Name: mechanistic insight into the development of tnbs-mediated intestinal fibrosis and evaluating the inhibitory effects of rapamycin
Uploaded: 2019-09-12T14:45:00
Duration: 10 min 21 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about Mechanistic Insight into the Development of TNBS-Mediated Intestinal Fibrosis and Evaluating the Inhibitory Effects of Rapamycin at JoVE.com

עבודה זו נתמכה על ידי NIH מענק R01NS093045 (י דמרי), NIH גרנט K08DK088950 (X.Z.), R03DK099566 (X.Z.), ו קרוהן & קוליטיס קרן של מחקר אמריקה מלגת המחקר (CCFA) 481637 (עקב חומרי גלם).

<ol>
	<li>Garrett, W. S., Gordon, J. I., Glimcher, L. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Homeostasis+and+inflammation+in+the+intestine.">Homeostasis and inflammation in the intestine.</a> Cell. 140, 859-870 (2010).</li><li>Park, S. G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+regulatory+cells+maintain+intestinal+homeostasis+by+suppressing+gammadelta+T+cells.">T regulatory cells maintain intestinal homeostasis by suppressing gammadelta T cells.</a> Immunity. 33, 791-803 (2010).</li><li>Speca, S., Giusti, I., Rieder, F., Latella, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cellular+and+molecular+mechanisms+of+intestinal+fibrosis.">Cellular and molecular mechanisms of intestinal fibrosis.</a> World Journal of Gastroenterology. 18, 3635-3661 (2012).</li><li>Keubler, L. M., Buettner, M., Hager, C., Bleich, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+Multihit+Model:+Colitis+Lessons+from+the+Interleukin-10-deficient+Mouse.">A Multihit Model: Colitis Lessons from the Interleukin-10-deficient Mouse.</a> Inflammatory Bowel Disease. 21, 1967-1975 (2015).</li><li>Strober, W., Nakamura, K., Kitani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+SAMP1/Yit+mouse:+another+step+closer+to+modeling+human+inflammatory+bowel+disease.">The SAMP1/Yit mouse: another step closer to modeling human inflammatory bowel disease.</a> Journal of Clinical Investigation. 107, 667-670 (2001).</li><li>Ostanin, D. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=T+cell+transfer+model+of+chronic+colitis:+concepts,+considerations,+and+tricks+of+the+trade.">T cell transfer model of chronic colitis: concepts, considerations, and tricks of the trade.</a> American Journal of Physiology-Gastroenterology and Liver Physiology. 296, G135-G146 (2009).</li><li>Antoniou, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+TNBS-induced+colitis+animal+model:+An+overview.">The TNBS-induced colitis animal model: An overview.</a> Annals of Medicine and Surgery. 11, 9-15 (2016).</li><li>Loeuillard, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=2,4,6-trinitrobenzene+sulfonic+acid-induced+chronic+colitis+with+fibrosis+and+modulation+of+TGF-beta1+signaling.">2,4,6-trinitrobenzene sulfonic acid-induced chronic colitis with fibrosis and modulation of TGF-beta1 signaling.</a> World Journal of Gastroenterology. 20, 18207-18215 (2014).</li><li>Mathur, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Induction+of+autophagy+in+Cx3cr1(+)+mononuclear+cells+limits+IL-23/IL-22+axis-mediated+intestinal+fibrosis.">Induction of autophagy in Cx3cr1(+) mononuclear cells limits IL-23/IL-22 axis-mediated intestinal fibrosis.</a> Mucosal Immunology. 12, 612-623 (2019).</li><li>Joeris, T., Muller-Luda, K., Agace, W. W., Mowat, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diversity+and+functions+of+intestinal+mononuclear+phagocytes.">Diversity and functions of intestinal mononuclear phagocytes.</a> Mucosal Immunology. 10, 845-864 (2017).</li><li>Mathur, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+mouse+model+of+Salmonella+typhi+infection.">A mouse model of Salmonella typhi infection.</a> Cell. 151, 590-602 (2012).</li><li>Zhao, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Noninflammatory+Changes+of+Microglia+Are+Sufficient+to+Cause+Epilepsy.">Noninflammatory Changes of Microglia Are Sufficient to Cause Epilepsy.</a> Cell Reports. 22, 2080-2093 (2018).</li><li>Murugaiyan, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=MicroRNA-21+promotes+Th17+differentiation+and+mediates+experimental+autoimmune+encephalomyelitis.">MicroRNA-21 promotes Th17 differentiation and mediates experimental autoimmune encephalomyelitis.</a> Journal of Clinical Investigation. 125, 1069-1080 (2015).</li><li>Hinz, B., Celetta, G., Tomasek, J. J., Gabbiani, G., Chaponnier, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-smooth+muscle+actin+expression+upregulates+fibroblast+contractile+activity.">Alpha-smooth muscle actin expression upregulates fibroblast contractile activity.</a> Molecular Biology of the Cell. 12, 2730-2741 (2001).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rapamycin+Inhibition+of+mTOR+Reduces+Levels+of+the+Na+/H++Exchanger+3+in+Intestines+of+Mice+and+Humans,+Leading+to+Diarrhea.">Rapamycin Inhibition of mTOR Reduces Levels of the Na+/H+ Exchanger 3 in Intestines of Mice and Humans, Leading to Diarrhea.</a> Gastroenterology. 149, 151-162 (2015).</li><li>Mutalib, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+sirolimus+(rapamycin)+in+the+management+of+refractory+inflammatory+bowel+disease+in+children.">The use of sirolimus (rapamycin) in the management of refractory inflammatory bowel disease in children.</a> Journal of Crohns and Colitis. 8, 1730-1734 (2014).</li><li>Shaw, T. J., Martin, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+at+a+glance.">Wound repair at a glance.</a> Journal of Cell Science. 122, 3209-3213 (2009).</li><li>Paul, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=IL-17-driven+intestinal+fibrosis+is+inhibited+by+Itch-mediated+ubiquitination+of+HIC-5.">IL-17-driven intestinal fibrosis is inhibited by Itch-mediated ubiquitination of HIC-5.</a> Mucosal Immunology. 11, 427-436 (2018).</li><li>Sohail, I., Ghosh, S., Mukundan, S., Zelewski, S., Khan, M. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Role+of+Inflammatory+Risk+Factors+in+the+Pathogenesis+of+Streptococcus+pneumoniae.">Role of Inflammatory Risk Factors in the Pathogenesis of Streptococcus pneumoniae.</a> Frontiers of Immunology. 9, 2275 (2018).</li><li>Laplante, M., Sabatini, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=mTOR+signaling+in+growth+control+and+disease.">mTOR signaling in growth control and disease.</a> Cell. 149, 274-293 (2012).</li><li>Xavier, R. J., Podolsky, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Unravelling+the+pathogenesis+of+inflammatory+bowel+disease.">Unravelling the pathogenesis of inflammatory bowel disease.</a> Nature. 448, 427-434 (2007).</li></ol>

תחומי עניין מתחרים: המחברים לא מצהירים על אינטרסים מתחרים.

ריפוי הפצע או תיקון רקמות הוא תהליך ביולוגי מוסדר היטב17. במהלך הפגיעה ברקמה במצב כימי, מכני וזיהום, תגובה דלקתית מפעילה את תהליך תיקון רקמות. עם זאת, התגובה דלקתיות מוסדר ופתולוגי מוביל לפתח צלקות או תגובת פיברוטיק, אשר עלול לפגוע בפונקציה תיקון רקמות9,18,19. כאן, אנו מראים את ההליך עבור המודל לחיות פיברוזיס הנגרמת על ידי TNBS, אשר מחולקת באופן משמעותי pathפסיולוגיה עם מחלת קרוהן האנושית. החיסונים הרצופים של החשיפה הכימית של TNBS לנזק האפיתל העכבר גורם כיבית עמוקים וגורמת פיברוזיס הפיתוח. עם אמינות, עלות נמוכה, אינדוקציה מהירה של התפתחות המחלה, שיטה זו מקובלת באופן נרחב על ידי קבוצות מחקר מרובות מעורבים במחקרים עבור פציעה ברקמות, דלקת הקיר העור הציר המוח המעיים.
כדי ליישם בהצלחה את המודל של TNBS פיברוזיס, קיימים מספר שלבים חיוניים. לדוגמה, מינון הולם ותזמון של מינהל TNBS חשובים מאוד. 6-8 מאפשר לחלות ברקמות עמוקות ומומלצת מאוד למחקרים כרוניים. שרפרף מתקרב מעכברים הרפלקס הרטרוגרדי של מחוסן TNBS הם שתי בעיות גדולות, אשר יכול לגרום למשלוח של מינונים משתנה לעכברים. לחץ עדין ליד הרקטום עכברים עשוי לעזור שחרור שרפרפים לפני הממשל TNBS. החזקת הראש של בעל החיים למטה למשך כמה שניות משמעותית מסייע להפסיק ריפלוקס הפוכה של TNBS. שמירה על העכברים בכלוב, הצבת הכלוב על משטח חום, ואספקת העכברים עם נקטר נאפה יכול גם להיות אסטרטגיות שימושיות למניעת תמותה גבוהה.
כאן, אנחנו גם דנים בדלקת בטן במהלך פיברוזיס TNBS ואת השפעתם על תגובת פיברוטיק. תפקיד mtor/אוטומטי מעורב באופן כללי על הומאוסטזיס מעיים ו-ibd בפתוגנזה20,21. זיהינו כי mTOR/אוטומטי איתות הוא קריטי כדי לווסת את התגובות pro-דלקתיות מ-IL-23 ו ציטוקינים IL1β מ Cx3Cr1+ מונמונומנט phagocytes המשפיעים על pro-פיברוטיק IL-23/il-22 ציר (איור 3A)9 . ובכך, טיהור יחיד Cx3Cr1+ מונמונומנט תאים עבור immunoprofiling וביטוי גנטי הוא צעד קריטי של המודל. אנו דנים בפירוט את הפרוטוקול לבידוד לאמינה ולספק את תהליך הטיהור לCx3Cr1+ מונמונומנט באמצעות חרוזים מגנטיים.
באופן קולקטיבי, למרות הנוכחות של מודלים גנטיים וספונטניים עבור מחלת קרוהן, TNBS-קוליטיס נשאר כלי רב עוצמה כדי ללמוד את דלקת הפתוגנזה של תקליטור ויש לו את הפוטנציאל להעריך את הטיפול פיברוזיס של קרוהן. המגבלה העיקרית של שימוש כימית המושרה פיברוזיס מודלים כגון TNBS הוא הסיכוי של שינויים גבוהים מהמשתמש למשתמש ואת האפשרות של outliers הנתונים. גודל מדגם של 5-8 בעלי חיים לכל קבוצה יחד עם חוויית משתמש גדולה יותר יכול להגביר את העקביות של המודל. עם זאת, מציאת מודל גנטי מתאים גרימת פיברוזיס של קרוהן היא ותמיד יהיה מוצדקת.

דיסרגולציה של הומאוסטזיס החיסונית בבטן מובילה לדלקת פתוגניים והיה ידוע לגרום מחלות מעי דלקתיות (ibd)1,2. מעיים פיברוזיס היא תוצאה כרונית של מחלות מעי דלקתיות (IBDs), כגון מחלת קרוהן (CD)3. הפתופסולוגיה בלתי הפיכה של תקליטור כולל מעיים או היצרות של פיברוזיס, אשר מגביל את אפשרויות הטיפול, עם תרופות לא זמין כרגע, הטיפול היחיד הוא ניתוח. בסופו של דבר, ההתפתחות של טיפולים יעילים לדלקת הבלתי הולמת מונה נחוצה הרבה כדי ללמוד את מנגנון התקליטור, וזה יוביל אותנו צעד קרוב יותר לזה.
מגוון של מודלים של עכבר גנטי זמינים כדי ללמוד ibd כולל IL10 KO, samp/yit והמאמצת CD45+RB העברת תאים גבוה לתוך עכברים scid4,5,6. כאן, אנו מראים את ההליך עבור TNBS בתיווך פיברוזיס במודל העכבר של תקליטור, אשר דומה הפתולוגיה של האדם פיברוזיס של קרוהן. למודל המושרה של TNBS יש יתרונות מסוימים. מודל זה הוא מבחינה טכנית פשוטה; התפרצות המחלה היא מהירה, זולה, והוא יכול לשמש באופן נרחב בעלי חיים שונים (למשל, עכבר, עכברוש ושפן גינאה7). שיתוף המינהל של אתנול ו-tnbs (2, 4, 6-trinitrobenzene נזן חומצה sulfonic) בפתאומיות נזקים מחסום המעי וחושף חלבון רקמת המעי כדי tnbs ולעורר תגובות חיסוני משמעותי8,9. חשיפה חוזרת של TNBS מובילה תהליך תיקון מוגזם תגובה להגיב לדלקת ופציעה, ומפתחת תגובה פיברוטית בבטן. כך, TNBS-המושרה פיברוזיס המודל משמש להיות מודל משכנע מאוד ללמוד פיברוזיס של המעי הקשורים סיסטיק.
יתר על כן, phagocytes מונפנקייה הם התאים העיקריים כי בוררויות את התגובה החיסונית מולדת הפתוגנזה ופציעה בבטן10,11,12,13. כדי להבהיר את המנגנון הסלולר כדי לקבוע את התפקיד של Cx3Cr1+ מונגוציטים phagocytes ב פיברוזיס המודל של tnbs, אנו מראים את ההליך של טיהור phagocytes מונמונומנט. ניתוח של Cx3Cr1+ תאים הוא צעד חיוני כדי להעריך את סמנים דלקתיים ולקבוע את המנגנון המקביל עבור סיסטיק מעיים. באופן קולקטיבי, זה הליך מפורט עבור סיסטיק בBS פיברוזיס יהיה מועיל להסביר את המנגנונים הסלולריים של סיסטיק מעיים.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Anti-mouse aSMA, AF488 conjugated, Clone#1A4</td>
			<td>e-bioscience</td>
			<td>53-9760-82</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse aSMA, purified Clone#M1/77</td>
			<td>e-bioscience</td>
			<td>149760-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CD11b, APCCy7 conjugated, Clone#M1/70</td>
			<td>Biolegend Inc</td>
			<td>101226</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse CX3cr1 PE conjugated, Clone#SA011F11</td>
			<td>Biolegend</td>
			<td>149006</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-mouse purified CD16/32 Fc block</td>
			<td>Biolegend Inc</td>
			<td>14-9760-80</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-PE MicroBeads</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-105-639</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-rabbit IgG, HRP-linked Antibody</td>
			<td>e-bioscience</td>
			<td>7074</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Bovine Serum Albumin</td>
			<td>InvivoGen</td>
			<td>tlrl-isdn</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Collagenase type IV</td>
			<td>Roche</td>
			<td>1088866001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>SIGMA</td>
			<td>D9542</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DMEM</td>
			<td>Corning</td>
			<td>10013-CV</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DNase I from bovine pancreas</td>
			<td>Roche</td>
			<td>D263-5vl</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Falcon&#174; 40&#181;m Cell Strainer</td>
			<td>Corning</td>
			<td>352340</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fixation/Permeabilization Solution Kit with BD GolgiPlug kit</td>
			<td>BD Bioscience</td>
			<td>555028</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FlowJo</td>
			<td>FlowJo LLC</td>
			<td><a href="http://www.flowjo.com/">www.flowjo.com</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glycogen</td>
			<td>Roche</td>
			<td>10901393001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat anti-Rabbit IgG (H+L) Secondary Antibody, Alexa Fluor 488 conjugate</td>
			<td>e-bioscience</td>
			<td>5018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Graphpad Prism 7</td>
			<td>GraphPad Software Inc</td>
			<td><a href="http://www.graphpad.com/">www.graphpad.com</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H&#38;E kit</td>
			<td>American Mastertech Kit</td>
			<td>HXMMHPT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Image J</td>
			<td>NIH</td>
			<td><a href="http://www.imagej.nih.gov/ij/">www.imagej.nih.gov/ij/</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Mouse: C57BL/6J</td>
			<td>Jackson Laboratories</td>
			<td>664</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MS Columns</td>
			<td>Miltenyi</td>
			<td>130-042-201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Percol</td>
			<td>GE Healthcare</td>
			<td>17-0891-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PMA/Ionomycin salt</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>P8139</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PowerUp SYBR Green Master Mix</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>A25777</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti mouse GAPDH, Clone# D16H11</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>5174</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti mouse p70 S6 Kinase, Clone#49D7</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>2708</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti mouse Phospho-p70 S6 Kinase, Clone#S371</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>9208</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti mouse Phospho-S6 Ribosomal Protein (Ser235/236), Clone# D57.2.2E</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>4858</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rabbit Anti mouse S6 Ribosomal Protein</td>
			<td>Cell signaling</td>
			<td>2217</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rapamycin</td>
			<td>LC LABORATORIES</td>
			<td>1003799</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TNBS</td>
			<td>Sigma</td>
			<td>92823</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Trichorme staining kit</td>
			<td>American Mastertech Kit</td>
			<td>STOSTBPT</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TRIzol</td>
			<td>Life technologies</td>
			<td>15596018</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Verso cDNA Synthesis Kit</td>
			<td>Thermofisher</td>
			<td>AB1453B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen black 2.1</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td><a href="http://www.zeis.com/">www.zeis.com</a></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Zen blue lite 2.3</td>
			<td>Carl Zeiss</td>
			<td><a href="http://www.zeis.com/">www.zeis.com</a></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

mechanistic insight into the development of tnbs-mediated intestinal fibrosis and evaluating the inhibitory effects of rapamycin

מחקרים משמעותיים בוצעו כדי להבין את הניהול האפקטיבי של סיסטיק מעיים. עם זאת, חוסר הידע הטוב ביותר של סיסטיק פיברוזיס הפריע להתפתחות של תרופה מונעת. בעיקר, מציאת המודל החי המתאים הוא מאתגר להבין את המנגנון של קרוהן הקשורים פיברוזיס מעיים פתולוגיה. כאן, אימצנו שיטה יעילה שבה tnbs חשיפה כימית לעכברים מפי מייצרת כיבית עמוק באופן משמעותי ודלקת כרונית, ואת העכברים אז באופן כרוני לפתח פיברוזיס במעיים. גם, אנו מתארים טכניקה שבה הזרקה rapamycin מראה השפעות מעכבות על TNBS-תיווך פיברוזיס במודל העכבר. כדי להעריך את המנגנון הבסיסי של סיסטיק, אנחנו באופן שיטתי לדון הליך לטיהור Cx3Cr1 + תאים מתוך לאמה קיננה של מטופלים ועכברים שליטה של TNBS. פרוטוקול זה מפורט יסייע לחוקרים החוקרים את המנגנון של פיברוזיס ולסלול את הנתיב כדי למצוא המצאה טיפולית טובה יותר עבור פיברוזיס של המעי הקשורות של קרוהן.

אימצנו את דגם העכבר הקוליטיס TNBS כדי ללמוד ולהבהיר את המנגנונים הבסיסיים של סיסטיק מעיים8. כאן, אנו ביצעו המחקר מפורט בקורס הזמן של קוליטיס בתיווך TNBS, שם TNBS היה מחודש שבועי בניהול בשבוע לעכברים סוג פראי עבור עד שישה שבועות כמו מיוצג שטוח (איור 1א). לאחר שישה שבועות של טיפול TNBS, הבחנו כי אורכי חוקן לקצר בהדרגה במהלך הטיפול TNBS, מהממוצע של 5 ± 0.5 ס מ בקבוצת הביקורת כדי 3 ± 0.5 ס מ בקבוצה TNBS; ניתוח כמותי כזה של אורך המעי הגס מייצג הפחתה ניכרת באורך המעי הגס (איור 1B). כדי להבטיח כי מודל TNBS קרוהן היא דומה למודל פיברוזיס של האדם של קרוהן ולא היה חפץ הקשור המתודולוגיה, ניתחנו את סמנים פיברוטיק ברמות מרובות במחקר מפורט מסלול הזמן להזרקה TNBS לסוג פראי . הצטברות של אלפא השריר חלקה אקטין (αSMA) תאים חיוביים והתצהיר קולגן בתוך שכבות submucosal דווחו ברוב המקרים פיברוזיס ונחשב סימן ההיכר של אירועים פיברוטיק14. מצאנו כי קטעי המעי הגס של העכברים מטופלים TNBS כי היו מוכתמים עם αSMA הראו עלייה מקפלים 4-6 בשכבת המעי הגס מוכתם באופן חיובי עם αSMA (איור 1ג). חוץ מזה, Trichrome כתמים כחול עבור סעיפים אלה גם הראה גידול 2-4 מקפלים, מציע התצהיר קולגן משמעותי, אשר מאמתת פיברוזיס מעיים חמורות (איור 1ד). אנו עוד העריכו את ההפעלה של מיופיברופיצוצים על ידי זיהוי תאים αSMA-חיוביים על-ידי ניתוח FACS במעי הגס של עכברים מטופלים ומצא הצטברות משמעותית של αSMA-חיוביים מכתים (איור 1E). יתר על כן, מצאנו אינדוקציה משמעותית בביטוי של αSMA, קולונל I, ו-Col-III נמדד על ידי ניתוח qPCR בעכברים מטופלים TNBS (איור 1F). ביטוי מוגבר של חלבון αSMA בניתוח כתמי אבן המערבי חשף פיברוזיס מוגברת (איור 1G). בסך הכל, הטיפול הקינטיקה TNBS מספק הזדמנות לגשת תגובת החיסון החיסונית בתנאים כרוניים, אשר מחקה היטב את המצב בשלב כרונית CD והוא חיוני פיברוזיס פיתוח.
כדי להשוות פיברוזיס של tnbs עם פיברוזיס הקשורים קרוהן, ניתחנו את הביטוי של פיברוזיס סמנים ו ציטוקינים ביופסיה רקמה טרייה מן מעי של חולים עם תקליטור פעיל או תחת הפוגה. במידה ניכרת, מצאנו אינדוקציה מסומן של עיבוי של שכבות αSMA-חיוביים מוגברת התצהיר קולגן כפי שזוהה על ידי כתמים trichrome במקטעי תקליטור פעיל (איור 2א). בוצע גם ניתוח כתמי מערבי ואישר את האינדוקציה של ביטוי αSMA בדגימות תקליטורים פעילים (איור 2ב). בנוסף, הבחנו אינדוקציה משמעותית של סיסטיק סמנים כולל αSMA, עמודה 1, כפי שזוהה על ידי ניתוח qPCR (איור 2ג).
הבא, כדי לקבוע מנגנון להגביל את tnbs פיברוזיס הערכנו את ההשפעות של rapamycin, מעכב תרופתי של פעילות mtor15,16. לכן, התייחסו עכברים עם TNBS ו rapamycin וניתח αSMA ו קולגן רמת היסטולוגיה המעי הגס הראו מדידה כמותית של αSMA ו קולגן בעלילה densi,איור 3A). הנתונים שלנו מראים כי rapamycin מפחית את αSMA-חיוביים מכתים בשכבה submucosal ומפחית את התצהיר קולגן. כדי לוודא עוד ולכמת תגובות פיברוטיק, קבענו את αSMA, קולגן ו TGFβ ביטויים על ידי qPCR, וביטוי αSMA ידי זרימה cy, לנסות ב-TNBS מטופלים נקודתיים (איור 3B, 3c). הצגנו גם Cx3Cr1+ מונפציטים phagocytes לגרום תגובה חיסונית דלקתית לפציעה9. כך, רצינו לראות אם המינהל של rapamycin בעכברים מטופלים TNBS יכול להפוך את ההשפעות דלקתיות ופיברוטי. לכן, אנחנו מטוהרים Cx3Cr1+ תושב מוננוציטים phagocytes המעי הגס בודד תא השעיות באמצעות מיקרוחרוזים מגנטיים (איור 3ד). מצאנו רמה מוגברת של p-p70 ו-p-S6 ב Cx3Cr1+ תושב phagocytes ברור על ידי ניתוח כתמי המערבי של העכברים מטופלים tnbs, ורמה זו נחסמה על ידי rapamycin (איור 3E). חוץ מזה, מצאנו כי rapamycin טיפול לחות במורד IL-23 ו-IL-1β בקבוצה מטופלים TNBS (איור 3F). יתר על כן, ממצאים אלה להבהיר את המנגנון האפקטיבי המעורבים אינדוקציה של TNBS פיברוזיס והראו כי rapamycin מחליש את אינדוקציה של פיברוזיס.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60067/60067fig1.jpg"> איור 1: הממשל TNBS מוצלחת מוביל לפתח פיברוזיס המעי בעכברים. A. תרשים סכמטי ייצוג של טיפול tnbs שבועי שניתנו עכברים מסוג פראי. B. colon תמונות ומדידה של אורכי נקודתיים מעכברים שטופלו tnbs, שנקטפו בשבועות 0, 2, 4, ו 6 הטיפול post-TNSB. C-D. מקטעים נקודתיים ' ניתוח היסטולוגית ויטראז ' אנטי αSMA להפעלה של מיופיברותקיעות ו trichrome כחול כתמים עבור קולגן; סרגל בקנה מידה 100 μm. E. ניתוח FACS לזיהוי תאים αSMA-חיוביים בנקודתיים ובקוונפיקציה של תאים αSMA-חיוביים. F. פיברוטיק סמנים ו ציטוקינים זיהה על ידי qpcr. G. ניתוח כתמי מערביות של αSMA מ המעי הגס ליפוסט של שטופלו tnbs ועכברים שליטה. איור שונה זה נעשה שימוש חוזר עם ההרשאה של פרסום קודם9 במערכת האימונולוגיה של Mucosal, 2019 על ידי אטור et Al. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60067/60067fig1large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60067/60067fig2.jpg"> איור 2: TNBS פיברוזיס הוא דומה קרוהן-הקשורים פיברוזיס המעי. A. הנציג תמונות של ביופסיות המעי הגס של שליטה, תקליטור פעיל המציג גידול משמעותי של כתמים כחולים trichrome ו αSMA-חיוביים כתמים בשכבות submucosal, סרגל קנה מידה 50 Μm. B. ניתוח כתמי אבן מערבי של ביטוי αSMA וכימות. ג. qpcr ניתוח של סמנים פיברוטיק ו ציטוקינים. איור שונה זה נעשה שימוש חוזר עם ההרשאה של פרסום קודם9 במערכת האימונולוגיה של Mucosal, 2019 על ידי אטור et Al. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60067/60067fig2large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגירסה גדולה יותר של איור זה.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/60067/60067fig3.jpg"> איור 3: הטיפול rapamycin ביעילות קילה המושרה הנגרמת פיברוזיס. A. Colon ניתוח היסטולוגית-תמונות מייצגות של כתמים מיופיברוסט עם נוגדן Anti-αSMA ו קולגן מכתים עם כחול trichrome, סרגל בקנה מידה 100 Μm. B. Qpcr ניתוח של ΑSMA, קולגן ו TGFβ ביטוי בקרה/ מטפל בעכבר נקודתיים. C. facs ניתוח של αSMA בתלייה תא בודד מתוך קולון העכבר שטופלו עם שליטה/tnbs. ד. סכמטית לטיהור של Cx3Cr1+ תאים מחוקן לאמינה שבריר וניתוח ה-facs של תאים מטוהרים. ה. ניתוח כתמי מערב של p-p70 ו p-S6 רמות מטוהרים Cx3Cr1 + מוננוציטים phagocytes מעכברים שטופלו עם tnbs ו/או rapamycin. F. qpcr ניתוח של הביטוי ב מטוהרים Cx3Cr1 + מונמונומנט phagocytes, אשר מייצרת il-23 ו-il-1β. איור שונה זה נעשה שימוש חוזר עם ההרשאה של פרסום קודם9 במערכת האימונולוגיה של Mucosal, 2019 על ידי אטור et Al. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/60067/60067fig3large.jpg" target="_blank">אנא לחץ כאן כדי לצפות בגירסה גדולה יותר של איור זה.</a>

Watch this Scientific Journal Video about Mechanistic Insight into the Development of TNBS-Mediated Intestinal Fibrosis and Evaluating the Inhibitory Effects of Rapamycin at JoVE.com

Mechanistic Insight into the Development of TNBS-Mediated Intestinal Fibrosis and Evaluating the Inhibitory Effects of Rapamycin

במחקר זה, אנו מתארים הליך מפורט של פיברוזיס בתיווך מעיים של TNBS, אשר מציג הפתופסולוגיה המקבילה ל-פיברוזיס של קרוהן. אנו גם דנים גישה זו לאור של rapamycin הקלה השפעות מעכבות על סיסטיק מעיים.

תובנה מכניסטית לתוך פיתוח של מעיים TNBS-תיווך פיברוזיס והערכת השפעות העכבות של Rapamycin

Significant studies have been carried out to understand effective management of intestinal fibrosis. However, the lack of better knowledge of fibrosis has ...

פרוטוקול זה מציג פתופיזיולוגיה דומה מאוד של פיברוזיס של קרוהן בבני אדם וגם דן ההשפעות מעכבות rapamycin מתווך על פיברוזיס מעיים. היתרון העיקרי של פרוטוקול זה הוא שהוא מתאר התפתחות פיברוזיס מעיים בזמן קצר מאוד משתנה בין ארבעה לשמונה שבועות, אשר נותנים לנו את ההזדמנות ללמוד תיקון רקמות והתחדשות רקמות. פרוטוקול זה יהיה מועיל לחוקרים אשר ממהרים לקבל את המנגנון של פיברוזיס, ולעזור למצוא טק טוב יותר לחזות התערבות עבור פיברוזיס המעי הקשורים של קרוהן.כדי להתחיל בהליך זה, לגלח עכברים בוגרים סביב אזור הצוואר על מנת לחוש אותם מראש TNBS באמצעות חשיפה עורית. לאחר מכן להשרות ספוגית קוטון עם TNBS ולהחיל אותו על האזור המגולח של צוואר העכבר. שמונה ימים לאחר רגישות, לגרום קוליטיס על ידי ממשל תוך-ירקטאלי פעם בשבוע, במשך שישה שבועות.כדי לעשות זאת, להחיל ארבעה מיליגרם של TNBS ב 25%אתנול באמצעות חוקן 100 מיקרוליטר באמצעות מזרק מיליליטר אחד מחובר מחט gavage פלדה. תן לעכברי בקרה 100 מיקרוליטר של 25% אתנול בלבד. לאחר הרדמה של העכברים, מוזרקים תוך-פרטית רפאמיצין בשני מיליגרם לקילוגרם ליום, או רכב, או שניהם, בכל יום חול במשך שלושה עד שישה שבועות הן לעכברים המטופלים על ידי TNBS והן לעכברים שטופלו ב- TNBS.לאחר מכן, השתמשו במעיי עכברים TNBS לאחר טיפול של שישה שבועות לניתוח הראיה החוץ-תאית. ראשית, לפתוח את המעי הגס אורך בקרח קר HBSS ולשטוף את המעי הגס ב HBSS. באמצעות מספריים סטריליים, לחתוך את המעי הגס לחתיכות קטנות כי הם כחמישה סנטימטרים ב HBSS.מעבירים את חלקי רקמת המעי הגס הקטנים לצינור חרוט 15 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של חיץ טרום עיכול. לנער את הצינור ב 100 סל"ד באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס במשך 20 דקות. לאחר מכן, להעביר את ההשעיה דרך מסננת תא 40 מיקרומטר, ולהשליך את האפיתל המעי הגס המצורף.לאסוף את הרקמה הנותרת מן מסננת ולעכל אותם עוד יותר במאגר העיכול המכיל קולגנס סוג IV ו DNASE1 ב 1X HBSS עם 5% FBS במשך 20 דקות באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס תוך רועד ב 100 סל"ד. לאחר מכן, מערבולת הרקמות מתעכל במשך כ 20 שניות ולהעביר אותו דרך מסננת תא 40 מיקרומטר כדי להשיג שברי למינה פרופריה. צנטריפוגה שברי פרופריה למינה ב 700 פעמים G וארבע מעלות צלזיוס כדי גלולה למטה התאים.לאחר מכן, בצע 100 מיליליטר של פתרונות מדיה הדרגתית של 30%ו- 70%. תן שימוש חוזר בתאים המתקבלים ב-10 מיליליטר של פתרון ה-30%, ו שכב על כך על גבי חמישה מיליליטר של 70% מהתסרון בצינור של 15 מיליליטר. צנטריפוגה שיפוע במצב חופשי הפסקה ב 1, 000 פעמים G וטמפרטורת החדר.לאסוף את שלב הטבעת הלבנה המכילה את לימפוציטים לימפוציטים למינה פרופריה, אשר יהיה בין 30% ו 70% שיפוע שכבות. לשטוף את התאים המתקבלים על ידי resuspending אותם בקרח קר HBSS ו צנטריפוגה ב 500 פעמים G ו 10 מעלות צלזיוס במשך 10 דקות. לאחר מכן בצע שימוש חוזר בתאים במאגר FACS.לפני כתמי נוגדנים, ראשית לחסום את פני התא של תאי פרופריה למינה על ידי דגירה אותם עם CD16 נגד עכבר על ידי חוסם 32FC על קרח במשך 15 דקות. הבא דגירה התאים עם נוגדנים נגד CX3CR1 PE יחד עם microbeads אנטי PE על הקרח במשך 30 דקות כדי ללכוד את התאים המאוגדים, ולאחר מכן לשטוף את התאים עם חיץ FACS. מעבירים את הנוגדן ותאים מאוגדי חרוזים דרך עמודת מיון תאים המופעלת מגנטית בשדה מגנטי כדי להסיר את התאים הלא מאוגדים.לשטוף את התאים שלוש פעמים עם מאגר FACS. לאחר מכן, הסר את העמודה מהשדה המגנטי ודחוף את הבוכנה בעמודה כדי להניב את התאים הקשורים לתיבה. ראשית, לחסום את תאי פרופריה למינה עם CD16 נגד עכבר על ידי חוסם 32FC על קרח.מסננים את התאים על ידי דגירה עם נוגדנים נגד CD64, CD11c, CD11b, CX3CR1, Ly6C ו- MHC Class II ואז למיין את התאים באמצעות ציטומטר זרימה FACS כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט. Lyse התאים ממוינים להכנת RNA הכוללת ולזהות ציטוקינים סמנים פיברוטיים. לנתח ביטוי mRNA של סמנים פיברוטיים וניתוח ציטוקינים דלקתיים מתלים בודדים של תא יחיד מטיהור מגנטי.כדי להתחיל מכתים וניתוח משטח התא, תן שימוש חוזר בין 500, 000 ומיליון תאי למינה פרופריה מבודדים ב-15 מיליליטר של מאגר FACS. הדגירה את התאים עם אנטי CD16 על ידי 32 נוגדנים בדילול של 1 עד 50 על קרח במשך 10 דקות. לאחר מכן, לשטוף את התאים עם 500 microliters של חיץ FACS קר כקרח כדי להסיר נוגדנים לא מאוגדים.מתלים של כתם המעי הגס עם נוגדנים בעלי תווית פלואורסצנטית בדילול של 1 עד 100 על קרח למשך 30 דקות. לשטוף את התאים המסומנים פעמיים כדי להסיר את הנוגדנים מאוגדים באמצעות 500 microliters של חיץ FACS קר כקרח עבור כל לשטוף. לאחר מכן נתח את התאים המונונו-גרעיניים המסומן לפי ציטומטר זרימה כמפורט בפרוטוקול הטקסט.כדי להתחיל בהכתמת ציטוקין תאי וניתוח, השתמש בערכת פתרון קיבעון permeabilization כדי לתקן ולחלחל לתאים מוכתמים על פני השטח על פי הוראות היצרן. שער תאי ההנעה למינה כפי שמתואר בפרוטוקול הטקסט כדי לזהות את הרמה תאית של IL-1 בטא ציטוקין. לאחר מכן, לשטוף את התאים על ידי הוספת חיץ FACS וצנטריפוגה ב 200 פעמים G וארבע מעלות צלזיוס במשך חמש דקות כדי להסיר מאגר תיקון עודף.חזור על שטיפה זו פעם אחת. כדי לקבוע את רמת actin שריר חלק אלפא, הראשון לחלחל תאים עם ערכת פתרון קיבעון permeabilization. הדגירה את התאים עם נוגדנים נגד אלפא SMA Alexa Fluor 488 בדילול של 1 עד 1000 על קרח במשך 30 דקות.לאחר מכן לשטוף את התאים על ידי הוספת חיץ FACS וצנטריפוגה ב 200 פעמים G וארבע מעלות צלזיוס במשך חמש דקות כדי להסיר מאגר תיקון עודף. חזור על שטיפה זו פעם אחת. בצע ניתוח FACS ושער התאים כמסווים בפרוטוקול הטקסט.במחקר זה מודל העכבר קוליטיס TNBS מאומץ ללמוד ולהבהר את המנגנונים הבסיסיים של פיברוזיס מעיים. לאחר שישה שבועות של טיפול TNBS, ניתן לראות כי אורך המעי הגס התקצר בהדרגה במהלך הטיפול TNBS מחמישה סנטימטרים בקירוב בקבוצת הביקורת לשלושה סנטימטרים בקירוב בקבוצת TNBS. כדי להבטיח שמודל המחלה של הקרוהן TNBS דומה למודל הפיברוזיס של הקרוהן האנושי והוא אינו חפץ הקשור למתודולוגיה, סמנים פיברוטיים מנותחים ברמות מרובות במחקר מסלול זמן מפורט.הצטברות של שרירי אלפא חלקה actin תאים חיוביים ותצהיר קולגן בתוך שכבות submucosal דווחו ברוב המקרים פיברוזיס ונחשב סימן ההיכר לאירועים פיברוטיים כדי להשוות פיברוזיס TNBS עם פיברוזיס הקשורים של קרוהן, הביטוי של סמני פיברוזיס ציטוקינים מנותח ביופסיה רקמה טרייה מן ileum של חולים עם תקליטור פעיל או תחת remission. למרבה הפלא, אינדוקציה מסומן נראה של עיבוי של אלפא חלק שריר actin שכבות חיוביות תצהיר קולגן מוגברת בקטעי תקליטור פעיל. ניתוח כתם מערבי מבוצע כדי לאשר את אינדוקציה של ביטוי actin שריר חלק אלפא בדגימות תקליטור פעיל.בנוסף, אינדוקציה משמעותית של סמני פיברוזיס מזוהה על ידי ניתוח qPCR. ההשפעות של rapamycin, מעכב פרמקולוגי של פעילות M4 מוערכים לאחר מכן כדי לקבוע מנגנון להגבלת פיברוזיס TNBS. עכברים מטופלים הן עם TNBS ו rapamycin ואת רמות של אלפא חלקה שריר actin ו קולגן בהיסטולוגיה המעי הגס מנותחים.חשוב לזכור לחסן את אותה כמות של TNBS לכל עכבר ולעבד תאי לאמינה פרופריה מבודדים בהקדם האפשרי כדי למנוע אובדן תאים, כמו גם כדי לשמור על הכדאיות התא. הפרוטוקול שלנו מפרט על פיברוזיס TNBS והפוגה של פיברוזיס, כמו גם את הגורם המעכב של rapamycin בהיווצרות פיברוזיס. חוקר אחר עשוי להיות מעוניין להשתמש בטכניקה זו כדי למצוא יעד תרופה טובה יותר עבור פיברוזיס וסרטן המעי הגס.אנא זכרו כי TNBS הוא מגירוי בעור ויש ללבוש חלוקי מעבדה במהלך הטיפול כדי למנוע מגע עם העור.

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

Investigating the Effects of Probiotics on Pneumococcal Colonization Using an In Vitro Adherence Assay

חוקר את ההשפעות של פרוביוטיקה על דלקת ריאות התיישבות שימוש<em&gt; במבחנה</em&gt; Assay דבקות

Adherence of Streptococcus pneumoniae (the pneumococcus) to the epithelial lining of the nasopharynx can result in colonization and is considered a ...

Assessing the Development of Murine Plasmacytoid Dendritic Cells in Peyer's Patches Using Adoptive Transfer of Hematopoietic Progenitors

הערכת התפתחותם של תאי Murine Plasmacytoid דנדריטים בתיקונים של Peyer באמצעות העברת מאמצת של אבות Hematopoietic

This protocol details a method to analyze the ability of purified hematopoietic progenitors to generate plasmacytoid dendritic cells (pDC) in intestinal ...

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor Fc&#949;RI

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor FcÃƒÅ½Ã‚ÂµRI

פיתוח<em&gt; במבחנה</em&gt; מערכת מודל לחקר האינטראקציה של<em&gt; Equus</em&gt;<em&gt; Caballus</em&gt; IgE עם קולטן גבוה הזיקה שלה FcεRI

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated ...

Analyzing the Effects of Stromal Cells on the Recruitment of Leukocytes from Flow

ניתוח ההשפעות של תאי סטרומה על הגיוס של לויקוציטים מתזרים

Stromal cells regulate the recruitment of circulating leukocytes during inflammation through cross-talk with neighboring endothelial cells. Here we ...

Development of Stem Cell-derived Antigen-specific Regulatory T Cells Against Autoimmunity

פיתוח תאי גזע שמקורם אנטיגן ספציפי תקינים בתאי T נגד אוטואימוניות

Autoimmune diseases arise due to the loss of immunological self-tolerance. Regulatory T cells (Tregs) are important mediators of immunologic ...

Flow Cytometric Analysis of Particle-bound Bet v 1 Allergen in PM10

ניתוח תזרים Cytometric נ בית נכנס חלקיקים 1 האלרגנים PM10

Flow cytometry is a method widely used to quantify suspended solids such as cells or bacteria in a size range from 0.5 to several tens of micrometers in ...

Visualizing the Effects of Sputum on Biofilm Development Using a Chambered Coverglass Model

לדמיין את ההשפעות של כיח על פיתוח biofilm באמצעות מודל תאיים coverglass

Biofilms consist of groups of bacteria encased in a self-secreted matrix. They play an important role in industrial contamination as well as in the ...

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

Development and Identification of a Novel Subpopulation of Human Neutrophil-derived Giant Phagocytes In Vitro

פיתוח זיהוי של subpopulation רומן של אדם נויטרופילים הנגזר הענק Phagocytes<em&gt; במבחנה</em

Neutrophils (PMN) are best known for their phagocytic functions against invading pathogens and microorganisms. They have the shortest half-life amongst ...

Use of the Soft-agar Overlay Technique to Screen for Bacterially Produced Inhibitory Compounds

השימוש בטכניקת הכיסוי הרך-אגר למסך תרכובות מעכבות הופקו bacterially

The soft-agar overlay technique was originally developed over 70 years ago and has been widely used in several areas of microbiological research, ...

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

An IL-8 Transiently Transgenized Mouse Model for the In Vivo Long-term Monitoring of Inflammatory Responses

דגם IL-8 עכבר transgenized חולף עבור<em&gt; בויבו</emמעקב ארוך טווח אחר תגובות דלקתיות

Airway inflammation is often associated with bacterial infections and represents a major determinant of lung disease. The in vivo determination of the ...