the neuro-intermediate lobe under normal and experimental conditions.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 250 (768), 311-327 (1966).</li><li>Golan, M., Zelinger, E., Zohar, Y., Levavi-Sivan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Architecture+of+GnRH-Gonadotrope-Vasculature+Reveals+a+Dual+Mode+of+Gonadotropin+Regulation+in+Fish.">Architecture of GnRH-Gonadotrope-Vasculature Reveals a Dual Mode of Gonadotropin Regulation in Fish.</a> Endocrinology. 156 (11), 4163-4173 (2015).</li><li>Isogai, S., Horiguchi, M., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vascular+anatomy+of+the+developing+zebrafish:+an+atlas+of+embryonic+and+early+larval+development.">The vascular anatomy of the developing zebrafish: an atlas of embryonic and early larval development.</a> Developmental Biology. 230 (2), 278-301 (2001).</li><li>Cha, Y. R., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+experimental+analysis+of+blood+vessel+formation+using+transgenic+zebrafish.">Visualization and experimental analysis of blood vessel formation using transgenic zebrafish.</a> Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 81 (4), 286-296 (2007).</li><li>Kamei, M., Isogai, S., Pan, W., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+blood+vessels+in+the+zebrafish.">Imaging blood vessels in the zebrafish.</a> Methods Cell Biology. 100, 27-54 (2010).</li><li>Wu, E. S., Jacobson, K., Papahadjopoulos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+Diffusion+in+Phospholipid+Multibilayers+Measured+by+Fluorescence+Recovery+after+Photobleaching.">Lateral Diffusion in Phospholipid Multibilayers Measured by Fluorescence Recovery after Photobleaching.</a> Biochemistry. 16 (17), 3936-3941 (1977).</li><li>Schlessinger, J., Axelrod, D., Koppel, D. E., Webb, W. W., Elson, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+Transport+of+a+Lipid+Probe+and+Labeled+Proteins+on+a+Cell-Membrane.">Lateral Transport of a Lipid Probe and Labeled Proteins on a Cell-Membrane.</a> Science. 195 (4275), 307-309 (1977).</li><li>Johnson, M., Edidin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+Diffusion+in+Plasma-Membrane+of+Mouse+Egg+Is+Restricted+after+Fertilization.">Lateral Diffusion in Plasma-Membrane of Mouse Egg Is Restricted after Fertilization.</a> Nature. 272 (5652), 448-450 (1978).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbocyanine+Dye+Orientation+in+Red-Cell+Membrane+Studied+by+Microscopic+Fluorescence+Polarization.">Carbocyanine Dye Orientation in Red-Cell Membrane Studied by Microscopic Fluorescence Polarization.</a> Biophysical Journal. 26 (3), 557-573 (1979).</li><li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Carbocyanine+Dyes+Allow+Living+Neurons+of+Identified+Origin+to+Be+Studied+in+Long-Term+Cultures.">Fluorescent Carbocyanine Dyes Allow Living Neurons of Identified Origin to Be Studied in Long-Term Cultures.</a> Journal of Cell Biology. 103 (1), 171-187 (1986).</li><li>Godement, P., Vanselow, J., Thanos, S., Bonhoeffer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+in+developing+visual+systems+with+a+new+method+of+staining+neurones+and+their+processes+in+fixed+tissue.">A study in developing visual systems with a new method of staining neurones and their processes in fixed tissue.</a> Development. 101 (4), 697-713 (1987).</li><li>Fox, C. H., Johnson, F. B., Whiting, J., Roller, P. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Formaldehyde+Fixation.">Formaldehyde Fixation.</a> Journal of Histochemistry &amp; Cytochemistry. 33 (8), 845-853 (1985).</li><li>Puchtler, H., Meloan, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=On+the+Chemistry+of+Formaldehyde+Fixation+and+Its+Effects+on+Immunohistochemical+Reactions.">On the Chemistry of Formaldehyde Fixation and Its Effects on Immunohistochemical Reactions.</a> Histochemistry. 82 (3), 201-204 (1985).</li><li>Hoetelmans, R. W. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acetone,+methanol,+or+paraformaldehyde+on+cellular+structure,+visualized+by+reflection+contrast+microscopy+and+transmission+and+scanning+electron+microscopy.">Effects of acetone, methanol, or paraformaldehyde on cellular structure, visualized by reflection contrast microscopy and transmission and scanning electron microscopy.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 9 (4), 346-351 (2001).</li><li>Hobro, A. J., Smith, N. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+fixation+methods:+Spatial+and+compositional+cellular+changes+observed+by+Raman+imaging.">An evaluation of fixation methods: Spatial and compositional cellular changes observed by Raman imaging.</a> Vibrational Spectroscopy. 91, 31-45 (2017).</li><li>Li, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+labeling+and+visualization+of+blood+vessels+with+lipophilic+carbocyanine+dye+DiI.">Direct labeling and visualization of blood vessels with lipophilic carbocyanine dye DiI.</a> Nature Protocols. 3 (11), 1703-1708 (2008).</li><li>Wittbrodt, J., Shima, A., Schartl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medaka--a+model+organism+from+the+far+East.">Medaka--a model organism from the far East.</a> Nature Review Genetic. 3 (1), 53-64 (2002).</li><li>Fontaine, R., Hodne, K., Weltzien, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Healthy+Brain-pituitary+Slices+for+Electrophysiological+Investigations+of+Pituitary+Cells+in+Teleost+Fish.">Healthy Brain-pituitary Slices for Electrophysiological Investigations of Pituitary Cells in Teleost Fish.</a> Journal of Visual Experiments. (138), 57790 (2018).</li><li>Ager-Wick, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+a+High-quality+Primary+Cell+Culture+from+Fish+Pituitaries.">Preparation of a High-quality Primary Cell Culture from Fish Pituitaries.</a> Journal of Visual Experiments. (138), 58159 (2018).</li><li>Hildahl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+tracing+of+luteinizing+hormone+beta-subunit+gene+expression+using+green+fluorescent+protein+transgenic+medaka+(Oryzias+latipes)+reveals+a+putative+novel+developmental+function.">Developmental tracing of luteinizing hormone beta-subunit gene expression using green fluorescent protein transgenic medaka (Oryzias latipes) reveals a putative novel developmental function.</a> Developmental Dynamics. 241 (11), 1665-1677 (2012).</li><li>Schmid, B., Schindelin, J., Cardona, A., Longair, M., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-level+3D+visualization+API+for+Java+and+ImageJ.">A high-level 3D visualization API for Java and ImageJ.</a> BMC Bioinformatics. 11, 274 (2010).</li><li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dil+and+diO:+versatile+fluorescent+dyes+for+neuronal+labelling+and+pathway+tracing.">Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing.</a> Trends Neurosciences. 12 (9), 333-335 (1989).</li><li>Fontaine, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+Neurons+Controlling+Anterior+Pituitary+Functions:+Anatomy+and+Ontogenesis+in+Zebrafish.">Dopaminergic Neurons Controlling Anterior Pituitary Functions: Anatomy and Ontogenesis in Zebrafish.</a> Endocrinology. 156 (8), 2934-2948 (2015).</li></ol>

وقد استخدمت ترويه القلب مع الشركة سابقا لتسميه الاوعيه الدموية في العديد من الأنواع النموذجية24، بما في ذلك الأسماك تيليوست13.
كما يتم تسليمها مباشره إلى غشاء الخلية البطانية من قبل ترويه في الاوعيه الدموية ، فمن الممكن لزيادة نسبه الاشاره إل...

تلعب الاوعيه الدموية جزءا أساسيا من الجسم الفقاري لأنها توفر العناصر الغذائية الضرورية والأكسجين والإشارات الهرمونية لجميع الأعضاء. أيضا ، منذ اكتشاف مشاركتهم في تطوير السرطان1، وقد تلقوا الكثير من الاهتمام في البحوث السريرية. وعلي الرغم من ان عددا من المنشورات قد حققت في أليات التي تسمح بنمو الاوعيه الدموية والمستنقعات ، وتم تحديد عدد كبير من الجينات الهامه لتشكيلها2، لا يزال هناك الكثير مما ينبغي فهمه فيما يتعلق بالتفاعل بين الخلايا أو الانسجه والدم المتداول.
التصور من الاوعيه الدموية في الدماغ والغدة النخامية مهم. الخلايا العصبية في الدماغ تتطلب إمدادات عاليه من الأكسجين والجلوكوز3, والغدة النخامية يحتوي علي ما يصل إلى ثمانيه أنواع الخلايا المنتجة للهرمونات الهامه التي تستخدم تدفق الدم لتلقي اشاره من الدماغ وإرسال الهرمونات الخاصة بهم إلى مختلف الاجهزه الطرفية4,5. بينما في الثدييات ، ونظام البوابة في قاعده تحت المهاد اسمه الفضيلة وسيط ، يربط الدماغ والغدة النخامية6، مثل هذا الجسر الدم واضحة لم يوصف في الأسماك تيليوست. في الواقع ، في teleosts ، preoptico-طائي الخلايا العصبية مباشره المشروع محاور في بارس العصبي من الغدة النخامية7 ومعظمها inعصبيه أنواع الخلايا الصماء المختلفة مباشره8،9. ومع ذلك ، فان بعض هذه الخلايا العصبية لها نهاياتها العصبية الموجودة في الفضاء الخارج ، في المنطقة القريبة من الشعيرات الدموية10. ولذلك ، فان الفرق بين الأسماك تيليوست والثدييات ليست واضحة جدا ، والعلاقة بين الاوعيه الدموية في الدم والدماغ والخلايا النخامية يتطلب المزيد من التحقيق في الأسماك تيليوست.
[زبرفيش] يتلقى, في كثير مظاهر, تشريحيا ووظيفيا قابل للمقارنة نظامه وعائية إلى أخرى فقاري أنواع11. وقد أصبح نموذج فقاري قويه للبحوث القلب والاوعيه الدموية في الغالب بفضل تطوير عده خطوط المحورة وراثيا حيث يتم تسميه مكونات نظام الاوعيه الدموية مع البروتينات الفلورية مراسل12. ومع ذلك ، قد يختلف تشريح نظام الدوران الدقيق بين الأنواع ، أو حتى بين شخصين ينتميان إلى نفس النوع. ولذلك ، فان التصور من الاوعيه الدموية قد تكون ذات فائده عاليه أيضا في الأنواع الأخرى تيليوست التي لا وجود لها أدوات التكوين.
وقد تم وصف العديد من التقنيات لتسميه الاوعيه الدموية في كل من الثدييات والتيليتات. وتشمل هذه التهجين في الموقع للجينات الاوعيه الدموية المحددة, تلطيخ الفوسفاتيز القلوية, تصوير الاوعيه الدقيقة, وحقن صبغ (للمراجعة انظر13). وقد استخدمت لأول مره لدراسة الدهون غشاء الحركية الجانبية والاحتفاظ بها في الطبقات الدهنية ويمكن ان تهاجر من خلال ذلك14,15,16. في الواقع ، يتكون جزيء من السلسلة الهيدروكربونية من سلسلتين من الهيدروكربونات والكروم. وفي حين ان السلاسل الهيدروكربونية تدمج في غشاء الخلية الدهنية للخلايا التي تلامسها ، فان الكروم لا يزال علي سطحه17. مره واحده في الغشاء ، وجزيئات الندية منتشر جانبيا داخل الطبقات الدهنية التي تساعد علي وصمه عار هياكل الاغشيه التي ليست علي اتصال مباشر مع حل الندية. التالي ، فان حقن محلول من خلال التروية القلبية ، سيقوم بتسميه جميع الخلايا البطانية في اتصال مع المركب الذي يسمح بالوسم المباشر للاوعيه الدموية. ويستخدم اليوم أيضا لأغراض تلطيخ أخرى ، مثل التصوير جزيء واحد ، وتعيين مصير ، وتتبع الخلايا العصبية. ومن المثير للاهتمام ، وجود العديد من الفلوروبورس (مع أطوال موجية مختلفه من الانبعاثات) مما يسمح بالجمع مع التسميات الفلورية الأخرى ، والتاسيس ، فضلا عن الانتشار الجانبي لل ، يمكن ان يحدث في كل من الانسجه الحية والثابتة18، التاسعة عشره
الفورمالديهايد ، التي اكتشفها فرديناند بلوم في 1893 ، وقد استخدمت علي نطاق واسع في الوقت الحاضر كالمادة الكيميائية المفضلة لتثبيت الانسجه20،21. هو يبدي خصوصية واسعه ل كثير أهداف خلوية ويحافظ البنية خلوية22,23. كما انه يحفظ الخصائص الفلورية لمعظم الفلوروبيورس ، التالي يمكن استخدامها لتثبيت الكائنات المحورة وراثيا التي تستهدف الخلايا التي تعبر عن البروتينات الفلورية مراسل.
في هذه المخطوطة ، تم تكييف بروتوكول سابق تم تطويره لتسميه الاوعيه الدموية في نماذج الثدييات التجريبية الصغيرة24 لاستخدامه في الأسماك. الاجراء بأكمله يستغرق سوي بضع ساعات لأداء. فانه يوضح كيفيه حقنت حل مثبت من الفورمالديهايد التي تحتوي علي الندية في قلب السمكة من أجل التسمية مباشره جميع الاوعيه الدموية في الدماغ والغدة النخامية للنموذج الأسماك medaka. Medaka هي سمكه صغيره المياه العذبة الاصليه إلى اسيا ، وجدت في المقام الأول في اليابان. وهو كائن نموذج البحث مع مجموعه من الاداات الجزيئية والجينية المتاحة25. ولذلك ، فان تحديد الاوعيه الدموية في هذا النوع وكذلك في غيرها من شانه ان يسمح لتحسين فهمنا حول كيفيه تفاعل الدماغ والخلايا النخامية مع الاوعيه الدموية في الانسجه الكاملة أو شرائح الانسجه السميكة.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:877px;" width="877">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">16% paraformaldehyde</td>
			<td style="width:171px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:123px;">RT 15711</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">5 mL Syringe PP/PE without needle</td>
			<td style="width:171px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z116866-100EA</td>
			<td style="width:152px;">syringes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:432px;">BD Precisionglide syringe needles</td>
			<td style="width:171px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z118044-100EA</td>
			<td style="width:152px;">needles 18G (1.20*40)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">borosilicate glass 10cm OD1.2mm</td>
			<td style="width:171px;">sutter instrument</td>
			<td style="width:123px;">BF120-94-10</td>
			<td style="width:152px;">glass pipette</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">DiI (1,1&#8242;-Dioctadecyl-3,3,3&#8242;,3&#8242;-tetramethylindocarbocyanine perchlorate)</td>
			<td style="width:171px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">D-282</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:432px;">LDPE tube O.D 1.7mm and I.D 1.1mm</td>
			<td style="width:171px;">Portex</td>
			<td style="width:123px;">800/110/340/100</td>
			<td style="width:152px;">canula</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">Phosphate Buffer Saline (PBS) solution</td>
			<td style="width:171px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">D8537-6X500ML</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">pipette puller</td>
			<td style="width:171px;">Narishige</td>
			<td style="width:123px;">PC-10</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">plastic petri dishes</td>
			<td style="width:171px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">391-0442</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">Super glue gel</td>
			<td style="width:171px;">loctite</td>
			<td style="width:123px;">c4356</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">tricaine (ms-222)</td>
			<td style="width:171px;">sigma</td>
			<td style="width:123px;">E10521-50G</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

labeling of blood vessels in the teleost brain and pituitary using cardiac perfusion with a dii-fixative

الاوعيه الدموية العصبية جميع الانسجه في الفقاريات ، مما يتيح البقاء علي قيد الحياة من خلال توفير المواد الغذائية اللازمة ، والأكسجين ، والإشارات الهرمونية. وهي واحده من الاجهزه الاولي التي تبدا العمل اثناء التنمية. أصبحت أليات تكوين الاوعيه الدموية موضوعا للاهتمام العلمي والسريري العالي. في البالغين ومع ذلك ، فانه من الصعب تصور الاوعيه الدموية في معظم الكائنات الحية بسبب توطينهم عميقا داخل الانسجه الأخرى. ومع ذلك ، لا يزال التصور من الاوعيه الدموية الهامه لعده دراسات مثل الغدد الصماء والبيولوجيا العصبية. في حين تم تطوير عده خطوط المحورة وراثيا في zebrafish ، مع الاوعيه الدموية تصور مباشره من خلال التعبير عن البروتينات الفلورية ، لا توجد مثل هذه الاداات للأنواع الأخرى تيليوست. باستخدام الميداكا (اوريزيراس لا تيبس) كنموذج ، والبروتوكول الحالي يقدم تقنيه سريعة ومباشره لتسميه الاوعيه الدموية في الدماغ والغدة النخامية من خلال الأداء المثالي عن طريق القلب مع المثبتة التي تحتوي علي الصورة. يسمح هذا البروتوكول بتحسين فهمنا لكيفيه تفاعل المخ والخلايا النخامية مع الاوعيه الدموية في الانسجه الكاملة أو شرائح الانسجه السميكة.

هذا البروتوكول يوضح اجراء خطوه بخطوه لتسميه الاوعيه الدموية في الدماغ الميداكا والغدة النخامية ، وفي الوقت نفسه إصلاح الانسجه. بعد الوسم عن طريق الحقن القلبي لمحلول مثبت يحتوي علي الصورة الضوئية في القلب ، يمكن ملاحظه الاوعيه الدموية علي الشرائح باستخدام المجسم الفراغي الفلوري (<strong class="...

Watch this Scientific Journal Video about Labeling of Blood Vessels in the Teleost Brain and Pituitary Using Cardiac Perfusion with a DiI-fixative at JoVE.com

Labeling of Blood Vessels in the Teleost Brain and Pituitary Using Cardiac Perfusion with a DiI-fixative

يصف هذا المقال بروتوكولا سريعا لوصف الاوعيه الدموية في الأسماك تيليست عن طريق التروية القلبية من المخفف في المثبت ، وذلك باستخدام الميداكا (اوريزيز لا تيبس) كنموذج والتركيز علي الدماغ والانسجه النخامية.

وضع العلامات علي الاوعيه الدموية في الدماغ والغدة النخامية باستخدام Perfusion القلب مع المثبت

Blood vessels innervate all tissues in vertebrates, enabling their survival by providing the necessary nutrients, oxygen, and hormonal signals. It is one ...

الهدف العام من هذا الإجراء هو تسمية الأوعية الدموية في الدماغ وخامة من الأسماك التيليوست، ونحن نستخدم ضخ القلب مع تثبيت يحتوي على دي في الأنواع النموذجية medaka. لذا فإن هذه التقنية التي هي بسيطة وفعالة تساعد على الإجابة على الأسئلة الهامة المتعلقة بالتشريح الوعائي في الدماغ وخامة من الأسماك التي تم نشرها وكذلك العلاقة بين الخلايا العصبية أو خلايا الغدد الصماء والأوعية الدموية. وتشمل بعض مزايا هذه التقنية إعداد بسيط سريع وسهل، وقدرتها على التكيف مع أنواع الأسماك teleost.لإعداد حامل السمك، وقطع قطعة من البوليسترين إلى طول خمسة سنتيمترات، وعرض ثلاثة سنتيمترات، وسمك اثنين سنتيمتر، والغراء البوليسترين إلى طبق بلاستيكي قطره تسعة سنتيمترات. ثم استخدام مشرط لجعل ثلاثة سنتيمترات على شكل قارب حفرة في البوليسترين. لتحضير نظام التسريب، أضف قنية بلاستيكية طولها 30 إلى 50 سنتيمترًا عند أقصى إبرة نظام الضخ.لإعداد خمسة ماصات زجاجية سنتيمتر، استخدم سحب ماصة لتمدد الشعيرات الزجاجية الفردية وفقا لتعليمات الشركة المصنعة. قبل البدء في تشريح، تحميل حقنة 10 ملليلتر مع الحل دي التثبيتية أعدت ووضع إبرة مع قنية في الطرف الأقصى من الحقنة. ثم استخدم عدة قطع من الشريط وضعت في اتجاهات مختلفة لإصلاح الحقنة إلى مقاعد البدلاء، وضبط موقف المجهر والمقعد للحصول على وضع جيد للتشريح والضغط على المكبس الحقنة مع الكوع.المقبل، ووضع سمكة القتل الرحيم في الجانب صاحب السمك البطن حتى وتأمين الرأس والذيل مع دبابيس. استخدم المقصات لقطع الطبقة السطحية من الجلد أفقيًا لفتح البطن الأمامي، واستخدم ملقطًا لإزالة الجلد فوق القلب حتى يتحقق الوصول الواضح إلى البطين والشراي لمبة. إضافة أنبوب زجاجي في أقصى شعري وكسر غيض من الماصة.جلب الأنابيب الزجاجية قريبة من البطين وإضافة ضغط الكوع إلى المكبس حقنة لإجبار السائل في حين تعلق البطين القلب مع ماصة. ثم ثقب على الفور في الجيوب الأنفية مع ملقط لتحرير الدم من الدورة الدموية. من البطين، وضبط زاوية من الماصات الزجاجية لتحديد موقع مدخل الشريانية لمبة، ونقل فتحة ماصة داخل المصابيح الشريانية.ثم إضافة الضغط إلى حقنة لمدة إضافية 30 إلى 60 ثانية مع الحفاظ على ماصة داخل المصابيح الشريانية. لوضع العلامات الأمثل لجميع الأوعية الدموية من الأهمية بمكان أن تضخ في لمبة الشريان طويلة بما يكفي لاستبدال جميع الدم مع حل DiI-المثبت. بعد حوالي 60 ثانية من الضخ، عندما لا يتم ملاحظة تسرب الدم أكثر، وإزالة ماصة الزجاج والإبر من الأسماك، وحصاد الدماغ والنخامية في 4٪ paraformaldehyde الطازجة لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة في الظلام.ثم شطف الأنسجة مرتين في برنامج تلفزيوني جديد لمدة 10 دقائق لكل غسل قبل إعداد العينات للتصوير. بعد حقن القلب من محلول التثبيت التي تحتوي على DiI كما هو موضح، يمكن ملاحظة الأوعية الدموية المسمى على شرائح الأنسجة عن طريق المجهر ستيريو الفلورسنت أو على الأنسجة بأكملها عن طريق المجهر confocal. لاحظ أنه إذا تم حقن المحلول في بطين القلب بدلاً من المصابيح الشريانية أو إذا تم حقن المحلول بضغط منخفض جداً و/أو لفترة قصيرة جداً، سيتم ملاحظة وضع علامات غير كافية على الأوعية.بالإضافة إلى ذلك، عند تصوير نفس النسيج بنفس معلمات التصوير، يمكن ملاحظة انخفاض في كثافة وضع العلامات بعد عدة أيام، مع ظهور إشارة أكثر انتشارًا داخل عينة الأنسجة. شرائح الأنسجة من خطوط المعدلة وراثيا داخل الخلايا ذات الاهتمام التعبير عن البروتينات مراسل الفلورسنت يمكن أن تكون أكثر المسمى لبروتينات محددة من الفائدة باستخدام بروتوكولات المناعة القياسية التي تسمح للتحقيق في التفاعلات بين الأوعية الدموية وأنواع الخلايا الأخرى. من المهم الوصول إلى المصابيح الشريانية.عندما يتحقق ذلك، إضافة الضغط إلى المكبس حقنة ينبغي أن تحفز على توسيع لمبة تأكيد إجراء ناجح. ويمكن استخدام هذه التقنية للتحقيق في التفاعل بين خلايا الغدد الصماء والأوعية الدموية في الغدة النخامية التائية بشكل عام، ولكن ربما بشكل أكثر تحديدا للتحقيق في الاختلافات أو أوجه التشابه المحتملة بين أنظمة البوابة في teleost والثدييات. لأن هذا الاستخدام السياسي المركبات السامة والمتطايرة الاحتياطات مثل استخدام قناع الغاز وغرفة التهوية ينبغي دائما أن تتخذ عند تنفيذ هذه الإجراءات.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Anatomical Reconstructions of the Human Cardiac Venous System using Contrast-computed Tomography of Perfusion-fixed Specimens

إعادة بناء تشريحية من الجهاز الوريدي للقلب البشري باستخدام التباين-المقطعي العينات الإرواء ثابت

A detailed  understanding of the complexity and relative variability within the human  cardiac venous system is crucial for the development of cardiac ...

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

تحسين طريقة لإعداد القائم على الخليوي، الاتصال نموذج الإنسان من حاجز الدم في الدماغ

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Generation and Grafting of Tissue-engineered Vessels in a Mouse Model

جيل ومسمار سفن الهندسة الأنسجة في نموذج الفأر

The construction of vascular conduits is a fundamental strategy for surgical repair of damaged and injured vessels resulting from cardiovascular diseases. ...

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

في فيفو التقييم الكمي للبنية عضلة القلب، وظيفة، الإرواء والجدوى عن طريق احتساب الصغرى القلب المقطعي

The use of Micro-Computed Tomography (MicroCT) for in vivo studies of small animals as models of human disease has risen tremendously due to the fact that ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

بروتوكول لنقل ميكرورنا إلى المشتقة من نخاع العظام المكونة للدم الخلايا الجذعية البالغة لتمكينها هندسة الخلايا جنبا إلى جنب مع استهداف المغناطيسي

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

Lucifer Yellow - A Robust Paracellular Permeability Marker in a Cell Model of the Human Blood-brain Barrier

لوسيفر الأصفر - علامة نفاذية شبه خلوية قوية في نموذج خلية من حاجز الدم في الدماغ البشري

The blood-brain barrier BBB consists of endothelial cells that form a barrier between the systemic circulation and the brain to prevent the exchange of ...

Intra-cardiac Side-Firing Light Catheter for Monitoring Cellular Metabolism using Transmural Absorbance Spectroscopy of Perfused Mammalian Hearts

القسطرة الخفيفة داخل القلب للإشعال الجانبي لرصد الأيض الخلوي باستخدام مطياف الامتصاص عبر الجدارية لقلوب الثدييات المنصهرة

Absorbance spectroscopy of cardiac muscle provides non-destructive assessment of cytosolic and mitochondrial oxygenation via myoglobin and cytochrome ...

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

تقييم الكهربائيات القلبية قبل الاحتكين بواسطة الجهد المزدوج ورسم الخرائط البصرية الكالسيوم لشرائح القلب العضوية البشرية

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...

Blood Flow Imaging with Ultrafast Doppler

تصوير تدفق الدم مع دوبلر فائق السرعة

The pulsed-Doppler effect is the main technique used in clinical echography to assess blood flow. Applied with conventional focused ultrasound Doppler ...

Stepwise Cell Seeding on Tessellated Scaffolds to Study Sprouting Blood Vessels

البذر الخلايا Stepwise على السقالات تيسلاتيد لدراسة الأوعية الدموية تنبت

The cardiovascular system is a key player in human physiology, providing nourishment to most tissues in the body; vessels are present in different sizes, ...