Name: integrated cell manipulation platform coupled with the single-probe for mass spectrometry analysis of drugs and metabolites in single suspension cells
Uploaded: 2019-06-21T15:00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells at JoVE

המחברים מודים לנאגה ראמה Kothapalli אלי עבור עבודתה בפיתוח הכנה לדוגמא עבור תאי ההשעיה וניסויים ליפוסט תאים. בנוסף, המחברים מודים ל-NIH (R01GM116116 ו-R21CA204706) למימון.

1. בחירת תא זכוכית לייצור בדיקה
<ol><li>המר בודד צינורות זכוכית לתוך לווין מחודדות עם טיפ חדה.<ol>
<li>מניחים צינור זכוכית בודד (מזהה: 0.3 מ"מ, OD: 1.1. mm) לתוך התפסים של מחזיק פיפטה אנכי, מרכוז הזכוכית ביחס סליל החימום ולהדק כדי לאבטח את הצינור במקום. סליל חימום מורכב כבל ההתנגדות 18 כרום ניקל (~ 60 mm אורך) מתפתל על מוט מתכת (קוטר = 3.90 מ"מ) 2.5 פעמים.</li>
		<li>להגדיר את אבובים זכוכית עם טמפרטורה תוכנית 19.5 (יחידת היצרן). ניתן לשנות פרמטר זה עבור כלי מסוים.</li>
		<li>הגדר את הסולנואיד ב-4 (יחידת היצרן). ניתן לשנות פרמטר זה עבור כלי מסוים.</li>
		<li>תפעיל את הסולנואיד. כדי למשוך את צינור הזכוכית שלב זה יוצר שני רגשים התמזגו בקצה.</li>
		<li>השתמש מלקחיים לחתוך ~ 1 מ"מ מהקצה של כל לווין, יצירת הפתח של ~ 10 יקרומטר בקוטר בקצה המכשיר.</li>
	</ol>
</li>
	<li>לכופף את בדיקה זכוכית עבור צימוד קל ההתקנה של ICMP/בדיקה יחיד SCMS.<ol>
<li>להגדיר בדיקה זכוכית משכה לתוך מיקרופורג, מיקום הטיפ ~ 3 מ"מ מעל חוט החימום פלטינה.</li>
		<li>הפעל את החום על חוט הפלטינה ל -30% מטמפרטורת המקסימום.</li>
		<li>לכופף את החללית ~ 45 ° מהמיקום המקורי (איור 2).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. פלטפורמת מניפולציה משולבת הרכבה
<ol><li>מניחים את המיקרוסקופ ההפוך, microinjector זרק, ושני מערכות מניפולציה תאים על שולחן ממונע עבור צימוד קל עם ספקטרומטר המסה.<ol>
<li>שנה את אחת ממערכות הטיפול בתאים כדי להכיל לווין יחיד על-ידי החלפת הקצה בתפס זרוע.</li>
		<li>השתמש מזרק פלסטיק עם מחט כדי למלא את המיקרומזרק עם שמן מינרלי. להימנע בועות אבובים כמו זה ישפיע על השאיבה.</li>
		<li>החליפו את הוספת השלב של המיקרוסקופ ההפוך עם הצלחת המחוממת. הגדר את הצלחת המחוממת ב-37 ° c לפני הניתוח.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הגדר את התקן בחירת תא הזכוכית.<ol>
<li>הכנס את הזכוכית בחירת התא בתוך מחזיק מתכת של מיקרו מזרק על ידי הצבת ארוך (לא מכופף) צד לתוך המחזיק נימי והידוק הבורג כדי לאבטח את המקדח במקום. הצב את זווית קצה המכשיר במקביל לצלחת המחוממת. התראה: בדיקת הזכוכית חדה מאוד ושברירית, והיא נשברת בקלות. להגן על העיניים שלך להיות זהיר במיוחד תוך החדרת הגשוש לתוך מיקרו מזרק.</li>
		<li>אבטח את מחזיק המתכת של המיקרומזרק לתוך מערכת מניפולציה התא. הצב את קצה המכשיר בסמוך למרכז אור המיקרוסקופ ההפוך.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. צור צינור העברת יונים מורחב לספקטרומטר המסה
<ol><li>השתמש בחותך מתכת כדי לגזור פיסת צינורות נירוסטה (OD: 0.0625 (1/16) ב, מזהה: 0.021 ב) ~ 250 מ"מ באורך.</li>
	<li>למדוד 135 מ"מ מהסוף ומקום ברחוב מתכת כל כך ~ 135 מ"מ יהיה חשוף האטמוספירה ~ 115 מ"מ יהיה בתוך ספקטרומטר המסה. אבטחו את הרחוב בעזרת שני. מכלים כדי להדק אותו</li>
</ol>4. הזוג ICMP עם התקנה יחידה בדיקה
<ol><li>אבטחו את שקופית הזכוכית המכילה את המקדח היחיד לתוך מהדק הזרוע של מערכת הטיפול בתאים. הערה: חד-הרגשים מיוצרים על פי פרוטוקול48 שפורסם בעבר, עם שני שינויים קלים במחקר הנוכחי: פולט NANO-ESI מתבצע זמן רב יותר לצורך חיבור קל לספקטרומטר המסה, והחד-בדיקה מודבקים לזכוכית בצד הימני כדי למנוע הפרעה לתנועה המרחבית של המכשיר בחירת תא הזכוכית (איור 2).</li>
	<li>לחבר את הממס-מתן נימי לאיחוד מוליך על ידי הצבת הקפילר לתוך השרוול (1/16 x .005 in) של שלטון פלסטיק ואצבע הידוק המדידה.<ol>
<li>חבר את הצד השני של האיחוד המוליך לקפילר (ID: 40 μm, OD: 150 μm), המחובר למזרק המכיל את הממיסים, על ידי הצבת הקפילר בשרוול (1/32 x .007 in) והידוק המדידה. השתמש acetonitrile עם 0.1% החומצה פורמית כמו ממיס הדגימה בניסויים אלה. הערה: ממיס הדגימה גמישה, אך היא צריכה בעיקר להכיל acetonitrile (או acetonitrile עם חומצה פורמית לאינון טוב יותר) לפירוק תאים מיקרו בקנה מידה מהיר.</li>
		<li>אבטח את המזרק לתוך משאבת המזרק. על ספקטרומטר המסה</li>
		<li>הנח את כבל המתח של אינון על חוט נחושת המחובר לאיחוד המוליך.</li>
	</ol>
</li>
	<li>מקם את הפולט nano-ESI ~ 1 מ"מ עד לפתח הצינור של העברת היונים המורחבת.<ol>
<li>השתמש במערכת מניפולציה התא כדי לשלוט על התנועות המרחביים של הבדיקה היחידה ולמקם את פולט ננו-ESI מרכזי מול אבובים העברת יון מורחב.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. הכנה לדגימת תא מושעה
<ol><li>יום לפני הניתוח (~ 18-24 h), הזרע את התאים לבדיקת בקבוקון תרבות התא (T25). K562 בתאי לוקמיה מיאלואידית אנושית משמשים כמודלים במחקר זה.<ol>
<li>חום 1x פוספט באגירה מלוחים (PBS) ו רוזוול פארק הזיכרון מכון (RPMI) בינוני עם 10% סרום סינתטי העוברי (FBS) ו 1% פניצילין-סטרפטומיצין ב 37 ° c עבור 30 דקות.</li>
		<li>זרעי ~ 1 x 106 תאים בנפח כולל של 10 mL על ידי שילוב תאים עם בינוני חם. באופן כללי, השתמש בפיפטה בגודל 10 מ"ל כדי למקם 8 מ ל של RPMI לתוך בקבוקון תרבות התא. לאחר מכן, השתמש בפיפטה 2 מ"ל כדי לשים 2 מ ל של confluent K562 תאים בינוני עבור ~ 1 x 106 תאים.</li>
		<li>מודאת התאים ב 37 ° צ' ו 5% CO2 עד ניתוח.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכן תאים לניתוח.<ol>
<li>. בתוך שפופרת צנטריפוגה של 15 מ ל</li>
		<li>בתאי ספין למטה ב 400 x g ו 37 ° צ' עבור 5 דקות ולהיפטר supernatant.</li>
		<li>להשעות את התאים ב 4 מ ל של RPMI בינוני המכיל את תרכובת התרופות בריכוז הטיפול הרצוי. הערה: לניתוח תאי בקרה, השהה מחדש את התאים ב-4 מ ל של RPMI בינונית ודלג לשלב 6.</li>
		<li>דגירה את התאים למשך זמן הטיפול ב 37 ° צ' ו 5% CO2.</li>
		<li>בתאי ספין למטה ב 400 x g ו 37 ° צ' עבור 5 דקות....</li>
		<li>תאים מושעה מחדש 10 מ ל של PBS, ו צנטריפוגה ב 400 x g ו 37 ° צ' עבור 5 דקות. אחרי הספינינג, למחוק את הסופרנטאנט. חזור על שלב זה 3 פעמים כדי למזער את זיהוי התרופה מתוך מרכיבים לחילוץ.</li>
		<li>השהה תאים מחדש ב-4 מ ל של PBS לניתוח.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. ביצוע מדידות SCMS באמצעות ההתקנה ICMP/יחיד-בדיקה
<ol><li>התאם אישית פרמטרים עבור הספקטרומטר ההמוני עבור הניסוי.<ol>
<li>תחת הכותרת ' מצב סריקה ' של תוכנת המכשיר, בחר באפשרות ' הגדר סריקה'. השתמש ברזולוציה של 60,000 m/∆ m ב- m/z 400, 1 microscan, 100 ms זמן הזריקה המקסימלי, ובקרת רווח אוטומטי (agc) על. טווח מסה (m/z) של 100-1000 היה מנוצל עבור הניסויים. ניתן לשנות פרמטרים בהתבסס על דגם המכשיר.</li>
		<li>תחת משאבת מזרק, בחר קצב זרימה של 150 nL/min. שיעור זרימה צריך להיות אופטימיזציה עבור כל ניסוי.</li>
		<li>בחר Nsi מקור ולהחיל מתח של ~ 4.5 kV. פרמטר זה גם צריך להיות מיטבי עבור כל ניסוי.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הפעל את המיקרוסקופ ההפוך (עם ההגדלה של 40x שנבחר עבור הצלחת העליונה והעדשה התחתונה) וחבר אותו ליציאת USB של מחשב נייד כדי ללכוד הזנות וידאו חי. הפעל את הצלחת המחוממת והגדר אותה ל-37 ° c.</li>
	<li>במחשב, עבור אל הכרטיסיה רכוש נתונים ובחר ברציפות תחת השג זמן.</li>
	<li>הכן דוגמה לניתוח.<ol>
<li>פיפטה 2-3 mL של מדגם לתוך המכסה של צלחת פטרי קטנה (35 מ"מ x 12 מ"מ).</li>
		<li>6.4.2 מקמו את המדגם במרכז האור ממיקרוסקופ הפוך על גבי הלוחית המחוממת.</li>
	</ol>
</li>
	<li>הכן את תא בחירת הזכוכית בדיקה לניתוח. השתמש במערכת מניפולציה התא כדי להזיז את החללית כך הקצה שלה מתמקד תחת המיקרוסקופ הפוך באותו מישור כמו התאים.</li>
	<li>בחר תא בודד לניתוח.<ol>
<li>השתמש במערכת הטיפול בתאים כדי להעביר את העצה של הבדיקה הסלולרית לתא המיועד. תהליך זה מפוקח באמצעות המיקרוסקופ הפוך. הערה: אם לא ניתן למקד את קצה הגשוש של בחירת התא באותו מישור כמו התאים, ייתכן שהחלק העקום של הגשוש אינו מתאים בזווית. להתאים את המיקום של החללית בחירת התא עד שני עצות הבדיקה ניתן למקד יחד עם תאים מתחת למיקרוסקופ.</li>
		<li>בעדינות להפוך את ידית המיקרו מזרק כדי להתאים את המיקום של שמן מינרלי בתוך אבובים. יניקה עדינה מסופק על ידי המיקרומזרק כדי לאבטח את התא המיועד למכשיר בחירת התא. הערה: אם לא ניתן ללכוד את התא על ידי הגשוש בחירת התא דרך כוח היניקה, לבדוק את התא בחירת בדיקה כדי לוודא שהוא מוכנס במלואו לתוך מחזיק נימי. בנוסף, לבחון את רמות השמן המינרלים של המיקרומזרק ואבובים, ולגרש אוויר אם יש.</li>
		<li>השתמש במערכת הטיפול בתאים כדי להזיז את התא בעצת הבדיקה הסלולרית לקצה הבדיקה הבודדת, תוך שימוש במיקרוסקופ דיגיטלי המתמקד בקצה המכשיר היחיד כדי לנטר תהליך זה. כאשר נוגעים, שיחה קטנה על-ידי בדיקת המידע החד של המכשיר מעוררת מהירות מהירה של התא, ולאחר מכן התא ליפוסט מיועד באופן מיידי עבור ניתוח MS-line. הערה: מכיוון שהתא הנבחר מאובטח לעצת הבדיקה של בחירת התא דרך שאיבה עדינה, ניתן להתנתק מתא זה במהלך העברתו לקצה הבדיקה הבודדת. לכן, אם אותות יונים של שומנים סלולריים אופייני (ראה תוצאות מייצגות להלן) לא נצפו בתוך 5 s, ייתכן שהתא הפך ללא מצורף, והבחירה של תא אחר נדרש.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

. למחברים אין מה לגלות

מניפולציה תא משולבת פלטפורמת ניתוח נבנה כדי להרחיב את רב-תכליתיות של שיטת יחיד לבדוק MS, המאפשר on-line, ניתוח מהיר של תאים שאינם חסיד בסביבה כמעט טבעית. היתרון העיקרי של הטכניקה היא כי הכנה לדוגמה מינימלית נדרש, כך התאים נותחו בתנאים המחקים את המצב הרגיל שלהם. במיוחד, תאים בודדים של עניין ניתן לזהות ולבחור באופן חזותי, למזער את ההשפעה של אפקט מטריצה על יעילות MS יינון תוך שמירה על התאים בסביבה הטבעית שלהם, כך התוצאות הם יותר תאים מייצגים ' יליד מצב (S3 איור). טכניקה זו יכולה לשמש פוטנציאלית לחקר תאי החולה שהושעו ביולואידים במחקרים עתידיים. יתרון נוסף של טכניקה זו הוא מבחר גמיש של ממיס הדגימה. חשוב לכלול acetonitrile כמו הממס העיקרי הדגימה כך לפירוק מיקרוסקאלה יכול להתרחש במהירות. באופן פוטנציאלי, סטנדרטים פנימיים (למשל, isotopically התוויות תרופות) ניתן להוסיף לתוך ממיס הדגימה עבור כימות של מולקולות של עניין (למשל, מולקולות תרופה) מתאים בודדים, כולל אלה יכולים לשחק תפקיד מפתח למהפיכה התאמה אישית של טיפולי הסמים בעתיד54.
למרות מערכת משולבת זו ניתן להשתמש בנוחות כדי לנתח טווחי רחב של תאים, מגבלה של השיטה היא כי לא בדיקה יחידה או תא בחירת החללית היא זמינה מסחרית; הכתבת את הצורך אופטימיזציה של פרמטרים רבים (למשל, שיעור הזרימה, מתח, אורך בין הפולט ננו-ESI והעברת יונים, וכו ') לפני כל ניסוי. בנוסף, בשל הקטנות של הבדיקה היחידה ובחירת התא, הפרטורציה הסביבתית (למשל, זרימת האוויר) עלולה לגרום לקשיים בהקמת צומת בין שני הבדיקות. פתרון לטווח קצר הוא כיפוף של הגשוש בחירת התא קרוב לסוף כדי למזער את אורך הזמן. העבודה העתידית כוללת פיתוח של דיור להקיף את החלקים הקריטיים של הכיוונון כדי למזער את ההשפעות הסביבתיות. בשל כמות מוגבלת של תוכן הסלולר זמן רכישה קצר (~ 2-3 s) מתא, ניתוח MS/MS ניתן לנהל רק עבור מינים שופע יחסית. גורמים אחרים המשפיעים על רגישות לזיהוי כוללים את היעילות האינון מודחק בשל המבוא של מטריקס יחד עם התא ואת הפסד פוטנציאל יון דרך אבובים העברת יונים מורחבת.

ביולוגיה אנושית, בעיקר ביולוגיה של המחלה, מובנת יותר ויותר על מנת להיות תוצאה של פעילות ברמה של תאים בודדים, אך השיטות האנליטיות המסורתיות, כגון ספקטרומטר מסה של כרומטוגרפיה נוזליים (LCMS), משמשות בדרך כלל לניתוח דגימות המוכנות מאוכלוסיות של תאים, ואילו המידע המולקולרי הנרכש אינו יכול לייצג במדויק את התהליכים הכימיים ברמת התא הבודד. אלה סטנדרטיים, שיטות מסורתיות אינם יכולים להבחין את ההשפעות של טרוגניות הסלולר על מדידה אנליטית, ואת תהליך של השמדת וערבוב התאים כדי להכין את הליפוסט עשוי לגרום לשינוי או אובדן של הסלולר רכיבים1,2. מגבלות אלה של שיטות מסורתיות חשובות במיוחד בניתוח של תאי החולה, שבו הדגימות המתקבלות יכול להכיל תערובת מורכבת של סוגים רבים של תאים שונים. כדי להתגבר על ליקויים אלה, תא בודד שיטות ניתוח מולקולרי, כולל בודד תא המסה ספקטרומטריה (SCMS) שיטות, הם יותר ויותר להיות מפותח ולהחיל בדיקות ביולוגי, במיוחד של מטבוליטים סלולריים משקל מולקולרי נמוך biomolecules3,4.
טכניקות scms הראשון שפותחו בשימוש ואקום מבוססי טכניקות כדי לבצע את הניתוחים תחת תנאים שאינם סביבה2,5,6,7,8,9, 10,11. שיטות SCMS לא מקיף מסוגלים לנתח שומנים סלולריים מטבוליטים, אבל דורשים לדוגמה טרום טיפול בתנאים מלאכותיים, ולכן אינם מתאימים ניתוח בזמן אמת. תהליך ההכנה לדוגמה לניתוח שאינו מקיף כולל הוספת רכיבי מטריצה, והכנה זו יכולה לשנות רכיבים סלולריים מסביבתם הטבעית12. לכן, טכניקות הסביבה הספקטרום של המסה (MS), אשר אינם דורשים ואקום לסביבת הדגימה, מנוצלים לניתוח תאים בסביבה כמעט טבעית. אין סביבה ואקום מאפשר רב-תכליתיות בעיצוב ניסיוני; ניתן להוסיף מצלמות כדי לפקח על התהליך הסלולר וטכניקות אינון רך יותר ניתן לשלב עם טכניקות הפרדה כדי לקבל מידע טוב יותר מכל ניסוי תא בודד4,12,13 ,14,15,16,17,18,19,20,21,22 ,23,24,25,26,27,28,29,30,31 ,32,33,34,35,36,37,38,39,40 ,41,42.
השיטה בודדת scms היא טכניקת הסביבה כי מנתח חי, סרטן היונקים התאים בסביבה כמעט יליד21,43,44,45,46. בנוסף, התקן בדיקה יחידה שימש עבור יישומים אחרים ספקטרומטר המסה, כולל ניתוח של מולקולות החילוץ באמצעות מספרי העברה רב-תאיים ו MS הדמיה של רקמות47,48,49 ,50,51,52. עם זאת, מאחר שלאפשר להשתמש בתאי ההשעיה בשיטה זו, לא ניתן לנתח באופן ישיר את התאים התלויים בטכניקה זו3,53. לכן, המערכת בודדת SCMS לא יכול לשמש ישירות לדוגמה תאים בודדים שאינם חסיד, כגון קווי התאים הלא מחסיד או תאים ההשעיה מבודדים דם של המטופל או נוזלי גוף אחרים54. בעבודה זו, פלטפורמת מניפולציה משולבת של תאים (ICMP) היא ביחד עם הטכניקה בודדת SCMS לנתח בשידור חי, תאים ההשעיה ב-line עם הכנה לדוגמה מינימלית (איור 1)46. ה-ICMP מורכב ממיקרוסקופ הפוך כדי לפקח על בחירת התא, תא זכוכית בחירה בדיקה, מיקרו מזרק ללכוד תאים צפים בודדים, צלחת מחוממת כדי לשמור על הטמפרטורה התאית, שתי מערכות מניפולציה תאים לשלוט מרחבי תנועות של החללית בחירת תא זכוכית, יחיד לווין, ומיקרוסקופ דיגיטלי להתבונן העברת התא מקצה בחירת התא לקצה הבדיקה היחידה. הייצור של לווין יחיד מפורט בפרסומים הקודמים ולא יטופל כאן21,48. מערכת ה-ICMP/יחיד לבדיקה מצמידים ספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה. התקנה משולבת זו מאפשרת דגימה של תאים בודדים שזוהו מדגימות ביולוגיות מורכבות עם השפעות מינימליות ממולקולות מטריקס.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetontrile</td>
			<td>Millipore Co.</td>
			<td>AX0145-1</td>
			<td>Sampling solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTram Vario</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>6221</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper wire</td>
			<td>stores.ebay.com/jewelerheaven</td>
			<td>Dead soft, round, 20 guage, 25 ft</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital stereomicroscope</td>
			<td>Shenzhen D&#38;F Co.</td>
			<td>Supereyes T004</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable micropipette, 1-5 &#181;L</td>
			<td>Rochester Scientific</td>
			<td>5065</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual bore quartz tubing, 1.120&#34;x0.005&#34;x12&#34;</td>
			<td>Friedrich &#38; Dimmock, Inc.</td>
			<td>MBT-005-020-2Q</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoxy resin</td>
			<td>Devcon</td>
			<td>Part No. 20945</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf cell manipulation system</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Transferman NK517800397-U.R.</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>External nut</td>
			<td>VALCO*CHEMINERT</td>
			<td>EN1</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>399388-500ML</td>
			<td>Sampling solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fused silica capillary, ID: 40 &#181;m, OD: 100 &#181;m</td>
			<td>Polymicro Technologies</td>
			<td>TSP040105</td>
			<td>Single-probe fabrication, conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fused silica capillary, ID: 50 &#181;m, OD: 150 &#181;m</td>
			<td>Polymicro Technologies</td>
			<td>1068150015</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone Synthetic fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Fischer Sci</td>
			<td>SH3006603</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inline MicroFilter</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>M-520</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser puller</td>
			<td>Sutter Instrument Co.</td>
			<td>Model P-2000</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED UV lamp</td>
			<td>Foshan Liang Ya Dental Equipment</td>
			<td>LY-C240</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ Orbitrap mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LTQ Orbitrap XL</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Narishige, Co.</td>
			<td>MF-9</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microunion</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>M-539</td>
			<td>Conductive union</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tubing, 1/32x0.005x 5ft</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>1576</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tubing, 1/32x0.007x 5ft</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>1577</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco/Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, 35x10 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25382-334</td>
			<td>Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0780-50L</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum wire</td>
			<td>Narishige, Co.</td>
			<td>Model PT-A</td>
			<td>Microforge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>PSM-2120</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 1X with Corning glutagro</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-104-CV</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-bore tubes</td>
			<td>Boralex</td>
			<td>5065</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel ferrules, for 1/16&#34; OD</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>VHP-200-01x</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel tubing, 1/32x 205 &#181;m x30 cm</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>U-1128</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>1725LTN250UL</td>
			<td>Sampling syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 flask</td>
			<td>CellStar</td>
			<td>690160</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo LTQ XL ion source interface flange</td>
			<td>New Objective</td>
			<td>PB5500</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoPlate</td>
			<td>TokaiHit</td>
			<td>55R30N</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605-010</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube cutter, for 1/16&#34; stainless steel</td>
			<td>SUPELCO</td>
			<td>58692-U</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB digital photography microscope</td>
			<td>dx.com</td>
			<td>SO2 25~500X</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV curing resin</td>
			<td>Prime Dental</td>
			<td>Item No. 006.030</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical pipette puller</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>Model 720</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Voltage housing</td>
			<td>PicoChip</td>
			<td>PCH-A00120</td>
			<td>ICMP/MS interface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire cutter</td>
			<td>Craftsman</td>
			<td>4 1/2 in end nipper</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

integrated cell manipulation platform coupled with the single-probe for mass spectrometry analysis of drugs and metabolites in single suspension cells

הספקטרומטר המסה של התא היחיד (SCMS) מאפשר זיהוי רגיש וניתוח מדויק של טווחים רחבים של מינים סלולריים ברמת התא הבודד. התקן יחיד, דגימה מיקרוסקאלה ומכשיר אינון, יכול להיות ביחד עם ספקטרומטר מסה עבור מקוון, ניתוח SCMS מהירה של המרכיבים הסלולריים תחת תנאי הסביבה. בעבר, הטכניקה בודדת SCMS השתמשו בעיקר כדי למדוד את התאים מקיבוע על מצע, הגבלת סוגי התאים ללימודים. במחקר הנוכחי, טכנולוגיית SCMS חד החללית כבר שולבו עם מערכת מניפולציה התא, בדרך כלל משמש הפריה חוץ גופית. זה משולב תא מניפולציה ופלטפורמת ניתוח משתמש בדיקה תא בחירה כדי ללכוד תאים מזוהים בודדים צף להעביר את התאים לקצה בדיקה יחידה עבור הליזה מיקרוסקאלה, ואחריו ניתוח מיידי ספקטרומטר המסה. תהליך הלכידה וההעברה מסיר את התאים מהפתרון שמסביב לפני ניתוח, וממזער את המבוא של מולקולות המטריצה בניתוח הספקטרומטר המסה. התקנה זו משולבת מסוגל ניתוח SCMS של המטופל ממוקד תאים מבודדים נוכח בדגימות נוזלי הגוף (למשל, שתן, דם, רוק, וכו '), המאפשר יישומים פוטנציאליים של ניתוח SCMS לרפואה אנושית וביולוגיה של המחלה.

הראשון, תאים K562 מטופל משמשים כדי ליצור את השיטה הניסיונית. בניסוי SCMS אופייני, שינויים ברורים של ספקטרום מסה ניתן לצפות מהעברת תא, במהלך האיתור של תוכן הסלולר, ולאחר סיום המדידה (איור S1). שלוש פסגות שומנים סלולריים שכיחים (פוספולידיליולין, PC), כולל PC (34:4) (m/z 754.536), pc (36:4) (m/z 782.567), ומחשב (38:5) (m/z 808.583), הם מנוטרים כדי להבטיח את התא מועבר בהצלחה סלולרי התוכן מזוהה (איור S2)21,43,46,55,56. אם פסגות השומנים לא נראים בתוך 5 s, רמת השמן המינרלים במיקרו מזרק משתנה כדי להפחית את היניקה מחזיק את התא בבחירת תא בחירת עצה; זהירות צריך להילקח כך שאין שמן מינרלים נדחף החוצה מתוך לווין בחירת התא. הזהות של מחשב רבים של בטווח ההמוני של m/z 750-850 מאושרות באמצעות MS/ms על מטופל דגימות ליפוסט בתאים (איור 3, איור S2, טבלה 1)46.
תאים K562 חשופים גם לטיפול עם תרכובות תרופות שונות כדי להרחיב את צדדיות של השיטה. התאים K562 מודדרים עם gemcitabine (1 μM) ו מטקרול (1 μM) עבור 1 h ו-OSW-1 (100 nM, 1 μM) עבור 4 h ו 2 h, בהתאמה. התאים נשטפים לאחר מכן עם PBS כדי למזער את הזיהוי של תרכובות התרופה מתוך תוכן לחילוץ. תרומת מטריקס (למשל, יונים ממדיום תרבות התא, PBS, ו ממס) כדי ספקטרום המסה של תוכן הסלולר ניתן לסלק דרך חיסור נתונים, בשל אותות יון שונים משמעותית שלהם (S3 דמות). כל שלושת תרכובות הסמים מזוהים באמצעות ההתקנה ICMP/יחיד לבדוק MS (איור S4)46. תוצאות אלה מרמזות על שיטה זו ניתן להשתמש כדי לחקור שומנים תאיים, תרופות, מטבוליטים על רמת תא בודד מתאים בפתרון בסביבה כמעט טבעית.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig1.jpg"> איור 1. התקנה ניסיונית עבור ניסויים תא ההשעיה בודד MS. (א) הפלטפורמה המשולבת של מניפולציה תאים (ICMP) יחד עם ספקטרומטר מסה. (ב) תרשים סכימטי לניתוח של תאים מושעים. (ג) השקפה ניסויית של תאים K562 להיבחר באמצעות לווין בחירת התא. הודפסה מודפס באישור מתוך סטנדקה ואח '.46. זכויות יוצרים 2019 האגודה האמריקנית לכימיה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig2.jpg"> איור 2. תמונות של שונה יחיד לווין בדיקה תא בחירת מנוצל לניסויים תא ההשעיה יחיד MS. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig3.jpg"> איור 3. מוגדלת-בספקטרום מסה מתא אחד המציג את המינים הנציגים (m/z 750-850). מבנים כימיים מאומתים באמצעות ניתוח MS/MS (איור S1). הודפסה מודפס עם הרשאה מסטנדקה et al46. זכויות יוצרים 2019 האגודה האמריקנית לכימיה. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי להציג גירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>
מולקולת סמים*</td>
			<td>ז/ז</td>
			<td>שגיאת המסה (ppm)</td>
		</tr>
<tr>
<td>[Gemcitabine + H] +
</td>
			<td>264.076</td>
			<td>11.32</td>
		</tr>
<tr>
<td>[טקיול + נה] +
</td>
			<td>876.318</td>
			<td>2.74</td>
		</tr>
<tr>
<td>[OSW-1 + Na] +
</td>
			<td>895.445</td>
			<td>0.89</td>
		</tr>
<tr>
<td>שומנים סלולריים</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (34:4) + H] +
</td>
			<td>754.535</td>
			<td>3.71</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (34:3) + H] +
</td>
			<td>756.551</td>
			<td>3.44</td>
		</tr>
<tr>
<td>[מחשב (34:2) + ח] +
</td>
			<td>758.569</td>
			<td>0.66</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36:5) + H] +
</td>
			<td>780.551</td>
			<td>3.07</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36:4) + H] +
</td>
			<td>782.568</td>
			<td>2.17</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36:3) + H] +
</td>
			<td>784.585</td>
			<td>0.64</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38:7) + H] +
</td>
			<td>804.551</td>
			<td>4.1</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38:6) + H] +
</td>
			<td>806.567</td>
			<td>2.48</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38:5) + H] +
</td>
			<td>808.583</td>
			<td>2.72</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38:4) + H] +
</td>
			<td>810.601</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (40:7) + H] +
</td>
			<td>832.583</td>
			<td>3.12</td>
		</tr>
</tbody></table>. שולחן 1 מזוהה רכיבים סלולריים באמצעות הגדרת ICMP/בדיקה יחידה. האיתור של כל תרכובות התרופות אושרו על ידי השוואת תוצאות ms/ms עם מתחם סטנדרטי.

Watch this Scientific Journal Video about Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells at JoVE

Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells

פלטפורמת מניפולציה משולבת תא מפותחת לשימוש בשילוב עם התקנה בודדת המסה בדיקה מאסיבית עבור ניתוח מקוון של תאים ההשעיה בודדים תחת תנאי הסביבה.

משולב תאים מניפולציה פלטפורמה ביחד עם יחיד-בדיקה עבור ניתוח ספקטרומטר המסה של תרופות מטבוליטים בתאים ההשעיה יחיד

Single cell mass spectrometry (SCMS) enables sensitive detection and accurate analysis of broad ranges of cellular species on the individual-cell level. ...

מכיוון ששיטה זו מנתחת תאים מהפתרון, ניתן להשתמש בהם כדי לחקור תאים בסביבה כמעט מקורית. זה כולל ניתוח של דגימות תאים שמקורן בחולה. טכניקה זו דורשת הכנה מועטה עד ללא מדגם של תאים.לכן, אנו יכולים לנתח תאים בודדים באינטרנט בתנאי הסביבה, אשר מאפשר לנו לחקור הטרוגניות הסלולר. טכניקה זו יכולה להיות מיושמת כדי ללמוד ביופסיות נוזליות ממגוון מצבי מחלה שונים, שכן היא יכולה לנתח סוגים שונים של תאים מבודדים ישירות מדגימות המטופל. כדי להמיר צינורות זכוכית נשא יחיד לתוך גשוש מחודד עם קצה חד, במקום הראשון צינור זכוכית נשא אחד לתוך המהדקים של מחזיק פיפטה אנכי, מרכך את הזכוכית ביחס לסליל החימום ומהדק כדי לאבטח את הצינור במקום.סליל החימום מורכב מחוט התנגדות כרום ניקל 18 מד סליל סביב מוט מתכת 2.5 פעמים. הגדר את צינורות הזכוכית עם תוכנית טמפרטורה 19.5. תן את הבוכנה סולנואידית לארבע.הפעל את סולנואיד כדי למשוך את צינורות הזכוכית. שלב זה יוצר שתי בדיקות מותכות בקצה. השתמש בסוודרים כדי לחתוך כמילימטר אחד מהקצה של כל גשוש, יצירת פתח של כ 10 מיקרון קוטר בקצה החללית.כדי לכופף את גשושית הזכוכית עבור צימוד קל ICMP, בדיקה אחת SCMS להגדיר. ראשית להגדיר גשוש זכוכית משך לתוך microforge. מקם את החלק העליון כשלושה מילימטרים מעל חוט החימום פלטינה.לאחר מכן, הפעל את החום על חוט הפלטינה ל-30% מהטמפרטורה המרבית. לכופף את החללית כ 45 מעלות מהמיקום המקורי. מניחים את מיקרוסקופ מיקרוסקופ הפוך בשתי מערכות מניפולציה תאים על שולחן ממונע עבור צימוד קל עם ספקטרומטר המסה.כדי להגדיר את התקן בחירת תא הזכוכית, הכנס את גשוש בחירת תאי הזכוכית לתוך מחזיק המתכת של המיקרו-מיינר על-ידי הצבת השקופית הארוכה במחזיק נימי והידוק הבורג כדי לאבטח את החללית במקום. מקם את קצות החללית בזווית מקבילה לצלחת המחוממת. לאבטח את מחזיק המתכת של מזרק מיקרו לתוך מערכת מניפולציה התא.לאחר מכן מקם את קצה הגשוש ליד מרכז אור המיקרוסקופ ההפוך. אבטח את מגלשת הזכוכית המכילה את הגשוש הבודד לתוך מהדק הזרוע של מערכת מניפולציה התא. חבר את הממס המספק נימי לאיחוד מוליך על ידי הנחת נימי לתוך השרוול של ferrule פלסטיק אצבע הידוק ההתאמה.חבר את הצד השני של האיחוד מוליך נימי אשר מחובר מזרק המכיל את ממס הדגימה על ידי הנחת נימי לתוך השרוול והידוק ההתאמה. השתמש אצטוניטריל עם 0.1% חומצה פורמית כמו ממס דגימה בניסויים אלה. אבטחו את המזרק במשאבת המזרק בספקטרומטר המסה.מקם את היוניזציה nanoelectrospray או פולט ננו ESI כמילימטר אחד אל פתח צינור העברת היונים המורחבת. השתמש במערכת מניפולציה התא כדי לשלוט בתנועות spacial של בדיקה אחת ולמקם את פולט ננו ESI במרכז מול צינורות העברת היונים המורחבת. פיפטה התאים מבקבוק תרבות התא לתוך צינור צנטריפוגה 15 מיליליטר.לסובב את התאים ב 400 פעמים G ב 37 מעלות צלזיוס במשך חמש דקות ולהשליך את העל טבעי. תן שימוש חוזר בתאים בארבעה מיליליטר של מדיום RPMI המכיל את תרכובת התרופה בריכוז הטיפול הרצוי. התאם אישית את הפרמטרים הניסיוניים עבור ספקטרומטר המסה.תחת כותרת מצב הסריקה של תוכנת הכלי, בחר הגדר סריקה. השתמש ברזולוציה של 60,000 ב M מעל Z 400, מיקרוסקאן אחד 100 אלפיות שנייה זמן הזרקה מקסימלית ושליטה אוטומטית להשיג על. תחת משאבת מזרק, בחר את קצב הזרימה של 150 ננוליטר לדקה.בחר מקור NSI והחל מתח של כ- 4.5 קילו-וולט. הפעל את המיקרוסקופ ההפוך בהגדלה של פי 40 שנבחרה הן עבור הלוח העליון והן עבור העדשה התחתונה. חבר אותו ליציאת ה- USB של מחשב נישא כדי ללכוד הזנות וידאו בשידור חי.הפעל את הצלחת המחוממת והגדר אותו ל 37 מעלות צלזיוס. במחשב, עבור אל הכרטיסיה רכישת נתונים ובחר ברציפות תחת זמן שנרכש. כדי להכין את המדגם לניתוח, פיפטה 2-3 של המדגם לתוך המכסה של צלחת פטרי קטנה.מקם את המדגם במרכז האור מהמיקרוסקופ ההפוך מעל הלוח המחומם. הכן את הבדיקה לבחירת תאי זכוכית לניתוח. השתמש במערכת מניפולציה התא כדי להזיז את החללית כך החלק העליון שלה ממוקד תחת microcsope הפוך באותו מישור כמו התאים.השתמש במערכת טיפול בתאים כדי להעביר את קצה הבדיקה של בחירת התא לתא ייעודי לניתוח. תהליך זה מנוטר באמצעות המיקרוסקופ ההפוך. בעדינות לסובב את הידית של microinjector כדי להתאים את המיקום של שמן מינרלי בתוך הצינור.יניקה עדינה מסופקת על ידי המיקרו-מיינר כדי לאבטח את התא הממוקד לקצה הבדיקה לבחירת התא. השתמש במערכת טיפול בתאים כדי להעביר את התא בקצה הבדיקה לבחירת התא לקצה הבדיקה הבודד באמצעות מיקרוסקופ דיגיטלי המתמקד בקצה הבדיקה הבודד כדי לפקח על תהליך זה. תאי K-562 לא מטופלים משמשים לביסוס השיטה הניסיונית.בניסוי SCMS טיפוסי, ניתן לראות שינויים ברורים בספקטרום המסה מהעברת תא במהלך זיהוי התוכן התאי ולאחר סיום המדידה. שלוש פסגות נפוצות של שומנים סלולריים, כולל מחשב 34:4, מחשב 36:4 ומחשב 38:5 מנוטרות כדי להבטיח שהתא יועבר בהצלחה ותוכן סלולרי יתגלה. זהותם של מחשבים רבים בטווח המסה של 750 עד 850 מאושרת באמצעות MSMS בדגימות ליט תאים לא מטופלים.באמצעות בדיקה אחת ICMP MS להגדיר, Gemcitabine, Taxol ו OSW1 זוהו בעקבות הדגירה עם תאים K-562. תוצאות אלה מראות כי שיטה זו יכולה לשמש לחקר שומנים תאיים, תרופות, מטבוליטים ברמת התא הבודד מתאים בתסרון בסביבה ילידית קרובה. זכור למקם באופן מאובטח את הבדיקה בחירת תא זכוכית לתוך מחזיק פיפטה אוניברסלי, כך יניקה ניתן להחיל כראוי.שיטה זו יכולה להיות מיושמת גם על דגימות המטופל נגזר להבחין הבדלים בין מטבוליטים הסלולר ממגוון רחב של סוגי תאים, אשר מאפשר לנו להשיג הבנה טובה יותר של מצבי מחלה אלה. לאחר פיתוח שיטה זו, אנו יכולים ליישם באופן פוטנציאלי כימות של תרכובות סמים ברמת התא הבודד. כאשר עובדים עם תאים, חשוב שיהיה ציוד מגן אישי מתאים כולל חלוק מעבדה וכפפות.ניתן להשתמש ללבוש עיניים נוספות בעת עבודה עם זכוכית.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Metabolomics לא ממוקדים ממקורות ביולוגיים באמצעות Ultraperformance כרומטוגרפיה נוזלית-רזולוציה גבוהה ספקטרומטריית מסה (UPLC-HRMS)

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

רצף של הצמח קיר Heteroxylans שימוש enzymic, כימית (מתילציה) הפיזיקליים (ספקטרומטריית מסה, תהודה מגנטית גרעינית) טכניקות

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

ויזואליזציה של ספקטרומטריית אמביינט המוני עם השימוש של צילומי שליארן

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites

שיטה נוחה עבור חילוץ וניתוח עם כרומטוגרפיה נוזלית בלחץ גבוה של נוירוטרנסמיטורים קטכולאמין מטבוליטים שלהם

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

אנליזת נשימה בזמן אמת באמצעות Nanoelectrospray משני יינון מצמידים ספקטרומטר מסה ברזולוציה גבוהה

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

סינתזה וניתוח ספקטרומטר מסה של Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog (Xenopus laevis) Embryos

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog Xenopus laevis Embryos

Microprobe נימי אלקטרופורזה ספקטרומטריית עבור מטבולומיקס תא בודד ב- Live צפרדע (צפרדע רפואית זריזה) העוברים

The quantification of small molecules in single cells raises new potentials for better understanding the basic processes that underlie embryonic ...

Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry

תיוג קוולנטי עם דיתילפירוקרבונט לחקר מבנה חלבון מסדר גבוה יותר על ידי ספקטרומטריית מסה

Characterizing a protein&#39;s higher-order structure is essential for understanding its function. Mass spectrometry (MS) has emerged as a powerful tool ...

Capillary Electrophoresis-based Hydrogen/Deuterium Exchange for Conformational Characterization of Proteins with Top-down Mass Spectrometry

חילופי מימן/דיטריום מבוססי נימי אלקטרופורזה לאפיון קונפורמציה של חלבונים עם ספקטרומטריית מסה מלמעלה למטה

Resolving conformational heterogeneity of multiple protein states that coexist in solution remains one of the main obstacles in the characterization of ...

Cell-Lineage Guided Mass Spectrometry Proteomics in the Developing (Frog) Embryo

Cell-Lineage Guided Mass Spectrometry Proteomics in the Developing Frog Embryo

ספקטרומטריית מסה מונחית שושלת תאים פרוטאומיקה בעובר המתפתח (צפרדע)

Characterization of molecular events as cells give rise to tissues and organs raises a potential to better understand normal development and design ...