Name: integrated cell manipulation platform coupled with the single-probe for mass spectrometry analysis of drugs and metabolites in single suspension cells
Uploaded: 2019-06-21T15:00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells at JoVE

ويشكر المؤلفان ناغا راما كوتابالي على عملها في إعداد العينات لكل من خلايا التعليق وتجارب lysate الخلايا. وبالإضافة إلى ذلك، يشكر المؤلفون المعاهد القومية للصحة (R01GM116116 وR21CA204706) على التمويل.

1. الزجاج خلية اختيار التحقيق تلفيق
<ol><li>تحويل أنابيب الزجاج واحد تتحمل إلى مسبار مدبب مع طرف حاد.<ol>
<li>وضع أنبوب زجاجي واحد تتحمل (ID: 0.3 مم، OD: 1.1. مم) في المشابك من حامل ماصة عمودي، توسيط الزجاج فيما يتعلق لفائف التدفئة وتشديد لتأمين الأنبوب في المكان. وتتألف لفائف التدفئة من 18 قياس النيكل والكروم سلك المقاومة (~ 60 ملم في الطول) ملفوفحول قضيب معدني (قطر = 3.90 مم) 2.5 مرات.</li>
		<li>تعيين أنابيب الزجاج مع برنامج درجة الحرارة 19.5 (وحدة الشركة المصنعة). يمكن تعديل هذه المعلمة لأداة معينة.</li>
		<li>تعيين المكبس الملف اللولبي في 4 (وحدة الصانع). يمكن تعديل هذه المعلمة لأداة معينة.</li>
		<li>الزناد الملف اللولبي لسحب الأنابيب الزجاجية. هذه الخطوة يخلق اثنين من التحقيقات تنصهر في غيض.</li>
		<li>استخدام ملاقط لقطع ~ 1 ملم بعيدا عن غيض من كل مسبار، وخلق فتحة من 10 ~m في القطر في طرف التحقيق.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ثني التحقيق الزجاج لسهولة اقتران إلى ICMP / واحد التحقيق SCMS الإعداد.<ol>
<li>تعيين التحقيق الزجاج سحبها في microforge، ووضع غيض ~3 مم فوق سلك التدفئة البلاتين.</li>
		<li>قم بقلب الحرارة على السلك البلاتيني إلى 30% من درجة الحرارة القصوى.</li>
		<li>ثني المسبار ~ 45 درجة من الموقف الأصلي (الشكل 2).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. منصة معالجة الخلية المتكاملة الجمعية
<ol><li>وضع المجهر المقلوب، microinjector، ونظامين التلاعب الخلية على طاولة بمحركات لسهولة اقتران مع مطياف الكتلة.<ol>
<li>تعديل واحد من أنظمة التلاعب الخلية لاستيعاب واحد التحقيق عن طريق استبدال نهاية مع المشبك الذراع.</li>
		<li>استخدام حقنة بلاستيكية مع إبرة لملء ميكروحاقن مع الزيوت المعدنية. تجنب فقاعات في الأنابيب لأن هذا سيؤثر على شفط.</li>
		<li>استبدل مرحلة إدراج المجهر مقلوب مع لوحة ساخنة. ضبط لوحة ساخنة في 37 درجة مئوية قبل التحليل.</li>
	</ol>
</li>
	<li>إعداد جهاز اختيار الخلية الزجاجي.<ol>
<li>أدخل الرقاقة الزجاجية في الموضع داخل حامل المعدن في الحاقن الدقيق بوضع الجانب الطويل (غير العازم) في حامل الشعرية وتشديد المسمار لتأمين المسبار في مكانه. ضع زاوية طرف المسبار موازية لللوحة المدفأة. تحذير: المسبار الزجاجي حاد جدا وهش، ويكسر بسهولة. حماية عينيك وتوخي الحذر أكثر أثناء إدخال التحقيق في حاقن ميكرو.</li>
		<li>تأمين حامل المعادن من ميكروحاقن في نظام التلاعب الخلية. ضع طرف المسبار بالقرب من منتصف ضوء المجهر المقلوب.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. إنشاء أنبوب نقل ايون الموسعة لمقدم مطياف الكتلة
<ol><li>استخدام قطع المعادن لقطع قطعة من أنابيب الفولاذ المقاوم للصدأ (OD: 0.0625 (1/16) في، ID: 0.021 في) ~ 250 ملم في الطول.</li>
	<li>قياس 135 ملم من النهاية ووضع المعادن الوحشية حتى 135 سوف يتعرض للغلاف الجوي و 115 ملم سوف يكون داخل مطياف الكتلة. تأمين متوحش باستخدام اثنين من الشدات لتشديد عليه.</li>
</ol>4. الزوجين ICMP مع إعداد مسبار واحد
<ol><li>تأمين الشريحة الزجاجية التي تحتوي على مسبار واحد في المشبك الذراع من نظام التلاعب الخلية. ملاحظة: يتم تصنيع تحقيقات واحدة وفقا لبروتوكول نشر سابقا48 مع اثنين من التغييرات الطفيفة في الدراسة الحالية: يتم إجراء باعث نانو-ESI لفترة أطول لسهولة اقتران إلى مطياف الكتلة، ويتم لصقها على واحد تحقيقات إلى الزجاج الجانب على الجانب الأيمن لتجنب التدخل في الحركة المكانية لجهاز الزجاجالخلية اختيار (الشكل 2).</li>
	<li>توصيل الشعرية توفير المذيبات إلى اتحاد موصل عن طريق وضع الشعرية في الأكمام (1/16 × 005 في) من الطويق البلاستيك والاصبع تشديد المناسب.<ol>
<li>ربط الجانب الآخر من الاتحاد موصل إلى الشعرية (ID: 40 ميكرون، OD: 150 ميكرومتر)، الذي يتصل حقنة تحتوي على مذيب أخذ العينات، عن طريق وضع الشعرية في الأكمام (1/32 س .007 في) وتشديد تركيب. استخدام أسيتونيتريل مع 0.1٪ حمض الفورميك كما أخذ العينات المذيبات في هذه التجارب. ملاحظة: المذيب أخذ العينات مرنة، ولكن ينبغي أن تحتوي في المقام الأول على أسيتونيتريل (أو الأسيتونيتريل مع حمض الفورميك للتأين أفضل) لlysis خلية صغيرة النطاق السريع.</li>
		<li>تأمين حقنة في مضخة حقنة على مطياف الكتلة.</li>
		<li>وضع الحبل الجهد التأين على سلك النحاس تعلق على الاتحاد موصل.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ضع مصدر الانبعاث نانو-ESI حوالي 1 ملم إلى فتحة أنبوب نقل الأيون الممتد.<ol>
<li>استخدام نظام التلاعب الخلية للسيطرة على الحركات المكانية للمسبار واحد ووضع انبعاث نانو-ESI مركزيا أمام أنابيب نقل ايون الموسعة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. مع وقف التنفيذ إعداد عينة الخلية
<ol><li>في اليوم السابق للتحليل (~ 18-24 ح)، والبذور من الخلايا للاختبار في قارورة زرع الخلية (T25). يتم استخدام خلايا سرطان الدم النخاعي البشري K562 كنماذج في هذه الدراسة.<ol>
<li>الحرارة 1X الفوسفات العازلة المالحة (PBS) وروزويل بارك معهد التذكارية (RPMI) المتوسطة تكملها 10% مصل جنيني اصطناعي البقري (FBS) و 1% البنسلين-العقدي في 37 درجة مئوية لمدة 30 دقيقة.</li>
		<li>البذور ~ 1 × 106 خلايا في حجم إجمالي 10 مل عن طريق الجمع بين الخلايا مع متوسط دافئ. بشكل عام، استخدم ماصة سعة 10 مل لوضع 8 مل من متوسط RPMI في قارورة ثقافة الخلية. ثم استخدم ماصة 2 مل لوضع 2 مل من خلايا K562 confluent المتوسطة ل ~ 1 X 106 الخلايا.</li>
		<li>احتضان الخلايا في 37 درجة مئوية و 5٪ ثاني أكسيد الكربون2 حتى التحليل.</li>
	</ol>
</li>
	<li>إعداد الخلايا للتحليل.<ol>
<li>خلايا الماصة من قارورة زرع الخلية في أنبوب الطرد المركزي 15 مل.</li>
		<li>تُثري الخلايا إلى أسفل عند 400 x غ و37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق وتُترك فوق الناستانت.</li>
		<li>إعادة تعليق الخلايا في 4 مل من متوسط RPMI تحتوي على مركب الدواء في تركيز العلاج المطلوب. ملاحظة: لتحليل خلايا التحكم، قم بتعليق الخلايا في 4 مل من متوسط RPMI وتخطي إلى الخطوة 6.</li>
		<li>احتضان الخلايا لمدة وقت العلاج في 37 درجة مئوية و 5٪ CO2.</li>
		<li>تُدْسِبُ الخلايا ُإلى 400 x غ و37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق.</li>
		<li>يتم إعادة تعليق الخلايا في 10 مل من PBS، والطرد المركزي في 400 x ز و 37 درجة مئوية لمدة 5 دقائق. بعد الغزل، وتجاهل supernatant. كرر هذه الخطوة 3 مرات لتقليل الكشف عن المخدرات من المكونات خارج الخلية.</li>
		<li>إعادة تعليق الخلايا في 4 مل من PBS لتحليلها.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. إجراء قياسات SCMS باستخدام إعداد ICMP/واحد التحقيق
<ol><li>تخصيص معلمات لمطياف الكتلة للتجربة.<ol>
<li>ضمن عنوان وضع المسح الضوئي لبرنامج الأداة، حدد تعريف المسح الضوئي. استخدام قرار 60,000 م / م في م / z 400, 1 ميكروسكان, 100 مللي ثانية الحد الأقصى للحقن الوقت, والتحكم التلقائي في السيطرة على (AGC) على. وقد استخدم نطاق كتلة (م/ ض) من 100-1000 للتجارب. يمكن تعديل المعلمات بناء على نموذج الصك.</li>
		<li>تحت مضخة حقنة، حدد معدل تدفق 150 nL/min. معدل تدفق يحتاج إلى تحسين لكل تجربة.</li>
		<li>حدد مصدر NSI وتطبيق الجهد من ~ 4.5 كيلو فولت. تحتاج هذه المعلمة أيضا ً إلى تحسين لكل تجربة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>قم بتشغيل المجهر المقلوب (مع تكبير 40مرة تم تحديده لكل من اللوحة العلوية والعدسة السفلية) وقم بتوصيله بمنفذ USB لجهاز كمبيوتر محمول لالتقاط موجزات فيديو حية. قم بتشغيل اللوحة المُسخنة واضبطها على درجة حرارة 37 درجة مئوية.</li>
	<li>على جهاز الكمبيوتر، انتقل إلى علامة التبويب الحصول على بيانات، وحدد باستمرار ضمن الحصول على الوقت.</li>
	<li>إعداد عينة للتحليل.<ol>
<li>ماصة 2-3 مل من عينة في غطاء طبق بيتري صغير (35 مم × 12 مم).</li>
		<li>6.4.2 ضع العينة في وسط الضوء من المجهر المقلوب على رأس لوحة ساخنة.</li>
	</ol>
</li>
	<li>إعداد التحقيق الزجاج الخلية اختيار للتحليل. استخدام نظام التلاعب الخلية لتحريك التحقيق حتى يتم تركيز طرفه تحت المجهر المقلوب في نفس الطائرة مثل الخلايا.</li>
	<li>حدد خلية فردية للتحليل.<ol>
<li>استخدم نظام معالجة الخلية لنقل تلميح مسبار تحديد الخلية إلى خلية مستهدفة. يتم رصد هذه العملية باستخدام المجهر المقلوب. ملاحظة: إذا كان لا يمكن تركيز طرف مسبار اختيار الخلية في نفس المستوى مثل الخلايا، فمن الممكن أن الجزء عازمة من التحقيق غير زاوية بشكل مناسب. ضبط موقف من التحقيق الخلية اختيار حتى يمكن أن تركز كل من نصائح التحقيق جنبا إلى جنب مع الخلايا تحت المجهر.</li>
		<li>قم بقلب مقبض الحاقن الدقيق لضبط موضع الزيت المعدني داخل الأنابيب. يتم توفير شفط لطيف من قبل حاقن ميكرو لتأمين الخلية المستهدفة إلى طرف التحقيق اختيار الخلية. ملاحظة: إذا تعذر التقاط الخلية بواسطة مسبار اختيار الخلية من خلال قوة الشفط، فتحقق من مسبار اختيار الخلية للتأكد من أنه يتم إدخاله بالكامل في حامل الشعرية. وبالإضافة إلى ذلك، تفقد مستويات الزيت المعدني في ميكروحاقن والأنابيب، وطرد الهواء إذا كان هناك أي.</li>
		<li>استخدم نظام معالجة الخلية لنقل الخلية في طرف مسبار اختيار الخلية إلى طرف مسبار واحد، وذلك باستخدام مجهر رقمي يركز على طرف مسبار واحد لمراقبة هذه العملية. عند لمس، قطرة صغيرة الأسيتونيتريل في طرف مسبار واحد يحفز على lyses السريع من الخلية، ومن ثم يتم تأين خلية على الفور لتحليل MS على الخط. ملاحظة: لأن الخلية المحددة مؤمنة إلى تلميح مسبار اختيار الخلية من خلال شفط لطيف، يمكن فصل هذه الخلية أثناء نقلها إلى طرف مسبار واحد. لذلك، إذا لم يتم ملاحظة إشارات الأيون من الدهون الخلوية النموذجية (انظر النتائج التمثيلية أدناه) في غضون 5 ق، فمن الممكن أن الخلية أصبحت غير مرتبطة، وهناك حاجة إلى اختيار خلية مختلفة.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

وليس لدى أصحاب البلاغ ما يكشفون عنه.

تم بناء منصة معالجة وتحليل الخلايا المتكاملة لتوسيع براعة طريقة MS ذات المسبار الواحد، مما يسمح بإجراء تحليل سريع على الإنترنت للخلايا غير المنضمة في بيئة شبه أصلية. ميزة رئيسية لهذه التقنية هو أن الحد الأدنى من إعداد عينة مطلوب، لذلك يتم تحليل الخلايا في الظروف التي تحاكي حالتها القياسية. وعلى وجه الخصوص، يمكن تحديد الخلايا ذات الأهمية الفردية واختيارها بصرياً، مما يقلل إلى أدنى حد من تأثير المصفوفة على كفاءة تأين التصلب المتعدد مع الحفاظ على الخلايا في بيئتها الطبيعية، وبالتالي فإن النتائج هي أكثر تمثيلاً للخلايا الأصلية. الحالة (الشكل S3). ويمكن استخدام هذه التقنية المحتملة لدراسة خلايا المرضى المعلقة في السوائل الحيوية في الدراسات المستقبلية. ميزة أخرى من هذه التقنية هو اختيار مرنة من مذيب أخذ العينات. من المهم أن تشمل أسيتونتريل كما مذيب أخذ العينات الرئيسي بحيث يمكن أن يحدث التثليث الميكروي بسرعة. من المحتمل أن تضاف المعايير الداخلية (مثل مركبات الأدوية ذات العلامات المؤينة بـ isotopically) إلى مذيب أخذ العينات من أجل تقدير كمية الجزيئات ذات الأهمية (مثل جزيئات الدواء) من الخلايا الفردية، بما في ذلك تلك التي يمكن أن تلعب دوراً رئيسياً في إحداث ثورة تخصيص العلاجات الدوائية في المستقبل54.
على الرغم من أن هذا النظام المتكامل يمكن استخدامها بشكل ملائم لتحليل نطاقات واسعة من الخلايا، وحد من الأسلوب هو أن لا التحقيق واحد ولا خلية الاختيار التحقيق هو متاح تجاريا. يملي الحاجة إلى تحسين العديد من المعلمات (مثل معدل التدفق، والجهد، والطول بين أنبوب انبعاث نانو-ESI وأنابيب نقل الأيون، إلخ) قبل كل تجربة. [إين دّيأيشن], واجبة إلى الحجم صغيرة من ال [سنغل-سفينس] و [سلّ-نكأيشن] تحقيق, اضطراب بيئيّة ([إ.غ.], هواء دفق) يمكن نتجت في صعوبات يؤسّس ملتقى بين الاثنان تحقيقات. حل قصير الأجل هو الانحناء من التحقيق اختيار الخلية على مقربة من نهاية لتقليل طول مستدق. وتشمل الأعمال المقبلة إنشاء مسكن لتضمين الأجزاء الحاسمة من الإعداد للحد من الآثار البيئية. نظراً لكمية محدودة من المحتويات الخلوية ووقت الاقتناء القصير (~2-3 s) من خلية، لا يمكن إجراء تحليل MS/MS إلا للأنواع الوفيرة نسبياً. وتشمل العوامل الأخرى التي تؤثر على حساسية الكشف كفاءة التأين المكبوتة بسبب إدخال مصفوفة جنبا إلى جنب مع الخلية وفقدان الأيون المحتملة من خلال أنابيب نقل الأيون الموسعة.

علم الأحياء البشري، وخاصة بيولوجيا الأمراض، يُفهم بشكل متزايد على أنه نتيجة لأنشطة على مستوى الخلايا الفردية، ولكن الأساليب التحليلية التقليدية، مثل مطياف الكتلة الكروماتوغرافيا السائلة (LCMS)، تستخدم عموما لتحليل العينات التي تم إعدادها من مجموعات الخلايا، في حين أن المعلومات الجزيئية المكتسبة لا يمكن أن تمثل بدقة العمليات الكيميائية على مستوى الخلايا الفردية. هذه الأساليب القياسية التقليدية غير قادرة على تمييز آثار عدم تجانس الخلوية على قياس تحليلي، وعملية تدمير وخلط الخلايا لإعداد الليسات يحتمل أن يؤدي إلى تغيير أو فقدان الخلوية المكونات1،2. هذه القيود من الأساليب التقليدية هي مهمة بشكل خاص في تحليل خلايا المريض، والتي يمكن أن تحتوي على عينات تم الحصول عليها خليط معقد من العديد من أنواع الخلايا المختلفة. للتغلب على أوجه القصور هذه، يجري تطوير أساليب التحليل الجزيئي لخلايا واحدة، بما في ذلك أساليب قياس الطيف الكتلي أحادي الخلية (SCMS)، وتطبيقها بشكل متزايد على التحليل البيولوجي، وخاصة من الأيض الخلوي والوزن الجزيئي المنخفض الجزيئات الحيوية3،4.
وقد طورت تقنيات SCMS الأولى تقنيات مبنية على الفراغ لإجراء التحليلات في ظل ظروف غير محيطة2و5و6و7و8و9 10,11. تقنيات SCMS غير المحيطة قادرة على تحليل الدهون الخلوية والأيض، ولكن تتطلب قبل المعالجة عينة في ظل ظروف اصطناعية، وبالتالي ليست مناسبة للتحليل في الوقت الحقيقي. وتشمل عملية إعداد العينات للتحليل غير المحيط إضافة مكونات المصفوفة، ويمكن لهذا الإعداد أن يغير المكونات الخلوية من بيئتها الطبيعية12. ولذلك، فإن تقنيات قياس الطيف الكتلي المحيط (MS)، التي لا تتطلب فراغاً لبيئة أخذ العينات، تستخدم لتحليل الخلايا في بيئة قريبة من الأصل. عدم وجود بيئة فراغ يسمح لبراعة في التصميم التجريبي؛ يمكن إضافة الكاميرات لمراقبة العملية الخلوية ويمكن الجمع بين تقنيات تأين ليونة مع تقنيات الفصل للحصول على معلومات أفضل من كل تجربة خلية واحدة4،12،13 14 ،15،16،17،18،19،20،21،22 ،24 24 ،24،26،27،27،29،30،31 32 ،33،34،35،36،37،38،39،40 41,42. 
طريقة SCMS ذات التحقيق الواحد هي تقنية محيطة تحلل خطوط خلايا سرطان الثدييات الحية في بيئة قريبة من السكان الأصليين21،43،44،45،46. وبالإضافة إلى ذلك، تم استخدام جهاز مسبار واحد لتطبيقات القياس الطيفي الكتلي الأخرى، بما في ذلك تحليل الجزيئات خارج الخلية في كرويات متعددة الخلايا والتصوير MS من الأنسجة47،48،49 ،50،51،52. ومع ذلك، بما أن تجميد الخلية على ركائز مطلوب لهذا الأسلوب، لا يمكن تحليل خلايا التعليق مباشرة باستخدام هذه التقنية3،53. ولذلك، فإن نظام SCMS أحادي التحقيق لا يمكن استخدامها مباشرة لأخذ عينات من الخلايا الفردية غير الملتصقة، مثل خطوط الخلايا غير الملتصقة أو خلايا التعليق المعزولة عن دم المريض أو سوائل الجسم الأخرى54. في هذا العمل، يتم إرفاق منصة معالجة الخلية المتكاملة (ICMP) مع تقنية SCMS أحادية التحقيقلتحليل حية، تعليق الخلايا على الخط مع الحد الأدنى من إعداد عينة (الشكل 1)46. تتكون اللجنة الدولية لشؤون المفقودين من مجهر مقلوب لمراقبة اختيار الخلايا، ومسبار اختيار خلية زجاجية، وحاقن صغير لالتقاط الخلايا العائمة الفردية، ولوحة ساخنة للحفاظ على درجة الحرارة الخلوية، ونظامين للتلاعب بالخلايا للسيطرة على المكاني حركات كل من ال [سل-كّينكأيشن] زجاجيّة تحقيق و [سنغل-سّر], ومجهر رقميّة أن يلاحظ خلية إنتقال من الخلية -إنتقاء تحقيق طرف إلى ال [سنغل-سفير] طرف. يتم تفصيل تصنيع التحقيق واحد في المنشورات السابقة ولن يتم تناولها هنا21،48. ويقترن نظام ICMP/واحد-التحقيق إلى مطياف كتلة عالية الدقة. يسمح هذا الإعداد المتكامل بأخذ عينات من خلايا مفردة محددة من عينات بيولوجية معقدة مع الحد الأدنى من الآثار من جزيئات المصفوفة.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetontrile</td>
			<td>Millipore Co.</td>
			<td>AX0145-1</td>
			<td>Sampling solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTram Vario</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>6221</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper wire</td>
			<td>stores.ebay.com/jewelerheaven</td>
			<td>Dead soft, round, 20 guage, 25 ft</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital stereomicroscope</td>
			<td>Shenzhen D&#38;F Co.</td>
			<td>Supereyes T004</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable micropipette, 1-5 &#181;L</td>
			<td>Rochester Scientific</td>
			<td>5065</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual bore quartz tubing, 1.120&#34;x0.005&#34;x12&#34;</td>
			<td>Friedrich &#38; Dimmock, Inc.</td>
			<td>MBT-005-020-2Q</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoxy resin</td>
			<td>Devcon</td>
			<td>Part No. 20945</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf cell manipulation system</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Transferman NK517800397-U.R.</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>External nut</td>
			<td>VALCO*CHEMINERT</td>
			<td>EN1</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>399388-500ML</td>
			<td>Sampling solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fused silica capillary, ID: 40 &#181;m, OD: 100 &#181;m</td>
			<td>Polymicro Technologies</td>
			<td>TSP040105</td>
			<td>Single-probe fabrication, conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fused silica capillary, ID: 50 &#181;m, OD: 150 &#181;m</td>
			<td>Polymicro Technologies</td>
			<td>1068150015</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone Synthetic fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Fischer Sci</td>
			<td>SH3006603</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inline MicroFilter</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>M-520</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser puller</td>
			<td>Sutter Instrument Co.</td>
			<td>Model P-2000</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED UV lamp</td>
			<td>Foshan Liang Ya Dental Equipment</td>
			<td>LY-C240</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ Orbitrap mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LTQ Orbitrap XL</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Narishige, Co.</td>
			<td>MF-9</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microunion</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>M-539</td>
			<td>Conductive union</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tubing, 1/32x0.005x 5ft</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>1576</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tubing, 1/32x0.007x 5ft</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>1577</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco/Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, 35x10 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25382-334</td>
			<td>Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0780-50L</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum wire</td>
			<td>Narishige, Co.</td>
			<td>Model PT-A</td>
			<td>Microforge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>PSM-2120</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 1X with Corning glutagro</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-104-CV</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-bore tubes</td>
			<td>Boralex</td>
			<td>5065</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel ferrules, for 1/16&#34; OD</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>VHP-200-01x</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel tubing, 1/32x 205 &#181;m x30 cm</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>U-1128</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>1725LTN250UL</td>
			<td>Sampling syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 flask</td>
			<td>CellStar</td>
			<td>690160</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo LTQ XL ion source interface flange</td>
			<td>New Objective</td>
			<td>PB5500</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoPlate</td>
			<td>TokaiHit</td>
			<td>55R30N</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605-010</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube cutter, for 1/16&#34; stainless steel</td>
			<td>SUPELCO</td>
			<td>58692-U</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB digital photography microscope</td>
			<td>dx.com</td>
			<td>SO2 25~500X</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV curing resin</td>
			<td>Prime Dental</td>
			<td>Item No. 006.030</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical pipette puller</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>Model 720</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Voltage housing</td>
			<td>PicoChip</td>
			<td>PCH-A00120</td>
			<td>ICMP/MS interface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire cutter</td>
			<td>Craftsman</td>
			<td>4 1/2 in end nipper</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

integrated cell manipulation platform coupled with the single-probe for mass spectrometry analysis of drugs and metabolites in single suspension cells

يتيح قياس الطيف الكتلي أحادي الخلية (SCMS) الكشف الدقيق والتحليل الدقيق لنطاقات واسعة من الأنواع الخلوية على مستوى الخلايا الفردية. ويمكن أن يقترن المسبار الأحادي، وهو جهاز لأخذ العينات والتأين على نطاق مصغر، بمطياف كتلة لتحليل SCMS السريع على الخط للمكونات الخلوية في ظل الظروف المحيطة. في السابق، كانت تقنية SCMS ذات المسبار الواحد تستخدم في المقام الأول لقياس الخلايا المتوقفة على الركيزة، مما يحد من أنواع الخلايا للدراسات. في الدراسة الحالية، تم دمج تكنولوجيا SCMS ذات التحقيق الواحد مع نظام معالجة الخلايا، الذي يستخدم عادة للإخصاب في المختبر. تستخدم هذه المنصة المتكاملة للتلاعب والتحليل الخلية مسبار اختيار الخلية لالتقاط الخلايا العائمة الفردية المحددة ونقل الخلايا إلى طرف مسبار واحد للتحليل الجزئي، يليه تحليل الطيف الكتلي الفوري. عملية الالتقاط والتحويل هذه تزيل الخلايا من الحل المحيط قبل التحليل، مما يقلل من إدخال جزيئات المصفوفة في تحليل قياس الطيف الكتلي. هذا الإعداد المتكامل قادر على تحليل SCMS للخلايا المعزولة المرضى المستهدفة الموجودة في عينات سوائل الجسم (مثل البول والدم واللعاب، وما إلى ذلك)، مما يسمح بالتطبيقات المحتملة لتحليل SCMS للطب البشري وبيولوجيا الأمراض.

أولاً، يتم استخدام الخلايا K562 غير المعالجة لإنشاء الطريقة التجريبية. في تجربة SCMS نموذجية، يمكن ملاحظة تغييرات واضحة من أطياف الكتلة من نقل خلية، أثناء الكشف عن محتويات الخلوية، وبعد الانتهاء من القياس (الشكلS1). ثلاث قمم الدهون الخلوية المشتركة (فوسفاتيديلكولين، PC)، بما في ذلك PC (34: 4) (م/ z 754.536)، PC (36: 4) (م/ z 782.567)، وPC (38: 5) (م/ z 808.583)، ومراقبة لضمان نقل الخلية بنجاح والخلوية يتم الكشف عن محتويات (الشكل S2)21،43،46،55،56. إذا لم يتم رؤية قمم الدهون في غضون 5 ق، يتم تغيير مستوى الزيت المعدني في ميكروحاقن للحد من شفط عقد الخلية في تلميح التحقيق اختيار الخلية. الحذر يحتاج إلى أن تؤخذ بحيث يتم دفع أي النفط المعدني من التحقيق الخلية اختيار. يتم تأكيد هوية العديد من أجهزة الكمبيوتر في النطاق الشامل من م / z 750-850 باستخدام MS / MS على عينات الخلايا غير المعالجة ( الشكل3، الشكل S2، الجدول 1)46.
كما تتعرض الخلايا K562 للعلاج مع مركبات المخدرات المختلفة لتوسيع براعة الأسلوب. يتم احتضان خلايا K562 بالأحجار الكريمة (1 ميكرومتر) وتاكسول (1 ميكرومتر) لمدة 1 ساعة وOSW-1 (100 طن، 1 ميكرومتر) لمدة 4 ح و2 ح، على التوالي. ثم يتم غسل الخلايا مع PBS للحد من الكشف عن مركبات المخدرات من المحتوى خارج الخلية. ويمكن القضاء على مساهمة المصفوفة (مثل الأيونات من وسط ثقافة الخلية، وPBS، والمذيبات) إلى أطياف الكتلة من المحتويات الخلوية من خلال طرح البيانات، وذلك بسبب إشارات أيون مختلفة بشكل كبير (الشكلS3). يتم الكشف عن جميع مركبات المخدرات الثلاثة باستخدام ICMP / واحد التحقيق MS الإعداد (الشكلS4)46. وتشير هذه النتائج إلى أن هذه الطريقة يمكن استخدامها لدراسة الدهون داخل الخلايا, المخدرات, والأيض على مستوى خلية واحدة من الخلايا في الحل في بيئة شبه أصلية.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig1.jpg"> الشكل 1 الإعداد التجريبي لتجارب MS خلية تعليق واحد. (أ) منصة معالجة الخلية المتكاملة (ICMP) مقترنة بمطياف الكتلة. (B) مخطط لتحليل الخلايا العالقة. (C) عرض تجريبي لخلايا K562 يتم اختيارها باستخدام مسبار اختيار الخلية. أعيد طبعها بإذن من Standke وآخرون46. حقوق الطبع والنشر 2019 الجمعية الكيميائية الأمريكية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig1large.jpg" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig2.jpg"> الشكل 2 صور من معدلة مسبار واحد ومسبار اختيار الخلية المستخدمة لتجارب MS خلية تعليق واحد. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig2large.jpg" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig3.jpg"> الشكل 3 تكبير في الطيف الشامل من خلية واحدة تظهر الأنواع التمثيلية (م / z 750-850). يتم تأكيد الهياكل الكيميائية باستخدام تحليل MS /MS (الشكلS1). أعيد طبعها بإذن من Standke et al46. حقوق الطبع والنشر 2019 الجمعية الكيميائية الأمريكية. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig3large.jpg" target="_blank">الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>
جزيء المخدرات*</td>
			<td>م/ض</td>
			<td>خطأ كتلة (ppm)</td>
		</tr>
<tr>
<td>[جيمسيتابين + ح] +
</td>
			<td>264.076</td>
			<td>11.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>[تاكسول + نا] +
</td>
			<td>876.318</td>
			<td>2.74</td>
		</tr>
<tr>
<td>[OSW-1 + Na] +
</td>
			<td>895.445</td>
			<td>0.89</td>
		</tr>
<tr>
<td>الدهون الخلوية</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (34: 4) + H] +
</td>
			<td>754.535</td>
			<td>3.71</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (34: 3) + ح] +
</td>
			<td>756.551</td>
			<td>3.44</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (34: 2) + H] +
</td>
			<td>758.569</td>
			<td>0.66</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36: 5) + H] +
</td>
			<td>780.551</td>
			<td>3.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36: 4) + H] +
</td>
			<td>782.568</td>
			<td>2.17</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36: 3) + H] +
</td>
			<td>784.585</td>
			<td>0.64</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38: 7) + H] +
</td>
			<td>804.551</td>
			<td>4.1</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38: 6) + H] +
</td>
			<td>806.567</td>
			<td>2.48</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38: 5) + H] +
</td>
			<td>808.583</td>
			<td>2.72</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38: 4) + H] +
</td>
			<td>810.601</td>
			<td>صفر</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (40: 7) + H] +
</td>
			<td>832.583</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
</tbody></table>الجدول 1 مكونات خلوية تم تحديدها باستخدام إعداد ICMP/Single-probe. وقد تأكد الكشف عن جميع مركبات المخدرات عن طريق مقارنة نتائج التصلب المتعدد/التصلب المتعدد مع المركب القياسي.

Watch this Scientific Journal Video about Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells at JoVE

Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells

تم تطوير منصة معالجة خلية متكاملة للاستخدام بالاقتران مع إعداد قياس الطيف الكتلي أحادي التحقيق لتحليل خلايا التعليق الفردية على الخط في الظروف المحيطة.

منصة معالجة الخلية المتكاملة مقرونة بمسبار واحد لتحليل قياس الطيف الكتلي للأدوية والأيض في خلايا تعليق واحدة

Single cell mass spectrometry (SCMS) enables sensitive detection and accurate analysis of broad ranges of cellular species on the individual-cell level. ...

منذ هذه الطريقة يحلل الخلايا من الحل، فإنه يمكن استخدامها لدراسة الخلايا في بيئة قريبة من الأم. وهذا يشمل تحليل عينات الخلايا المشتقة من المريض. هذه التقنية يتطلب القليل أو لا إعداد عينة من الخلايا.لذلك، يمكننا تحليل الخلايا الفردية عبر الإنترنت في ظل الظروف المحيطة، مما يسمح لنا باستكشاف التغاير الخلوي. يمكن تطبيق هذه التقنية لدراسة الخزعات السائلة من مجموعة متنوعة من حالات المرض المختلفة ، لأنها يمكن أن تحليل أنواع مختلفة من الخلايا المعزولة مباشرة عن عينات المرضى. لتحويل واحد أنابيب الزجاج تتحمل إلى مسبار مدبب مع طرف حاد، المقام الأول أنبوب زجاجي واحد تتحمل في المشابك من حامل ماصة عمودي، مركزة الزجاج فيما يتعلق لفائف التدفئة وتشديد لتأمين أنبوب في مكان.وتتألف لفائف التدفئة من 18 قياس النيكل الكروم المقاومة سلك ملفوف حول قضيب معدني 2.5 مرات. تعيين أنابيب الزجاج مع برنامج درجة الحرارة 19.5. تعيين المكبس اللولبي في أربعة.الزناد اللولبي لسحب أنابيب الزجاج. هذه الخطوة يخلق اثنين من تحقيقات تنصهر في الطرف. استخدام البلوزات لقطع ما يقرب من ملليمتر واحد بعيدا عن غيض من كل مسبار، وخلق فتحة من حوالي 10 ميكرون في القطر في طرف التحقيق.لثني مسبار الزجاج لالتيا اقتران سهلة إلى ICMP، SCMS التحقيق واحد إعداد. تعيين أول مسبار الزجاج سحبت في microforge. ضع الجزء العلوي حوالي ثلاثة ملليمترات فوق سلك التدفئة البلاتيني.ثم، تحويل الحرارة على السلك البلاتيني إلى 30٪ من درجة الحرارة القصوى. ثني المسبار حوالي 45 درجة من الوضع الأصلي. ضع المجهر المقلوب في جهازي معالجة الخلايا على طاولة مزودة بمحركات لتسهيل اقترانها مع مطياف الكتلة.لإعداد جهاز اختيار الخلايا الزجاجية ، أدخل مسبار اختيار الخلايا الزجاجية داخل حامل معدني من المنازن الصغير عن طريق وضع الشريحة الطويلة في حامل الشعيرات الدموية وتشديد المسمار لتأمين التحقيق في مكان. ضع نصائح المسبار بزاوية موازية للصحن المدفأ. تأمين حامل المعادن من الحقن الدقيقة في نظام التلاعب الخلية.ثم ضع طرف المسبار بالقرب من منتصف ضوء المجهر المقلوب. تأمين الشريحة الزجاجية التي تحتوي على مسبار واحد في المشبك الذراع من نظام التلاعب الخلية. ربط المذيب توفير الشعرية إلى الاتحاد موصل عن طريق وضع الشعرية في كم من الضراوة البلاستيكية والاصبع تشديد المناسب.ربط الجانب الآخر من الاتحاد موصل إلى الشعرية التي ترتبط بحقنة تحتوي على المذيبات أخذ العينات عن طريق وضع الشعيرات الدموية في الأكمام وتشديد المناسب. استخدام الأسيتونيتريل مع 0.1٪ حمض فشكل كمذيب أخذ العينات في هذه التجارب. تأمين الحقنة في مضخة الحقنة على مطياف الكتلة.ضع تأين النانو أو نانو ESI الباعث ما يقرب من ملليمتر واحد إلى فتحة أنبوب نقل أيون الموسعة. استخدام نظام معالجة الخلية للسيطرة على الحركات spacial من التحقيق واحد ووضع نانو ESI باعث مركزيا أمام أنابيب نقل أيون الموسعة. Pipette الخلايا من قارورة زراعة الخلية إلى أنبوب جهاز طرد مركزي 15 ملليلتر.تدور الخلايا في 400 مرة G في 37 درجة مئوية لمدة خمس دقائق والتخلص من افرا. resuspend الخلايا في أربعة ملليلترات من متوسطة RPMI تحتوي على مركب المخدرات في تركيز العلاج المطلوب. تخصيص المعلمات التجريبية لمطياف الكتلة.ضمن عنوان وضع المسح الضوئي لبرنامج الجهاز، حدد تحديد الفحص. استخدام قرار من 60،000 في M عبر Z 400، واحد microscan 100 ميلي ثانية أقصى وقت الحقن والتحكم التلقائي في اكتساب. تحت مضخة حقنة، حدد معدل تدفق 150 نانولترز في الدقيقة الواحدة.حدد مصدر NSI وتطبيق الجهد من حوالي 4.5 كيلوفولت. قم بتشغيل المجهر المقلوب عند التكبير 40 مرة المحدد لكل من اللوحة العلوية والعدسة السفلية. قم بتوصيله بمنفذ USB للكمبيوتر المحمول لالتقاط خلاصات الفيديو المباشرة.بدوره على لوحة ساخنة وتعيينها إلى 37 درجة مئوية. على الكمبيوتر، انتقل إلى علامة التبويب الحصول على البيانات وحدد باستمرار ضمن الوقت المكتسبة. لإعداد العينة للتحليل، الماصات اثنين إلى ثلاثة من العينة في غطاء طبق بتري صغير.ضع العينة في مركز الضوء من المجهر المقلوب على قمة اللوحة الساخنة. إعداد خلية الزجاج اختيار التحقيق للتحليل. استخدام نظام التلاعب الخلية لنقل التحقيق بحيث يتم التركيز على أعلى تحت microcsope مقلوب في نفس الطائرة كخلايا.استخدم نظام معالجة الخلية لنقل تلميح مسبار تحديد الخلية إلى خلية مستهدفة للتحليل. يتم رصد هذه العملية باستخدام المجهر المقلوب. بدوره بلطف مقبض من المصبر لضبط موقف من الزيت المعدني داخل الأنابيب.يتم توفير شفط لطيف من قبل الحقن المجهري لتأمين الخلية المستهدفة إلى طرف مسبار اختيار الخلية. استخدام نظام معالجة الخلية لنقل الخلية في الخلية تلميح التحقيق اختيار إلى طرف التحقيق واحد باستخدام المجهر الرقمي تركز على طرف التحقيق واحد لرصد هذه العملية. وتستخدم خلايا K-562 غير المعالجة لإنشاء طريقة تجريبية.في تجربة SCMS نموذجية، يمكن ملاحظة تغيرات واضحة من أطياف الكتلة من نقل خلية أثناء الكشف عن محتويات الخلوية وبعد الانتهاء من القياس. ثلاث قمم مشتركة للدهون الخلوية بما في ذلك PC 34:4، PC 36:4، PC 38:5 يتم مراقبتها لضمان نقل الخلية بنجاح والكشف عن محتويات الخلوية. يتم تأكيد هوية العديد من أجهزة الكمبيوتر في نطاق كتلة من 750 إلى 850 باستخدام MSMS على عينات الخلايا غير المعالجة.باستخدام المسبار المتعدد التشوّع ICMP الذي تم إعداده، تم اكتشاف Gemcitabine وSicol وOSW1 بعد الحضانة مع خلايا K-562. هذه النتائج تشير إلى أن هذه الطريقة يمكن استخدامها لدراسة الدهون داخل الخلايا, المخدرات, والايض على مستوى الخلية واحدة من الخلايا في حل في بيئة محلية قريبة. تذكر أن تضع بشكل آمن الخلية اختيار التحقيق في حامل ماصة العالمي بحيث يمكن تطبيقها على نحو كاف.ويمكن أيضا تطبيق هذه الطريقة على عينات المستمدة من المريض للتمييز بين الاختلافات بين الأيض الخلوية من مجموعة متنوعة من أنواع الخلايا, الذي يسمح لنا للحصول على فهم أفضل لهذه الحالات المرض. بعد تطوير هذه الطريقة، يمكننا تنفيذ القياس الكمي لمركبات المخدرات على مستوى الخلية الواحدة. عند العمل مع الخلايا، من المهم أن يكون لديك معدات الحماية الشخصية المناسبة بما في ذلك معطف المختبر والقفازات.ويمكن استخدام ارتداء العين إضافية عند العمل مع الزجاج.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

الايض غير مستهدفة من مصادر بيولوجية عن طريق Ultraperformance اللوني السائل عالية الدقة الطيف الكتلي (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

تسلسل مصنع ستريت Heteroxylans عن طريق إنزيمي، والمواد الكيميائية (مثلأيشن) والمادية (الطيف الكتلي، الرنين المغناطيسي النووي) تقنيات

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

تصور المحيطة الطيف الكتلي مع استخدام انعراجي التصوير الفوتوغرافي

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites

طريقة مريحة لاستخراج وتحليل مع اللوني السائل عالي الضغط الكاتيكولامينات العصبية وعلى نواتج الأيض

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

تحليل التنفس في الوقت الحقيقي باستخدام التأين نانوليكتروسبراي الثانوية بالإضافة إلى دقة عالية الطيف الكتلي

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

توليف وتحليل الطيف الكتلي اليغو-بيبتويدس

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog (Xenopus laevis) Embryos

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog Xenopus laevis Embryos

ميكروبروبي الشعرية التفريد قياس الطيف الكتلي لجميع الخلايا المفردة في أجنة "الضفادع يعيش" (ليفيس النمو)

The quantification of small molecules in single cells raises new potentials for better understanding the basic processes that underlie embryonic ...

Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry

وضع العلامات التساهمية مع ديثيلبيروبونات لدراسة بنية البروتين الأعلى ترتيبا حسب قياس الطيف الكتلي

Characterizing a protein&#39;s higher-order structure is essential for understanding its function. Mass spectrometry (MS) has emerged as a powerful tool ...

Capillary Electrophoresis-based Hydrogen/Deuterium Exchange for Conformational Characterization of Proteins with Top-down Mass Spectrometry

تبادل الهيدروجين / الديوتيريوم القائم على الرحلان الكهربائي الشعري للتوصيف التوافقي للبروتينات باستخدام مطياف الكتلة من أعلى إلى أسفل

Resolving conformational heterogeneity of multiple protein states that coexist in solution remains one of the main obstacles in the characterization of ...

Cell-Lineage Guided Mass Spectrometry Proteomics in the Developing (Frog) Embryo

Cell-Lineage Guided Mass Spectrometry Proteomics in the Developing Frog Embryo

البروتيوميات قياس الطيف الكتلي الموجه بسلالة الخلية في الجنين النامي (الضفدع)

Characterization of molecular events as cells give rise to tissues and organs raises a potential to better understand normal development and design ...