Name: integrated cell manipulation platform coupled with the single-probe for mass spectrometry analysis of drugs and metabolites in single suspension cells
Uploaded: 2019-06-21T15:00:00
Duration: 7 min 55 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells at JoVE

Yazarlar, hem süspansiyon hücreleri ve hücre lysate deneyler için numune hazırlama geliştirme çalışmaları için Naga Rama Kothıdo teşekkür ederiz. Ayrıca, yazarlar NıH (R01GM116116 ve R21CA204706) finansman için teşekkür ederiz.

1. Cam hücre seçimi prob imalatı
<ol><li>Tek delikli cam tüpünü keskin bir uç ile konik bir prob haline dönüştürün.<ol>
<li>Tek delikli cam tüp (ID: 0,3 mm, OD: 1,1. mm) bir dikey pipet tutucunun kelepçeleri içine yerleştirin, cam ısıtma bobini ile ilgili olarak merkezleme ve boru yerine sabitlemek için sıkın. Isıtma bobini, 18 kalibrelik nikel-krom direnç telinden (~ 60 mm uzunluğunda) oluşan bir metal çubuk (çap = 3,90 mm) 2,5 kez etrafında sarılmış.</li>
		<li>Cam tüpünü sıcaklık programı 19,5 (üreticinin ünitesi) ile ayarlayın. Bu parametre, belirli bir enstrüman için değiştirilebilir.</li>
		<li>Solenoid pistonu 4 (üreticinin ünitesi) olarak ayarlayın. Bu parametre, belirli bir enstrüman için değiştirilebilir.</li>
		<li>Cam tüpünü çekmek için Solenoid tetikleyici. Bu adım, iki problar ucu erimiş oluşturur.</li>
		<li>Her prob ucunu ~ 1 mm kesmek için cımbız kullanın, prob ucu çapı ~ 10 μm bir orifis oluşturarak.</li>
	</ol>
</li>
	<li>ICMP/Single-Probe SCMS kurulumuna kolay bağlantı için cam sondayı bükün.<ol>
<li>Mikroforge içine çekilen bir cam prob ayarlayın, ucu ~ 3 mm platin Isıtma teli konumlandırın.</li>
		<li>Platin Teldeki ısı miktarını maksimum sıcaklığın% 30 ' unda çevirin.</li>
		<li>Sondayı orijinal konumdan ~ 45 ° Bend (Şekil 2).</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. entegre hücre manipülasyon platformu montajı
<ol><li>Kütle spektrometresi ile kolay bağlantı için ters mikroskop, mikroenjektör ve iki hücreli manipülasyon sistemlerini motorlu bir masaya yerleştirin.<ol>
<li>Son bir kol kelepçe ile değiştirerek tek prob sığdırmak için hücre işleme sistemlerinden birini değiştirin.</li>
		<li>Mikroenjektör mineral yağı ile doldurmak için bir iğne ile plastik bir şırınga kullanın. Bu suctioning etkileyecektir gibi boru kabarcıkları kaçının.</li>
		<li>Ters mikroskopla sahne eklemesini ısıtmalı plakalı olarak değiştirin. Isıtma plakasını 37 °C ' de analiz etmeden önce ayarlayın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cam hücre seçimi aygıtını ayarlayın.<ol>
<li>Uzun (bükülmeyen) tarafı kapiller tutucuya yerleştirerek ve sondayı yerine sabitlemek için vidayı sıkıştırarak, Cam hücre seçimi sondasını mikroenjektör metal tutucusunun içine takın. Prob ucunun açısını ısıtmalı plakaya paralel olarak konumlandırın. DIKKAT: cam sondası çok keskin ve kırılgan ve kolayca kırılır. Gözlerinizi koruyun ve mikroenjektör içine prob takarken ekstra dikkatli olun.</li>
		<li>Mikroenjektör metal tutucusunu hücre manipülasyon sistemine sabitleyin. Prob ucunu ters çevrilmiş mikroskop ışığını ortasına getirin.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. kütle spektrometresi girişi için uzatılmış iyon transfer tüpü oluşturun
<ol><li>Paslanmaz çelik tüpün bir parçasını kesmek için bir metal kesici kullanın (OD: 0,0625 (1/16) in, ID: 0,021 in) ~ 250 mm uzunluğunda.</li>
	<li>Ölçü 135 mm sonunda ve bir metal Feral böylece ~ 135 mm atmosfere maruz kalacak ve ~ 115 mm kitle Spektrometre içinde olacaktır. Sıkılaştırmak için iki anahtarı kullanarak Feral güvenliğini sağlayın.</li>
</ol>4. tek prob kurulum ile ıCMP çift
<ol><li>Tek prob içeren cam slaytı hücre manipülasyon sisteminin kol kelepçesi içine sabitleyin. Not: tek problar geçerli çalışmada iki küçük değişiklik ile önceden yayımlanan protokol48 göre üretilmiştir: nano-ESI emiter kitle spektrometresi kolay bağlantı için daha uzun yapılır ve tek problar cam yapıştırılır tarafı, Cam hücre seçimi cihazının uzamsal hareketini engellemesini önlemek için (Şekil 2).</li>
	<li>Kapiller plastik yüksül (1/16 x .005 in) kolunun içine yerleştirerek ve parmak sıkma Fitting-solvent-iletkenli bir birlik için kılcal sağlayan bağlayın.<ol>
<li>İletken birliğin diğer tarafını bir kapiller (ID: 40 μm, OD: 150 μm), örnekleme çözücüsü içeren bir şırıngaya bağlı olan, kapiller kol (1/32 x .007) içine yerleştirerek ve montaj sıkma. Bu deneylerde örnekleme çözücüsü olarak% 0,1 formik asit ile Asetonitril kullanın. Not: örnekleme solvent esnek, ancak öncelikle Asetonitril (veya daha iyi iyonizasyon için formik asit ile Asetonitril), hızlı bir mikroölçekli hücre lizis için içermelidir.</li>
		<li>Şırıngayı kütle spektrometresi üzerindeki şırınga pompasına sabitleyin.</li>
		<li>İyonizasyon voltajı kablosunu iletken birleşime bağlı bir bakır tel üzerine yerleştirin.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Nano-ESI emiter ~ 1 mm uzatılmış iyon transfer tüpü orifis konumlandırın.<ol>
<li>Tek prob uzamsal hareketlerini kontrol etmek için hücre işleme sistemi kullanın ve genişletilmiş iyon transfer tüpü önünde nano-ESI emiter merkezi konumlandırın.</li>
	</ol>
</li>
</ol>5. askıya alınan hücre numune hazırlama
<ol><li>Analiz önceki gün (~ 18-24 h), bir hücre kültürü Flask (T25) test etmek için hücreler dışarı tohum. K562 insan miyeloid lösemi hücreleri bu çalışmada model olarak kullanılmaktadır.<ol>
<li>Isı 1x fosfat tamponlu tuz (PBS) ve Roswell Park Memorial Enstitüsü (RPMı) orta% 10 sentetik fetal Sığır serum (FBS) ve% 1 penisilin-streptomisin ile 37 °C 30 dakika boyunca desteklenmektedir.</li>
		<li>Tohum ~ 1 x 106 hücreler sıcak orta ile hücreleri birleştirerek 10 ml toplam hacminde. Genel olarak, bir hücre kültürü Flask içine RPMı orta 8 mL yerleştirmek için 10-mL pipet kullanın. Daha sonra, 2 ml konfluent K562 hücresi ~ 1 x 106 hücre için orta koymak Için iki ml pipet kullanın.</li>
		<li>Hücreleri 37 °C ' de ve% 5 CO2 ' de analizine kadar kulbe etme.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Hücreleri analiz için hazırlayın.<ol>
<li>Hücre kültüründen pipet hücreleri 15 mL santrifüjten tüp içine.</li>
		<li>400 x g ve 37 °c ' de 5 dakika boyunca hücreleri aşağı döndürün ve supernatant 'i atın.</li>
		<li>İstenen tedavi konsantrasyonunda ilaç bileşiği içeren RPMI orta 4 mL resuspend hücreler. Not: denetim hücrelerinin analizi için, 4 ml rpmi orta hücreleri yeniden pelletini ve Adım 6' ya atlayın.</li>
		<li>37 °C ve% 5 CO2' de tedavi süresi boyunca hücreleri kulyur.</li>
		<li>5 dakika boyunca 400 x g ve 37 °c ' de hücreleri aşağıya döndürün. supernatant aspirate.</li>
		<li>Hücreler 10 mL PBS 'de yeniden resuspended ve 400 x g ve 37 °c ' de santrifüjler 5 dk. Dönen sonra, supernatant atın. Hücre dışı bileşenlerdeki ilacın algılanmasını en aza indirmek için bu adımı 3 kez tekrarlayın.</li>
		<li>Analiz için PBS 4 mL hücrelerinde resuspend.</li>
	</ol>
</li>
</ol>6. ıCMP/tek prob kurulumunu kullanarak SCMS ölçümleri gerçekleştirin
<ol><li>Deney için kütle spektrometresi parametrelerini özelleştirin.<ol>
<li>Enstrüman yazılımının tarama modu başlığının altında tarama tanımla'yı seçin. M/z 400, 1 mikrotarama, 100 ms maksimum enjeksiyon süresi ve otomatik kazanç kontrolü (AGC) üzerinde 60.000 m/∆ m çözünürlük kullanın. Deneyler için 100-1000 bir kütle aralığı (m/z) kullanılmıştır. Parametreler enstrüman modeline göre değiştirilebilir.</li>
		<li>Şırınga pompasıaltında, 150 nl/dak 'lik bir akış hızı seçin. akış hızı her deneme için optimize edilmesi gerekir.</li>
		<li>NSI kaynak seçin ve ~ 4,5 kV voltaj uygulayın. Bu parametrenin her deneme için de optimize edilmesi gerekir.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Ters mikroskop (hem üst plaka hem de alt objektif için 40X büyütme seçiliyken) açın ve canlı video akışlarını yakalamak için dizüstü bilgisayarın USB bağlantı noktasına bağlayın. Isıtmalı plakayı açın ve 37 °C ' ye ayarlayın.</li>
	<li>Bilgisayarda, veri edinme sekmesine gidin ve elde etme süresialtında sürekli olarak seçin.</li>
	<li>Numune analizi için hazırlayın.<ol>
<li>Pipet 2-3 mL küçük bir petri tabağı (35 mm x 12 mm) kapağına numune.</li>
		<li>6.4.2 numuneyi ısıtılan plakanın üstüne ters çevrilmiş mikroskopla ışığın ortasına konumlandırın.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Cam hücre seçim sondasını analiz için hazırlayın. Sondayı taşımak için hücre işleme sistemini kullanarak ucu hücrelerle aynı düzlemde ters mikroskop altında odaklanmıştır.</li>
	<li>Analiz için tek bir hücreyi seçin.<ol>
<li>Hücre seçimi prob ucu hedeflenen bir hücreye taşımak için hücre düzenleme sistemi kullanın. Bu işlem, ters mikroskop kullanılarak izlenir. Not: hücre seçimi prob ucu hücrelerle aynı düzlemde odaklanmış olamaz, prob bükülmüş parçası uygun açılı değildir mümkündür. Her iki prob ipuçları mikroskop altında hücreler ile birlikte odaklanmış kadar hücre seçimi prob konumunu ayarlayın.</li>
		<li>Mikroenjektör kolunu hafifçe çevirin ve mineral yağının tüpün içinde konumunu ayarlayın. Mikro enjektör tarafından, hedeflenen hücreyi hücre seçimi prob ucunun güvenliğini sağlamak için nazik bir emme sağlanır. Not: hücre seçimi prob tarafından emiş kuvveti aracılığıyla yakalanamazsa, hücre seçimi sondasını kontrol ederek kapiller tutucusuna tam olarak yerleştirildiğinden emin olun. Buna ek olarak, mikroenjektör ve boru içinde mineral yağ düzeylerini incelemek, ve herhangi bir hava dışarı dışarı.</li>
		<li>Bu işlemi izlemek için tek prob ucu odaklı bir dijital mikroskop kullanarak, hücre seçimi prob ucunu tek prob ucu için hücreyi taşımak için hücre işleme sistemi kullanın. Dokunmadan, tek prob ucu küçük bir Asetonitril damlacık hücrenin hızlı bir yapışıklıkların indükler, ve sonra hücre lysate hemen on-line MS analizi için iyonize. Not: seçili hücre hassas bir emme aracılığıyla hücre seçimi prob ucu için güvenli olduğundan, bu hücre potansiyel olarak tek prob ucu transfer sırasında ayrılabilir. Bu nedenle, tipik hücresel lipidlerin iyon sinyalleri (aşağıda temsili sonuçlara bakın) 5 sn içinde gözlemlenmez, hücrenin takılı olmaması ve farklı bir hücrenin seçilmesi gereklidir.</li>
	</ol>
</li>
</ol>

Yazarların ifşa etmesi gereken hiçbir şey yok.

Entegre hücre manipülasyon ve analiz platformu tek prob MS yönteminin çok yönlülük genişletmek için inşa edilmiştir, on-line için izin, yakın bir doğal ortamda yapışmayan hücrelerin hızlı analiz. Tekniğin büyük bir avantajı, minimal numune hazırlama gereklidir, böylece hücreler standart durumunu taklit koşullarda analiz edilir. Özellikle, bireysel ilgi hücreleri görsel olarak tespit edilebilir ve seçilebilir, MS iyonizasyon verimliliği üzerinde matris etkisinin etkisini en aza indirerek kendi doğal ortamda hücreleri korurken, böylece sonuçları daha temsili hücrelerin yerli (Şekil S3). Bu teknik, gelecekteki çalışmalarda biofluidler içinde askıya alınan hasta hücrelerini incelemek için potansiyel olarak kullanılabilir. Bu tekniğin bir diğer avantajı da örnekleme çözücünün esnek seçimidir. Mikroölçek liziz hızla ortaya çıkabilir, böylece ana örnekleme solvent olarak Asetonitril dahil etmek önemlidir. Potansiyel olarak, iç standartlar (örn., isotopically etiketli ilaç bileşikleri), bireysel hücrelerden ilgi moleküllerinin (örn. ilaç molekülleri) ölçülmesine yönelik örnekleme çözücüye eklenebilir, bu da dahil olmak üzere devrim içinde önemli bir rol oynayabilirler gelecekte54ilaç tedavileri kişiselleştirmek.
Bu entegre sistem kolayca hücrelerin geniş aralıkları analiz etmek için kullanılabilir olsa da, yöntemin bir sınırlama ne tek prob ne de hücre seçimi prob ticari olarak kullanılabilir; Her denemeden önce birçok parametrenin optimizasyonu (örn., akış hızı, voltaj, nano-ESI emiter ve iyon transfer tüpü arasındaki uzunluk vb.) ihtiyacını dikte etme. Buna ek olarak, tek prob ve hücre seçimi sondasının küçüklüğü nedeniyle, çevresel pertürasyon (örn. hava akımı) iki prob arasında bir kavşak kurma zorluklara neden olabilir. Kısa vadeli bir çözüm, bantlama uzunluğunu en aza indirmek için son yakın hücre seçimi prob bükme olduğunu. Gelecekteki çalışma çevresel etkileri en aza indirmek için kurulum kritik bölümlerini kapsayan bir konut gelişimi içerir. Hücresel içerik ve kısa edinme süresi (~ 2-3 s) bir hücreden sınırlı miktarda nedeniyle, MS/MS Analizi sadece nispeten bol türler için yapılabilir. Algılama hassasiyetini etkileyen diğer faktörler arasında, matris girişi nedeniyle hücre ve uzatılmış iyon transfer borusu yoluyla potansiyel iyon kaybı ile birlikte bastırılmış iyonizasyon verimliliği bulunmaktadır.

İnsan biyolojisi, özellikle hastalık biyolojisi, bireysel hücrelerin düzeyinde faaliyetlerin sonucu olarak giderek daha anlaşılabilir, ancak sıvı kromatografi kitle spektrometresi (LCMS) gibi geleneksel analitik yöntemler genellikle analiz etmek için kullanılır hücrelerden hazırlanan numuneler, elde edilen moleküler bilgiler bireysel hücre seviyesinde kimyasal süreçleri doğru şekilde temsil edemez. Bu standart, geleneksel yöntemler, hücresel heterojenliğin analitik bir ölçümde etkilerini ayırt edemiyoruz ve lysate hazırlamak için hücreleri yok etme ve karıştırma süreci, cep telefonlarının değiştirilmesine veya kaybına yol açar bileşenler1,2. Geleneksel yöntemlerin bu sınırlamaları, elde edilen numunelerin birçok farklı hücre türünün karmaşık bir karışımını içerebileceği hasta hücrelerinin analizinde özellikle önemlidir. Bu eksikliklerin üstesinden gelmek için, tek hücreli kütle spektrometresi (SCMS) yöntemleri de dahil olmak üzere tek hücreli moleküler analiz yöntemleri, özellikle hücresel metabolitler ve düşük moleküler ağırlıkta, biyolojik analizlere giderek geliştirilmiştir ve uygulanır biyomoleküllerin3,4.
İlk SCMS teknikleri, ortam dışı koşullarda2,5,6,7,8,9, 10,11. Olmayan ortam SCMS teknikleri hücresel lipidler ve metabolitleri analiz yeteneğine sahiptir, ancak yapay koşullarda örnek ön tedavi gerektirir ve bu nedenle gerçek zamanlı analiz için uygun değildir. Ortam dışı analiz için örnek hazırlama işlemi matris bileşenlerinin eklenmesi içerir ve bu hazırlık doğal ortamlarından hücresel bileşenleri değiştirebilir12. Bu nedenle, örnekleme ortamı için bir vakum gerektirmeyen ortam kütlesi spektrometresi (MS) teknikleri, yakın bir yerel ortamda hücreleri analiz etmek için kullanılır. Bir vakum ortamı sahip değil deneysel tasarım çok yönlülük sağlar; kameralar hücresel süreci izlemek için eklenebilir ve daha yumuşak iyonizasyon teknikleri her tek hücreli deney daha iyi bilgi almak için ayrım teknikleri ile kombine edilebilir4,12,13 ,14,15,16,17,18,19,20,21,22 ,23,24,25,26,27,28,29,30,31 ,32,33,34,35,36,37,38,39,40 ,41,42.
Tek prob SCMS yöntemi, canlı, mammalin kanseri hücre çizgilerini yerel bir ortamda analiz eden bir ortam teknikidir21,43,44,45,46. Buna ek olarak, tek prob cihaz diğer kütle spektrometresi uygulamaları için kullanılmıştır, çok hücreli küreleri ve MS görüntüleme dokularda ekstrülüler moleküllerin analizi de dahil olmak üzere,47,48,49 ,50,51,52. Ancak, bu yöntem için substratlar üzerinde hücre immobilizasyonu gerekli olduğundan, süspansiyon hücreleri doğrudan bu tekniği kullanılarak analiz edilemez3,53. Bu nedenle, tek prob SCMS sistemi doğrudan olmayan yapışkanlar tek hücreler, örneğin bir hastanın kanı veya diğer bedensel sıvılar54izole olmayan yapışkanlar hücre hatları veya süspansiyon hücreleri gibi örnek için kullanılmaz. Bu çalışmasında, entegre hücre manipülasyon platformu (ıCMP), canlı, süspansiyon hücrelerini minimum numune hazırlama ile on-line analiz etmek için tek prob SCMS tekniği ile birleştiğinde (Şekil 1)46. ICMP hücre seçimini izlemek için ters bir mikroskop oluşur, bir cam hücre seçimi prob, bireysel yüzen hücreleri yakalamak için bir mikroenjektör, hücresel sıcaklık korumak için ısıtmalı bir plaka, uzamsal kontrol etmek için iki hücre manipülasyon sistemleri hem cam hücre seçimi prob hem de tek prob hareketlerini ve hücre seçimi prob ucunu tek prob ucunu hücre aktarımı gözlemlemek için bir dijital mikroskop. Tek prob imalatı önceki yayınlar ayrıntılı ve burada ele alınacaktır değil21,48. ICMP/Single-Probe sistemi yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi ile birleştir. Bu entegre kurulum, matris moleküllerinden minimal etkilere sahip kompleks biyolojik örneklerden tanımlanan tek hücrelerin örneklemesini sağlar.

<table>
	<tbody>
		<tr>
			<td>Acetontrile</td>
			<td>Millipore Co.</td>
			<td>AX0145-1</td>
			<td>Sampling solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CellTram Vario</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>6221</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Copper wire</td>
			<td>stores.ebay.com/jewelerheaven</td>
			<td>Dead soft, round, 20 guage, 25 ft</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Digital stereomicroscope</td>
			<td>Shenzhen D&#38;F Co.</td>
			<td>Supereyes T004</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Disposable micropipette, 1-5 &#181;L</td>
			<td>Rochester Scientific</td>
			<td>5065</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Dual bore quartz tubing, 1.120&#34;x0.005&#34;x12&#34;</td>
			<td>Friedrich &#38; Dimmock, Inc.</td>
			<td>MBT-005-020-2Q</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Epoxy resin</td>
			<td>Devcon</td>
			<td>Part No. 20945</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf cell manipulation system</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>Transferman NK517800397-U.R.</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>External nut</td>
			<td>VALCO*CHEMINERT</td>
			<td>EN1</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Formic acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>399388-500ML</td>
			<td>Sampling solvent</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fused silica capillary, ID: 40 &#181;m, OD: 100 &#181;m</td>
			<td>Polymicro Technologies</td>
			<td>TSP040105</td>
			<td>Single-probe fabrication, conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fused silica capillary, ID: 50 &#181;m, OD: 150 &#181;m</td>
			<td>Polymicro Technologies</td>
			<td>1068150015</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>HyClone Synthetic fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td>Fischer Sci</td>
			<td>SH3006603</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Inline MicroFilter</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>M-520</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Laser puller</td>
			<td>Sutter Instrument Co.</td>
			<td>Model P-2000</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LED UV lamp</td>
			<td>Foshan Liang Ya Dental Equipment</td>
			<td>LY-C240</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>LTQ Orbitrap mass spectrometer</td>
			<td>Thermo Scientific</td>
			<td>LTQ Orbitrap XL</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microforge</td>
			<td>Narishige, Co.</td>
			<td>MF-9</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microunion</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>M-539</td>
			<td>Conductive union</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tubing, 1/32x0.005x 5ft</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>1576</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PEEK tubing, 1/32x0.007x 5ft</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>1577</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Penicillin/Streptomycin</td>
			<td>Gibco/Life Technologies</td>
			<td>15140-122</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Petri dish, 35x10 mm</td>
			<td>VWR</td>
			<td>25382-334</td>
			<td>Sample preparation</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td>VWR</td>
			<td>0780-50L</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Platinum wire</td>
			<td>Narishige, Co.</td>
			<td>Model PT-A</td>
			<td>Microforge</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Power supply</td>
			<td>Nikon</td>
			<td>PSM-2120</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>RPMI, 1X with Corning glutagro</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10-104-CV</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Single-bore tubes</td>
			<td>Boralex</td>
			<td>5065</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel ferrules, for 1/16&#34; OD</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>VHP-200-01x</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stainless steel tubing, 1/32x 205 &#181;m x30 cm</td>
			<td>IDEX Health &#38; Science LLC</td>
			<td>U-1128</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Syringe, 250 &#181;L</td>
			<td>Hamilton</td>
			<td>1725LTN250UL</td>
			<td>Sampling syringe</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>T25 flask</td>
			<td>CellStar</td>
			<td>690160</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thermo LTQ XL ion source interface flange</td>
			<td>New Objective</td>
			<td>PB5500</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>ThermoPlate</td>
			<td>TokaiHit</td>
			<td>55R30N</td>
			<td>ICMP</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TrypLE Express</td>
			<td>Gibco</td>
			<td>12605-010</td>
			<td>Cell culture</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tube cutter, for 1/16&#34; stainless steel</td>
			<td>SUPELCO</td>
			<td>58692-U</td>
			<td>Ion transfer tube fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>USB digital photography microscope</td>
			<td>dx.com</td>
			<td>SO2 25~500X</td>
			<td>Analysis</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>UV curing resin</td>
			<td>Prime Dental</td>
			<td>Item No. 006.030</td>
			<td>Single-probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vertical pipette puller</td>
			<td>David Kopf Instruments</td>
			<td>Model 720</td>
			<td>Cell-selection probe fabrication</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Voltage housing</td>
			<td>PicoChip</td>
			<td>PCH-A00120</td>
			<td>ICMP/MS interface</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wire cutter</td>
			<td>Craftsman</td>
			<td>4 1/2 in end nipper</td>
			<td>Conductive union setup</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

integrated cell manipulation platform coupled with the single-probe for mass spectrometry analysis of drugs and metabolites in single suspension cells

Tek hücreli kütle spektrometresi (SCMS), tek hücreli düzeyde hücresel türlerin geniş aralıklarının hassas tespiti ve doğru analizini sağlar. Tek prob, mikro ölçekli örnekleme ve iyonizasyon cihazı, ortam koşullarında hücresel bileşenlerin hızlı SCMS analizi için bir kitle spektrometresi ile birleşebilir. Daha önce, tek prob SCMS tekniği öncelikle bir substrat üzerinde immobilize hücreleri ölçmek için kullanılan, çalışmalar için hücrelerin türlerini sınırlandırmak. Mevcut çalışmada, tek prob SCMS teknolojisi genellikle in vitro fertilizasyon için kullanılan bir hücre manipülasyon sistemi ile entegre edilmiştir. Bu entegre hücre manipülasyon ve analiz platformu tespit bireysel yüzen hücreleri yakalamak ve mikroölçek lizis için tek prob ucu hücreleri aktarmak için bir hücre seçimi prob kullanır, hemen kitle spektrometri Analizi izledi. Bu yakalama ve aktarım işlemi, analiz öncesinde çevreleyen çözümden hücreleri kaldırır, kütle spektrometresi analizinde matris moleküllerinin giriş değerini en aza indirir. Bu entegre kurulum, vücut sıvıları örneklerinde (örn. idrar, kan, tükürük vb.) mevcut hedeflenen hasta yalıtılmış hücrelerin SCMS analizini yapabilir ve SCMS analizinin insan ilacına ve hastalık biyolojisine potansiyel uygulamalarına olanak sağlar.

İlk, tedavi edilmemiş K562 hücreler deneysel yöntemi kurmak için kullanılır. Tipik bir SCMS denemesinde, hücre içeriğinin saptanması sırasında ve ölçümü bitirdikten sonra (Şekil S1), bir hücreyi aktararak kitle spektrumunda belirgin değişiklikler görülebilir. Üç ortak hücresel lipid doruklarına (Fosfatidilkolin, PC), PC dahil olmak üzere (34:4) (m/z 754,536), PC (36:4) (m/z 782,567), ve PC (38:5) (m/z 808,583), hücre başarıyla transfer ve hücresel sağlamak için izlenir İçindekiler algılandı (Şekil S2)21,43,46,55,56. Eğer lipid zirveleri 5 s içinde görülmediği takdirde, mikroenjektör içindeki mineral yağ seviyesi hücreyi hücre seçimi prob ucunda tutan emiş miktarını azaltmak için değiştirilir; herhangi bir maden yağı hücre seçimi prob dışarı itilir böylece dikkatli alınması gerekir. M/z 750-850 kitle ARALıĞıNDA birçok PC 'nin kimliği tedavi edilmemiş hücre lysate örneklerinde MS/MS kullanılarak teyit edilir (Şekil 3, Şekil S2, Tablo 1)46.
K562 hücreler de yöntemin çok yönlülük genişletmek için çeşitli ilaç bileşikleri ile tedaviye tabi tutulur. K562 hücreler, sırasıyla 4 h ve 2 h için 1 h ve osw-1 (100 Nm, 1 μm) için gemsitabin (1 μm) ve Taxol (1 μm) ile inkübe edilir. Hücreler daha sonra PBS ile yıkanır ve hücre dışı içeriklerden ilaç bileşiklerinin algılanmasını en aza indirir. Matris (örn., hücre kültürü medyası, PBS ve çözücüden gelen iyonlarının) hücresel içeriğin kütle spektrumlarına katkısı, önemli ölçüde farklı iyon sinyalleri nedeniyle veri çıkarma yoluyla ortadan kaldırılabilir (Şekil S3). Her üç ilaç bileşiği, ıCMP/Single-Probe MS kurulumu (Şekil S4)46kullanılarak algılanır. Bu sonuçlar, bu yöntem hücre içi lipidler, ilaçlar ve metabolitleri tek hücreli düzeyde çözümdeki hücrelerden bir yakın yerel ortamda okumak için kullanılabilir olduğunu düşündürmektedir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig1.jpg"> Şekil 1. Tek süspansiyon HÜCRESI MS deneyler Için deneysel kurulum. (A) entegre hücre işleme platformu (ICMP) bir kütle spektrometresi ile birleştiğinde. (B) askıya alınan hücrelerin analizi için şematik. (C) hücre seçimi prob kullanılarak seçilecek K562 hücrelerin deneysel görünümü. Standke ve al.46'den izin ile yeniden basılmıştır. Copyright 2019 Amerikan Kimya Derneği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig1large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig2.jpg"> Şekil 2. Tek süspansiyon hücresi MS deneyler için kullanılan bir modifiye tek prob ve bir hücre seçimi prob fotoğrafları. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig2large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/59875/59875fig3.jpg"> Şekil 3. (M/z 750-850) temsili türler gösteren tek bir hücreden yakınlaştırılmış-kitle spektrum. Kimyasal yapılar MS/MS analizi kullanılarak teyit edilir (Şekil S1). Standke ve el46'den izin ile yeniden basıldı. Copyright 2019 Amerikan Kimya Derneği. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/59875/59875fig3large.jpg" target="_blank">Bu figürün daha büyük bir versiyonunu görmek Için lütfen tıklayınız.</a>
<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody>
<tr>
<td>
Ilaç molekülü*</td>
			<td>m/z</td>
			<td>Toplu hata (ppm)</td>
		</tr>
<tr>
<td>[Gemcitabine + H] +
</td>
			<td>264,076</td>
			<td>11,32</td>
		</tr>
<tr>
<td>[Taxol + na] +
</td>
			<td>876,318</td>
			<td>2,74</td>
		</tr>
<tr>
<td>[OSW-1 + na] +
</td>
			<td>895,445</td>
			<td>0,89</td>
		</tr>
<tr>
<td>Hücresel lipidler</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (34:4) + H] +
</td>
			<td>754,535</td>
			<td>3,71</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (34:3) + H] +
</td>
			<td>756,551</td>
			<td>3,44</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (34:2) + H] +
</td>
			<td>758,569</td>
			<td>0,66</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36:5) + H] +
</td>
			<td>780,551</td>
			<td>3,07</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36:4) + H] +
</td>
			<td>782,568</td>
			<td>2,17</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (36:3) + H] +
</td>
			<td>784,585</td>
			<td>0,64</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38:7) + H] +
</td>
			<td>804,551</td>
			<td>4,1</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38:6) + H] +
</td>
			<td>806,567</td>
			<td>2,48</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38:5) + H] +
</td>
			<td>808,583</td>
			<td>2,72</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (38:4) + H] +
</td>
			<td>810,601</td>
			<td>0</td>
		</tr>
<tr>
<td>[PC (40:7) + H] +
</td>
			<td>832,583</td>
			<td>3,12</td>
		</tr>
</tbody></table>Tablo 1. ICMP/Single-Probe kurulumunu kullanarak tespit edilen hücresel bileşenler. Tüm ilaç bileşiklerinin tespiti, MS/MS sonuçlarını standart bileşik ile karşılaştırarak doğrulandı.

Watch this Scientific Journal Video about Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells at JoVE

Integrated Cell Manipulation Platform Coupled with the Single-probe for Mass Spectrometry Analysis of Drugs and Metabolites in Single Suspension Cells

Entegre hücre manipülasyon platformu, ortam koşullarında bireysel süspansiyon hücrelerinin on-line analizi için tek prob Kütle Spektrometrisi kurulumu ile birlikte kullanılmak üzere geliştirilmiştir.

Entegre hücre manipülasyon platformu tek süspansiyon hücrelerinde Ilaçların ve metabolitlerin Kütle Spektrometrisi analizi için tek prob ile birleştiğinde

Single cell mass spectrometry (SCMS) enables sensitive detection and accurate analysis of broad ranges of cellular species on the individual-cell level. ...

Bu yöntem çözeltideki hücreleri analiz ettiği için, yakın yerel ortamdaki hücreleri incelemek için kullanılabilir. Bu hasta türetilmiş hücre örneklerinin analizini içerir. Bu teknik, hücrelerin çok az veya hiç örnek hazırlanması gerektirir.Bu nedenle, biz bize hücresel heterojenlik keşfetmek için izin verir ortam koşulları altında online bireysel hücreleri analiz edebilirsiniz. Bu teknik, hasta örneklerinden doğrudan izole edilmiş farklı hücre türlerini analiz edebileceğinden, çeşitli hastalık durumlarından sıvı biyopsileri incelemek için uygulanabilir. Tek delikli cam boruyu keskin uçlu konik bir proba dönüştürmek için, ilk olarak tek bir delikli cam tüpü dikey pipet tutucunun kelepçelerine yerleştirin, camı ısıtma bobinine göre ortalayın ve tüpü yerinde sabitlemek için sıkın.Isıtma bobini bir 18 gauge nikel krom direnç tel bir metal çubuk etrafında 2,5 kez kıvrılmış oluşur. Sıcaklık programı 19,5 ile cam boru ayarlayın. Solenoid pistonu saat dörtte ayarlayın.Cam boruyu çekmek için solenoidi tetikle. Bu adım, uçta erimiş iki prob oluşturur. Her sondanın ucundan yaklaşık bir milimetre uzakta kesmek için kazak kullanın, sonda ucunda çapı yaklaşık 10 mikron bir delik oluşturma.ICMP kolay bağlantı için cam prob bükmek için, tek prob SCMS kurmak. Önce mikroforge içine çekilmiş bir cam sonda sıcağa. Üstünü platin ısıtma kablosunun yaklaşık üç milimetre yukarısını yerleştirin.Daha sonra platin telüzerindeki ısıyı maksimum sıcaklığın %30'una çevirin. Sondayı orijinal konumdan yaklaşık 45 derece bükün. Kütle spektrometresi ile kolay bağlantı için ters mikroskop mikroenjektörü motorlu bir masaya iki hücreli manipülasyon sistemine yerleştirin.Cam hücre seçim cihazını kurmak için, uzun kaydırağı kılcal damar tutucuya yerleştirerek ve sondayı yerinde sabitlemek için vidayı sıkarak cam hücre seçim probunu mikroenjektörün metal tutucunun içine yerleştirin. Prob uçlarını ısıtmalı plakaya paralel olarak konumlandırın. Mikro enjektörün metal tutucuyu hücre manipülasyon sistemine sabitle.Daha sonra sonda ucunu ters mikroskop ışığının ortasına yerleştirin. Hücre manipülasyon sisteminin kol kelepçesine tek sonda içeren cam kaydırağı sabitlayın. Kılcal damarı plastik ferrule'nin koluna yerleştirerek ve parmak montajı nı sıkarak kılcal damarı iletken bir birliğe bağlayın.İletim birliğinin diğer tarafını, kapilleri kola yerleştirerek ve montajı sıkarak numune solventini içeren bir şırıngaya bağlanan bir kılcal damara bağlayın. Bu deneylerde örnekleme çözücü olarak %0,1 formik asit içeren asetonitril kullanın. Şırıngayı kütle spektrometresindeki şırınga pompasına sabitle.Nanoelektrosprey iyonizasyonunu veya nano ESI yayımlayıcısını genişletilmiş iyon transfer tüpünün deifisesine yaklaşık bir milimetre yerleştirin. Tek probun aralıklı hareketlerini kontrol etmek ve nano ESI yayımlayıcısını genişletilmiş iyon transfer borusu önünde merkezi olarak konumlandırmak için hücre manipülasyon sistemini kullanın. Pipet hücre kültürü şişesinden hücreleri 15 mililitrelik bir santrifüj tüpüiçine.Hücreleri 400 kez G'de 37 santigrat derecede beş dakika döndürün ve süpernatant'ı atın. İstenilen tedavi konsantrasyonunda ilaç bileşiği içeren RPMI orta dört mililitre hücreleri resuspend. Kütle spektrometresi için deneysel parametreleri özelleştirin.Cihaz yazılımının tetkik modu başlığı altında, tetkik'i tanımla'yı seçin. Z 400 üzerinden M'de 60,000 çözünürlük, bir microscan 100 milisaniye maksimum enjeksiyon süresi ve otomatik kazanç kontrolü kullanın. Şırınga pompası altında, dakikada 150 nanolitre akış hızını seçin.NSI kaynağını seçin ve yaklaşık 4,5 kilovoltluk bir voltaj uygulayın. Hem üst plaka hem de alt lens için seçilen 40 kat büyütmede ters mikroskobu açın. Canlı video akışlarını yakalamak için dizüstü bilgisayarın USB bağlantı noktasına bağlayın.Isıtılan plakayı açın ve 37 santigrat dereceye ayarlayın. Bilgisayarda, elde edilen veri sekmesine gidin ve edinilen süre nin altında sürekli olarak seçin. Analiz için örnek hazırlamak için, pipet küçük bir petri kabın kapağına örnek iki ila üç.Numuneyi ters mikroskobundan gelen ışığın ortasına ısıtılan plakanın üzerine yerleştirin. Analiz için cam hücre seçim sondasını hazırlayın. Sondayı hareket ettirmek için hücre manipülasyon sistemini kullanın, böylece üst kısmında hücrelerle aynı düzlemde ters mikroksope'nin altına odaklanın.Hücre seçimi sondası ucunu analiz için hedeflenen bir hücreye taşımak için hücre işleme sistemini kullanın. Bu işlem ters mikroskop kullanılarak izlenir. Mikroenjektörün sapını yavaşça çevirerek mineral yağın tüpün içindeki konumunu ayarlayın.Mikroenjektör tarafından, hedeflenen hücreyi hücre seçimi sondası ucuna sabitlemek için nazik bir emme sağlanır. Hücre seçimi sondaucundaki hücreyi tek sonda ucuna taşımak için hücre manipülasyon sistemini kullanarak bu işlemi izlemek için tek prob ucuna odaklanmış bir dijital mikroskop kullanın. Tedavi edilmeyen K-562 hücreleri deneysel yöntemi oluşturmak için kullanılır.Tipik bir SCMS deneyinde, hücre içeriğinin algılanması sırasında ve ölçümü bitirdikten sonra hücre transferinden kütle spektrumlarında bariz değişiklikler gözlemlenebilir. PC 34:4, PC 36:4 ve PC 38:5 dahil olmak üzere üç yaygın hücresel lipid zirveleri hücre başarıyla transfer ve hücresel içeriği tespit emin olmak için izlenir. 750 ile 850 arasında değişen birçok bilgisayarda işlenmemiş hücre lisat örneklerinde MSMS kullanılarak doğrulanır.ICMP tek probu MS kullanılarak, Gemcitabine, Taxol ve OSW1 K-562 hücreleri ile kuluçka sonrasında tespit edildi. Bu sonuçlar, bu yöntemin yakın bir yerli ortamda çözelti içinde hücrelerden tek hücre düzeyinde hücre içi lipidler, ilaçlar ve metabolitleri incelemek için kullanılabilir öneririz. Emmeyeterince uygulanabilir, böylece evrensel pipet tutucu içine güvenli bir şekilde cam hücre seçimi probu yerleştirmeyi unutmayın.Bu yöntem aynı zamanda hücre metabolitleri arasındaki farklılıkları çeşitli hücre tiplerinden ayırt etmek için hasta kaynaklı örneklere de uygulanabilir, bu da bize bu hastalık durumlarını daha iyi anlamamızı sağlar. Bu yöntemi geliştirdikten sonra, potansiyel olarak tek hücre düzeyinde ilaç bileşiklerinin sayısallaştırılması uygulayabilir. Hücrelerle çalışırken, laboratuvar önlüğü ve eldivenler de dahil olmak üzere uygun kişisel koruyucu ekipmana sahip olmak önemlidir.Cam ile çalışırken ek göz aşınması kullanılabilir.

Research

JoVE Journal

Chemistry

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry (UPLC-HRMS)

Untargeted Metabolomics from Biological Sources Using Ultraperformance Liquid Chromatography-High Resolution Mass Spectrometry UPLC-HRMS

Ultra Performanslı Sıvı Kromatografi-Yüksek Çözünürlüklü Kütle Spektrometre (UPLC-HRMS) kullanarak Biyolojik Kaynaklar gelen hedefsiz Metabolomik

Here we present a workflow to analyze the metabolic profiles for biological samples of interest including; cells, serum, or tissue. The sample is first ...

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical (Methylation) and Physical (Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance) Techniques

Sequencing of Plant Wall Heteroxylans Using Enzymic, Chemical Methylation and Physical Mass Spectrometry, Nuclear Magnetic Resonance Techniques

Enzimatik, kimyasal (Metilasyon) ve Fiziksel (Kütle Spektrometre, Nükleer Manyetik Rezonans) Teknikleri Kullanarak Bitki Duvar heteroksilanlar sıralanması

This protocol describes the specific techniques used for the characterization of reducing end (RE) and internal region glycosyl sequence(s) of ...

Visualization of Ambient Mass Spectrometry with the Use of Schlieren Photography

Schlieren Fotoğraf Kullanımına Ortam kütle spektrometresi görselleştirme

This manuscript outlines how to visualize mass spectrometry ambient ionization sources using schlieren photography. In order to properly optimize the mass ...

A Convenient Method for Extraction and Analysis with High-Pressure Liquid Chromatography of Catecholamine Neurotransmitters and Their Metabolites

Ayıklama ve çözümleme katekoiamin nörotransmitter ve onların metabolitleri yüksek basınçlı sıvı Kromatografi ile uygun bir yöntem

The extraction and analysis of catecholamine neurotransmitters in biological fluids is of great importance in assessing nervous system function and ...

Real-time Breath Analysis by Using Secondary Nanoelectrospray Ionization Coupled to High Resolution Mass Spectrometry

İkincil Nanoelectrospray iyonlaşma kullanarak gerçek zamanlı nefes analiz için yüksek çözünürlüklü kütle spektrometresi birleştiğinde

Exhaled volatile organic compounds (VOCs) have aroused considerable interest, since they can serve as biomarkers for disease diagnosis and environmental ...

Synthesis and Mass Spectrometry Analysis of Oligo-peptoids

Sentez ve kütle spektrometresi analizleri Oligo-peptoids

Peptoids are sequence-controlled peptide-mimicking oligomers consisting of N-alkylated glycine units. Among many potential applications, peptoids have ...

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog (Xenopus laevis) Embryos

Microprobe Capillary Electrophoresis Mass Spectrometry for Single-cell Metabolomics in Live Frog Xenopus laevis Embryos

Microprobe kılcal Elektroforez kütle spektrometresi canlı Kurbağa (Xenopus laevis) embriyo tek hücreli Metabolomics için

The quantification of small molecules in single cells raises new potentials for better understanding the basic processes that underlie embryonic ...

Covalent Labeling with Diethylpyrocarbonate for Studying Protein Higher-Order Structure by Mass Spectrometry

Kütle Spektrometresi ile Protein Yüksek Sıralı Yapısını incelemek için Diethylpyrocarbonate ile Kovalent Etiketleme

Characterizing a protein&#39;s higher-order structure is essential for understanding its function. Mass spectrometry (MS) has emerged as a powerful tool ...

Capillary Electrophoresis-based Hydrogen/Deuterium Exchange for Conformational Characterization of Proteins with Top-down Mass Spectrometry

Yukarıdan Aşağıya Kütle Spektrometrisi ile Proteinlerin Konformasyonel Karakterizasyonu için Kapiler Elektroforez Bazlı Hidrojen/Döteryum Değişimi

Resolving conformational heterogeneity of multiple protein states that coexist in solution remains one of the main obstacles in the characterization of ...

Cell-Lineage Guided Mass Spectrometry Proteomics in the Developing (Frog) Embryo

Cell-Lineage Guided Mass Spectrometry Proteomics in the Developing Frog Embryo

Gelişmekte Olan (Kurbağa) Embriyoda Hücre-Soy Kılavuzlu Kütle Spektrometrisi Proteomikleri

Characterization of molecular events as cells give rise to tissues and organs raises a potential to better understand normal development and design ...