Name: labeling of blood vessels in the teleost brain and pituitary using cardiac perfusion with a dii-fixative
Uploaded: 2019-06-13T14:45:00
Description: Watch this Scientific Journal Video about Labeling of Blood Vessels in the Teleost Brain and Pituitary Using Cardiac Perfusion with a DiI-fixative at JoVE.com

메 다 카의 고정 용액을 사용 하 여 심장 관류를 시연 하 고, 미 루 데스 카레 온 G 탄 메 나카 축산에 도움이 되 고, 그림은 앤서니 펠 티어 씨에 게 감사 드립니다. 이 작품은 NMBU와 노르웨이의 연구 위원회에 의해 투자 되었다, 보조금 번호 248828 (디지털 라이프 노르웨이 프로그램).

모든 동물 취급은 노르웨이 생명 과학 대학교에서 연구 동물의 보살 핌과 복지에 대 한 권고에 따라 수행 되었으며, 권한 있는 구도 자의 감독 하에 실시 되었습니다.
1. 장비 및 솔루션의 준비
<ol><li>1.5 mL 플라스틱 튜브에 96%에 토를 사용 하 여 dii 5 mg을 용 해 하는 DiI 스톡 용액 준비 30 초에 대 한 소용돌이 및 알루미늄 호 일을 사용 하 여 덮여 유지 합니다. 참고:</stro...

<ol>
	<li>Nishida, N., Yano, H., Nishida, T., Kamura, T., Kojiro, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Angiogenesis+in+cancer.">Angiogenesis in cancer.</a> Vascular Health and Risk Management. 2 (3), 213-219 (2006).</li><li>Simon, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Vascular+morphogenesis+and+the+formation+of+vascular+networks.">Vascular morphogenesis and the formation of vascular networks.</a> Developmental Cell. 6 (4), 479-482 (2004).</li><li>Magistretti, P. J., Zigmond, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> Brain energy metabolism in Fundamental neuroscience. , 389-413 (1999).</li><li>Weltzien, F. A., Andersson, E., Andersen, O., Shalchian-Tabrizi, K., Norberg, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+brain-pituitary-gonad+axis+in+male+teleosts,+with+special+emphasis+on+flatfish+(Pleuronectiformes).">The brain-pituitary-gonad axis in male teleosts, with special emphasis on flatfish (Pleuronectiformes).</a> Comparative Biochemistry and Physiology - Part A: Molecular &amp; Integrative Physiology. 137 (3), 447-477 (2004).</li><li>Ooi, G. T., Tawadros, N., Escalona, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Pituitary+cell+lines+and+their+endocrine+applications.">Pituitary cell lines and their endocrine applications.</a> Molecular and Cellular Endocrinology. 228 (1-2), 1-21 (2004).</li><li>Knigge, K. M., Scott, D. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Structure+and+function+of+the+median+eminence.">Structure and function of the median eminence.</a> American Journal of Anatomy. 129 (2), 223-243 (1970).</li><li>Ball, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Hypothalamic+control+of+the+pars+distalis+in+fishes,+amphibians,+and+reptiles.">Hypothalamic control of the pars distalis in fishes, amphibians, and reptiles.</a> General Comparative Endocrinology. 44 (2), 135-170 (1981).</li><li>Knowles, F., Vollrath, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Synaptic+contacts+between+neurosecretory+fibres+and+pituicytes+in+the+pituitary+of+the+eel.">Synaptic contacts between neurosecretory fibres and pituicytes in the pituitary of the eel.</a> Nature. 206 (4989), 1168 (1965).</li><li>Knowles, F., Vollrath, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Neurosecretory+innervation+of+the+pituitary+of+the+eels+Anguilla+and+Conger+I.+The+structure+and+ultrastructure+of+the+neuro-intermediate+lobe+under+normal+and+experimental+conditions.">Neurosecretory innervation of the pituitary of the eels Anguilla and Conger I. The structure and ultrastructure of the neuro-intermediate lobe under normal and experimental conditions.</a> Philosophical Transactions of the Royal Society B: Biological Sciences. 250 (768), 311-327 (1966).</li><li>Golan, M., Zelinger, E., Zohar, Y., Levavi-Sivan, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Architecture+of+GnRH-Gonadotrope-Vasculature+Reveals+a+Dual+Mode+of+Gonadotropin+Regulation+in+Fish.">Architecture of GnRH-Gonadotrope-Vasculature Reveals a Dual Mode of Gonadotropin Regulation in Fish.</a> Endocrinology. 156 (11), 4163-4173 (2015).</li><li>Isogai, S., Horiguchi, M., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+vascular+anatomy+of+the+developing+zebrafish:+an+atlas+of+embryonic+and+early+larval+development.">The vascular anatomy of the developing zebrafish: an atlas of embryonic and early larval development.</a> Developmental Biology. 230 (2), 278-301 (2001).</li><li>Cha, Y. R., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Visualization+and+experimental+analysis+of+blood+vessel+formation+using+transgenic+zebrafish.">Visualization and experimental analysis of blood vessel formation using transgenic zebrafish.</a> Birth Defects Research Part C: Embryo Today. 81 (4), 286-296 (2007).</li><li>Kamei, M., Isogai, S., Pan, W., Weinstein, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Imaging+blood+vessels+in+the+zebrafish.">Imaging blood vessels in the zebrafish.</a> Methods Cell Biology. 100, 27-54 (2010).</li><li>Wu, E. S., Jacobson, K., Papahadjopoulos, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+Diffusion+in+Phospholipid+Multibilayers+Measured+by+Fluorescence+Recovery+after+Photobleaching.">Lateral Diffusion in Phospholipid Multibilayers Measured by Fluorescence Recovery after Photobleaching.</a> Biochemistry. 16 (17), 3936-3941 (1977).</li><li>Schlessinger, J., Axelrod, D., Koppel, D. E., Webb, W. W., Elson, E. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+Transport+of+a+Lipid+Probe+and+Labeled+Proteins+on+a+Cell-Membrane.">Lateral Transport of a Lipid Probe and Labeled Proteins on a Cell-Membrane.</a> Science. 195 (4275), 307-309 (1977).</li><li>Johnson, M., Edidin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lateral+Diffusion+in+Plasma-Membrane+of+Mouse+Egg+Is+Restricted+after+Fertilization.">Lateral Diffusion in Plasma-Membrane of Mouse Egg Is Restricted after Fertilization.</a> Nature. 272 (5652), 448-450 (1978).</li><li>Axelrod, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Carbocyanine+Dye+Orientation+in+Red-Cell+Membrane+Studied+by+Microscopic+Fluorescence+Polarization.">Carbocyanine Dye Orientation in Red-Cell Membrane Studied by Microscopic Fluorescence Polarization.</a> Biophysical Journal. 26 (3), 557-573 (1979).</li><li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fluorescent+Carbocyanine+Dyes+Allow+Living+Neurons+of+Identified+Origin+to+Be+Studied+in+Long-Term+Cultures.">Fluorescent Carbocyanine Dyes Allow Living Neurons of Identified Origin to Be Studied in Long-Term Cultures.</a> Journal of Cell Biology. 103 (1), 171-187 (1986).</li><li>Godement, P., Vanselow, J., Thanos, S., Bonhoeffer, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+study+in+developing+visual+systems+with+a+new+method+of+staining+neurones+and+their+processes+in+fixed+tissue.">A study in developing visual systems with a new method of staining neurones and their processes in fixed tissue.</a> Development. 101 (4), 697-713 (1987).</li><li>Fox, C. H., Johnson, F. B., Whiting, J., Roller, P. 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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Effects+of+acetone,+methanol,+or+paraformaldehyde+on+cellular+structure,+visualized+by+reflection+contrast+microscopy+and+transmission+and+scanning+electron+microscopy.">Effects of acetone, methanol, or paraformaldehyde on cellular structure, visualized by reflection contrast microscopy and transmission and scanning electron microscopy.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 9 (4), 346-351 (2001).</li><li>Hobro, A. J., Smith, N. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=An+evaluation+of+fixation+methods:+Spatial+and+compositional+cellular+changes+observed+by+Raman+imaging.">An evaluation of fixation methods: Spatial and compositional cellular changes observed by Raman imaging.</a> Vibrational Spectroscopy. 91, 31-45 (2017).</li><li>Li, Y. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Direct+labeling+and+visualization+of+blood+vessels+with+lipophilic+carbocyanine+dye+DiI.">Direct labeling and visualization of blood vessels with lipophilic carbocyanine dye DiI.</a> Nature Protocols. 3 (11), 1703-1708 (2008).</li><li>Wittbrodt, J., Shima, A., Schartl, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Medaka--a+model+organism+from+the+far+East.">Medaka--a model organism from the far East.</a> Nature Review Genetic. 3 (1), 53-64 (2002).</li><li>Fontaine, R., Hodne, K., Weltzien, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Healthy+Brain-pituitary+Slices+for+Electrophysiological+Investigations+of+Pituitary+Cells+in+Teleost+Fish.">Healthy Brain-pituitary Slices for Electrophysiological Investigations of Pituitary Cells in Teleost Fish.</a> Journal of Visual Experiments. (138), 57790 (2018).</li><li>Ager-Wick, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Preparation+of+a+High-quality+Primary+Cell+Culture+from+Fish+Pituitaries.">Preparation of a High-quality Primary Cell Culture from Fish Pituitaries.</a> Journal of Visual Experiments. (138), 58159 (2018).</li><li>Hildahl, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developmental+tracing+of+luteinizing+hormone+beta-subunit+gene+expression+using+green+fluorescent+protein+transgenic+medaka+(Oryzias+latipes)+reveals+a+putative+novel+developmental+function.">Developmental tracing of luteinizing hormone beta-subunit gene expression using green fluorescent protein transgenic medaka (Oryzias latipes) reveals a putative novel developmental function.</a> Developmental Dynamics. 241 (11), 1665-1677 (2012).</li><li>Schmid, B., Schindelin, J., Cardona, A., Longair, M., Heisenberg, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+high-level+3D+visualization+API+for+Java+and+ImageJ.">A high-level 3D visualization API for Java and ImageJ.</a> BMC Bioinformatics. 11, 274 (2010).</li><li>Honig, M. G., Hume, R. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dil+and+diO:+versatile+fluorescent+dyes+for+neuronal+labelling+and+pathway+tracing.">Dil and diO: versatile fluorescent dyes for neuronal labelling and pathway tracing.</a> Trends Neurosciences. 12 (9), 333-335 (1989).</li><li>Fontaine, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dopaminergic+Neurons+Controlling+Anterior+Pituitary+Functions:+Anatomy+and+Ontogenesis+in+Zebrafish.">Dopaminergic Neurons Controlling Anterior Pituitary Functions: Anatomy and Ontogenesis in Zebrafish.</a> Endocrinology. 156 (8), 2934-2948 (2015).</li></ol>

이전에 DiI를 가진 심장 관류는 teleost 물고기13을 포함 하 여 몇몇 모형 종24에 있는 혈관에 상표를 지정 하기 위하여 이용 되었습니다.
DiI는 혈관 구조에서 관류에 의해 내 피 세포 막으로 직접 전달 되기 때문에, 고정 용액에서 DiI 농도를 증가 시 킴으로써 신호 대 잡음비를 증가 시킬 수 있다. 또한, 형광 단을 최소한의 표백으로 흥?...

그들은 모든 기관에 필요한 영양소, 산소와 호르몬 신호를 제공으로 혈관은 척추 동물 body의 필수적인 부분을 재생 합니다. 또한, 암 개발1에 그들의 관여의 발견 이후, 그들은 임상 연구에 많은 관심을 받았다. 다 수의 간행물은 혈관 성장 및 형태 형성을 허용 하는 기전을 조사 하였으나, 그들의 생성을 위해 중요 한 다 수의 유전자가확인 되었지만, 많은 것은 상호 작용에 관하여 이해 될 수 있다 세포 또는 조직과 순환 혈액 사이.
뇌와 뇌 하 수 체에서 혈액 혈관의 시각화는 중요 하다. 두뇌에 있는 신경은 산소와 포도 당3의 높은 공급을 요구 하 고, 뇌에서 신호를 수신 하 고 다른 그들의 각각 호르몬을 보낼 혈 류를 사용 하 여 8 개의 중요 한 호르몬 생산 세포 유형을 포함 하는 뇌 하 수 체 주변 기관4,5. 포유동물에 있는 동안, 시상 하 부의 기지에 있는 포털 시스템은 중앙값 미 넨 스 이라고 명명 하 고, 두뇌와 뇌 하 수 체6을 연결 합니다, 그런 명확한 혈액 교량은 teleost 물고기에서 기술 되지 않았습니다. 실제로, 텔 레 티코-시상 하 부 뉴런은 뇌 하 수 체7 의 par nervosa에 직접 축 삭을 투사 하 고 주로 다른 내 분 비 세포 유형을 직접8,9로 자극 합니다. 그러나, 이러한 뉴런의 일부는 extravascular 공간에 있는 그들의 신경 종말, 혈액 모세 혈관에 가까운 근처에10. 따라서, teleost 물고기와 포유류의 차이 그렇게 명확 하지 않습니다., 그리고 혈액 맥 관 구조와 두뇌와 뇌 하 수 체 세포 사이의 관계는 teleost 물고기에서 더 큰 조사를 필요로.
제 브라 피시는 다양 한 측면에서, 해부학 적이 고 기능적으로 필적 하는 혈관 시스템을 다른 척추 동물 종11에 보유 하 고 있습니다. 그것은 심혈 관 시스템의 구성 요소 형광 리포터 단백질12로 표시 되는 여러 형질 전환 라인의 개발 덕분에 심장 혈관 연구에 대 한 강력한 척추 동물 모델이 되고있다. 그러나, 정확한 순환 시스템 해부학은 종 사이에서 다를 수 있습니다, 또는 심지어 같은 종에 속하는 두 개인 사이. 따라서, 혈관의 시각화는 변환 도구가 존재 하지 않는 다른 teleost 종에도 높은 관심을 가질 수 있다.
포유류와 전보 모두에서 혈관에 라벨을 지정 하는 몇 가지 기술이 설명 되어 있습니다. 이들은 맥 관 구조 특정 유전자를 위한 현장 잡종 화, 알칼리 성 인산 가수분해 물 염색, 미세 혈관 조 영 법 및 염료 주사를 포함 합니다 (검토를 위해13참조). 형광 성 친 유성 양이온 indocarbocyanine 염료 (DiI)는 지질 이중 층에서 유지 되 고 그것을14,15,16을 통해 마이그레이션할 수 있으므로 막 지질 측면 이동성을 연구 하기 위해 처음 사용 되었다. 실제로 DiI의 분자는 두 개의 탄화수소 체인과 발 색 단이 구성 되어 있습니다. 탄화수소 사슬이 그것에 접촉 하는 세포의 지질 이중 층 세포 막에 통합 되는 동안, 발 색 단은 그 표면17에 남아 있습니다. 일단 막에, DiI 분자는 DiI 용액과 직접적으로 접촉 하지 않는 막 구조물을 오염 시키는 것을 돕는 지질 이중 층 내에서 횡 방향으로 확산 됩니다. 심장 관류를 통해 DiI 용액을 주입 하는 것은, 따라서 혈관의 직접적인 라벨링을 허용 하는 화합물과 접촉 하는 모든 내 피 세포를 라벨링 할 것 이다. 오늘날 DiI는 또한 단일 분자 이미징, 운명 매핑, 뉴런 추적과 같은 다른 염색 목적으로 사용 됩니다. 흥미롭게도, 다른 형광 레이블과의 조합을 허용 하는 몇몇 형광 물질 (방출의 다른 파장)이 존재 하 고, DiI의 측면 확산 뿐만 아니라 결합이 살아있는 및 고정 조직 모두에서 발생할 수 있다18, 19.
포름알데히드는 1893에서 페르디난드 블 룸에 의해 발견 되었으며, 조직 고정20,21에 대 한 바람직한 화학 물질로 서 현재까지 널리 사용 되 고 있다. 이는 대부분의 세포 표적에 대 한 광범위 한 특이성을 나타내고 세포 구조22,23을 보존 한다. 그것은 또한 대부분의 형광 발 색의 형광체를 보존 하며, 따라서 표적 세포가 형광 리포터 단백질을 발현 하는 형질 전환 동물을 고정 시키기 위해 사용 될 수 있다.
이 원고에서, 작은 실험 포유류 모델 (24 )에서 혈관에 라벨을 지정 하기 위해 개발 된 이전 프로토콜은 어류에서의 사용에 적응 되었다. 전체 절차는 수행 하는 데 몇 시간 밖에 걸리지 않습니다. 그것은 직접 뇌의 모든 혈관과 모델 물고기 medaka의 뇌 하 수 체에 레이블을 하기 위해 물고기 심장에 DiI를 포함 하는 포름알데히드의 고정 솔루션을 사용 하는 방법을 보여줍니다. Medaka는 주로 일본에서 발견 되는 아시아에서 자생 하는 작은 민물 어류입니다. 그것은 분자 및 유전 도구의 제품군을 사용할 수 있는 연구 모델 유기 체입니다25. 따라서,이 종에서 뿐만 아니라 다른 사람에서 혈관의 식별 뇌와 뇌 하 수 체 세포가 전체 조직 또는 두꺼운 조직 조각에 혈액 맥 관 구조와 상호 작용 하는 방법에 대 한 우리의 이해를 개선 하는 것을 허용 합니다.

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" style="width:877px;" width="877">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">16% paraformaldehyde</td>
			<td style="width:171px;">Electron Microscopy Sciences</td>
			<td style="width:123px;">RT 15711</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">5 mL Syringe PP/PE without needle</td>
			<td style="width:171px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z116866-100EA</td>
			<td style="width:152px;">syringes</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:432px;">BD Precisionglide syringe needles</td>
			<td style="width:171px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">Z118044-100EA</td>
			<td style="width:152px;">needles 18G (1.20*40)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">borosilicate glass 10cm OD1.2mm</td>
			<td style="width:171px;">sutter instrument</td>
			<td style="width:123px;">BF120-94-10</td>
			<td style="width:152px;">glass pipette</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">DiI (1,1&#8242;-Dioctadecyl-3,3,3&#8242;,3&#8242;-tetramethylindocarbocyanine perchlorate)</td>
			<td style="width:171px;">Invitrogen</td>
			<td style="width:123px;">D-282</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:432px;">LDPE tube O.D 1.7mm and I.D 1.1mm</td>
			<td style="width:171px;">Portex</td>
			<td style="width:123px;">800/110/340/100</td>
			<td style="width:152px;">canula</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">Phosphate Buffer Saline (PBS) solution</td>
			<td style="width:171px;">Sigma</td>
			<td style="width:123px;">D8537-6X500ML</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">pipette puller</td>
			<td style="width:171px;">Narishige</td>
			<td style="width:123px;">PC-10</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">plastic petri dishes</td>
			<td style="width:171px;">VWR</td>
			<td style="width:123px;">391-0442</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">Super glue gel</td>
			<td style="width:171px;">loctite</td>
			<td style="width:123px;">c4356</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:432px;">tricaine (ms-222)</td>
			<td style="width:171px;">sigma</td>
			<td style="width:123px;">E10521-50G</td>
			<td style="width:152px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
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labeling of blood vessels in the teleost brain and pituitary using cardiac perfusion with a dii-fixative

혈관은 척추 동물의 모든 조직을 자극 하 여 필요한 영양분, 산소 및 호르몬 신호를 제공 함으로써 생존을 가능 하 게 합니다. 그것은 개발 하는 동안 작동을 시작 하는 첫 번째 장기 중 하나입니다. 혈관 형성의 메커니즘은 높은 과학적 및 임상 관심의 대상이 되고있다. 그러나 성인의 경우 다른 조직 내에서 자신의 국 소화로 인해 대부분의 살아있는 동물에서 혈관 구조를 시각화 하는 것은 어렵습니다. 그럼에도 불구 하 고, 혈관의 시각화는 내 인 성 및 신경 생물학과 같은 여러 연구에 중요 한 남아 있다. 몇몇 형질 전환 선은 제 브라 피쉬에서 개발 되었지만, 혈관이 형광 단백질의 발현을 통해 직접적으로 가시화 되는 반면, 다른 텔 레 ost 종에는 그러한 도구가 존재 하지 않습니다. 모델으로 서 송사리를 사용 하 여, 현재 프로토콜은 신속 하 고 직접적인 기술을 제공 하 여 뇌와 뇌 하 수 체에 혈관을 레이블 고정을 포함 하 여 심장 통해 사용 하 여. 이 프로토콜은 뇌와 뇌 하 수 체 세포가 전체 조직 또는 두꺼운 조직 조각에서 혈액 맥 관 구조와 상호 작용 하는 방법에 대 한 우리의 이해의 향상을 허용.

이 프로토콜은 송사리 뇌와 뇌 하 수 체에서 혈관에 레이블을 지정 하는 단계 절차를 보여 주며 동시에 조직을 수정 합니다. DiI를 포함 하는 고착 성 용액을 심장에 심장 주입 하 여 라벨링 한 후, 형광 실체 현미경을 사용 하는 슬라이스 (그림 4) 또는 전체 조직에 대 한 혈관을 관찰할 수 있습니다 (그림 5). 두꺼운 조직 슬라이스 또는 전체 조직에, 혈액 ...

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Labeling of Blood Vessels in the Teleost Brain and Pituitary Using Cardiac Perfusion with a DiI-fixative

이 기사에서는 픽스 쳐에 희석 한 DiI의 심장 관류에 의해 텔 레 ost 물고기의 혈관을 라벨링 하기 위한 빠른 프로토콜을 설명 하고, 송사리를 모델로 하 고 뇌 및 뇌 하 수 체 조직에 초점을 맞추고 있습니다.

텔 레 Ost 뇌와 뇌 하 수 체에 있는 혈관의 라벨링은 DiI와 함께 심장 관류를 사용 하 여

Blood vessels innervate all tissues in vertebrates, enabling their survival by providing the necessary nutrients, oxygen, and hormonal signals. It is one ...

이 절차의 전반적인 목표는 텔레오스트 물고기의 뇌와 뇌하수체에 있는 혈관을 표지하는 것입니다, 우리는 모형 종 medaka에 있는 DiI를 포함하는 고정으로 심장 관혈을 이용합니다. 그래서 간단하고 효율적인이 기술은 텔레오스트 물고기의 뇌와 뇌 하 수 체뿐만 아니라 뉴런 또는 내분비 세포와 혈관 사이의 관계에 관한 중요한 질문에 대답하는 데 도움이됩니다. 이 기술의 몇 가지 장점은 빠르고 쉬운 간단한 준비, 텔레오스트 물고기 종에 대한 적응성을 포함한다.생선 홀더를 준비하려면 폴리스티렌 조각을 5센티미터 길이, 3센티미터 너비, 2센티미터 두께로 자르고 폴리스티렌을 직경 9센티미터의 플라스틱 접시에 붙입니다. 그런 다음 메스를 사용하여 폴리스티렌에 3 센티미터 보트 모양의 구멍을 만듭니다. 관류 시스템을 준비하려면 관류 시스템 바늘의 극단에 30~50cm 길이의 플라스틱 캐뉼라를 추가합니다.5센티미터 유리 파이펫을 준비하려면 파이펫 풀러를 사용하여 제조업체의 지침에 따라 개별 유리 모세 혈관을 늘이십시오. 해부를 시작하기 전에 준비된 DiI 고정 용액으로 10 밀리리터 주사기를 적재하고 주사기의 극단에 캐뉼라로 바늘을 놓습니다. 그런 다음 다른 방향으로 배치 된 테이프의 여러 조각을 사용하여 주사기를 벤치에 고정시키고 현미경과 시트의 위치를 조정하여 해부에 적합한 위치를 얻고 팔꿈치로 주사기 피스톤을 누르는 것입니다.다음으로, 생선 홀더 복부쪽에 안락사된 물고기를 놓고 핀으로 머리와 꼬리를 고정시세요. 가위를 사용하여 피부표면층을 수평으로 잘라 전방 복부를 열고, 집게를 사용하여 심실과 구균 동맥에 대한 명확한 접근이 이루어질 때까지 심장 위의 피부를 제거합니다. 모세관의 사지에 유리 파이프를 추가하고 파이펫의 끝을 깰.유리 파이프를 심실 가까이 에 가져와 주사기 피스톤에 팔꿈치 압력을 추가하여 파이펫으로 심실을 고정하면서 액체를 강제로 꺼낼 수 있습니다. 그런 다음 즉시 부비동 독을 집게로 천명하여 혈액을 순환에서 방출합니다. 심실에서 유리 파이펫의 각도를 조정하여 구푸스 동맥의 입구를 찾고, 피펫개 개구부 내부의 피펫 개구부를 구불 구균 동맥 내로 이동합니다.그런 다음 피펫을 구불 구균 동맥 내부에 유지하면서 30~60초 동안 주사기에 압력을 추가합니다. 모든 혈관의 최적의 라벨링을 위해 모든 혈액을 DiI 고정 솔루션으로 대체할 만큼 오랫동안 구불 구균 동맥으로 침투하는 것이 중요합니다. 관류의 약 60 초 후, 더 이상 혈액 누출이 관찰되지 않는 경우, 물고기에서 유리 파이펫과 바늘을 제거하고, 어둠 속에서 실온에서 2 시간 동안 신선한 4 %의 파라 포름 알데히드로 뇌와 뇌하수체를 수확.그런 다음 화상 진찰을 위한 견본을 준비하기 전에 세척 당 10 분 동안 신선한 PBS에서 조직을 두 번 헹구습니다. 입증된 바와 같이 DiI를 포함하는 고정용액의 심장 주입 후, 표지된 혈관은 형광 스테레오 현미경 검사법에 의해 조직 조각또는 공초점 현미경검사법에 의해 조직 조각에서 관찰될 수 있다. 용액이 구균 동맥 대신 심실에 주입되거나 용액이 너무 낮은 압력 및 /또는 너무 짧은 기간 동안 주입되는 경우 혈관의 부적절한 라벨링이 관찰됩니다.또한, 동일한 이미징 파라미터를 가진 동일한 조직을 이미징할 때, 라벨링 강도의 감소는 며칠 후에 관찰될 수 있으며, 신호가 조직 샘플 내에서 더 확산되는 것으로 나타난다. 관심 있는 세포의 발현형 기자 단백질이 혈관과 그밖 세포 모형 사이 상호 작용의 조사를 허용하는 표준 면역 형광 프로토콜을 사용하여 관심의 특정 단백질을 위해 추가로 표지될 수 있는 내의 형질 선에서 조직 조각. 구불 구균 동맥에 도달하는 것이 중요합니다.이 달성 될 때, 주사기 피스톤에 압력을 추가 하는 성공적인 절차를 확인 하는 전구의 확장을 유도 한다. 이 기술은 텔레오스트 뇌하수체에 있는 내분비 세포와 혈관 사이 상호 작용을 일반적으로 조사하는 데 사용될 수 있습니다, 그러나 어쩌면 더 구체적으로 텔레오스트와 포유동물의 포털 시스템 사이 가능한 다름 또는 유사성을 조사하기 위하여. 이 정치적 사용은 방독면과 환기 실을 사용하는 것과 같은 독성 및 휘발성 화합물 예방 조치를 항상 이러한 절차를 수행 할 때 취해야하기 때문입니다.

Research

JoVE Journal

Bioengineering

Anatomical Reconstructions of the Human Cardiac Venous System using Contrast-computed Tomography of Perfusion-fixed Specimens

콘트라스트 계산하기 관류 고정 시편의 단층 촬영을 이용하여 인간의 심장 정맥 시스템의 해부학 적 재건

A detailed  understanding of the complexity and relative variability within the human  cardiac venous system is crucial for the development of cardiac ...

연구

생체공학

Improved Method for the Preparation of a Human Cell-based, Contact Model of the Blood-Brain Barrier

방법 혈액 - 뇌 장벽의 인간 세포 기반의 연락 모델의 준비를 위해 개선

The blood-brain barrier (BBB) comprises impermeable but adaptable brain capillaries which tightly control the brain environment. Failure of the BBB has ...

Generation and Grafting of Tissue-engineered Vessels in a Mouse Model

마우스 모델에서 조직 공학 혈관의 생성 및 손톱 확장

The construction of vascular conduits is a fundamental strategy for surgical repair of damaged and injured vessels resulting from cardiovascular diseases. ...

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

In Vivo Quantitative Assessment of Myocardial Structure, Function, Perfusion and Viability Using Cardiac Micro-computed Tomography

심근 구조, 기능의 생체 양적 평가에서 관류 및 생존 능력은 심장 마이크로 컴퓨터 단층 촬영을 사용하여

The use of Micro-Computed Tomography (MicroCT) for in vivo studies of small animals as models of human disease has risen tremendously due to the fact that ...

Protocol for MicroRNA Transfer into Adult Bone Marrow-derived Hematopoietic Stem Cells to Enable Cell Engineering Combined with Magnetic Targeting

성인 골 수 유래 조 혈 줄기 세포로 세포 공학 자기 대상으로 함께 있도록 예측에 관한 전송을 위한 프로토콜

While CD133+ hematopoietic stem cells (SCs) have been proven to provide high potential in the field of regenerative medicine, their low retention rates ...

Lucifer Yellow - A Robust Paracellular Permeability Marker in a Cell Model of the Human Blood-brain Barrier

루시퍼 옐로우 - 인간 혈액-뇌 장벽의 세포 모델에서 강력한 파라셀룰러 투과성 마커

The blood-brain barrier BBB consists of endothelial cells that form a barrier between the systemic circulation and the brain to prevent the exchange of ...

Intra-cardiac Side-Firing Light Catheter for Monitoring Cellular Metabolism using Transmural Absorbance Spectroscopy of Perfused Mammalian Hearts

교란 성 포유류 심장의 경부 흡광도 분광학을 사용하여 세포 대사를 모니터링하기위한 심장 내 측 발사 라이트 카테터

Absorbance spectroscopy of cardiac muscle provides non-destructive assessment of cytosolic and mitochondrial oxygenation via myoglobin and cytochrome ...

Preclinical Cardiac Electrophysiology Assessment by Dual Voltage and Calcium Optical Mapping of Human Organotypic Cardiac Slices

인간 조직형 심장 슬라이스의 이중 전압 및 칼슘 광학 매핑에 의한 전임상 심장 전극생리학 평가

Human cardiac slice preparations have recently been developed as a platform for human physiology studies and therapy testing to bridge the gap between ...

Blood Flow Imaging with Ultrafast Doppler

초고속 도플러를 가진 혈류 영상

The pulsed-Doppler effect is the main technique used in clinical echography to assess blood flow. Applied with conventional focused ultrasound Doppler ...

Stepwise Cell Seeding on Tessellated Scaffolds to Study Sprouting Blood Vessels

스테셀레이트 비계에 단계별 세포 파종하여 발아 혈관을 연구합니다.

The cardiovascular system is a key player in human physiology, providing nourishment to most tissues in the body; vessels are present in different sizes, ...